β-榄香烯抗DDP耐药卵巢癌细胞SKOV3/DDP 作用及机制研究

目的:研究β-榄香烯对DDP耐药卵巢癌细胞SKOV3/DDP增殖生长、逆转耐药的作用,以及对耐药细胞中耐药相关蛋白表达的影响。方法:CCK-8法研究β-榄香烯对SKOV3/DDP细胞增殖的抑制作用;克隆形成实验研究β-榄香烯对SKOV3/DDP细胞克隆形成的影响;流式细胞术研究β-榄香烯对SKOV3/DDP细胞凋亡的影响;CCK-8法研究β-榄香烯对SKOV3/DDP细胞产生顺铂(DDP)耐药的逆转指数;Western Blot法研究β-榄香烯对SKOV3/DDP细胞中耐药相关蛋白ABCB1、LRP和P-gp表达水平的影响。结果:β-榄香烯在20、40、80μmol·L^-1时能够抑制SKOV3/DDP细胞的增殖、克隆形成并促进细胞凋亡;β-榄香烯在不具有直接杀伤细胞作用的10μmol·L^-1时即可以逆转SKOV3/DDP细胞对DDP的耐药,其逆转耐药指数为2.58倍;β-榄香烯在20、40、80μmol·L^-1时能够减少耐药相关蛋白ABCB1、LRP和P-gp表达。结论:β-榄香烯能够直接抑制SKOV3/DDP细胞增殖、促进其凋亡并逆转细胞DDP耐药,其作用机制可能与减少耐药相关蛋白ABCB1、LRP和P-gp表达有关。     

舒芬太尼通过Notch信号通路对前列腺癌细胞的影响

目的 研究舒芬太尼通过Notch信号通路影响前列腺癌细胞增殖、凋亡和细胞周期的功能机制。方法 对人前列腺癌细胞LNCaP进行培养,将LNCaP细胞随机分为对照组（Control组）、舒芬太尼低剂量组、舒芬太尼中剂量组、舒芬太尼高剂量组、舒芬太尼组和舒芬太尼+Notch1组;舒芬太尼低、中、高剂量组分别用2,10,50 ng·mL^-1舒芬太尼处理,舒芬太尼组用50 ng·mL^-1舒芬太尼处理,舒芬太尼+Notch1组用50 ng·mL^-1舒芬太尼与Notch1共同处理。通过细胞计数法-8（CCK-8）检测各组细胞增殖情况;用流式细胞术检测各组细胞凋亡情况及周期进程;用蛋白质印迹（Western blot）法检测LNCaP细胞凋亡及Notch信号通路相关蛋白表达情况。结果 CCK-8检测可知,与对照组相比,舒芬太尼低、中、高剂量组72 h的光密度（OD）值显著降低,且具有剂量依赖性（均P<0.05）;与舒芬太尼组相比,随着作用时间的延长,舒芬太尼+Notch1组72 h的OD值逐渐增加（P<0.05）。对照组和舒...     

PI3K/Akt/FOXO3a信号通路介导的保护性自噬参与肺腺癌获得性顺铂耐药表型重塑

目的:比较顺铂压力下人肺腺癌亲本A549细胞与获得性顺铂耐药表型的A549/DDP细胞自噬水平,探寻肿瘤细胞获得性耐药表型重塑的分子机制。方法:不同浓度顺铂(cisplatin, DDP)干预亲本A549细胞及获得性顺铂耐药表型的A549/DDP细胞,应用CCK-8法比较两株细胞耐药指数、免疫印迹法比较自噬相关蛋白(Beclin 1、LC3Ⅱ及p62)表达水平;应用10μmol/L顺铂(相当于亲本A549细胞半数抑制浓度,即A549 IC₅₀值)干预A549及A549/DDP细胞,构建细胞应激状态,CCK-8法比较两株细胞生存活力,免疫印迹法比较自噬相关蛋白(Beclin 1、LC3Ⅱ及p62)、凋亡相关蛋白(Bcl-2、Bax、Cleaved Caspase-3)、转录因子FOXO3a及其磷酸化蛋白(p-FOXO3a)表达水平,免疫荧光法观察FOXO3a亚细胞定位,并利用自噬晚期抑制剂巴弗洛霉素A1(Baf A1)干预A549及A549/DDP细胞,进一步验证顺铂压力下细胞自噬激活情况;利用蛋白激酶抑制剂干预PI3K/Akt信号通路,免疫印迹法检测顺铂压力下A5...     

基于Notch/Snail信号的艳山姜挥发油对内皮间质转分化的保护作用研究

目的：探讨艳山姜挥发油对转化生长因子β₁（TGF-β₁）诱导的内皮间质转分化（EndMT）的干预作用及信号机制。方法：以10 ng·mL^-1 TGF-β₁诱导人脐静脉内皮细胞（HUVECs）建立EndMT模型。实验共分为两个部分：（1）分组：正常组,模型组（10 ng·mL^-1 TGF-β₁）,EOFAZ低剂量组（10 ng·mL^-1 TGF-β₁+1 μg·L^-1 EOFAZ）,EOFAZ高剂量组（10 ng·mL^-1 TGF-β₁+4 μg·L^-1 EOFAZ）。EOFAZ干预作用2 h后加入TGF-β₁共同孵育72 h。采用Transwell小室实验检测细胞迁移能力;波形蛋白（Vimentin）和血小板-内皮细胞粘附分子（CD31）以及Notch-1的蛋白表达情况通过蛋白免疫印迹法检测。（2）分组：正常组,模型组（10 ng·mL^-1 TGF-β₁）,γ-分泌酶抑制剂组（10 ng·mL^-1 TGF-β₁+15 μmol·L^-1 DAPT）,EOFAZ高剂量组（10 ng·mL^-1 TGF-β₁+4 μg·L^-1 EOFAZ）。DAPT及EOFAZ干预作用2 h后加入TGF-β₁共同孵育72 h。通过蛋白免疫印迹法检测Notch-1,Snail和Slug的表达。结果：内皮细胞经TGF-β₁处理72 h后,细胞迁移能力明显增强（P<0.01）,CD31蛋白表达水平显著降低（P<0.01）,Vimentin,Notch-1,Snail和Slug蛋白表达水平显著提高（P<0.01,P<0.05）,给予EOFAZ作用后能逆转上述改变。同时在给予DAPT阻断Notch信号后,Notch-1,Snail和Slug蛋白水平下降（P<0.05）。结论：EOFAZ干预TGF-β₁诱导EndMT的作用与Notch信号相关,其可以进一步调控Snail和Slug的表达。     

二氢杨梅素联合小剂量VP16抗肺癌研究

目的：研究二氢杨梅素(DMY)联合小剂量依托泊苷(VP16)治疗非小细胞肺癌的作用及机制,探索减毒高效联合化疗新方案。方法：以非小细胞肺癌A549细胞为研究对象,MTT实验摸索并确定单药作用浓度及时间(IC₂₀),之后分别给予不同药物(对照组、VP16组、DMY组、联合组)干预48 h;倒置显微镜下观察细胞增殖情况;Tunel实验检测各组细胞凋亡情况;Western blot实验检测凋亡相关蛋白PARP、Cleaved PARP、Caspase-3、Cleaved Caspase-3、Bax蛋白表达水平。结果：低剂量DMY(80μg·mL^-1)联合低剂量VP16(0.06μg·mL^-1)治疗后,对A549细胞的抑制作用显著增强,镜下可见细胞融合率显著降低,细胞固缩明显;Tunel实验显示联合组凋亡显著增强;Western blot结果显示联合组与单独用药组或与对照组比较Cleaved PARP、Cleaved Caspase-3、Bax蛋白表达显著增加,同时PARP、Caspase-3蛋白表达显著下降。结论：小剂量DMY...     

β-榄香烯对结肠癌SW480细胞放疗增敏作用

目的研究β-榄香烯对结肠癌细胞系SW480的放疗增敏作用,并分析其对磷脂酰肌醇3-激酶/丝苏氨酸蛋白激酶(PI3K/Akt)信号通路的影响。方法将细胞分为6组:空白对照组、辐照组(进行4 Gy辐照)、药物组(10μmol·L^-1β-榄香烯)、抑制剂组(50μmol·L^-1PI3K抑制剂,LY294002)、联合1组(4 Gy辐照+10μmol·L^-1β-榄香烯)、联合2组(4 Gy辐照+50μmol·L^-1LY294002)。用噻唑蓝法检测细胞增殖抑制率,用流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期分布,用免疫印迹法测定相关蛋白表达。结果抑制剂组、药物组、辐照组、联合2组和联合1组细胞凋亡率分别为(20. 39±1. 34)%,(21. 62±1. 23)%,(8. 94±1. 16)%,(31. 76±4. 22)%和(32. 83±4. 17)%;这5组的G0/G1期DNA含量分别为52. 68±4. 13,54. 36±4. 68,49. 20±4. 77,74. 63±6. 29和74. 92±6. 34;这5组的细胞集落形成数目分别为111. 19±15. 33,108. 74±15. 28,116. 67±14. 39,45. 32±9. 06和40. 08±8. 43;这5组的细胞内p Akt蛋白表达水平分别为0. 86±0. 04,0. 85±0. 04,0. 87±0. 05,0. 42±0. 03和0. 41±0. 03。上述指标,联合2组、联合1组与抑制剂组、药物组和辐照组相比,差异均有统计学意义(均P <0. 01)。结论β-榄香烯能够通过抑制PI3K/Akt信号通路激活,抑制周期相关蛋白表达引起G2/M期阻滞以抑制细胞增殖,同时促进细胞凋亡相关蛋白表达诱导细胞凋亡,从而提高SW480细胞的放射敏感性。     

原苏木素A通过调控Notch1信号通路增加前列腺癌细胞的放疗敏感性

摘要：目的:研究原苏木素A（PrA）对前列腺癌PC-3细胞放疗敏感性及的Notch1信号通路影响。方法:体外培养人前列腺癌PC-3细胞,分别用不同浓度PrA(100,200,400,800,1 600μmol·L-1)处理对数生长期PC-3细胞,分别设为PrA-1组、PrA-2组、PrA-4组、PrA-8组、PrA-16组,另设无处理PC-3细胞为正常对照（NC）组,只进行放射处理的PC-3细胞为放射处理（RT）组。采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测各组前列腺癌PC-3细胞增殖情况;采用平板克隆试验法检测前列腺癌PC-3细胞增殖能力;采用流式细胞仪和Annexin V-FITC/PI法体外检测前列腺癌PC-3细胞凋亡率; Western Blot检测前列腺癌PC-3细胞中凋亡相关半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（cleaved-caspase3）、B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）蛋白表达水平及Notch1信号通路相关蛋白Jagged1、Notch1、Hes-1蛋白表达。结果:与NC组比较,RT组、PrA-1、PrA-2、PrA-4、PrA-8组前列腺癌PC-3细胞增值抑制率呈时间依赖性依次增加（P<0.05）,PrA-8组48 h时,前列腺癌PC-3细胞抑制率为51.03%,与半数抑制浓度（IC50）接近,因此将800μmol·L-1作为PrA最佳浓度,48 h作为最佳作用时间用于下游实验。与NC组比较,RT组、PrA-4、PrA-8组列腺癌PC-3细胞平板克隆形成率、Bcl-2蛋白水平依次降低（P<0.05）,细胞凋亡率、Bax、cleaved-caspase3、Jagged1、Notch1、Hes-1蛋白水平依次升高（P<0.05）。PrA-8和PrA-16组前列腺癌PC-3细胞增值抑制率、克隆形成率、凋亡率、Bcl-2、Bax、cleaved-caspase3、Jagged1、Notch1、Hes-1蛋白表达水平比较,差异均无统计学意义（P>0.05）。结论:原苏木素A可通过上调Bax、cleaved-caspase3,下调Bcl-2蛋白,激活Notch1信号通路增加前列腺癌PC-3细胞的放疗敏感性。     

舒芬太尼通过Notch信号通路对前列腺癌细胞的影响

目的 研究舒芬太尼通过Notch信号通路影响前列腺癌细胞增殖、凋亡和细胞周期的功能机制。方法 对人前列腺癌细胞LNCaP进行培养,将LNCaP细胞随机分为对照组（Control组）、舒芬太尼低剂量组、舒芬太尼中剂量组、舒芬太尼高剂量组、舒芬太尼组和舒芬太尼+Notch1组;舒芬太尼低、中、高剂量组分别用2,10,50 ng·mL^-1舒芬太尼处理,舒芬太尼组用50 ng·mL^-1舒芬太尼处理,舒芬太尼+Notch1组用50 ng·mL^-1舒芬太尼与Notch1共同处理。通过细胞计数法-8（CCK-8）检测各组细胞增殖情况;用流式细胞术检测各组细胞凋亡情况及周期进程;用蛋白质印迹（Western blot）法检测LNCaP细胞凋亡及Notch信号通路相关蛋白表达情况。结果 CCK-8检测可知,与对照组相比,舒芬太尼低、中、高剂量组72 h的光密度（OD）值显著降低,且具有剂量依赖性（均P<0.05）;与舒芬太尼组相比,随着作用时间的延长,舒芬太尼+Notch1组72 h的OD值逐渐增加（P<0.05）。对照组和舒...     

同型半胱氨酸对体外大鼠神经干细胞增殖及Notch信号通路相关基因表达的影响

【摘要】目的 研究同型半胱氨酸（Hcy）对体外大鼠神经干细胞(NSCs)增殖及Notch信号通路相关基因Notch1和Hes1mRNA表达的影响。方法 采用无血清培养原代培养新生大鼠NSCs,细胞分为对照组(Hcy-C)、Hcy低剂量组（Hcy-L）、Hcy中剂量组（Hcy-M）、Hcy高剂量组（Hcy-H）。采用免疫组化法检测Nestin、β-tubulin Ⅲ及GFAP的表达对NSCs进行鉴定,MTT法检测细胞增殖情况,Real-time PCR检测Notch1、Hes1基因mRNA表达。结果 无血清培养条件下,所培养细胞形成大量呈Nestin抗原阳性细胞组成的神经球;诱导分化6d后,形成β-tubulin Ⅲ表达呈阳性的神经元和GFAP表达呈阳性的星形胶质细胞;Hcy干预组细胞活力低于对照组,且有剂量依赖性(P<0.05)。Hcy干预组Hes1mRNA表达低于对照组(P<0.05)。Hcy-H组Notch1mRNA表达低于其他3组(P<0.05);Hcy-M组Notch1mRNA表达低于对照组和低剂量组(P<0.05)。结论 Hcy能抑制大鼠新生鼠NSCs的增殖,可能与下调Notch信号通路中Notch1和Hes1mRNA表达有关     

δ-榄香烯通过线粒体途径诱导人结肠癌细胞DLD-1凋亡的研究

目的探讨δ-榄香烯诱导人结肠癌细胞DLD-1凋亡的作用及其机制。方法采用MTT法考察了δ-榄香烯对肿瘤细胞增殖的影响;ELISA法定量检测细胞DNA片段化;Annexin-VFITC/PI流式细胞术检测细胞PS外翻的影响;用Westernblot分析药物对蛋白质表达的影响。结果δ-榄香烯明显抑制DLD-1细胞的增殖。DNA核小体的检测、细胞PS外翻证实δ-榄香烯的抗肿瘤作用是以诱导肿瘤细胞凋亡的方式产生的;Bax蛋白转入线粒体内,细胞色素C的释放以及凋亡因子AIF从线粒体释放入胞质,δ-榄香烯激活caspase信号通路,引起pro-caspase-3蛋白水解为caspase-3,进一步发生PARP底物的断裂。结论δ-榄香烯通过线粒体途径诱导DLD-1细胞发生凋亡。     

灵芝乙醇提取物对A549肺癌细胞的作用及其机制

目的探讨灵芝乙醇提取物(GLEE)抗肺癌的作用及其机制。方法采用CCK-8法测定GLEE对肺癌A549细胞生长的抑制率;用荧光显微镜观察GLEE对细胞形态的影响;用流式细胞术观察其对细胞周期的影响;用AnnexinV-FITC/PI双染检测细胞的凋亡情况。结果当GLEE浓度为5～320μg·mL^-1时,A549细胞生长的抑制率逐步上升,半数抑制浓度(IC₅₀)为10.8μg·mL^-1。荧光显微镜下观察到不同浓度GLEE作用后的A549细胞出现了细胞皱缩,染色质边缘凝集等凋亡细胞特有的形态学特征。当GLEE的浓度为80、100、200μg·mL^-1时,主要将细胞周期阻滞在G₀/G₁期,当GLEE浓度为300、350μg·mL^-1时,主要将细胞周期阻滞在S期。当GLEE浓度为200、300、350μg·mL^-1时,早期凋亡率分别为21.66%±5.19%、27.34%±2.89%、28.28%±7.25%,凋亡率显著...     

槲皮素通过靶向GAS5/Notch1信号通路促进乳腺癌细胞凋亡的研究

目的探讨槲皮素对乳腺癌细胞促凋亡作用的可能机制。方法用槲皮素处理乳腺癌MCF-7细胞后,采用MTT法检测细胞活力;平板克隆实验检测细胞增殖克隆能力;Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡;同时,分别采用槲皮素(40、80、160μmol·L^-1)、GAS5小干扰RNA(siGAS5)、槲皮素(80μmol·L^-1)协同siGAS5处理细胞后,qRT-PCR法和Western blot法检测GAS5、Notch1、Jagged1、Hes1、Bcl-2、Bax、Caspase-3的表达。结果槲皮素(40、80、160μmol·L^-1)处理MCF-7细胞后,发现40μmol·L^-1槲皮素可明显抑制增殖,而80、160μmol·L^-1槲皮素不仅明显抑制增殖且诱导凋亡;槲皮素(40、80、160μmol·L^-1)可上调GAS5、Bax和Caspase-3的表达,下调Notch1、Jagged1、Hes1和Bcl-2的表达;细胞转染siGAS5后,与sncRNA组相比,GAS5、Bax和Caspase-3表达下调,Notch1、Jagged1、Hes1和Bcl-2表达上调;当siGAS5与槲皮素(80μmol·L^-1)共处理细胞后,与sncRNA加槲皮素对照组相比,GAS5、Bax和Caspase-3表达下调,Notch1、Jagged1、Hes1和Bcl-2上调。结论槲皮素通过靶向GAS5/Notch1信号通路促进乳腺癌细胞凋亡。     

银杏达莫注射液联合鼠神经生长因子治疗重型急性颅脑损伤的临床研究

目的 探讨消岩汤逆转肺癌顺铂（DDP）耐药的可能机制。方法 MTT检测细胞增殖情况,划痕实验检测细胞侵袭能力;siRNA转染细胞获取稳定低表达基因的细胞株;实时荧光定量PCR（qRT-PCR）和Werstern blotting检测mRNA和蛋白表达水平的变化。结果 MTT检测A549/DDP,在72、96 h,消岩汤能够明显抑制细胞增殖,而在48、72、96 h,DDP联合消岩汤能够明显抑制细胞增殖。划痕实验显示与A549/DDP/siRNA-NC比较,A549/DDP/siRNA-Beclin1细胞株迁移距离明显缩短。MTT显示与A549/DDP/siRNA-NC比较,A549/DDP/siRNA-Beclin1细胞株增殖能力减低,Western blotting显示与A549/DDP/siRNA-NC比较,A549/DDP/siRNA-Beclin1细胞P-糖蛋白（P-gp）和肺耐药相关蛋白（LRP）蛋白表达降低,MTT检测A549/DDP/siRNA-Beclin1细胞,在72、96 h,DDP和消岩汤能明显抑制细胞增殖;而在24、48、72、96 h,DDP联合消岩汤明显抑制细胞增殖。结果显示DDP联合消岩汤使A549/DDP/siRNA-Beclin1细胞株中YES关联蛋白1（YAP1）、P-gp和LRP蛋白表达明显降低。结论 消岩汤可能通过影响Beclin 1-YAP1分子通路进而改变肺癌细胞对DDP的敏感性。     

双氢青蒿素通过PI3K/Akt通路逆转肺癌顺铂耐药A549/DDP细胞的分子机制

摘要：目的:研究双氢青蒿素通过磷脂酰肌醇-3-激酶/丝苏氨酸蛋白激酶（PI3K/Akt）通路逆转肺癌顺铂耐药A549/DDP细胞的分子机制。方法:体外培养人肺癌耐顺铂株（A549/DDP）,给予不同浓度双氢青蒿素(20,40,80,160,200,250,300μmol·L-1)处理48 h后,通过MTT法检测双氢青蒿素对A549/DDP细胞增殖影响,选取双氢青蒿素最佳实验浓度及在不同浓度DDP(0,20,40,60,80,100μmol·L-1)作用下观察并计算顺铂对A549/DDP细胞IC50和双氢青蒿素对A549/DDP逆转倍数;通过流式细胞术检测各组细胞凋亡率,Western blot法检测各组细胞中凋亡相关因子B淋巴细胞瘤-2基因（Bcl-2）和半胱氨酸蛋白酶3（Caspase3）及PI3K/Akt通路相关蛋白PI3K、AKT、磷酸化蛋白激酶B（p-Akt）的表达。结果:随双氢青蒿素浓度升高,细胞增殖抑制率依次升高（P<0.05）,且具有浓度依赖性,IC10（32.07±1.04）μmol·L-1是双氢青蒿素为最佳逆转耐药浓度;随DDP浓度的升高,双氢青蒿素A549/DDP细胞增殖抑制率随之升高（P<0.05）,DDP+双氢青蒿素组顺铂对A549/DDP的IC50为（26.42±1.23）μmol·L-1,顺铂组为（58.16±1.32）μmol·L-1,双氢青蒿素的逆转耐药倍数为2.21;与对照组相比,DDP组、双氢青蒿素组、DDP+双氢青蒿素组细胞凋亡率、caspase-3表达显著升高（P<0.05）,Bcl-2、PI3K、p-Akt/Akt表达显著降低（P<0.05）;与DDP组、双氢青蒿素组相比,DDP+双氢青蒿素组细胞凋亡率、caspase-3表达显著升高（P<0.05）,Bcl-2、PI3K、p-Akt/Akt表达显著降低（P<0.05）。结论:双氢青蒿素通过抑制PI3K/Akt通路促进A549/DDP细胞凋亡,在一定程度上可逆转肺癌A549/DDP细胞株对顺铂的耐药性。     

黄芪多糖调控AMPK-mTORC1通路对牙周膜成纤维细胞增殖、凋亡、自噬的影响

目的 探究黄芪多糖(Astragalus polysaccharide, APS)对牙周膜成纤维细胞(human periodontal ligament fibroblasts, HPLF)增殖、凋亡、自噬及磷酸腺苷蛋白激酶(AMPK)/雷帕霉素靶蛋白(mTORC1)通路的影响。方法 原代培养HPLF细胞;免疫组织化学法鉴定HPLF细胞;设置对照组、0.1 mg·mL^-1组(0.1 mg·mL^-1 APS)、0.2 mg·mL^-1组(0.2 mg·mL^-1 APS)、0.4 mg·mL^-1组(0.4 mg·mL^-1 APS),细胞增殖及毒性(CCK-8)法检测各组细胞增殖抑制率;用流式细胞仪检测各组细胞凋亡率;透射电子显微镜观察各组HPLF细胞自噬情况;Western blot检测各组细胞自噬、凋亡、通路相关蛋白表达情况。结果 与对照组相比,细胞增殖抑制率、细胞凋亡率在0.1 mg·mL^-1组、0.2 mg·mL^-1     

Notch1表达对肝癌细胞HepG2生物学行为的影响

目的研究Notch1基因对Hes1、Hes2表达水平以及肝癌细胞HepG2生物学行为的影响。方法将HepG2细胞分为Notch1受体胞内段质粒(A)组、Notch1干扰RNA(B)组、空载体(C)组和未处理HepG2细胞(D)组。采用MTT法检测各组细胞增殖能力,流式细胞术测定细胞周期,RT-PCR和Western blot法分别检测Notch1、Hes1、Hes2mRNA和蛋白的表达。结果与C组和D组相比,A组细胞增殖能力减弱,G1期细胞以及Notch1、Hes1、Hes2mRNA和蛋白表达均明显增加(P<0.05),而B组细胞增殖能力增强,G1期细胞以及Notch1、Hes1、Hes2mRNA和蛋白表达均明显减少(P<0.05)。结论上调Notch1的表达能促进Hes1与Hes2表达水平并抑制肝癌细胞HepG2增殖。     

G蛋白偶联受体相关分选蛋白1在非小细胞肺癌中表达的临床意义及其与顺铂化疗抵抗的关系

目的 探究G蛋白偶联受体相关分选蛋白1(GPRASP1)的表达与非小细胞肺癌(NSCLC)细胞的顺铂(DDP)敏感性的关系。方法 收集癌旁组织、原发NSCLC组织及复发NSCLC组织，用荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)法检测GPRASP1和腺苷三磷酸结合盒式亚家族A成员5(ABCA5)mRNA的表达情况。空白组和过表达组分别用慢病毒转染空白载体和GPRASP1过表达载体于A549细胞中；对照组和抵抗组分别用慢病毒转染对照小干扰RNA(si-control)于A549细胞及DDP耐药细胞中；干扰组用慢病毒转染GPRASP1小干扰RNA(si-GPRASP1)于DDP耐药细胞中。用CCK-8实验法检测细胞对DDP的半抑制浓度(IC₅₀),用RT-PCR法检测各组细胞中GPRASP1与ABCA5的表达情况。结果 癌旁组织、NSCLC组织与复发NSCLC组织中GPRASP1 mRNA表达量分别为(1.27±0.16)×10^-2、(2.68±0.30)×10^-2和(3.89±0.72)×10^-2,ABCA...     

丹参酮ⅡA对缺血再灌注损伤的乳鼠心肌细胞Notch信号通路的影响

目的 研究丹参酮ⅡA预处理对缺血再灌注后乳鼠心肌细胞丙二醛(MDA)水平、细胞凋亡及细胞内Notch1、Hes1及HIF-1α mRNA表达的影响,从Notch信号通路活化水平阐明丹参酮ⅡA预处理防治缺血再灌注损伤(ischemia/ reperfusion,I/R)的分子机制。方法 培养乳鼠原代心肌细胞,建立心肌细胞I/R模型。并分为对照组、I/R模型组(先用正常培养液孵育1 h,然后模拟缺血2 h,正常DMEM再灌注4 h)、DAPT处理组(先用含DAPT的DMEM中孵育1 h,然后模拟缺血2 h,正常DMEM再灌注4 h)和丹参酮ⅡA处理组(先用含丹参酮IIA的DMEM中孵育1 h,然后模拟缺血2 h,正常DMEM再灌注4 h)。应用硫代巴比妥酸法测定MDA水平,用磷脂酰丝氨酸外翻分析法检测细胞凋亡,并用荧光定量PCR技术检测反映Notch信号通路活化水平的Notch信号通路受体Notch1 mRNA、下游信号分子Hes1 mRNA和HIF-1α mRNA表达。结果 与对照组比较,乳鼠I/R模型组心肌细胞MDA水平升高(P<0.01),细胞早期凋亡率增加,Notch1、Hes1、HIF-1α mRNA表达水平增加(P<0.05,P<0.01,P<0.01)。与I/R模型组比较,DAPT处理组和丹参酮ⅡA处理组心肌细胞MDA水平降低(P<0.01),心肌细胞早期凋亡率降低,Notch1、Hes1、HIF-1α mRNA表达水平下降(P均<0.01)。结论 丹参酮ⅡA在乳鼠心肌细胞I/R损伤中起到心肌保护作用,其可能的分子机制为抑制Notch信号通路的活化及调节细胞凋亡。     

没药甾酮下调PXR/P-gp通路逆转肝癌化疗耐药机制

目的 研究没药甾酮(guggulsterone, GS)能否通过调控孕烷X受体(pregnane X receptor, PXR)/P-糖蛋白(P-glycoprotein, P-gp)通路增强化疗药物对人肝癌细胞增殖抑制和凋亡诱导作用。方法 以人肝癌细胞HepG2为研究对象,检测GS、化疗药物顺铂(cis-platinum, DDP)和5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil, 5-FU)单独或联合使用对HepG2细胞增殖、凋亡、MDR1 mRNA转录,及PXR/P-gp通路的调控作用。结果 与DDP、5-FU单药组相比,联用GS(30μmol·L^-1)24 h明显增强DDP、5-FU对HepG2细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用。与5-FU单药组相比,联用GS(30μmol·L^-1)24 h明显下调PXR、P-gp表达和MDR1 mRNA转录水平。进一步研究发现,PXR激动剂利福平能够诱导PXR和P-gp表达,与GS联用后,PXR和P-gp明显下调;PXR抑制剂酮康唑能够抑制PXR/P-gp表达,与GS联用后,PXR和P-gp进一步下调。结论...     

荜茇酰胺对人肺癌A549/DDP细胞耐药性的逆转作用

目的:研究荜茇酰胺对人肺癌A549/顺铂(DDP)细胞耐药性的逆转作用。方法:A549/DDP细胞经0、20、30μmol/L荜茇酰胺作用48 h后,用MTS法检测肿瘤细胞抑制率;流式细胞术检测肿瘤细胞凋亡、细胞周期、P-糖蛋白(P-gp)表达和肿瘤细胞内罗丹明Rht123含量的变化;Western blotting法检测多药耐药基因(MDR)1、多药耐药相关蛋白(MRP)1、DNA拓扑异构酶(Top)Ⅱ、谷胱甘肽S-转移酶(GST)-π、凋亡抑制蛋白Survivin、周期蛋白依赖性蛋白激酶(CDK)1和蛋白激酶(PK)Cζ蛋白表达;实时荧光聚合酶链反应(RT-PCR)法检测MDR1、MRP1、Top-II、GST-π、Survivin和CDK1 m RNA表达;酶标仪检测含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase)-3、8活性。结果:A549/DDP细胞经0、20、30μmol/L荜茇酰胺作用48 h后,DDP对肿瘤细胞增殖的抑制率明显升高;与0μmol/L比较,20、30μmol/L荜茇酰胺作用48 h后,DDP导致的细胞凋亡率和G2期/M期明显升高,P-gp表达明显减弱,Rh-123浓度明显增加,MDR1、MRP1、Top-II、GST-π、Survivin、CDK1和PKCζ蛋白表达明显减弱,MDR1、MRP1、Top-Ⅱ、GST-π、Survivin、CDK m RNA表达明显减弱,Caspase-3、8的活性明显增强。结论:荜茇酰胺可逆转人肺癌A549/DDP细胞DDP耐药性,可能与其调节多药耐药相关基因表达有关。