EGCG经NF-кB途径抑制肝癌HepG2细胞增殖的研究

目的初步探讨EGCG抑制肝癌HepG2细胞增殖的作用机制。方法通过绘制细胞生长曲线、平皿克隆和软琼脂集落形成实验观察EGCG对HepG2细胞增殖的抑制作用;Western blot检测NF-кB P65蛋白的表达。结果细胞生长曲线、平皿克隆和软琼脂集落形成实验结果显示,EGCG可有效抑制HepG2细胞的增殖(n=3,P<0.05)。Western blot检测结果显示,EGCG处理后NF-кB P65蛋白表达降低。结论 EGCG通过抑制HepG2细胞中NF-кB P65蛋白表达发挥其对细胞增殖的抑制作用。     

塞来昔布对人肝癌细胞株HepG2细胞核转录因子-KB活性及蛋白表达的抑制

目的: 探讨环氧合酶-2选择性抑制剂塞来昔布(celecoxib)对人肝癌细胞株HepG2细胞核转因子-κB(nuclear factor-kappa B, NF-κB)活性和蛋白表达的影响.方法:不同浓度的塞来昔布作用于HepG2细胞后,应用凝胶电泳迁移率改变分析技术检测H印G2细胞中NF-κB DNA结合活性;用Western blotting法检测H印G2细胞NF-κB p65蛋白表达.结果:25、50μmol/L塞来昔布作用于HepG2细胞后,药物处理组HepG2细胞NF-κd DNA结合活性明显降低,与空白对照组相比有显著性差异(t=12.58,P=0.000;t=17.97,P=0.000);塞来昔布可明显抑制HepG2细胞NF-κB p65蛋白表达水平,与空白对照组相比,差异均有统计学意义(t=4.24,P=0.013;t=6.38,P=0.003).结论:塞来昔布能有效抑制HepG2细胞NF-κB活性及NF-κB p65蛋白表达.     

全反式维甲酸对肝癌细胞HepG2的分化、侵袭迁移的影响

目的:探讨全反式维甲酸(ATRA)对肝癌细胞HepG2的诱导分化作用及侵袭迁移的影响.方法:MTT法测定ATRA对肝癌细胞HepG2的抑制作用;平皿集落形成法检测ATRA对HepG2细胞锚定依赖性生长作用;ELISA法检测ATRA作用前后HepG2 AFP分泌量的变化;RT-PCR检测ATRA对HepG2细胞MMP-9及Nanog的mRNA表达的影响;Western blot检测ATRA对HepG2细胞MMP-9及Nanog蛋白表达的影响;Transwell及划痕实验检测其对侵袭及迁移能力的影响.结果:MTT法显示ATRA抑制体外培养人肝癌细胞HepG2细胞生长,呈剂量和时间依赖性;ELISA显示ATRA诱导HepG2细胞分化和凋亡,使代表肝细胞恶变的AFP分泌量明显下降(P<0.05);平皿克隆形成实验结果表明未经ATRA处理的HepG2可形成克隆,但经ATRA刺激后,其形成克隆变小且数目明显减少;ATRA呈时间及浓度依赖性下调Nanog mRNA及蛋白的表达,并在24h呈浓度依赖性下调MMP-9 mRNA及蛋白表达;Transwell实验和划痕实验结果显示ATRA能抑制HepG2细胞的侵袭和迁移能力.结论...     

NF-κB在铁负荷过低上调炎症因子中的作用

目的: 探讨核转录因子(NF)-κB在铁负荷过低上调巨噬细胞、泡沫细胞炎症因子反应中的作用。方法: 将巨噬细胞和泡沫细胞给予NF-κB抑制剂预处理,加入或不加入铁离子鳌合剂去铁胺(DFO)继续培养24 h,用Western blot测定细胞中细胞外基质金属蛋白酶诱导因子（EMMPRIN）蛋白的表达。于巨噬细胞和泡沫细胞中加入DFO刺激,用Western blot测定细胞核中NF-κB p65蛋白的表达。将巨噬细胞和泡沫细胞给予p38 MAPK信号通路抑制剂或视黄醛x受体（RXR）的天然配体预处理,加入DFO刺激,用Western blot测定细胞核中NF-κB p65蛋白的表达。结果: NF-κB抑制剂可抑制DFO对巨噬细胞、泡沫细胞中EMMPRIN上调的作用。DFO可促进巨噬细胞、泡沫细胞细胞核中NF-κB p65蛋白的表达。p38 MAPK通路抑制剂或RXR配体可抑制DFO对NF-κB p65蛋白水平上调的作用。结论: NF-κB 参与了铁负荷过低上调巨噬细胞和泡沫细胞中EMMPRIN表达的过程。RXR配体对铁负荷过低上调炎症反应的抑制作用,同其抑制NF-κB激活有关。     

小干扰RNA抑制核因子-κB活化对HepG2细胞凋亡的影响

目的 探讨小干扰RNA(SiRNA)抑制核转录因子(NF)-κB活化对肝癌细胞凋亡的影响.方法 化学合成NF-κB siRNA和阴性对照siRNA,脂质体法转染HepG2细胞,用巢式RT-PCR和荧光定量PCR检测NF-κB mRNA表达情况;免疫组织化学法、酶联免疫吸附法、Western b10t检测NF-κB蛋白表达情况;用磷脂结合蛋白V-异硫氰酸荧光素法检测细胞凋亡,分析NF-κB表达抑制和细胞凋亡间关系.多个样本均数间的比较先行方差齐性检验,方差齐时行单因素方差分析;计数资料比较采用确切概率法分析.结果 NF-κBp65 mRNA在HepG2细胞相对表达量为1.13±0.03,在正常肝细胞L02为0.29±0.07,两者比较,t=27.02,P<0.05,差异有统计学意义.利用NF-κB siRNA干扰可下调NF-κB表达,且呈剂量、时间依赖;NF-κB siRNA转染HepG2细胞72h后,NF-κBmRNA和蛋白表达分别下降了93%和62%,抑制NF-κB表达使HepG2细胞凋亡增加85%. 结论 NF-κB在肝癌细胞中高表达,NF-κB SiRNA能特异性抑制其在肝癌细胞中活化并促进癌细胞凋亡发生.     

表没食子儿茶素没食子酸酯对高糖环境下内皮细胞氧化应激的影响

目的研究不同剂型表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）对高糖诱导人脐静脉内皮细胞（HUVEC）氧化应激损伤所引起凋亡的抑制作用及人核因子-κB P65（NF-κB P65）表达的影响。方法从新鲜脐带中分离培养HUVEC。用高糖诱导HUVEC表达NF-κB P65,实验组加入不同浓度的EGCG（12．5、25、50、100、200μmol／L）进行干预,PCR检测NF-κB P65mRNA的表达,AV-PI法检测凋亡细胞。结果高糖可诱导HUVEC凋亡,NF-κB P65表达增高;EGCG可抑制NF-κB P65的表达,降低凋亡指数,具有一定的时效关系、剂量关系。结论EGCG可在一定程度上抑制高糖诱导的氧化应激损伤所致的细胞凋亡。EGCG可能是通过抑制高糖所致的NF-κB增高,从而调控HUVEC细胞凋亡过程,发挥对HUVEC的保护作用。     

氧化苦参碱对胰腺星状细胞中脂多糖诱导的NF-κB表达的影响

目的:观察氧化苦参碱(oxymatrine,OM)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导胰腺星状细胞(LTC-14细胞株)中核因子-κB(nuclear factorκB,NF-κB)表达和核易位的影响.方法:体外培养LTC-14细胞,分别用相应浓度的LPS和/或OM刺激后,检测NF-κB的表达.用MTT法检测细胞增殖活性,免疫细胞化学技术检测LTC-14细胞胞浆和胞核内NF-κB的表达,实时荧光定量PCR检测细胞内NF-κB mRNA的表达,Western blot法检测NF-κB蛋白含量.结果:OM呈时间-剂量依赖性地抑制LTC-14细胞增殖,LPS(10μg/mL)刺激LTC-14细胞引起NF-κB mRNA及其蛋白表达量增高,NF-κB核内易位量明显增加,OM干预后可以下调NF-κB mRNA和蛋白表达,抑制NF-κB核内易位.结论:对LPS诱导的LTC-14细胞NF-κB mRNA、蛋白表达及NF-κB向核内易位抑制作用可能是OM治疗胰腺纤维化的机制之一.     

RNAi下调MAGE-A9表达抑制非小细胞肺癌细胞转移潜能的实验研究

目的探讨RNAi技术沉默MAGE-A9表达对非小细胞肺癌细胞转移潜能的影响。方法采用Western blot法检测非小细胞肺癌细胞系中MAGE-A9蛋白表达。在H1299细胞中沉默MAGE-A9表达,Western blot和Transwell实验分别检测H1299细胞中基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)和核转录因子κB p65(NF-κB p65)蛋白表达及细胞迁移和侵袭数变化。结果与HBE人正常支气管上皮细胞相比,人非小细胞肺癌细胞系H1299、H460、95-D中MAGE-A9蛋白表达上调(P0.05),其中H1299细胞中MAGE-A9蛋白表达水平最高,选取H1299细胞用于后续实验。Western blot和Transwell实验结果显示,将pSUPER-shRNA MAGE-A9重组质粒转染至H1299细胞后,细胞中MMP-2、MMP-9和NF-κB p65蛋白表达下调(P0.05),细胞迁移和侵袭数减少(P0.05)。结论 MAGE-A9在人非小细胞肺癌细胞中呈高表达,沉默MAGE-A9可抑制H1299细胞迁移和侵袭,其机制可能与MMP-2、MMP-9及NF-κB信号通路有关。     

NF-κB通过调控人食管癌ET-10细胞miR-21表达抑制凋亡的机制研究

目的 研究食管癌中NF-κB通过影响miR-21的表达对食管癌细胞系ET-10凋亡的作用。方法 使用shRNA下调NF-κB p65的表达,使用脂多糖(LPS)激活NF-κB,并使用qRT-PCR检测NF-κB p65的表达情况。使用CCK-8细胞增殖检测试剂盒,检测NF-κB p65对于细胞增殖活力的影响。使用流式细胞术检测NF-κB p65对于ET-10细胞凋亡的影响,使用qRT-PCR检测对于miR21表达的作用,并使用Western blotting检测对于凋亡调控蛋白PTEN以及凋亡执行蛋白cleaved caspase3表达的调控作用。结果 本课题所构建的shRNA载体可显著下调ET-10细胞中NF-κB p65的表达,并显著抑制ET-10细胞的增殖活力,而NF-κB激动剂LPS可以促进ET-10细胞的增殖活力。流式细胞术结果显示(Annexin-V/PI染色法),敲低NF-κB的表达可促进ET-10细胞的凋亡,并促进凋亡执行蛋白cleaved caspase3的表达,而LPS并不影响ET-10细胞的凋亡。进一步试验发现,敲低NF-κB可下调miR-21的表达并抑制PTEN...     

二硫代氨基甲酸吡咯烷对苦参碱诱导肝癌细胞凋亡的影响

目的 观察二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)抑制核因子-κB(NF-κB)活化后对苦参碱诱导肝癌细胞HepG2凋亡的影响.方法 MTT法观察苦参碱(分0.8、1.0、1.5、2.0、2.5 g/L组)及PDTC联合苦参碱对HepG2细胞增殖的抑制作用.将HepG2细胞随机分为细胞对照组、PDTC组(20μmol/L)、苦参碱组(1.5 g/L)和PDTC+苦参碱联合组,流式细胞仪和末端脱氧核苷酸转移酶介导的脱氧三磷酸尿苷缺口末端标记法检测细胞凋亡;电泳迁移率改变实验检测细胞核内NF-κB的活化水平.结果 PDTC增强了苦参碱对细胞增殖的抑制作用(F=183.92,P＜0.01).苦参碱同时具有诱导HepG2细胞凋亡和NF-κ B活化的作用;PDTC能显著增加苦参碱诱导的HepG2细胞凋亡和抑制苦参碱诱导的HepG2的NF-κB活化,细胞凋亡率由6.11%±0.81%增加至12.95%±0.02%(χ2=9.67,P＜0.05),NF-κB活化的灰度值由38.82±0.17降至32.01±0.69(χ2=10.38,P＜0.05).结论 苦参碱诱导HepG2细胞凋亡的同时激活NF-κB;PDTC可通过抑制NF-κB活化,增强苦参碱诱导HepG2细胞凋亡的作用.     

Western印迹检测人肾细胞癌中NF-KB信号通路分子蛋白的表达水平

目的 应用Western印迹方法检测人肾细胞癌组织及癌旁组织中NF-κB信号通路蛋白表达,探究NF-κB信号通路与人肾细胞癌之间的可能关系.方法 手术获得3对人肾细胞癌组织标本以及相应的癌旁组织标本,利用Western印迹方法检测人肾细胞组织以及相应癌旁组织中NF-κB信号通路蛋白p-IκB、NF-κB P65以及NF-κB P50表达水平.结果 与相应癌旁组织比较,人肾细胞癌组织中NF-κB信号通路蛋白IκBa表达水平明显下降,而NF-κB信号通路蛋白NF-κB P65和NF-κB P50表达水平明显升高.结论人肾细胞癌的发生可能与NF-κB信号通路存在一定的相关性.     

白藜芦醇对肺癌A549细胞增殖及NF-κB表达的影响

目的研究白藜芦醇对肺癌细胞A549增殖与NF-κB表达的影响。方法采用MTT法检测白藜芦醇对A549细胞增殖的影响;采用RT-PCR法检测白藜芦醇对A549细胞NF-κB mRNA表达的作用;用Western印迹法检测白藜芦醇作用后NF-κB在A549中的表达。结果白藜芦醇对A549细胞增殖抑制作用具有时间与剂量依赖性;白藜芦醇作用48 h后可以明显抑制NF-κB mRNA和蛋白的表达。结论白藜芦醇可以抑制A549细胞增殖及NF-κB在其中的表达。     

约氏疟原虫环子孢子蛋白对TNF-α刺激人肝癌细胞株核转录因子活化的抑制作用

目的 观察约氏疟原虫环子孢子蛋白（CSP）对肿瘤坏死因子α（TNF-α）刺激人肝癌细胞株HepG2核转录因子-κB （NF-κB）活化的影响。 方法 以约氏疟原虫BY265株子孢子总RNA为模板,用RT-PCR扩增CSP基因的编码区序列并克隆至pFLAG-CMV8载体,构建重组质粒pFLAG-CMV8-CSP。以兔抗CSP多克隆抗体间接免疫荧光法观察pFLAG-CMV8-CSP能否在HepG2细胞中正确表达,及其在细胞中的分布。实验分为3组,A组（阴性对照组）为转染质粒pFLAG-CMV8的HepG2细胞,B组以100 ng/ml TNF-α刺激转染质粒pFLAG-CMV8的HepG2细胞,C组以100 ng/ml TNF-α刺激转染质粒pFLAG-CMV8-CSP的HepG2细胞。采用双荧光素酶试验和凝胶迁移试验（EMSA）检测NF-κB 的核转位及其活化,观察pFLAG-CMV8?鄄CSP对于TNF-α刺激HepG2细胞活化NF-κB是否具有抑制作用。 结果 　质粒pFLAG-CMV8-CSP主要在HepG2细胞胞浆中表达。 检测HepG2细胞浆中NF-κB活性,C组萤火虫荧光素酶活性与海肾荧光素酶活性比值为0.228±0.029,明显低于B组（0.571±0.030）和A组（0.438±0.085）（P＜0.05）。EMSA结果显示,C组的条带明显弱于B组。　结论 位于细胞浆中的疟原虫CSP蛋白通过抑制NF-κB核转位, 从而抑制TNF-α刺激HepG2细胞活化NF-κB。     

NF-κBp65 / IκBα 在非小细胞肺癌组织中的表达简

目的 从蛋白和RNA水平研究NF-κBp65、IκBα在非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）组织中的表达特点,探讨其在肺癌发生中的作用.方法 免疫组化、Western blot方法检测NSCLC和癌旁肺组织中NF-κBp65和IκBα蛋白的表达,实时定量-PCR方法检测NF-κBp65和IκBα 基因表达.结果 共检测NSCLC组织62例（腺癌33例,鳞癌29例）,癌旁肺组织27例.免疫组化显示NSCLC组织中NF-κBp65阳性表达率分别为58.6%和60.9%,显著高于癌旁肺组织（P均〈0.0001）,而IκBα阳性表达率分别为12.3%和1.4%,显著低于癌旁肺组织（P均〈0.0001）.Western blot进一步证实：NF-κBp65蛋白在NSCLC组织中表达升高,IκBα蛋白表达降低.实时定量-PCR结果显示,NSCLC组织中NF-κBp65 基因表达分别是癌旁肺组织的2.73±0.33倍和2.58±0.27倍（P=0.0046）,而IκBα 基因表达分别是癌旁肺组织的0.63±0.086倍和0.87±0.075倍（P=0.0208）.结论 NF-κBp65高表达和IκBα低表达可能在NSCLC发生过程中发挥重要作用.     

环氧合酶-2、核因子-κB在胃癌、癌前病变中的表达及尼美舒利逆转其表达的实验研究

目的探讨环氧合酶（COX）-2、核因子（NF）-κB在胃癌及异型增生中的表达，并研究尼美舒利对人胃癌SGC-7901细胞增殖及COX-2、NF-κB表达的影响。方法采用免疫组化Powervi-sionTM两步法对84例胃癌和54例胃异型增生组织中COX-2、NF-κB的表达进行检测；在体外实验中对人胃癌SGC-7901细胞采用细胞培养，MTT法检测不同浓度尼美舒利对人胃癌SGC-7901细胞增殖的抑制作用，免疫组化、Western blot方法检测药物对COX-2、NF-κB表达的影响。结果COX-2、NF-κB在胃癌中的阳性表达率分别为66．67％、59．52％，均高于异型增生（P〈0．05），COX-2表达与肿瘤的大小、淋巴转移呈正相关（P〈0．05），并与NF-κB的表达相关（P〈0．05），COX-2与肿瘤浸润深度正相关（P〈0．05）。体外实验中结果显示尼美舒利可以抑制人胃癌SGC-7901细胞生长并具有浓度、时间依赖性；与阴性对照组相比，药物作用48h后尼美舒利100、200 μmol／L组COX-2、NF-κB蛋白表达明显减弱并具有剂量依赖性（P〈0．05），COX-2、NF-κB之间正相关（P〈0．05）。结论COX-2、NF-κB与胃癌的发生转移相关，并且NF-κB蛋白作为上游调控因子调节COX-2的表达。尼美舒利可以抑制人胃癌SGC-7901细胞增殖，抑制COX-2、NF-κB的表达在其抑制肿瘤机制中可能具有一定作用。     

重组蛋白Rv2346c抑制巨噬细胞对结核分枝杆菌的免疫灭活效应

目的探讨重组蛋白Rv2346c对卡介苗(BCG)感染鼠巨噬细胞(RAW264.7)后的免疫效应的影响及其机制。方法通过DNA合成、基因扩增、载体构建、诱导表达、纯化等过程制备重组蛋白Rv2346c;利用Cell Counting Kit-8(CCK8)方法检测RAW264.7增殖水平;采用菌落形成试验评估BCG生长情况;运用ELISA方法检测BCG和RAW264.7共培养上清中的肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL)-6的浓度;采取Western blot方法检测RAW264.7细胞中核转录因子κB(NF-κB)p65的表达水平。结果 DNA测序及Western blot检测证实成功制备重组蛋白Rv2346c;BCG可以抑制RAW264.7细胞增殖(P0.05),而RAW264.7细胞对BCG有灭活作用(P0.05);重组蛋白Rv2346c可以增强BCG对RAW264.7细胞增殖的抑制作用(P0.05),并降低RAW264.7对BCG的灭活效应(P0.05);Rv2346c还可以抑制RAW264.7分泌TNF-α和IL-6(P0.05),并抑制NF-κB p65的表达(P0.05)。结论重组蛋白Rv2346c可以抑制小鼠巨噬细胞RAW264.7对BCG的免疫灭活效应,该作用可能与抑制细胞因子分泌和NF-κB p65活化有关,具体机制值得进一步深入探讨。     

依达拉奉对Aβ1-40诱导PC12细胞NF-κB、Bcl-2 mRNA和蛋白表达的影响

目的 探讨依达拉奉对β淀粉样蛋白(Aβ1-40)诱导PC12细胞NF-κB、Bcl-2 mRNA和蛋白表达的影响.方法 采用Western印迹法,RT-PCR等检测NF-κB、Bcl-2mRNA和蛋白的表达,观察MCI-186对其保护作用.结果 模型组中NF-κB P65 mRNA和蛋白表达水平明显升高,Bcl-2 mRNA和蛋白表达水平明显降低,与对照组比较有显著差异(P＜0.01).保护组中NF-κB P65 mRNA和蛋白及Bcl-2 mRNA和蛋白表达与模型组组间比较有统计学意义(均P＜0.05),而与对照组比较无统计学意义(P＞0.05).结论 Aβ1-40可以活化神经细胞内NF-κB,减少Bcl-2的表达,发生细胞凋亡.依达拉奉可以抑制NF-κB激活,增加Bcl-2的表达发挥抗凋亡作用,最终达到保护神经细胞的目的 .     

马鞭草总黄酮对肝癌HepG-2细胞凋亡的影响

目的探讨马鞭草总黄酮(TFV)对肝癌Hep G-2细胞增殖和凋亡的影响。方法 MTT法检测TFV对肝癌Hep G-2细胞增殖的影响,流式细胞仪检测细胞周期和凋亡水平,Western印迹法检测核因子(NF)-κB p65和IκB-α蛋白表达情况。结果与阴性对照组比较,不同浓度TFV能明显抑制Hep G-2细胞的生长(P0.01),呈浓度和时间依赖性。TFV作用于Hep G-2细胞24 h后,Hep G-2 G0/G1期细胞比例下降,S期和G2/M期细胞百分率增加(P0.05),诱导细胞凋亡效果明显(P0.01),能明显的降低NF-κBp65表达,升高IκB-α蛋白表达(P0.05)。结论 TFV能抑制Hep G-2细胞的增殖,诱导细胞凋亡,机制可能与促进IκB-α蛋白表达,下调NF-κBp65蛋白表达有关。     

姜黄素对膀胱癌T24细胞生物学行为的影响及其机制

目的观察姜黄素对人膀胱癌T24细胞增殖、凋亡及细胞内核因子κB(NF-κB)蛋白表达的影响。方法将对数生长期T24细胞分为两组,实验组加入10、20、50、100μmol/L姜黄素,对照组加入完全培养液。培养24、48、72 h时采用MTT比色法检测两组细胞增殖抑制率;培养24 h采用流式细胞术检测细胞凋亡率、Western blot法检测细胞内NF-κB蛋白表达情况。结果实验组细胞增殖抑制率明显高于对照组,且呈时间—剂量依赖性,P均<0.05;实验组24 h细胞凋亡率明显高于、NF-κB蛋白表达水平明显低于对照组,且呈剂量依赖性,P均<0.05。结论姜黄素能有效抑制人膀胱癌T24细胞增殖,诱导细胞凋亡,其机制可能与下调NF-κB表达有关。     

SHP-2酪氨酸磷酸酶对肝癌细胞增殖的影响

目的 建立SHP-2野生过表达型(WT)及激活突变型(MT)稳定转染的肝癌HepG2细胞系,研究SHP-2激活突变及野生过表达对肝癌细胞增殖能力的影响.方法 将已经构建成功的WT SHP-2(WT组)和MT SHP-2(MT组)及空载体pcDNA3.1(空载组)分别转染到人肝癌HepG2细胞中,同时设未转染细胞作对照组;Westernblot法检测细胞中SHP-2蛋白的表达水平;MTT法检测细胞增殖情况;平板克隆和软琼脂集落形成实验检测细胞集落、克隆形成能力.结果 成功的将SHP-2突变型和野生型真核表达载体转染到人肝癌HepG2细胞中;MTT结果显示,对照组和空载组细胞增殖速度接近且增殖慢,而MT组和WT组细胞增殖速度明显加快,WT、MT组与空载组、对照组比较,P均＜0.01;细胞克隆形成的数量多于空载组和对照组,P均＜0.01.结论 成功构建了WT及MT稳定表达SHP-2的HepG2细胞株;SHP-2激活突变及野生过表达促进肝癌细胞增殖能力.