c-FLIP在恶性血液病中的表达及其临床相关性研究

目的：探讨c-FLIP基因在血液肿瘤中的表达以及临床意义。方法以半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测22例血液肿瘤骨髓中的c-FLIP mRNA表达,Western-Blot蛋白质印迹(WB)方法检测其c-FLIP蛋白的表达。病例包括急性白血病(AL)12例(其中初治11例及反复复发1例)、完全缓解(CR)后AL 2例、慢性粒细胞性白血病(CML)2例、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)2例、多发性骨髓瘤(MM)2例和骨髓增生异常综合征-难治性贫血伴原始细胞增多2型(MDS-RAEB-2)2例。结果初治和复发AL,初治CML、CLL、MDS-RAEB-2、MM患者c-FLIP mRNA和蛋白均表达异常增高。初治AL c-FLIP mRNA及43 kD蛋白的表达显著高于慢性白血病(CL)(P<0.05)。MDS-RAEB-2、MM与ALc-FLIP mRNA的表达差异均无统计学差异(P>0.05),但MDS 55 KD、43 KD蛋白表达明显低于AL(P<0.05),而MM无明显差异。对照组mRNA及其蛋白均阴性表达,CR后AL mRNA阴性表达,但其蛋白均有表达,低表达于AL,尤其43 kD明显低于AL(P<0.05)。c-FLIP表达在初治AL患者与其年龄、性别、初诊白细胞数、LDH以及核型、免疫表型无关。AL患者c-FLIP mRNA及其蛋白表达与初治疗效无明显相关性(P>0.05)。结论血液肿瘤患者c-FLIP mRNA及其蛋白表达异常增高,能够反映出恶性血液病患者骨髓造血细胞的凋亡抑制情况,与恶性血液病的类型、疾病的状态以及病程中的临床疗效、预后等都密切相关。     

c-FLIP在胃癌中的表达及其对凋亡的影响

目的检测c-FLIP在胃癌组织和胃癌细胞系中的表达,探讨其对胃癌细胞凋亡的影响。方法采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测6株胃癌细胞系和32例配对的胃癌组织及癌旁形态学正常组织中c-FLIP的表达;应用Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测下调c-FLIP表达对细胞凋亡的影响。结果 6个胃癌细胞系中存在c-FLIP的差异表达,其中BGC823高表达c-FLIP基因。在32例胃癌组织中有27例(84.4%)高表达c-FLIP基因,而在32例配对的癌旁形态学正常组织中仅有13例(40.6%)表达且表达水平明显低于胃癌组织。shR-NA干扰c-FLIP表达后明显抑制了细胞的凋亡。结论胃癌组织和细胞中存在c-FLIP的高表达,且其与细胞的凋亡相关,提示c-FLIP可能在抑制胃癌细胞凋亡中发挥重要作用。     

c-FLIP mRNA在大肠癌细胞中的表达及其与Fas抗原表达的相关性

目的:探讨cFLIP(细胞型Fas相关死亡区域蛋白样白介素-1β转换酶抑制蛋白) mRNA在大肠癌细胞中的表达及其与Fas抗原(CD95)表达的相关性.方法:应用RT-PCR方法检测3株人大肠癌细胞株中c-FLIP mRNA的表达,采用间接免疫荧光标记流式细胞术检测大肠癌细胞Fas抗原表达.结果:SW1116及SW620细胞株 c-FLIP mRNA 表达阳性并相对高水平表达Fas抗原,而LoVo细胞株c-FLIP mRNA表达阴性并低水平表达Fas抗原.结论:在大肠癌细胞中,c-FLIP mRNA的表达趋势与Fas抗原一致,提示c-FLIP可能在抑制Fas抗原诱导的细胞凋亡中发挥重要作用.     

人急性白血病淋巴细胞HSP70及HSP70mRNA的表达研究

目的　检测急性白血病病人血淋巴细胞热休克蛋白 70 (HSP70 )及其mRNA的表达。方法　ELISA法检测HSP70 ,RT -PCR法检测HSP70mRNA。结果　化疗前急性白血病病人淋巴细胞HSP70及mRNA明显低于正常人。化疗后 ,急性白血病病人淋巴细胞HSP70及mRNA明显高于正常人。结论　HSP70与急性白血病癌细胞关系密切 ,对癌细胞起保护作用     

二氢青蒿素抑制c-FLIP的表达增强TRAIL对肺癌细胞的凋亡诱导活性

目的: 探讨天然药物二氢青蒿素对TNF相关凋亡诱导配体(TRAIL)抗肺癌活性的影响并研究其机制。方法: 将PC9人肺癌细胞按对照组,二氢青蒿素组,TRAIL组,二氢青蒿素+TRAIL组及二氢青蒿素+TRAIL+c-FLIP质粒组进行分组,MTT法检测二氢青蒿素及TRAIL对PC9细胞的杀伤活性,流式细胞术检测PC9细胞的凋亡和活性氧簇(ROS)的释放,Western blot实验检测PC9细胞c-FLIP的表达、细胞色素c的释放及caspase-8、caspase-9和caspase-3的活化。结果: 二氢青蒿素能显著抑制PC9细胞中c-FLIP蛋白的表达。二氢青蒿素+TRAIL组PC9细胞的相对细胞活力(0.41±0.04)显著低于TRAIL组(0.83±0.06, P<0.05)和二氢青蒿素+TRAIL+c-FLIP质粒组(0.75±0.06, P<0.05)。二氢青蒿素+TRAIL组PC9细胞的凋亡率(35.4±2.6)显著高于TRAIL组(8.7±0.8, P<0.05)和二氢青蒿素+TRAIL+c-FLIP质粒组(13.5±1.1, P<0.05)。二氢青蒿素能显著促进TRAIL诱导的ROS的产生和细胞色素c从线粒体中的释放。二氢青蒿素能显著促进TRAIL诱导的PC9细胞中caspase-8、caspase-9和caspase-3的活化。结论: 二氢青蒿素抑制c-FLIP的表达增强TRAIL对肺癌细胞的凋亡诱导活性。     

急性白血病患者WT1基因mRNA表达研究

用ＲＴ－ＰＣＲ检测了２８例急性白血病患者ＷＴ１表达水显示：１９例ＷＴ１表达一,阳性率６７．９％;其中１６例ＡＮＬＬ中有１１例表达阳性,１２例ＡＬＬ有８例表达阳性。表明ＷＴ１在急性白血病中有高度表达,可作为一种新的检测标记物,在白血病疗效观察、判定预后及ＭＲＤ研究中有重要意义。     

FOXO1在急性白血病中的表达及临床意义

目的：探讨转录因子叉头框蛋白O1 （FOXO1）在成人急性白血病（AL）患者及健康人外周血中的表达及其临床意义.方法：应用半定量逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）测定40例成人AL组及50例对照组外周血中FOXO1的含量,并进行比较.结果：AL组外周血中FOXO1的表达明显高于对照组（P＜0.05）,AL组经标准化疗后完全缓解（CR）者FOXO1的含量低于化疗前（P＜0.05）,部分缓解和未缓解（PR/NR）者其含量亦降低,但降低不明显,与化疗前比较差异无统计学意义（P＞0.05）,而FOXO1在CR者中的表达低于PR/NR者,差异有统计学意义（P＜0.05）.结论：成人AL外周血中FOXO1呈高表达,而化疗后完全缓解者呈低表达,可能参与白血病的发生发展.     

白血病患者血小板凋亡蛋白Bax、Caspase-3表达的研究

目的探讨白血病患者血小板凋亡蛋白Bax、Caspase-3表达情况。方法采集自2015年1月~2017年年1月我院收治的60例白血病患者作为研究对象,同时选取同期的60例健康体检者作为对照组。探讨两组患者血小板凋亡蛋白Bax、Caspase-3表达情况。结果与对照组相比,试验组PLT水平降低(P0.05),PDW水平升高(P0.05),MPV水平升高(P0.05)。试验组Bax m RNA相对表达量升高(P0.05),Caspase-3 m RNA相对表达量升高义(P0.05)。试验组Bax蛋白相对表达量升高(P0.05),Caspase-3蛋白相对表达量升高(P0.05)。结论白血病患者的血小板功能低下,并且存在血小板凋亡现象,血小板凋亡可能Bax、caspase-3表达升高有关。检测白血病患者的血小板相关指标水平变化,对临床上白血病患者病情的评估具有重要意义。     

原代白血病细胞人端粒酶催化亚单位的表达

目的 :研究原代白血病细胞人端粒酶催化亚单位 (hEST)的表达及其临床意义。方法 :应用RT -PCR方法检测 30例初发急性白血病 (AL)患者、1 2例AL获完全缓解 (CR)患者和 6例正常志愿者骨髓单个核细胞 (MNCs)hESTmRNA的表达。结果 :初发AL患者骨髓MNCshESTmRNA表达量 (0 .71± 0 .34)明显高于CR患者 (0 .4 3± 0 .2 5 ,P <0 .0 5 )及正常志愿者 (0 .2 2± 0 .2 1 ,P <0 .0 1 )。初发AL患者骨髓常规涂片中原始细胞百分率与骨髓MNCs的hESTmRNA表达量呈正相关 (r =0 .4 5 7,P <0 .0 5 )。结论 :初发AL患者骨髓MNCs的hESTmRNA表达增高。hESTmRNA表达可能代表白血病细胞的一种高增殖状态     

c-FLIP反义寡核苷酸对食管癌EC109细胞裸鼠移植瘤抑制作用的实验研究

目的研究细胞型Fas相关死亡域样白介素-1β转换酶抑制蛋白反义寡核苷酸（c-FLIP-ASODN）对食管癌EC109细胞裸鼠移植瘤的作用。方法采用食管癌EC109细胞株建立裸鼠移植瘤模型,将其分为空白对照组、脂质体转染组、无义寡核苷酸（SODN）组、ASODN组。通过移植瘤生长曲线、终末瘤重,免疫组化法检测c-FLIP蛋白表达、增殖指数,RT-PCR检测移植瘤c-FLIP-mRNA变化,TUNEL检测凋亡指数,观察c-FLIP-ASODN对食管癌裸鼠移植瘤的作用。结果ASODN组治疗后移植瘤生长缓慢,实验结束时ASODN组瘤重及瘤体积明显低于其它各组,抑瘤率为68.19％。ASODN组移植瘤组织c-FLIP-mRNA及蛋白、Ki-67抗原表达较其它各组明显减少,而移植瘤细胞凋亡指数明显高于其它各组(P均<0.01)。其余三组上述指标间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论c-FLIP -ASODN对食管癌EC109细胞裸鼠移植瘤生长有抑制作用,其机制与降低的c-FLIP-mRNA和蛋白表达、抑制移植瘤细胞的增殖活性及促进肿瘤细胞凋亡有关。     

人急性白血病淋巴细胞HSP70及 HSP70 mRNA的表达研究

目的：检测急性白血病病人血淋巴细胞热休克蛋白70（HSP70）及其mRNA的表达。方法：ELISA法检测HSP70,RT－PCR法检测HSP70 mRNA。结果：化疗前急性白血病病人淋巴细胞HSP70及mRNA明显低于正常人;而化疗后,急性白血病病人淋巴细胞HSP70及mRNA明显高于正常人（P＜0．01）,结论：HSP70与急性白血病癌细胞关系密切,对癌细胞起保护作用。     

c-FLIP和TGF-β1在喉鳞癌组织中的表达及其临床相关性研究

目的探讨c-FLIP和TGF-β1在喉鳞癌组织中的表达与肿瘤的病理学分级和患者临床分期及颈淋巴结转移之间的相关性。方法应用RT-PCR法检测30例喉鳞癌患者肿瘤组织及喉部正常组织中c-FLIP mRNA的表达情况,同时应用免疫组化法对实验组及对照组中c-FLIP和TGF-β1蛋白的表达情况进行了检测。结果①实验组中,c-FLIP mRNA表达阳性者有18例,而对照组中仅3例表达阳性。②c-FLIP、TGF-β1在实验组中的平均阳性细胞表达率分别为44.87%和48.56%,而在对照组中此相应值分别为8.63%和8.25%。③两因子在喉鳞癌组织中的表达水平均与患者临床分期和肿瘤病理学分级成正相关,且它们在伴颈淋巴结转移组中的表达水平均明显高于非转移组。结论①c-FLIP、TGF-β1在喉鳞癌组织中高表达而在喉部正常组织中低表达。②c-FLIP和TGF-β1两因子在喉鳞癌组织中的表达水平与喉鳞癌患者的临床病理参数密切相关。③c-FLIP和TGF-β1可能共同参与了喉鳞癌的发生、发展。     

c-FLIP/BCL-2/Ki-67在膀胱移行细胞癌中的表达与临床病理学特征及对预后影响的研究

目的 研究膀胱癌中c-FLIP、BCL-2、Ki-67的表达与肿瘤分期、分级和生长方式以及病人预后的关系,从而为膀胱移行细胞癌侵袭性和预后的判断提供科学理论依据.方法 收集56例临床资料完整石蜡包埋的肿瘤标本,用免疫组化SABC法测定c-FLIP、BCL-2和Ki-67的表达,采用SPSS12.0软件包分析其表达与肿瘤组织学性状的关系以及对病人预后的影响.结果 c-FLIP、BCL-2和Ki-67的阳性表达在56个病例中分别为：64%（36/56）、43%（24/56）和59%（33/56）;c-FLIP和BCL-2的阳性表达在不同分期组间差异具有显著性（P=0.012,P=0.035）,而在不同的分级和不同的生长方式组间二者的阳性表达差异无显著性（P＞0.10）;Ki-67的阳性表达在不同的分级和分期组间差异均有显著性（P=0.048,P=0.020）;单因素生存分析发现生长方式、分期、c-FLIP、Bcl-2、Ki-67对生存影响具有显著性意义（P＜0.05）,多因素生存分析发现c-FLIp、生长方式和分期对生存影响具有显著性意义.结论 c-FLIP对评价膀胱癌的侵袭性和对预后的影响是一个重要的独立因素,Bcl-2、Ki-67对评价膀胱癌的侵袭性和预后也有一定的意义.检测膀胱移行细胞癌组织中的c-FLIP、Bcl-2和Ki-67的表达可作为估计病情发展判断患者预后的重要指标.     

c—FLIP／Ki-67在膀胱癌中的表达对预后影响的研究

目的研究膀胱癌中c—FLIP和Ki-67的表达与肿瘤分期、分级和生长方式以及患者预后的关系，从而为膀胱移行细胞癌侵袭性和预后的判断提供科学理论依据。方法收集56例临床资料完整石蜡包埋的肿瘤标本，用免疫组化SABC法测定c—FLIP、Ki-67的表达，采用SPSS12．0软件包分析其表达与肿瘤组织学性状的关系以及对患者预后的影响。结果c-FLIP、Ki-67的阳性表达在56个病例中分别为：64％（36／56）、59％（33／56）；多因素生存分析发现c—FLIP、生长方式和分期对生存影响具有显著性意义。结论c—FLIP对评价膀胱癌的侵袭性和对预后的影响是-个重要的独立因素，Ki-67对评价膀胱癌的侵袭性和预后也有一定的意义。     

Study of heat shock protein HSP90α, HSP70, HSP27 mRNA expression in human acute leukemia cells

Summary The expression of three heat shock proteins (HSPs)-HSP90α, HSP70, HSP27 in cells obtained from 22 patients with leukemia, K562 erythroleukemia cell line, and normal blood cells was observed by means of RNA dot blot analysis. The results showed that the expression of the HSP27 gene was enhanced in 4 cases of acute lymphoid leukemia (ALL), 7 cases of acute nonlymphoid leukemia (ANLL) and 2 cases of myelodysplastic syndrome. (MDS) as compared with that of the normal blood Cells, yet there was no significant difference in the HSP27 expression between the ALL and ANLL cells. The expression of HSP70 in all the 5 ALL and ANLL patients was much lower than that of the normal subjects, except 1 case of ALL and 1 case of MDS, in which the expression was obviously enhanced. All the cases including 11 ANLL, 5 ALL and 1 MDS had higher HSP90α expression than the normal subjects. The enhanced expression pf HSP90α in leukemia cells may be associated with the active and indefinite proliferation of leukemia cells. Our results also suggest that the high expression of the HSP27 gene may not be confined to a specific type of acute leukemia.     

bcl-2基因过表达致急性髓系白血病对柔红霉素耐药机制的初步探讨

目的 探讨bcl-2基因过表达导致人急性髓系白血病对柔红霉素耐药的机制.方法 通过分子克隆技术构建质粒pcDNA3.1(+)/bcl-2,将其转染人急性髓系白血病U937细胞,分正常对照组、空载体对照组、转染组,与柔红霉素培养24 h,采用CCK-8法检测细胞增殖率,Western blot检测凋亡相关蛋白的表达变化,从而比较转染bcl-2基因前后,U937细胞对柔红霉素敏感性的变化.结果 成功构建质粒pcDNA3.1(+)/bcl-2,转染入U937细胞,PCR证实其转染效果;CCK-8法检测结果显示U937/ bcl-2组细胞存活率显著高于对照组和空载体对照组;bcl-2基因过表达降低caspase-3片段的裂解活化,降低U937细胞对柔红霉素的敏感性.结论 bcl-2过表达抑制caspase-3激活、抑制柔红霉素杀伤U937细胞,导致细胞对柔红霉素耐药.bcl-2可作为临床治疗急性髓系白血病的靶点.     

急性白血病患者多药耐药基因MDR1的表达及临床意义的研究

目的探讨急性白血病(AL)患者多药耐药基因MDR1的表达和化疗敏感性的关系.方法应用实时荧光定量RT-PCR技术测定45例初治AL患者MDR1水平的表达. 结果耐药组MDR1阳性表达(56.52%)明显高于敏感组(13.64%),P＜0.01,两组差异显著,有统计学意义.结论 MDR1基因表达是AL临床耐药的因素之一.