鸭源大肠杆菌氨基糖苷类耐药基因的检测与传播扩散机制

目的探索鸭源大肠杆菌对氨基糖苷类耐药及耐药传播的分子机制。方法用微量稀释法测定鸭源大肠杆菌对氨基糖苷类药物的耐药表型,用PCR和DNA测序方法检测多种氨基糖苷修饰酶基因和质粒介导的16S甲基化酶基因,通过质粒接合试验分析有关耐药基因和耐药性的质粒接合传递特点,并采用基因克隆方法研究rmtB的基因环境。结果 27株分离菌中,有23株、19株、19株和18株分别对安普霉素、庆大霉素、阿米卡星和新霉素耐药,耐药率分别为85.2%、70.4%、70.4%和66.7%。27株中的13株检测到rmtB基因,6株同时检测到rmtB和aac(3)-IV基因。质粒接合试验获得5株接合子,接合子对安普霉素、庆大霉素、阿米卡星和新霉素均高水平耐药(MIC≥128μg/ml),rmtB基因检测呈阳性反应。结论鸭源大肠杆菌氨基糖苷类药物耐药和交叉耐药十分严重,质粒介导的rmtB基因和质粒接合传递是其耐药及其传播扩散的重要机制。     

大肠埃希菌连续分离株氨基糖苷类修饰酶aac（6＇）-Ⅰb基因分型研究

2006年初,美国学者Robiesek等发现了不仅对氨基糖苷类药物有修饰作用．而且对喹诺酮类药物也有修饰作用的新氨基糖苷类修饰酶aac（6＇）-Ⅰb-Cr型。为了解我院大肠埃希菌（Escherichiacoli．E．coli）连续分离株aac（6’）-Ⅰb基因家族及亚型存在状况．我们对60株E．coli进行了aac（6’）-Ⅰb PCR检测与DNA测序研究．现报告如下。     

下呼吸道感染患者铜绿假单胞菌分离株氨基糖苷类耐药相关基因分析

目的探讨分离自下呼吸道感染患者的氨基糖苷类耐药铜绿假单胞菌的耐药机制。方法从下呼吸道感染患者痰液中分离出52株对氨基糖苷类耐药的铜绿假单胞菌,PCR法检测6种氨基糖苷类修饰酶(AMEs)基因,并检测其中泛耐药菌的6种16S rRNA甲基化酶基因(以下简称甲基化酶基因)。对阳性产物测序加以证实。结果 52株铜绿假单胞菌中检出4种AMEs基因[aac(3)-Ⅱ、aac(6’)-Ⅰb、aac(6’)-Ⅱ和ant(2″)-Ⅰ],AMEs基因总检出率为92.3%。泛耐药菌中检出1种甲基化酶基因(rmtB)。16株高水平泛耐药菌中rmtB基因的检出率为81.3%。结论分离自下呼吸道感染患者的氨基糖苷类耐药铜绿假单胞菌中AMEs基因携带率高,其对氨基糖苷类耐药与aac(3)-Ⅱ、aac(6’)-Ⅰb、aac(6’)-Ⅱ和ant(2″)-Ⅰ有关;对氨基糖苷类高水平泛耐药主要与甲基化酶基因rmtB有关。     

磷霉素联合氨基糖苷类对产ESBLs大肠埃希菌体外敏感性的影响

目的探讨磷霉素（FOS）与3种氨基糖苷类抗菌药物[庆大霉素（GM）、妥布霉素（TO）、阿米卡星（AMK）]联用对ESBLs大肠埃希菌的体外抗菌效应。方法采用棋盘法设计,微量肉汤稀释法测定不同浓度组合的抗菌药物对30株ESBLs大肠埃希菌的最低抑菌浓度,并计算抑菌指数（FIC）判定联合效应。结果 FOS与GM、TO、AMK联合后的M IC50、M IC90均有下降,GM、TO、AMK与FOS联合后相加作用发生率分别为50.0%、23.3%、16.7%,协同作用发生率由大到小依次为AMK（83.3%）、TO（66.7%）、GM（43.3%）,无关作用较少,未发现拮抗现象。结论临床治疗产ESBLs大肠埃希菌感染时,可以考虑FOS与氨基糖苷类抗菌药物联合使用。     

48株鲍曼不动杆菌氨基糖苷类抗生素耐药基因检测

目的了解鲍曼不动杆菌氨基糖苷类抗生素耐药基因分布情况。方法收集蚌埠医学院第一附属医院2015年1月至12月临床分离的48株泛耐药鲍曼不动杆菌,VITEK 2Compact进行鉴定和药敏实验。PCR法检测12个氨基糖苷类修饰酶基因和3个甲基化酶基因以及外排泵基因adeB。结果在实验的16个基因中,共检出4种氨基糖苷类抗生素耐药基因aac(6′)-Ib、armA、adeB和ant(3″)-Ia,其中aac(6′)-Ib检出率为39.6%(19/48),armA基因检出率为89.6%(43/48),adeB检出率89.6%(43/48),ant(3″)-Ia检出率为10.4%(5/48),其余基因均未检出;存在两种以上耐药基因的共39株,检出率为81.3%(38/48)。结论 aac(6′)-Ib、armA基因以及外排泵adeB是介导我院鲍曼不动杆菌氨基糖苷类抗生素耐药的主要基因。     

脑卒中患者医院感染大肠埃希菌耐药情况及耐药基因序列分析

目的通过对住院脑卒中患者感染的大肠埃希菌耐药基因序列进行研究,了解其耐药现状,以指导脑卒中患者的临床用药。方法从住院脑卒中患者的临床标本中分离大肠埃希菌,进行药敏试验,按标准计算各分离株对抗菌药物的敏感率、中介率、耐药率;对分离菌进行耐药基因PCR扩增,通过凝胶电泳记录结果。结果分离株大肠埃希菌对22种抗菌药物的敏感率从高到低顺序为:TZP 100%、SCF 100%、IMP 100%、MEM 100%、AK 94.4%、ATM90.7%、FEP 90.7%、CAZ 83.3%、FOX 74.1%、NET 72.2%、K 61.1%、F 61.1%、CTX 51.9%、CXM 50.0%、TOB44.4%、KF 42.6%、CN 27.8%、OFX 24.0%、LEV 24.0%、NOR 24.0%、CIP 24.0%、PIP 14.8%。检测大肠埃希菌部分耐药基因,包括CTX-M-1基因、aac(3)-I基因、aac(3)-II基因、aac(6)-I基因、aac(6)-II基因、TEM基因、SHV基因、qnr基因、qacE△1-sull基因、VEB基因、PER基因以及CARB基因,其中CTX-M-1基因、TEM基因、SHV基因、aac(3)-II基因、qacE△1-sull基因阳性率分别为:16.7%、29.6%、9.3%、7.4%和70.4%。结论住院脑卒中患者感染的大肠埃希菌多重耐药情况严重,并且耐药机制复杂,应根据药敏试验结果合理选用抗菌药物治疗。     

细菌性传染病

东莞市2004年流脑疫情分析及防制对策探讨；流行性脑脊髓膜炎53例临床及流行病学分析；早期应用肝素治疗休克型暴发性流行性脑脊髓膜炎；急性白血病并ESBL阳性大肠杆菌败血症的相关因素分析与护理；血液病患儿医院感染大肠埃希菌败血症调查分析；64株大肠埃希菌对氨基糖苷类抗生素的耐药表型与钝化酶基因型的分析 。     

呼吸道铜绿假单胞菌对氨基糖苷类抗生素药敏试验结果及耐药规律

目的了解呼吸道铜绿假单胞菌对氨基糖苷类抗生素敏感情况及耐药规律。方法收集并分析361株呼吸道铜绿假单胞菌对氨基糖苷类抗生素药敏资料,并探讨其耐药规律。结果本院呼吸道铜绿假单胞菌对阿米卡星最敏感,敏感率达82.2％。其次为奈替米星,敏感率46.3％。庆大霉素和妥布霉素的耐药率约60％。对4种抗生素同时敏感菌株为115株,占总数的31.9％,同时耐药菌株49株,占13.6％。对阿米卡星敏感而对其它3种抗生素耐药菌株79株,占21.9％。对阿米卡星和奈替米星敏感,而对另两种抗生素耐药菌株为41株,占11.4％。结论阿米卡星在氨基糖苷类抗生素中对铜绿假单胞菌最敏感。铜绿假单胞菌对4种抗生素存在不同程度交叉耐药,妥布霉素与庆大霉素交叉耐药更严重。     

泌尿科住院患者大肠埃希菌及尿肠球菌耐药基因检测与分析

目的分析泌尿系患者感染大肠埃希菌及尿肠球菌的耐药性及其耐药基因分布情况,为临床治疗及耐药性控制提供科学依据。方法收集2015年6月-2017年5月本院收治泌尿系感染患者的送检标本经琼脂平板法培养分离的大肠埃希菌124株,尿肠球菌68株,采用K-B法对分离菌进行耐药性分析;应用聚合酶链反应(PCR)扩增耐药基因并测序,分析耐药基因分布情况。结果 K-B法测定大肠埃希菌分离株耐药率分别为:诺氟沙星24.20%、氧氟沙星14.52%、环丙沙星8.87%、阿米卡星16.94%、美罗培南0.81%、亚胺培南1.61%、庆大霉素61.29%、四环素32.26%;PCR扩增IMP(587bp)基因、TEM(535bp)基因、CTX-M-1(891bp)基因、SHV(305bp)基因、NDM-1(287bp)基因、aac(3)-Ⅱ(237bp)基因、ant(3″)-Ⅰ(284bp)基因、aac(6′)-Ⅰ(394bp)基因阳性率分别为9.68%、60.48%、40.32%、11.29%、4.03%、46.77%、29.03%和50.81%。尿肠球菌耐药率分别为:诺氟沙星64.70%,氧氟沙星61.77%,环丙沙星57.35%,四环素58.82%,、氯霉素47.06%,庆大霉素75.00%,红霉素66.18%,利福平47.06%,对万古霉素和替考拉宁均敏感;PCR扩增ant(6)-Ⅰ(460)基因、aac(6′)-Ⅰ(394bp)基因、aph(3)-Ⅲ(370)基因、efm(1090)基因、efa(940)基因、ermB(920)基因、tetM(770)基因阳性率分别为57.35%、73.53%、32.35%、60.29%、51.47%、36.76%和8.2%。结论泌尿系统感染患者感染的大肠埃希菌对氨基糖苷类抗生素耐药性较高。尿肠球菌除对万古霉素及替考拉宁敏感外,对其它常用抗生素耐药性也较高,且耐药性与耐药基因分布密切相关。因此对于泌尿科患者的抗感染治疗应根据药敏试验结果用药,耐药基因检测也有一定指导意义。     

大肠埃希菌产ESBLs菌株的耐药谱动态观察

目的动态观察大肠埃希菌产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）菌株的耐药谱变化,为临床合理选用抗菌药提供依据。方法对2007~2009年临床分离的248株大肠埃希菌标本进行病原菌鉴定及药敏试验,用纸片扩散确证法判断产ESBLs菌株（即ESBLs阳性菌）。结果 248株大肠埃希菌中,ESBLs阳性菌137株（占55.2%）,其检出率为2007年65.6%、2008年53.8%、2009年50.0%,呈逐年下降趋势;产ESBLs菌株的大肠埃希菌对青霉素类、头孢菌素类、单酰胺类、氨基糖苷类、喹诺酮类等抗菌药呈多重耐药,对亚胺培南高度敏感。结论大肠埃希菌ES-BLs阳性菌检出率较高,临床治疗中应严格掌握抗菌药的应用指征,动态监测其耐药谱变化。     

Enteropathogenicity and antimicrobial susceptibility of new Escherichia spp

To determine the mechanism of enteropathogenicity of the newly described Escherichia species, a total of 50 clinical isolates of Escherichia spp. from diarrhoeal stools were studied. Twelve isolates (24%) were found to be E. vulneris, 6 (12%) E. fergusonii, 2 (4%) E. hermannii, and the rest 30 (60%) were E. coli. Most isolates of the new species were resistant to ampicillin, tetracycline, and co-trimoxazole, but were susceptible to cephalosporins and aminoglycosides. The representative strains of all the new species produced significant fluid accumulation in the rat ileal loops both by live cells and their culture filtrates. E. vulneris, isolated from stools, showed maximum fluid accumulation. Thus, it can be inferred that these species are diarrhoeagenic, but their roles on extra-intestinal infections remain to be determined.     

随机引物PCR法分型大肠艾希菌及其在判断医院感染中的应用

目的对大肠艾希菌(艾希菌)进行随机引物PCR(AP—PCR)法基因分型并应用于医院感染的判断。方法以优化的随机引物、反应体系和扩增条件对临床分离的161株艾希菌进行AP—PCR法基因分型并按指纹图上DNA条带数及片段大小绘制基因分型图谱，同时对艾希菌的医院内感染进行了观察与分析。结果161株艾希菌共得AP—PCR型120种；艾希菌的医院内感染确实存在。结论AP—PCR法可对艾希菌有效分型并可用于艾希菌医院内感染的判断。     

多耐药大肠埃希菌NB8株全基因组耐药基因检测

目的检测1株多耐药大肠埃希菌NB8株的遗传学背景。方法病原分离自2012年4月宁波市第一医院住院患者尿液,作16S rDNA和gyrA基因测序、BLASTn比对确认为大肠埃希菌,采用Illumina HiSeq与Ion Torrent PGM两种大规模并行测序仪进行全基因组分析,再行人工测序。最后NB8株和9株已完成全基因组测序的大肠埃希菌耐药基因的比较基因组学研究。结果多耐药大肠埃希菌NB8株全基因组测序得到一条推定的染色体序列,长4 550 369 bp (内含14个缺口),得到一条推定的质粒序列,长635 377 bp(内含33个缺口)。从NB8株全基因组数据中挖掘出了β-内酰胺类、氨基糖苷类、喹诺酮类、大环内酯类、磺胺类、四环素类、多粘菌素的耐药基因,并挖掘出接合性质粒、转座子、插入序列、整合子的遗传标记,以及5大类外排泵基因。结论多耐药大肠埃希菌NB8株遗传学背景明确,主动外排机制增强也会导致或者增强NB8株的耐药性。质粒、转座子和整合子等可移动遗传元件可以使细菌的耐药性得以快速传播,使受体菌表现为多重耐药。     

Bacteremias caused by Escherichia coli in cancer patients - analysis of 65 episodes.

OBJECTIVES: The aims of this study were to evaluate risk factors, clinical presentation, outcome and antimicrobial susceptibility in patients with Escherichia coli bacteremia occurring over seven years in a single cancer hospital. METHODS: Sixty five episodes of bacteremia from E. coli appearing over seven years from 12,301 admissions in a single cancer institution were retrospectively analyzed. RESULTS: The proportion of bacteremia caused by E. coli among Gram-negative bacteremia was 20.8% (the second most common organism after Pseudomonas aeruginosa), and infection-associated mortality was 17%. The incidence in 1989-1995 varied from 14.3 to 24.7%. The most common risk factors were: solid tumors as the underlying disease (70.7%); central venous catheter insertion (32.3%); prior surgery (46.2%), and prior chemotherapy within 48 h (44.4%). Neutropenia and urinary catheters did not place patients at high risk in any of the subgroups. When we compared the two subgroups of 61 cases of bacteremia - monomicrobial and polymicrobial (when E. coli was isolated from blood culture with another microorganism) - we found that acute leukemia and breakthrough (recurrence while receiving antibiotics) bacteremia were more frequently associated with polymicrobial E. coli bacteremia. There was also a difference in infection-associated mortality: monomicrobial bacteremia due to E. coli only had a significantly lower mortality in comparison with polymicrobial E. coli bacteremia (8.9 vs 35.0%, respectively; P<0.03). CONCLUSION: The susceptibility of 115 E. coli strains isolated from 65 episodes of bacteremia was stable. Only two episodes caused by quinolone-resistant strains occurred, both in 1995, after six years of using ofloxacin for prophylaxis in neutropenic patients in our hospital. We found that 85.2-91.3% of all strains were susceptible to aminoglycosides, 97.8% to quinolones, and 90-100% to third generation cephalosporins and imipenems. The patients most commonly infected had solid tumors and the mortality was only 17%.     

Prevalence of Escherichia coli possessing the eaeA gene of enteropathogenic E. coli (EPEC) or the aggR gene of enteroaggregative E. coli (EAggEC) in traveler's diarrhea diagnosed in those returning to Tama, Tokyo from other Asian countries

To elucidate the importance of enteropathogenic Escherichia coli (EPEC) and enteroaggregative E. coli (EAggEC) as etiological agents in traveler's diarrhea, the detection of the eaeA and aggR gene in E. coli strains isolated from overseas travelers with diarrhea in Tama, Tokyo was carried out using a PCR method. Of 192 travelers who were mostly adults and had visited Asian countries from April 1998 to March 1999, aggR-positive E. coli strains were detected in 26 (13.5%). These strains represent the second predominant enteropathogen following enterotoxigenic E. coli (ETEC), whereas eaeA-positive E. coli strains were confirmed in seven subjects (3.6%). In 13 cases with aggR and four cases with eaeA, the organisms were detected in stool samples of patients as the only potential enteric pathogen. The clinical symptoms of these patients were similar to those in patients with ETEC; however, the severity of illness was milder than that associated with ETEC alone. Three strains with eaeA and five strains with aggR were typed as six different kinds of O serogroups, of which four strains belonged to the classical EPEC serogroups (O55, O114, O119, and O127a). These findings suggest that aggR-positive E. coli (EAggEC) is a significant causative agent in traveler's diarrhea. In addition, it was demonstrated that eaeA-positive E. coli (EPEC) is markedly correlated with diarrhea in adults.     

2000年武汉地区产超广谱β-内酰胺酶菌种的分布及药敏分析

目的 了解产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的细菌分离、分布及对抗生素的敏感性。方法 用APl或V1TEK-AMS系统(Bio’Merieux，法国)鉴定菌种，用NCCLS推荐的初筛和确证法检测产ESBLs的细菌，并用K-B法测定其对14种抗生素的敏感性。结果 2000年武汉地区的269株大肠埃希菌、202株肺炎克雷伯菌、149株阴沟肠杆菌、67株费劳地枸椽酸杆菌、43株产酸克雷伯菌中：ESBLs的检出率分别为40．9％、29．2％、20．1％、29．9％、和23．3％。产ESBLs大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌对亚胺培南全部敏感，产ESBLs的大肠埃希菌对阿米卡星的耐药率为22．4％，对其它抗生素有不同程度的耐药。结论 产ESBLs的菌株集中在肠杆菌科菌中，以大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、费劳地枸椽酸杆菌的ESBLs产出最高。阴沟肠杆菌、产酸克雷伯菌ESBLs的产出应引起重视。治疗其感染时应首选亚胺培南。     

犬源大肠杆菌分离鉴定及耐药性分析

目的 了解犬源耐药性大肠杆菌的流行情况。方法 采集犬的肛拭子样品191份,进行大肠杆菌的分离鉴定及分群;对分离的大肠杆菌进行氨苄西林、多粘菌素B等13种抗生素药敏检测及耐药谱分析。结果 从样品中分离鉴定出254株大肠杆菌。细菌耐药性检测结果表明,对阿米卡星和氨苄西林的耐药率最高(77.56%,75.98%),对美洛培南和多粘菌素耐药率较低(3.54%,3.94%);其中187株菌表现为对3类以上抗生素的多重耐药表型(73.62%),仅有8株菌对13种药物都敏感(3.15%);宠物犬携带的大肠杆菌耐药率比工作犬更高。结论 研究获得了犬源大肠杆菌耐药性的基本流行病学数据,检测到了对6类12种抗生素耐药的泛耐药菌,首次发现了对包括多粘菌素在内的全部7类抗生素耐药的超广谱耐药犬源大肠杆菌,为深入研究动物源耐药性产生与传播机制以及指导伴侣动物临床用药提供了科学依据。     

气单胞属菌粪便分离株分子鉴定与耐药元件检测

目的 调查一组14株气单胞属菌的菌种分子鉴定情况,以及β-内酰胺酶类、氨基糖苷类耐药的遗传学背景。方法 14株气单胞属菌均分离自2012年1月至12月宁波市第一医院肠道门诊腹泻患者的粪便标本,再作通用引物16SrDNA测序比对判定菌种,然后用聚合酶链反应(PCR)的方法分析23种β-内酰胺酶基因、6种氨基糖苷类修饰酶基因和6种16SrRNA甲基化酶基因以及6种可移动遗传元件分子标记。结果 本组14株菌经16SrDNA测序比对,10株为嗜水气单胞菌, 水簇箱气单胞菌、温和气单胞菌、肠棕气单胞菌、斑点气单胞菌各1株。14株气单胞菌共检出5种β-内酰胺酶基因、4种氨基糖苷类修饰酶基因和3种可移动遗传元件遗传标记基因。其中4号株(嗜水气单胞菌)AQU基因是新的基因亚型,命名为AQU-2, 11号株(水簇箱气单胞菌)AQU基因也是新的基因亚型,命名为AQU-3。结论 气单胞菌属的菌种鉴定应该以分子鉴定法为准。本组14株气单胞属菌耐药严重,已呈多重耐药。     

小儿肺炎产超广谱β-内酰胺酶细菌耐药性分析

目的了解肺炎患儿产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)病原菌感染情况和耐药特征,指导临床合理用药。方法对2007年1月～2010年12月住院治疗的肺炎患儿吸取下呼吸道痰液,做细菌培养,对产ESBLs肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌进行药敏分析。结果共培养岀406株革兰阴性菌,检岀产ESBLs菌126株。肺炎克雷伯菌163株,ESBLs(+)58株,占35.6%;大肠埃希菌139株,ESBLs(+)56株,占40.3%;其他菌104株,ESBLs(+)12株,占4.5%。2007年～2010年革兰阴性菌产ESBLs菌株检岀率分别为29.3%、31.6%、30.7%和31.9%,差异无统计学意义(P>0.05)。<1岁患儿产ESBLs菌检出率为39.1%,1～3岁组为23.8%,>3岁组为20.8%,差异有统计学意义(P<0.05)。产ESBLs肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌对大多数β-内酰胺类抗生素如青霉素类、头孢菌素类、氨曲南基本耐药,对头孢吡肟、氨基糖苷类中度敏感,对亚胺培南、哌拉西林/他唑巴坦、左氧氟沙星敏感。结论肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌是产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)主要菌株,对大多数抗生素耐药明显。