人脐带间充质干细胞静脉输注小鼠的安全性

目的探讨C57/BL6J小鼠重复多次尾静脉输注人脐带间充质干细胞后的免疫反应和毒性。方法将SPF级别的32只C57/BL6J小鼠随机分为阴性对照组、细胞移植组,每组16只,雌雄各半,细胞移植组小鼠尾静脉注射分离培养的第5代人脐带间充质干细胞,一次5×106/只,每周注射一次,连续注射4周;阴性对照组每次注射相同容积的PBS。注射后后观察小鼠的一般症状,末次注射后1周、4周进行血细胞计数、血生化、免疫反应指标、脏器质量测定和组织病理学检查。结果细胞移植组小鼠血细胞计数、血生化、脏器重量和脏器系数与对照组无显著性差异(P>0.05),脏器组织病理学在光镜下检查结果与对照组无形态学差别,以及免疫结果测定(T细胞亚群CD3+、CD4+、CD8+及CD4+/CD8+)与对照组无显著性差异(P>0.05)。结论人脐带间充质干细胞重复多次尾静脉输注C57/BL6J小鼠是安全可行的,对受者无明显免疫反应和毒副作用。     

肿瘤坏死因子α诱导蛋白8样分子2在T细胞发育过程中的表达及其对哮喘发病的潜在作用

目的 探讨肿瘤坏死因子α诱导蛋白8样分子2(TIPE2)在T细胞发育过程中的表达及作用,分析其在哮喘发病中的潜在作用。方法 选择C57BL/6J雌性野生型(WT)小鼠、C57BL/6J雄性TIPE2基因敲除(Tipe2^-/-)小鼠、C57BL/6J雄性绿色荧光蛋白敲入(Tipe2^gfp/+)小鼠为研究对象。取WT和Tipe2^gfp/+小鼠结肠组织和胸腺组织,获取肠道固有层淋巴细胞(LPLs)和胸腺细胞,采用流式细胞术检测结肠组织CD45^-细胞、CD45⁺细胞及双阴性(DN)T细胞、双阳性(DP)T细胞、CD4⁺T细胞和CD8⁺ T细胞中TIPE2的表达。取WT和Tipe2^-/-小鼠外周血、脾脏和肠系膜淋巴结,采用流式细胞术检测外周血、脾脏和肠系膜淋巴结中CD4⁺和CD8⁺T细胞水平。将10只Tipe2^gfp/+小鼠随机分为对照组和哮喘组,每组5只。...     

小鼠脾脏和外周血免疫细胞及部分细胞因子的增龄性变化

目的 探索不同年龄小鼠脾脏和外周血免疫细胞、细胞因子的变化.方法 24只雄性C57BL/6J小鼠分为幼年(1月龄)组7只、青年(2月龄)组7只、中年(12月龄)组7只、老年(17月龄)组3只.分别用流式细胞术和ELISA检测小鼠脾脏和外周血免疫细胞(CD3-CD19+B细胞、CD3+CD4+T细胞、CD3+CD8+T细...     

3种品系小鼠iNKT细胞组织特异性分布

目的 比较3种品系小鼠外周血、胸腺、脾脏和肝脏中iNKT细胞频率及胸腺、脾脏、肝脏iNKT细胞中iNKT1、iNKT2亚群比例的差异。方法 分别以DBA/1、 NOD/LtJ 及C57BL/6J 3种品系小鼠为研究对象,分离健康小鼠外周血、胸腺、脾脏和肝脏的淋巴细胞,采用FCM检测各组织器官中TCR β和CD1d 四聚体双阳性的iNKT细胞频率,并根据核内PLZF和T-bet的表达水平确定iNKT1和iNKT2亚群。 结果(1)3种品系小鼠外周血中iNKT细胞频率最低,肝脏中iNKT细胞频率最高,脾脏和胸腺iNKT细胞频率介于两者之间。其中,C57BL/6J 小鼠胸腺iNKT细胞频率显著低于DBA/1及NOD/LtJ小鼠,肝脏iNKT细胞频率显著高于其他2品系小鼠;NOD/LtJ小鼠脾脏、肝脏iNKT细胞频率显著低于C57BL/6J 及DBA/1小鼠。(2)3种品系小鼠胸腺iNKT细胞中iNKT2亚群占比较高,脾脏、肝脏中iNKT细胞以iNKT1亚群为主。其中,C57BL/6J小鼠胸腺iNKT2亚群比例最低;NOD/LtJ小鼠胸腺iNKT2亚群比例最高,脾脏、肝脏iNKT1亚群比例较高。结论 DBA/1、 NOD/LtJ 及C57BL/6J 3种品系小鼠,同一品系小鼠不同组织器官iNKT细胞频率及亚群比例,不同品系小鼠同一组织器官iNKT细胞频率及亚群比例存在很大差异。     

预针刺小鼠足三里对穴区皮肤及穴旁淋巴结记忆T细胞的影响

目的:观察预针刺小鼠足三里对穴区皮肤及穴旁腹股沟淋巴结记忆T细胞的影响,探讨预针刺在治未病方面的作用.方法:C57BL/6雄性小鼠按体质量随机分为空白组6只,预针刺组6只.预针刺组小鼠于足三里行针刺,30 min/次,1次/d,共10d.治疗结束后用流式细胞术分别检测穴区组织驻留性记忆T细胞(TRM)、穴区CD3+ TRM、淋巴结CD3+ TRM、淋巴结CD3+中央记忆T细胞(TCM)、CD3+效应记忆T细胞(TEM)的细胞数量.结果:与空白组相比,预针刺可增加穴区组织CD69+ 103+TRM和CD3+ TRM数量(P＜0.05),对穴区组织CD3+ TRM亚群和淋巴结CD3+记忆T细胞(TM)亚群数量变化无明显影响(P＞0.05);预针刺对穴区TRM/淋巴结TRM比值、淋巴结内TRM/TCM比值、淋巴结内TRM/TEM比值均无明显影响(P＞0.05).结论:预针刺可增加穴区组织CD69+ 103+ TRM以及CD3+ TRM数量,这可能是针灸治未病的的物质基础之一.     

-半乳糖神经鞘胺醇诱发小鼠流产机制的初探

目的 利用 -半乳糖神经鞘胺醇( -galactosylceramide, -Galcer)诱发性C57BL/6J小鼠流产模型,初步探讨NKT细胞活化与C57BL/6J小鼠流产的关系。方法 孕7d和孕10d C57BL/6J小鼠,每组8只腹腔注射 -Galcer,72h后处死鼠剖腹探察胚胎数量。于0h和24h取胎盘淋巴细胞,流式细胞术检测CD3+NK1.1+细胞百分率和CD69+CD3+NK1.1+细胞百分率,ELISA方法检测 -Galcer处理不同时间血清孕酮（P）水平,并做子宫胎盘免疫组化切片观察。结果 C57BL/6J小鼠可由 -Galcer引起流产。胎盘CD3+NK1.1+淋巴细胞在0,24h分别为（2.96±0.22）%和（4.17±0.67）%,CD69+CD3+NK1.1+细胞百分率分别为（6.54±1.13）%和（82.45±5.85）%。ELISA方法测得血清P浓度为（0.15±0.01） ng/ml与对照组(1.28±0.03)ng/ml相比差异有显著性。胎盘子宫免疫组化切片显示 -Galcer处理组孕激素受体（PR）表达明显强于对照组。结论 -Galcer可诱发C57BL/6J小鼠流产,NKT细胞的活化及其分泌的细胞因子可能是导致流产的主要原因。     

PDCD4基因对T淋巴细胞亚群分化的影响

目的探讨PDCD4基因对小鼠T淋巴细胞亚群分化的影响。方法采用流式细胞术检测PDCD4基因缺失小鼠脾细胞和淋巴结细胞中的CD8+T和CD4+T,及其亚群Th1、Th2、Th17和调节性T细胞(Treg)的特异性标记分子,并分析各细胞亚群的比例变化。结果 pdcd4-/-小鼠脾脏和淋巴结中CD8+T细胞数量较野生型C57BL/6小鼠有所下降(P<0.05),CD4+T细胞及Th1细胞也呈下降趋势,差异无统计学意义(P>0.05);而PDCD4基因缺失后Th2和Th17的分化比例无显著变化(P>0.05);进一步分析CD4+T细胞群体中CD25+Foxp3+Treg的表达,发现pdcd4-/-小鼠CD25+Foxp3+Treg比例明显上调(P<0.05)。结论 PDCD4基因能够影响部分T淋巴细胞亚群的分化,PDCD4基因敲除小鼠中CD8+T细胞数量下降和CD25+Foxp3+Treg比例升高,提示PDCD4基因有可能在免疫调节方面起到一定作用。而PDCD4基因对于CD4+T以及Th1、Th2和Th17的分化并无明显作用。     

Rag2敲除小鼠脏器重量、血液生理生化指标及免疫细胞的研究

目的检测SPF级Rag2敲除小鼠的脏器重量,血生理生化等生物学特性指标和免疫细胞。方法分别选5、10周龄的Rag2敲除(knockout,KO)小鼠测定主要脏器重量,并测定主要血生理、生化指标。选取6周龄Rag2 KO小鼠,应用流式细胞仪检测细胞免疫(T细胞-CD3+、T细胞亚群-CD4+、CD8+)、体液免疫(B细胞-CD19+、B220+)、NK细胞(NK1.1+)和粒细胞(CD11b+)进行检测。结果同性别NOD/SCID小鼠,10周小鼠脑、肺脏、脾脏、肝脏、心脏、双肾脏重、TBIL、WBC高于5周龄。同周龄的雌雄相比,雄性小鼠心脏、双肾脏、肝脏、脾脏重量、AST、ALP、A/G、GLU、PLT、PCT、WBC、LYM%高于雌性。Rag2 KO小鼠无T细胞(0.36±0.15)%、CD4+T细胞(0.21±0.06)%、CD8+T细胞(0.23±0.07)%、CD19+B细胞(0.28±0.04)%和B220+B细胞(2.03±0.42)%)。NK细胞比例为(24.13±3.62)%,粒细胞比例为(57.20±3.85)%。结论 Rag2 KO小鼠与C57BL/6J小鼠的主要生物学特性基本一致。周龄和性别因素对其脏器重量、血生理生化指标都有一定的影响。Rag2 KO小鼠T、B淋巴细胞缺失。     

日本血吸虫感染C57BL/6小鼠脾脏调节性B细胞的检测

目的探讨日本血吸虫感染C57BL/6小鼠脾脏不同亚群调节性B细胞的含量。方法使用日本血吸虫尾蚴经腹部感染C57BL/6小鼠,5周后分离感染组及正常对照组小鼠脾细胞,制备单个细胞悬液。使用细胞表面染色的方法,通过流式细胞术检测小鼠CD19~+B细胞含量及表达免疫调节相关分子CD5、CD11b以及PD-1的B细胞亚群的含量。结果 C57BL/6小鼠感染日本血吸虫后,脾脏B细胞的百分比含量及数目明显增多,差异有统计学意义(P0.01);CD5~+和CD11b~+B细胞的含量明显增加,差异有统计学意义(P0.05);而PD-1~+B细胞的含量变化不明显,差异无统计学意义(P0.05)。结论日本血吸虫感染能在C57BL/6小鼠体内诱导CD5~+和CD11b~+调节性B细胞产生。     

老年和青年C57BL/6J小鼠外周血及免疫细胞分型测定分析

目的比较观察老年C57BL/6J小鼠与年轻C57BL/6J小鼠外周血及免疫系统相关指标的差异。方法 19月龄和2月龄的C57BL/6J小鼠分别取材检测外周血细胞计数、免疫脏器指数和外周血免疫细胞分型。结果与年轻小鼠比较,老年小鼠外周血中红细胞和血小板计数升高,中性粒细胞比例升高,淋巴细胞比例下降(P0.001),CD4~+细胞比例明显降低(P0.001),胸腺指数明显降低(P0.001)。结论老年小鼠血细胞发生分化偏移,辅助性T细胞数量下降,与年轻小鼠有明显差异,与人造血免疫老龄化改变类似。本项研究为免疫衰老相关问题研究提供基础数据。     

不同种鼠对实验脑型疟发生的影响研究

目的 比较昆明小鼠和C57BL/6小鼠作为种鼠对实验脑型疟模型的影响.方法 分别以伯氏疟原虫ANKA株感染C57BL/6小鼠和昆明小鼠作为传代用种鼠,当种鼠原虫率为5％～15％时接种子代C57BL/6小鼠,观察两组小鼠原虫率、脑型疟发生率以及死亡率.同时,通过脑组织切片和脑部淋巴细胞的流式检测,观察两组发生脑型疟小鼠的脑部微血管中感染疟原虫红细胞和CD8+T细胞的粘附情况,另外,通过感染CD8+T KO小鼠,证实CD8+T细胞在两组小鼠发生脑型疟中的作用.结果 用昆明小鼠作为种鼠的实验组的原虫率和脑型疟发生率均明显高于用C57BL/6小鼠作为种鼠的实验组,发生脑型疟小鼠的脑部组织切片发现,脑部微血管可见明显的感染疟原虫红细胞的粘附和CD8+T淋巴细胞浸润;而用昆明小鼠作为种鼠感染CD8+T细胞缺失的C57BL/6小鼠并不能诱导实验脑型疟的发生.结论 与C57BL/6小鼠相比,昆明小鼠作为种鼠的实验组的脑型疟发病率更高,而且感染疟原虫红细胞和CD8+T细胞在脑部微血管内的粘附也是该脑型疟发生的主要因素,因此,更适合用于实验脑型疟模型的建立及其机制的探讨.     

甲巯咪唑对鼠T细胞亚群及NK细胞杀伤活性的免疫抑制作用研究

以Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ小鼠为模型，研究了甲巯咪唑（ＭＭＩ）对小鼠脾Ｔ淋巴细胞亚群及ＮＫ细胞杀伤活性的影响。结果表明，ＭＭＩ使小鼠血清中甲状腺素Ｔ３，Ｔ４水平明显降低，使脾Ｔ淋巴细胞中Ｌ３Ｔ４＋细胞数量显著减少、Ｔｈｙ１．２＋细胞和Ｌｙｔ２＋细胞数量降低、Ｌ３／Ｌｙｔ２比值下降。而且实验鼠脾ＮＫ细胞对腹水型Ｓ１８０靶细胞的细胞毒活性明显降低。表明ＭＭＩ对小鼠的细胞免疫有非特异的免疫抑制作用。     

前房相关免疫偏离中调节性T细胞的变化

目的：探索前房相关免疫偏离（ACAID）机制中调节性T细胞的变化,为进一步研究其具体机制创造条件。方法：将C57BL／6小鼠分为ACAID实验组、阳性对照组和正常组。实验组将2μL卵白蛋白（OVA,50mg／mL）前房注射,阳性对照组和正常组以2μL PBS行前房注射,7d后实验组和阳性对照组足底皮下免疫OVA100μL（2．5mg／mLOVA与CFA等体积充分乳化）,正常对照组不予处理。14d后检测耳廓迟发型超敏反应（DTH）,流式分析脾细胞中CD4^＋CD25^＋Foxp3^＋T细胞以及CD8^＋Foxp3CF细胞的数量和比例。结果：DTH结果显示,实验组的耳廓肿胀值较阳性对照组明显减小。CD4＋CD25＋Foxp3CF细胞和CD8^＋Foxp3q^＋细胞比例较阳性对照组和正常组均升高。结论：CD4^＋CD25＋Foxp3^＋T细胞和CD8^＋＋Foxp3^＋＋T细胞在ACAID机制中发挥重要作用。     

墨旱莲乙酸乙酯总提物对T淋巴细胞功能的调节

目的 观察墨旱莲乙酸乙酯总提物（EAEEP）对T淋巴细胞介导的细胞免疫的影响。方法 采用正常小鼠及腹腔注射环磷酰胺造成免疫功能低下小鼠模型,观察EAEEP对外周血CD4^ ,CD8^ T淋巴细胞亚群比例、迟发性超敏反应（DTH）、ComA刺激的淋巴细胞平殖反应的影响。结果 EAEEP显著抑制正常小鼠的细胞免疫功能（正常组CD4^ T淋巴细胞比例为40．13％,EAEEP大剂量组降至30．87％）,而对于免疫功能低下模型鼠可显著促进细胞免疫功能（使免疫抑制组CD4^ T淋巴细胞比例由34．87％升至40．80％）。结论 墨旱莲乙酸乙酯总提物对T淋巴细胞介导的细胞免疫具有一定的免疫调节作用。     

低剂量环磷酰胺对Lewis肺癌小鼠CD4+CD25+Treg细胞功能的影响

目的：研究低剂量环磷酰胺（CTX）单次注射对Lewis肺癌小鼠CD4⁺CD25⁺Treg细胞功能的影响,探讨CD4⁺CD25⁺Treg 细胞与肿瘤发生、发展的关系。方法：将传代培养的Lewis肺癌细胞接种于C57BL/6小鼠右腋皮下,建立Lewis肺癌模型,随机分成3组：CTX组、肿瘤组、单纯对照组。采用CTX单次注射,观测各组肿瘤体积动态变化;采用流式细胞术检测各组小鼠脾脏CD4⁺CD25⁺Treg细胞数量变化;采用半定量RT-PCR方法检测各组小鼠脾脏Foxp3 mRNA表达水平;采用MTT法检测脾脏T淋巴细胞增殖功能;采用LDH释放法检测脾脏特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTLs)细胞的杀伤活性。结果：与未治疗肿瘤组相比,CTX治疗可延缓荷19 d Lewis肺癌小鼠的肿瘤生长;CTX组小鼠脾脏CD4⁺CD25⁺Treg细胞数量低于肿瘤组（P< 0.05）;CTX组小鼠脾脏Foxp3 mRNA表达水平明显低于肿瘤组（P< 0.05）;CTX组小鼠脾脏T淋巴细胞功能明显高于肿瘤组（P<0. 05）;CTX组小鼠脾脏T淋巴细胞杀伤活性比肿瘤组略高,但变化不显著（P>0.05）。结论：CTX单次注射可降低Lewis肺癌小鼠脾脏CD4⁺CD25⁺Treg细胞的数量及Foxp3 mRNA表达,使T淋巴细胞增殖功能及脾细胞中CTLs杀伤功能增强。     

蜂胶类黄酮对糖尿病合并肺结核患者外周血WBC与T淋巴细胞亚群的影响

目的 探讨蜂胶类黄酮对糖尿病合并肺结核(diabetes mellitus complicated with pulmonary tuberculosis,DM-PTB)患者外周血中WBC与T淋巴细胞亚群的影响.方法 以DM-PTB患者120人为对象,利用随机数字表采用完全随机法分成A(蜂胶黄酮1000 mg/d)、B(蜂胶黄酮2000 mg/d)、C(条件对照)三组,每组40人,观察6个月,比较综合治疗前后白细胞计数(WBC)及分类(淋巴细胞L和中性粒细胞N)、T淋巴细胞亚群CD3+、CD4+、CD8+数量及CD4+/CD8+比值的变化,并比较组内前后差异和组间差异.结果 三组7项观测指标自身前后配对差值(治疗后-治疗前)的均数比较Hotelling T2=515.359,P=0.000;治疗7项观测指标差别Wilksλ=0.017,P=0.000,其中多重比较结果为WBC的B组大于A与C组,L的B组>A组>C组,N的B组大于A与C组,CD3+的B与A组大于C组,CD4+的B组>A组>C组,CD4+/CD8+比值多重比较结果为B与A组大于C组.结论 蜂胶类黄酮能提高DM-PTB患者的细胞免疫水平.     

融合基因重组卡介苗对肿瘤的抑制作用

目的 研究EB病毒基因BZLF1 和LMP2 融合基因重组卡介苗(recombinant BCG, rBCG)对肿瘤的抑制作用。方法 建立EB病毒阳性肿瘤(NPRC18)荷瘤小鼠(C57BL/6J)模型,根据注射的药物不同,分为rBCG组、BCG组、转pMV261载体BCG组(pMV261+ BCG)、PBS组。采取颈背部皮下多点注射方式进行免疫,对荷瘤小鼠肿瘤重量、成瘤时间、存活情况进行分析,C57BL/6J小鼠肿瘤抑瘤实验结束后,将小鼠的肿瘤裂解后用流式检测CD4⁺T、CD8⁺T细胞增殖情况,HE染色分析小鼠肿瘤组织中淋巴细胞浸润情况;使用统计学软件SPSS 19.0对rBCG抑瘤效果进行单因素方差分析(One-way ANOVA)。结果 重组BCG组分别用BZLF1和LMP2一抗杂交后,出现杂交目的蛋白,其蛋白质分子量约为70 KD,与对照相比,重组卡介苗对肿瘤抑制作用明显,小鼠成瘤时间延迟,平均成瘤时间约22 d,与对照PBS注射组8 d相比,其差异均有统计学意义(P ≤0.01);PBS组肿瘤重量为6.8 g,重组BCG组肿瘤重量为1.01 g,抑瘤率约为81%。经流式分析,重组BCG组产生的CD4⁺T、CD8⁺T细胞高于对照组。与对照组相比,rBCG延长了小鼠的生存时间,延缓了肿瘤生长和形成时间。结论 重组卡介苗在小鼠体内对肿瘤细胞具有抑制作用。     

“补肾生髓”法通过Notch信号通路调节DCs介导的CD4+ T细胞分化及对EAE的干预作用研究

目的：研究“补肾生髓”法方药（BSD）对通过调节树突状细胞（Dendritic cells,DCs）Notch信号通路对CD4+ T细胞分化及实验性自身免疫性脑脊髓炎（Experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE）模型小鼠发病的干预作用。 方法：主动免疫法诱导2D2小鼠EAE后,磁珠分选收集脾脏和淋巴结中 CD4+ T 细胞,体外分离培养及诱导 C57BL/6 （C57）小鼠骨髓来源树突状细胞（BMDC）成熟,分组干预后,与CD4+ T 细胞共培养后,被动注射至C57小鼠体内,观察小鼠发病情况。实验分组为：对照（Control）组、BSD组、阳性药物γ分泌酶抑制剂（gamma-secretase inhibitor,GSI）组。采用Western blot检测各组DCs Notch通路蛋白表达情况,采用流式细胞术分析各组中CD4+ T 细胞分化情况, 结果：BSD可抑制DCs Notch1,Jagged1,MAML蛋白水平,通过DCs诱导CD4+T细胞Treg分化增多,Th17分化减少,并改善被动免疫诱导的小鼠EAE症状评分。 结论：BSD可通过抑制DCs Notch信号通路活化,减少DCs介导的CD4+T细胞分化,进而缓解EAE残疾症状。