神经生长因子家族及其受体基因表达与内耳组织发育分化的关系

本文介绍了鼠胚胎内耳发育期及成年后耳蜗和前庭组织NGF家族成员及其受体的表达规律，胚胎早期，听囊的耳蜗区域表达NT－3，前庭区域表达BDNF，胚胎中晚期，NT－3、BDNF在耳蜗、前庭区域均表达，成年后，NT－3是螺旋器的主要神经营养因子，BDNF是前庭的主要神经营养因子。NT－3、BDNF与毛细胞的发育、分化相关。     

神经营养因子和面神经再生

自从1850年Waller发现外周神经具有再生功能，打破了传统认为神经不可再生的观念之后，在神经再生方面的研究进展迅速。营养因子对神经再生的影响是近40年发展起来并成为热点的课题。本文对神经营养因子的生物学特性及其受体研究的最新进展作一综述，并着重回顾各种营养因子在面神经再生中的作用。根据分子结构的差异，与神经再生有关的营养因子可分为两大类：神经生长因子家族和非神经生长因子家族。1神经生长因子家族：包括NGF、BDNF、NT3、NT4、NTS、NT6，它们在分子结构上有一定同源性‘”。1·回神经生长因子（NGF）分子由a、…     

面神经损伤后穴位电针刺激对面神经核中几种神经营养因子mRNA表达的影响

目的：观察穴位电针刺激对面神经再生过程中神经核组织神经营养因子（NTFs，包括神经生长因子NGF、脑源性神经营养因子BDNF、神经营养因子3NT－3）表达的影响。方法：日本大耳白兔面神经压榨伤后，电针刺激翳风、颧Liao、地仓、颊车、四白、阳白、合谷穴，每天30分钟，2周为一疗程。分别于一、二、三疗程治疗后，应用原位杂交技术检测面神经核组织中上述三种神经营养因子mRNA表达水平的变化。结果：两组动物的面神经核组织中NGF、BDNF、NT－3mRNA表达高峰均在神经损伤后第6周；第二、第三疗程结束后，针刺组NGF、BDNF及NT－3mRNA的杂交信号均明显强于对照组。结论：在面神经再生过程中，穴位电针刺激能明显增强面神经核组织中NGF、BDNF及NT－3的表达，进而促进面神经再生。     

脑源性神经生长因子与听觉中枢可塑性

脑源性神经生长因子（brain—derived neurotrophic factor，BDNF）是神经营养蛋白家族中一重要成员，它通过“活性依赖”机制对听觉中枢神经元的可塑性变化进行调节，并受中枢听觉系统神经元活性的影响。本文综述了近年来对听觉中枢可塑性变化的研究及BDNF与听觉中枢可塑的相关性及可能的调节机制。     

胶质细胞源性神经营养因子在听觉相关系统中作用的研究进展

神经营养因子是影响神经元发育和维持神经可塑性的重要因子,胶质细胞源性神经营养因子(glial cell line derived neurotrophic factor,GDNF)是由胶质细胞衍生的神经营养因子,是一种糖基化、二硫键结合的同型二聚体蛋白,是转化生长因子-β超家族的成员,具有支持神经元的生长,助于神经元的存活和分化,并抑制细胞死亡的作用,可以保护听觉系统的感觉细胞免受噪声的破坏等[1]。     

神经营养素-3在内耳听觉损伤实验研究的应用

神经营养素家族（NGFs）成员包括神经生长因子（neurotrophin growth factor,NGF）、脑源性神经营养因子（brain derived neurotrophic factor,BDNF）、神经营养素-3 （neurotrophin-3, NT-3）、神经营养素-4/5（NT-4/5）、神经营养素-6（NT-6）等,它们在结构和功能上密切相关,在核酸和氨基酸序列上有很多同源性.NGFs是由神经所支配的靶组织、细胞或胶质细胞等产生的、能促进中枢和外周神经元分化、生长和存活的活性蛋白因子,在中枢和外周神经系统发育和正常生理功能维持及减轻神经损伤中起着重要的作用.这种作用是通过酪氨酸激酶受体（tyrosine kinases receptpr,Trk）来实现的.在对内耳听觉损伤的保护作用中,以NT-3的保护作用最为显著[1～3],引起众多学者的重视.本文对NT-3对内耳的保护作用作一综述.     

面神经

20030480脑源性神经营养因子及其受体TrkB在大鼠正常面神经核的分布/秦兆冰…//中国眼耳鼻喉科杂志一2002,2(4)一201一202 目的:研究脑源性神经营养因子(BDNF)及其受体TrkB在大鼠正常面神经核的分布和细胞定位。方法:利用BDNF和TrkB的抗体及地高辛标记的BDNF多相寡核昔酸探针,应用免疫组化和原位杂交方法对正常成年大鼠面神经核BDNF及其受体TrkB的分布进行了研究。结果:BDNF及其mRNA在面神经核各亚核中均有分布,以腹侧核阳性细胞数为多,TrkB受体更广泛分布于面神经核各亚核的神经元胞浆中。胶质细胞中同时有BDNF及其mRNA和…     

脑源性神经营养因子基因转染骨髓间充质干细胞体外诱导分化为神经元样细胞初步观察

目的探讨骨髓间充质干细胞（bone-marrow mesenchymal stem cells,BMscs）转染人脑源性神经营养因子（brain-derived neurotrophic factor,BDNF）基因后在体外分化为神经元样细胞的功能。方法克隆人BDNF基因并构建其真核表达载体;分离培养5只豚鼠BMscs,观测其形态并用流式细胞仪鉴定;将人BDNF基因电穿孔法转染BMscs,G418筛选后用维甲酸诱导分化,免疫细胞化学法对分化细胞进行鉴定。结果分离培养的细胞具有典型的BMSCs形态和标志,转染诱导后的细胞表达神经元特异性烯醇化酶、巢蛋白（Nestin）和胶质纤维酸性蛋白,并能分泌BDNF。结论BDNF基因转染的BMscs在体外能分化为神经元样细胞,电穿孔法能提高转染率,RA有促诱导作用。     

耳蜗电刺激并脑源性神经营养因子联合应用对大鼠耳蜗病理及听觉生理的影响

目的 探讨延迟给予慢性电刺激、脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF),以及二者联合应用对药物致聋大鼠耳蜗病理及听觉生理影响.方法 药物致聋大鼠40只,随机平均分为人工外淋巴液组(artificial perilymph,AP)、BDNF组、电刺激(electr...     

脑源性神经营养因子对耳蜗螺旋神经节的保护作用

目的　观察腺病毒携带的脑源性神经营养因子 (brainderivedneurotrophicfactor,BDNF)在豚鼠耳蜗中的表达 ,及噪声损伤后对螺旋神经节的保护作用。方法　 2 7只白色纯种豚鼠 ,暴露于135dBSPL ,4kHz的窄带噪声 4h。 7d后 ,12只经圆窗注入腺病毒携带BDNF(adenoviral mediatedBDNF ,ad BDNF) ,12只经圆窗注入ad LacZ ,3只注入人工外淋巴液。分别于 1、4、8周后取材 ,石蜡包埋中轴切片后 ,用免疫组化方法 (ABC法 )检测BDNF的表达。于光镜下计数螺旋神经节细胞。结果　在耳蜗各回中BDNF均有表达 ,4、8周组动物较 1周组动物表达弱。在 8周 ,注入ad BDNF组较ad LacZ组和人工外淋巴组螺旋神经节发生退行性病变的数目少 ,螺旋神经节细胞计数结果经统计学t检验 ,P <0 0 1,差异有显著性。结论　腺病毒携带的神经营养因子在耳蜗中能高效表达 ,在噪声损伤情况下腺病毒携带的脑源性神经营养因子对螺旋神经节有保护作用。该研究为基因治疗感音神经性聋提供了坚实的实验基础     

神经营养因子家族与变应性疾病

神经营养因子(neurotrophic factors,NTFs)家族是对神经系统有特异性作用的一类蛋白质,可促进神经元的分化、存活、突起生长、突触形成以及细胞迁移和增殖.近几年发现,他们与特异性皮炎、哮喘、变应性鼻炎等变应性疾病有着密切的关系,本文就神经营养因子家族与变应性疾病的关系进行综述.     

脑源性神经营养因子基因修饰骨髓基质细胞对体外培养小鼠螺旋神经元的影响

目的探讨人脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)基因工程细胞的建立及其对体外培养的小鼠螺旋神经元生长活性的影响。方法参照分子克隆技术成功构建BDNF真核表达载体———pcD-NA3.1(-)-BDNF,体外证实BDNF基因转染猿猴病毒40肝脏转化细胞(COS7)后正常表达,将骨髓基质细胞分离培养,体外转染骨髓基质细胞建立BDNF基因工程细胞,观察该基因工程细胞对体外培养小鼠螺旋神经元的生长活性的影响。结果成功构建BDNF基因真核表达载体,并且建立了BDNF基因工程细胞;在体外BDNF基因工程细胞能促进螺旋神经元的生长,并保护螺旋神经元免受氧化损伤。结论建立的BDNF基因修饰的骨髓基质细胞,对体外螺旋神经元生长、生存起着重要的保护作用,为进一步研究基因修饰的骨髓基质细胞内耳移植奠定了重要的基础。     

内耳相关性BDNF和NT-3的研究进展

神经营养因子（ｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｎ）是一组与神经结构和功能密切相关的家族蛋白，它包括神经生长因子（ＮＧＦ）、脑源性神经营养因子（ＢＤＮＦ）、胶质细胞源性神经营养因子（ＧＤＮＦ）、神经营养素－３（ＮＴ－３）、神经营养素－４／５（ＮＴ－４／５）以及最近发现的ＮＴ－６。神经营养因子是外周和中枢神经系统中最重要的内源性蛋白，调控着神经元的发育、生长、分化和生存，对维持神经系统的正常功能承担着重要作用。随着近些年对神经营养因子的进一步研究认识和基因转染的实验进展，以ＢＤＮＦ和ＮＴ－３为代表的神经营养因…     

脑源性神经营养因子对耳蜗螺旋神经节的保护作用

目的 观察腺疾病携带的脑源性神经营养因（brain derived neurotrophic factor,BDNF）在豚鼠耳蜗中的表达，及噪声损伤后螺旋神经节的保护作用。方法 27只白色纯豚鼠，暴露于135dBSLP，4kHz的窄带噪声4h。7d后，12只经圆注入腺病毒携带BDNF（adenoviral-mediated BDNF,ad-BDNF），12只经圆窗注入ad-LacZ,3只注入人工外淋巴液。分别于1、4、8周后取材，石蜡包埋中轴切片后，用免疫组化方法（ABC法）检测BDNF的表达。于光镜下计数螺旋神经节细胞。结果 在耳蜗各回中BDNF均有表达，4、8周组动脉较1周组织动物表达弱。在8周，注入ad-BNDF组较adLacZ组和人工淋巴组螺旋神经发生退行性病变的数目少，螺旋神经节细胞计数结果经统计学t检验，P＜0．01，差异有显著性。结论 腺病毒携带的神经营养因子在耳蜗中能高效表达，在噪声损伤情况下腺病毒携带的脑源性神经营养因子对螺旋神经节有保护作用。该研究为基因治疗感音神经性聋提供了坚实的实验基础。     

人神经营养因子3和绿色荧光蛋白基因共表达腺病毒载体对耳蜗组织的转染

目的:构建一个神经营养因子3(NT3)和绿色荧光蛋白(EGFP)基因共表达重组腺病毒载体,确定Ad/NT-3对离体耳蜗的转染效率和NT3对螺旋神经元存活的作用.方法:使用pAdeasy-1和pAdTrack CMV腺病毒载体系统,产生带绿色荧光标记的NT3重组腺病毒.转染培养新生的大鼠耳蜗基底膜,观察病毒的转染效率.对培养15 d的耳蜗进行神经丝蛋白200免疫荧光染色,计数螺旋神经元.观察NT3对神经存活的影响.结果:重组NT3病毒能够转染整个耳蜗组织中的各型细胞.以外沟细胞最高.约为49%,其次为齿间细胞,为27%.仅有少量的毛细胞和螺旋神经元被转染.Ad/NT-3重组腺病毒处理15 d的耳蜗螺旋神经元存活的数目多于Ad/EGFP腺病毒转染的耳蜗.结论:构建的Ad/NT-3重组腺病毒能够同时在耳蜗组织中表达EGFP和NT3蛋白,主要表达于外沟细胞和齿问细胞,这些细胞释放NT3能够维持耳蜗神经元存活.     

面神经

20021337面神经损伤后BDNF和FGr一2的分布与表达的实验研究/秦兆冰…/丫耳鼻咽喉一头颈外科一2002,9(l)一39~42 目的:研究脑源性神经营养因子(BDNF)和成纤维细胞生长因子一2(FGF一2)在大鼠面神经的分布和表达以及面神经损伤后的改变。方法:制作大鼠右面神经损伤模型,应用原位杂交检测BDNF mRNA和FGF一2 mRNA在损伤面神经两断端及左侧对照组神经的表达情况,结合计算机图像分析技术测定其灰度值。结果:BDNF mRNA在对照侧神经和损伤神经近侧端呈弱阳性表达,主要位于轴突和髓鞘周围的雪旺细胞(SC)内,损伤后不同时间组表达差异无显…     

小鼠耳蜗神经营养因子-3基因的克隆及其基因工程细胞模型的建立

目的：克隆小鼠耳蜗组织神经营养因子－3（neurotrophin-3,NT3)基因，并转染该基因在体外培养的T淋巴细胞系的Jurkat细胞，建立能够表达和分泌NT3的基因工程细胞模型，为后续体内应用作准备。方法：用反转录PCR方法扩增NT3基因，定向克隆入测序载体pUC19。酶切和测序鉴定正确后，再以pUC19－NT3质粒为模板，通过PCR方法得到上下游能够与pCDNA3载体中酶切位点匹配的NT3片段，进一步克隆获得pCDNA3－NT3质粒。酶切鉴定正确的质粒经阳离子脂质体包埋转染入Jurkat细胞，通过G418反复筛选后，有克降隆形成再扩大培养；收集部分细胞提取其中的总RNA，反转录PCR检测有无NT3基因片段存在；并利用这些细胞的培养上清鉴定有无生物学活性。结果：正确克隆的小鼠耳蜗组织NT3基因转染Jurkat细胞后，能够表达和分泌NT3蛋白并具有生物学活性，促进离体毛细胞和听觉神经元的存活。结论：在体外建立表达NT3基因并分泌NT3蛋白的基因工程细胞模型是可行的，为进一步应用到体内治疗感音神经性聋奠定了实验基础。     

脑源性神经营养因子延迟应用对感音神经性聋影响的实验研究

目的探讨药物致聋后,延迟给予脑源性神经营养因子(brain-drived neurotrophic factor,BDNF)对耳蜗病理及听觉生理的影响。方法药物致聋大鼠20只,随机平均分为人工外淋巴液(artifical perilymph,AP)组和BDNF组。左侧耳蜗为实验侧,右侧耳蜗为对照侧。致聋30天后通过微渗透压泵向鼓阶内持续灌注AP或BDNF,期间进行电诱发听性脑干反应(electrically auditory brainstem response,EABR)阈值检测。持续给药28天后取耳蜗进行病理检查,观察Rosenthal管内螺旋神经节细胞(spiral ganglion cell,SGC)胞体密度及骨螺旋板缰孔内神经纤维密度。结果EABR阈值AP组持续升高,BDNF组阈值初期上升缓慢,后期开始下降,用药治疗14～28夭阈值低于AP组(P<0.01);耳蜗病理变化,SGC胞体密度及神经纤维密度左右侧对比,AP组双侧无差异(P>0.05),BDNF组左侧明显高于右侧(P<0.01);两组左侧比较,BDNF组高于AP组(P<0.01)。结论大鼠药物致聋30天后,鼓阶内BDNF持续给药对SGC胞体及树突均有保护作用,并可以相应改善电听觉敏感性。     

脑源性神经营养因子促进鼻咽癌细胞CNE-2迁移的分子机制

目的 检测脑源性神经营养因子BDNF对鼻咽癌细胞CNE-2迁移过程的影响,以探讨BDNF对无TrkB表达的鼻咽癌细胞促进迁移的作用及其机制.方法 应用免疫印迹方法检测CNE-2细胞BDNF和TrkB蛋白的表达,采用细胞划痕实验检测BDNF对CNE-2细胞迁移能力的影响.结果 CNE-2细胞中高表达BDNF但不表达TrkB.BDNF依然能够促进CNE-2细胞迁移而且具有剂量依赖性,其中25 ng/mL BDNF促细胞迁移的作用具有明显的统计学差异(P＜0.01).K252a抑制Trk激酶活性不影响BDNF促细胞迁移作用(P＜0.01).结论 BDNF在不表达其高亲和力受体TrkB的鼻咽癌细胞中依然能够发挥促细胞迁移的作用,而且这一作用的机制很可能是通过其他受体及通路进行介导的.     

豚鼠耳蜗不同发育阶段神经生长因子的分布及意义

多种神经营养因子参与内耳的发生、发育和听觉功能的维护，如脑源性神经营养因子，胶质细胞源性营养因子等。神经生长因子（nerve growth factor，NGF）是最早发现的神经营养因子，主要对神经元尤其是感觉神经元的存活、发育和正常功能的维持起重要作用。我们于2005年9月至2006年2月利用免疫组织化学染色和蛋白质免疫印迹技术检测豚鼠耳蜗各发育阶段NGF的表达及分布，初步探讨NGF在听觉通路发育中的作用。