注射用丹参多酚酸对MCAO/R大鼠Nrf2/Keap1/HO-1信号通路的影响

目的 采用大鼠大脑中动脉栓塞/再灌注（MCAO/R）模型考察注射用丹参多酚酸（SAFI）对脑缺血再灌注大鼠核因子E2相关因子2（Nrf2）/Kelch样ECH相关蛋白（Keap1）/血红素氧合酶-1（HO-1）信号通路的影响。方法 线栓法构建大鼠MCAO/R模型,于术后24 h进行神经功能评分,将造模成功的大鼠随机分为模型组、丁苯酞（5 mL·kg^-1）组和SAFI低、中、高剂量（5.76、11.51、23.02 mg·kg^-1）组,尾iv给药,连续14 d。考察给药后各组大鼠神经功能缺损评分;ELISA法检测血清超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、脑源性神经营养因子（BDNF）水平;TTC染色法检测脑梗死体积;HE染色观察脑组织病理变化;Western blotting法检测Nrf2、Keap1、HO-1蛋白表达。结果 与模型组比较,SAFI中、高剂量组和丁苯酞组大鼠的神经功能缺损评分显著降低（P＜0.05、0.01） ;SAFI各剂量组和丁苯酞组脑梗死体积显著减少（P＜0.01、0.001）,血清BDNF、SOD水平均显著升高（P＜0.05、0.01、0.001）,MDA水平显著降低（P＜0.05、0.01）,脑组织病理变化明显减轻,水肿减轻; SAFI高、中剂量组及丁苯酞组Keap1、Nrf2、HO-1蛋白表达显著升高（P＜0.05、0.01、0.001）,SAFI低剂量组Keap1、HO-1蛋白表达显著升高（P＜0.01、0.001）。结论 SAFI可以减轻大鼠脑缺血再灌注损伤,可能是通过促进Nrf2/Keap1/HO-1信号通路,抑制氧化损伤实现的。     

三七总皂苷通过调节蛋白酶激活受体-1抗肺纤维化的作用机制研究

目的 考察三七总皂苷（PNS）的体内外抗肺纤维化作用,并探讨其作用机制。方法 将60只Wistar大鼠随机分为假手术组、模型组、吡非尼酮（阳性药,50 mg·kg^-1）组和PNS低、中、高剂量（50、100、200 mg·kg^-1）组,采用气管内注入博来霉素（5 mg·kg^-1）建立肺纤维化大鼠模型,假手术组注入生理盐水;造模24 h后给药,持续28 d;检测大鼠肺脏系数,利用BUXCO系统检测大鼠气道阻力与肺顺应性变化,HE染色后观察大鼠肺组织病理结构损伤,免疫荧光法检测大鼠肺组织E-钙黏蛋白（E-cad）、N-钙黏蛋白（N-cad）表达,免疫组化法检测大鼠肺组织蛋白酶激活受体-1（PAR-1）蛋白表达;体外培养人胚肺成纤维细胞MRC-5,设对照组、模型组（凝血酶2 U·mL^-1建立体外肺纤维化模型）和PNS 5、10、20 μg·mL^-1组,体外划痕实验检测细胞迁移率,实时荧光定量PCR（qRT-PCR）、Western blotting实验检测α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、波形蛋白（Vim）和PAR-1基因和蛋白表达水平;随后使用PAR-1 si RNA抑制PAR-1表达后,进一步采用qRT-PCR和Western blotting检测α-SMA与Vim基因与蛋白表达。结果 体内实验中,与模型组相比,PNS各剂量组肺脏系数显著降低（P＜0.001）、肺顺应性显著升高（P＜0.05、0.01、0.001）,100、200 mg·kg^-1 PNS组大鼠气道阻力显著降低（P＜0.05、0.01）,同时PNS能够改善大鼠肺组织的病理结构损伤,在下调N-cad的蛋白表达同时上调E-cad的蛋白表达,且100、200 mg·kg^-1 PNS组PAR-1蛋白表达显著下调（P＜0.01、0.001）。体外实验中,与模型组相比,10、20 μg·mL^-1 PNS组细胞的迁移率显著降低（P＜0.01、0.001）,20 μg·mL^-1 PNS组α-SMA与Vim mRNA水平下调（P＜0.05、0.01）,20 μg·mL^-1 PNS组α-SMA蛋白表达水平显著下调（P＜0.05） ,10、20 μg·mL^-1 PNS组Vim蛋白表达水平显著下调（P＜0.05、0.01）,PAR-1 siRNA组α-SMA mRNA水平和α-SMA、Vim蛋白表达水平显著降低（P＜0.05、0.01、0.001）。结论 PNS具有抗肺纤维化的作用,其机制可能与调控PAR-1的异常有关。     

硫辛酸对脑缺血再灌注损伤大鼠RAGE/LRP1通路及神经血管单元重塑的影响

目的 探究硫辛酸对脑缺血再灌注损伤大鼠神经血管单元重塑的作用及对晚期糖基化终产物受体（RAGE）/低密度脂蛋白受体相关蛋白1（LRP1）的影响。方法 108只雄性Wistar大鼠,除18只作为假手术组外,其余大鼠采用线栓法制备大脑中动脉短暂缺血再灌注（tMCAO）模型。模型成功大鼠根据神经评分分为模型组、FPS-ZM1 （RAGE抑制剂,1 mg·kg^-1）组和硫辛酸高、中、低剂量组（40、20、10 mg·kg^-1）,再灌注2 h后ip给药,假手术组和模型组注射等量生理盐水,每天1次,连续给药14 d。术后1、7、14 d对大鼠进行神经功能缺损程度评分（mNSS）和激光散斑成像仪监测脑血流量（CBF）。术后14 d,2,3,5-氯化三苯基四氮唑（TTC）染色法检测大鼠脑梗死面积;伊文思蓝（EB）检测血脑屏障通透性;免疫荧光染色检测脑微血管密度并采用免疫组化法检测胶质纤维酸性蛋白（GFAP）、神经元核抗原（NeuN）表达;实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测血管内皮生长因子（VEGF）、促血管生成素1（Ang-1）、促血管生成素2（Ang-2）的mRNA表达; Western blotting检测基质金属蛋白酶9（MMP9）、紧密连接相关蛋白5（claudin5）、RAGE、LRP1蛋白表达。结果 与假手术组比较,模型组大鼠mNSS评分、脑梗死百分比、EB含量、GFAP阳性细胞数、脑组织Ang-2 mRNA水平、MMP9和RAGE蛋白表达显著升高（P<0.05）,CBF、NeuN阳性细胞数、VEGF和Ang-1 mRNA水平、claudin5和LRP1蛋白表达显著降低（P<0.05）;与模型组比较,硫辛酸高、中剂量组大鼠mNSS评分、脑梗死百分比、EB含量、GFAP阳性细胞数、脑组织Ang-2 mRNA、MMP9和RAGE蛋白表达显著降低（P<0.05）,CBF、脑微血管密度、NeuN阳性细胞数、VEGF和Ang-1 mRNA、claudin5和LRP1蛋白表达显著升高（P<0.05）。结论 硫辛酸可降低BBB的通透性,促进血管新生,对神经血管单元起着修复和保护作用;其作用机制可能与下调RAGE的表达,上调LRP1的表达有关。     

泽泻多糖激活PPAR-γ/LXR-α/ABCG1信号通路发挥对糖尿病肾病大鼠的保护作用

目的 探究泽泻多糖对糖尿病大鼠肾损伤的改善作用。方法 SPF级SD雄性大鼠随机分为对照组,模型组,吡格列酮［过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPAR-γ）激活剂,20 mg·kg^-1］组,泽泻多糖低、中、高剂量（100、200、400 mg·kg^-1）组和泽泻多糖（400 mg·kg^-1）＋ GW9662（PPAR-γ抑制剂,10 mg·kg^-1）组,除对照组外均采用高糖高脂＋链脲佐菌素（STZ）柠檬酸钠缓冲液法制备糖尿病肾病（DN）大鼠模型,造模后各组ig给药,每天1次,连续6周。血糖仪测定大鼠空腹血糖（FBG）水平;全自动生化分析仪检测大鼠血清肌酐、尿酸、尿素氮水平,检测24 h尿蛋白及尿肌酐,计算内生肌酐清除率（Ccr）;处死大鼠,计算大鼠肾脏指数;HE染色观察大鼠右侧肾脏组织病理学变化;Western blotting法检测肾脏组织PPAR-γ/肝X受体-α（LXR-α）/ATP结合盒转运蛋白G1（ABCG1）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-1β（IL-1β）蛋白水平。结果 与对照组比较,模型组大鼠毛色枯黄,体质量显著减轻（P<0.05）;肾小球细胞空泡化、肾小球基底膜增厚;肾脏指数、FBG、24 h尿蛋白、尿酸、尿素氮、TNF-α和IL-1β蛋白水平显著升高（P<0.05）,Ccr和PPAR-γ、LXR-α、ABCG1蛋白水平显著降低（P<0.05）;与模型组比较,吡格列酮组和中、高剂量泽泻多糖组大鼠毛色及饮食、饮水逐渐恢复,体质量显著增加（P<0.05）;肾损伤程度减轻;FBG、24 h尿蛋白、尿酸、TNF-α和IL-1β蛋白水平显著降低（P<0.05）,Ccr及PPAR-γ、LXR-α、ABCG1蛋白水平显著升高（P<0.05）;泽泻多糖高剂量组肾脏指数显著降低（P<0.05）。高剂量泽泻多糖组与吡格列酮组各指标差异比较无统计学意义,GW9662可逆转高剂量泽泻多糖对大鼠肾脏功能的保护作用。结论 泽泻多糖可能通过激活PPAR-γ/LXR-α/ABCG1通路保护DN大鼠肾脏。     

丙酮酸乙酯调控TXNIP/NLRP3/Caspase-1通路对缺氧缺血新生大鼠海马神经元焦亡的影响

目的 探究丙酮酸乙酯（EP）调控硫氧还蛋白结合蛋白（TXNIP）/核苷酸结合域样受体蛋白3（NLRP3）/半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1（Caspase-1）通路对缺氧缺血性脑损伤（HIBI）新生大鼠海马神经元焦亡的影响。方法 将SD大鼠随机分为假手术组,模型组,尼莫地平（8 mg·kg^-1）组,EP低、高剂量（1.5、3.0 mg·kg^-1）组,EP （3 mg·kg^-1）+白藜芦醇（Res,30 mg·kg^-1,TXNIP抑制剂）组。通过左颈总动脉结扎及缺氧处理构建HIBI大鼠模型,于造模24h后开始ip给药,每天1次,连续2周。采用Longa评分对各组大鼠神经功能损伤进行评估;ELISA法检测大鼠海马组织白细胞介素-1β（IL-1β）、白细胞介素-18（IL-18）含量;透射电子显微镜下观察大鼠海马超微结构;HE染色观察海马组织病理学情况;TUNEL染色观察海马神经元凋亡;Western blotting检测海马组织中TXNIP/NLRP3/Caspase-1通路相关蛋白表达。结果 与假手术组比较,模型组Longa评分、海马组织IL-1β和IL-18水平、神经元凋亡指数（AI）、以及TXNIP、NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白（ASC）、cleaved Caspase-1蛋白表达水平显著增加（P<0.05）,神经元损伤、海马组织病理学程度明显增加;与模型组比较,尼莫地平组和EP低、高剂量组Longa评分、IL-1β和IL-18水平、神经元AI以及TXNIP、NLRP3、ASC、cleaved Caspase-1蛋白表达水平显著降低（P<0.05）,神经元损伤、海马组织病理学程度明显改善;与EP高剂量组比较,EP+Res组Longa评分、IL-1β和IL-18水平、神经元AI以及TXNIP、NLRP3、ASC、cleaved Caspase-1蛋白表达水平显著降低（P<0.05）,神经元损伤、海马组织病理学程度改善更明显。结论 EP可能通过抑制TXNIP/NLRP3/Caspase-1通路来减轻HIBI新生大鼠海马神经元焦亡。     

栀子苷介导GLP-1R/Akt信号通路改善大鼠脑缺血再灌注损伤和神经元凋亡的研究

目的 观察栀子苷对脑缺血再灌注损伤（CIRI）模型大鼠的神经保护作用及对胰高血糖素样肽-1受体（GLP-1R）/蛋白激酶B（Akt）信号通路的影响。方法 50只SD大鼠随机分为假手术组,模型组,栀子苷低、高剂量组及尼莫地平片组,每组10只。采用线栓法制备CIRI大鼠模型,缺血2 h再灌注24 h后,栀子苷低、高剂量组大鼠分别ig给予10、40 mg·kg^-1的栀子苷,尼莫地平片组大鼠ig给予8.1 mg·kg^-1尼莫地平,假手术组和模型组大鼠ig等体积生理盐水,每天1次,连续7 d。造模后及给药结束后,分别对各组大鼠进行神经功能缺损评分;给药结束后,采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测血清中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-1β（IL-1β）及白细胞介素-6（IL-6）水平,苏木素-伊红（HE）染色检测脑组织病理学变化,尼氏染色检测神经元与尼氏小体变化,免疫组化染色检测脑组织B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）和Bcl-2关联X蛋白（Bax）表达,蛋白质印迹法（Western blotting）检测脑组织细胞色素C（Cyt-C）、半胱氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）、半胱氨酸蛋白酶-9（Caspase-9）、胰高血糖素样肽-1受体（GLP-1R）及磷酸化蛋白激酶B（p-Akt）蛋白表达水平。结果 与假手术组比较,模型组大鼠神经功能缺损评分显著升高（P＜0.05）,血清中TNF-α、IL-1β、IL-6水平显著升高（P＜0.05）;皮质细胞间质疏松、增宽,有大量神经元细胞质萎缩和细胞核损伤;脑神经元皱缩,尼氏小体变小,数目明显减少。大鼠脑组织Bcl-2表达显著降低（P＜0.05）,Bax表达显著升高（P＜0.05）;脑组织中Cyt-C、Caspase-3、Caspase-9蛋白表达水平显著升高（P＜0.05）,GLP-1R和p-Akt蛋白表达水平显著降低（P＜0.05）。与模型组比较,栀子苷高剂量组和尼莫地平片组大鼠神经功能缺损评分均显著降低（P＜0.05）,血清中TNF-α、IL-1β、IL-6水平显著降低（P＜0.05）,皮质细胞较为整齐,神经元细胞和尼氏小体损伤减小,Bcl-2表达显著升高（P＜0.05）,Bax表达显著降低（P＜0.05）,同时,Cyt-C、Caspase-3及Caspase-9蛋白表达水平显著下降（P＜0.05）,GLP-1R和p-Akt蛋白表达水平显著升高（P＜0.05）。结论 栀子苷能够改善大鼠CIRI,减少神经元凋亡,其作用机制可能与激活GLP-1R/Akt信号通路有关。     

黄连碱对慢性肾功能衰竭大鼠的治疗作用及其机制研究

目的 探讨黄连碱对慢性肾功能衰竭（chronic renal failure,CRF）大鼠的治疗作用及其机制。方法 60只健康SD大鼠,♂,随机分为空白组、模型组、尿毒清组、黄连碱200,100和50 mg·kg^-1剂量组,每组10只。除空白组外,各组大鼠灌胃腺嘌吟,连续28 d,制成CRF模型。造模同时,黄连碱200,100和50 mg·kg^-1剂量组每日分别灌胃200,100和50 mg·kg^-1黄连碱。治疗后,观察各组大鼠体质量的变化、检测24 h尿量及尿蛋白含量,Elisa法检测各组大鼠血清尿素氮（BUN）、肌酐（SCr）、TGF-β1及PAI-1的含量水平、Western blot法检测大鼠肾组织TGF-β1及PAI-1蛋白的表达。结果 与模型组比较,200,100和50 mg·kg^-1剂量的黄连碱干预后,大鼠体质量及24 h尿量显著增加（P<0.05）,尿蛋白显著降低（P<0.05）,且血清中BUN、SCr、TGF-β1及PAI-1含量和肾组织TGF-β1和PAI-1表达均显著降低（P <0.05）。结论 黄连碱对CRF大鼠的肾功有一定的改善作用,其机制与降低血清及肾组织中TGF-β1和PAI-1表达有关。     

瞬时受体电位香草酸亚型1基因多态性与小儿哮喘的关系

目的 分析瞬时受体电位香草酸亚型1（TRPV1）基因多态性与小儿哮喘的关系。方法 抽取2018年2～10月平顶山市第一人民医院收治的90例哮喘患儿为研究对象（哮喘组）,另选取同期50例体检的健康儿童作为对照（对照组）。均采用限制性片段长度多态性聚合酶链反应（CPCR-RFLP）方法分析TRPV1基因rs222747、rs222748、rs8065080位点的基因型与等位基因分布情况,并对小儿哮喘基因型的危险度进行分析。结果 在哮喘组、对照组中,rs222747、rs222748、rs8065080位点均可检出3种基因型（即rs222747基因型包括CC、GC、GG,rs222748基因型包括CC、TC、TT,rs8065080基因型包括CC、TC、TT）。哮喘组TRPV1基因rs222747位点的3种基因型及等位基因分布与对照组相比差异无统计学意义（P>0.05）,而rs222748、rs8065080位点的3种基因型及等位基因分布与对照组比较均存在差异（P<0.05）。在显性模型、隐性模型、共显性模型中均未发现rs222747位点与小儿哮喘有关联（P>0.05）。在显性模型、隐性模型中均未发现rs222748位点与小儿哮喘有关联（P>0.05）,在共显性模型下,rs222748位点携带基因型TT的小儿患哮喘的风险是携带基因型CC小儿的5.926倍（P<0.05）。在显性模型下,rs8065080位点携带基因型TC+TT的小儿患哮喘的风险是携带基因型CC小儿的5.233倍（P<0.05）;在共显性模型下,rs8065080位点携带基因型TT小儿患哮喘的风险是携带基因型CC小儿的7.058倍（P<0.05）。结论 TRPV1基因rs222748、rs8065080位点基因多态性可能与小儿哮喘的易感性有关,未发现rs222747位点多态性对小儿哮喘的易感性有影响。     

咖啡酸苯乙酯通过下调LRRK2抑制JNK信号通路减轻大鼠创伤性颅脑损伤

目的 探究咖啡酸苯乙酯（CAPE）对创伤性颅脑损伤（TBI）大鼠的作用及机制。方法 54只SD大鼠随机分为假手术组,模型组,CAPE低、高剂量（5、10 mg·kg^-1）组,CAPE （10 mg·kg^-1）+腺相关病毒阴性对照（oe-NC,1×10⁹ pfu,200 μL）组,CAPE （10 mg·kg^-1）+过表达LRRK2腺相关病毒（oe-LRRK2,1×10⁹ pfu,200 μL）组,每组9只。采用改良的Feeney法制备TBI模型,造模后30 min,CAPE和oe-NC、oe-LRRK2均ip给药,假手术组和模型组大鼠ip等量溶剂。所有大鼠每天给药1次,连续7 d。改良神经功能缺损评分（mNSS）评估大鼠神经功能缺损程度;转棒实验评价大鼠综合运动能力;检测各组大鼠脑组织含水量;ELISA法检测血清神经元特异性烯醇化酶（NSE）、白细胞介素（IL）-6、肿瘤坏死因子（TNF）-α和IL-1β水平;实时荧光定量PCR（qRT-PCR）法检测LRRK2 mRNA表达;Western blotting检测LRRK2、p-JNK和JNK蛋白表达;TUNEL染色检测大脑皮层细胞凋亡;FJB染色检测神经元细胞死亡。结果 与假手术组相比,模型组大鼠mNSS、脑组织含水量、大脑皮层细胞凋亡率、FJB⁺细胞数以及血清中NSE、IL-6、TNF-α和IL-1β含量显著升高（P<0.05）,LRRK2 mRNA和LRRK2、p-JNK/JNK蛋白水平显著升高（P<0.05）,转棒时间显著降低（P<0.05）;与模型组相比,CAPE低、高剂量组大鼠mNSS、脑组织含水量、大脑皮层细胞凋亡率、FJB+细胞数以及血清中NSE、IL-6、TNF-α和IL-1β含量显著降低（P<0.05）,LRRK2 mRNA和LRRK2、p-JNK/JNK蛋白表达显著降低（P<0.05）,转棒时间显著升高（P<0.05）;与CAPE+oe-NC组相比,CAPE+oe-LRRK2组大鼠mNSS、脑组织含水量、细胞凋亡率、FJB+细胞数以及血清中NSE、IL-6、TNF-α和IL-1β含量显著升高（P<0.05）,LRRK2 mRNA和LRRK2、p-JNK/JNK蛋白表达显著升高（P<0.05）,转棒时间显著降低（P<0.05）。结论 CAPE可能通过下调LRRK2表达抑制JNK通路活化,在TBI中发挥保护作用。     

注射用丹参多酚酸对脑缺血再灌注大鼠脑损伤的保护作用

目的 考察注射用丹参多酚酸（SAFI）对脑缺血再灌注大鼠脑损伤的保护作用。方法 线拴法构建大脑中动脉缺血再灌注（MCAO/R）大鼠模型,将造模成功的大鼠随机分为模型组、丁苯酞氯化钠注射液（阳性药,9 mL·kg^-1）组和SAFI低、中、高剂量（5.85、11.71、23.42 mg·kg^-1,11.71 mg·kg^-1为临床等效剂量）组,每组12只。假手术组和模型组给予0.9%氯化钠注射液,SAFI每天给药1次,丁苯酞氯化钠注射液每天给药2次,尾iv连续给药14 d。给药期间称大鼠体质量;给药前后对各组大鼠进行神经功能评分;给药后采用TTC染色法检测脑梗死体积;酶联免疫吸附（ELISA）法检测血清中γ干扰素（IFN-γ）、白细胞介素-6（IL-6）、白细胞介素-1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和超氧化物歧化酶（SOD）的水平;HE染色观察脑组织病理形态;尼氏染色观察海马区尼氏小体形态变化情况。结果 给药14 d后,与模型组比较,SAFI 5.85、11.71、23.42 mg · kg^-1组和丁苯酞氯化钠注射液组大鼠体质量显著增加（P ＜ 0.001）,脑组织梗死体积显著缩小（P＜0.001） ;SAFI 11.71、23.42 mg·kg^-1组和丁苯酞氯化钠注射液组神经功能评分显著降低（P＜0.05、0.01）,IFN-γ、IL-1β和TNF-α水平均显著降低（P＜0.01、0.001）,SOD水平显著升高（P＜0.01、0.001）; SAFI 23.42 mg·kg^-1组和丁苯酞氯化钠注射液组IL-6水平显著降低（P＜0.05、0.01）; SAFI可明显改善MCAO/R大鼠脑组织缺血半暗带区病理损伤,抑制尼氏小体数的减少。结论 SAFI对脑缺血再灌注大鼠脑损伤具有明显的保护作用。     

Interactions between CB(1) receptors and TRPV1 channels mediated by 12-HPETE are cytotoxic to mesencephalic dopaminergic neurons

Background and purposes:We recently proposed the existence of neurotoxic interactions between the cannabinoid type 1 (CB(1)) receptor and transient receptor potential vanilloid 1 (TRPV1) channels in rat mesencephalic cultures. This study seeks evidence for the mediator(s) and mechanisms underlying the neurotoxic interactions between CB(1) receptors and TRPV1 in vitro and in vivo.Experimental approach:The mediator(s) and mechanism(s) for the interactions between CB(1) receptors and TRPV1 were evaluated by cell viability assays, immunocytochemistry, Fura-2 calcium imaging, mitochondrial morphology assay, ELISA and Western blot assay in vitro in neuron-enriched mesencephalic cultures. Injections into the substantia nigra and subsequent cell counts were also used to confirm these interactions in vivo.Key results:The neurotoxic interactions were mediated by 12(S)-hydroperoxyeicosatetraenoic acid (12(S)-HPETE), an endogenous TRPV1 agonist. CB(1) receptor agonists (HU210 and WIN55,212-2) increased the level of 12(S)-hydroxyeicosatetraenoic acid (12(S)-HETE), a downstream metabolite of 12(S)-HPETE, which stimulates TRPV1-mediated death of mesencephalic neurons, both in vitro and in vivo. The neurotoxicity was mediated by increased intracellular Ca(2+) concentration ([Ca(2+)](i)) through TRPV1, consequently leading to mitochondrial damage and was attenuated by baicalein, a 12-lipoxygenase inhibitor.Conclusion and implications:Activation of CB(1) receptors in rat mesencephalic neurons was associated with biosynthesis of 12(S)-HPETE, which in turn stimulated TRPV1 activity, leading to increased [Ca(2+)](i), mitochondrial damage and neuronal death.British Journal of Pharmacology (2008) 155, 253-264; doi:10.1038/bjp.2008.246; published online 16 June 2008.     

TRPV1在心血管疾病中的作用及相关中医药研究进展

瞬时受体电位香草素亚型1(transient receptor potential vanilloid-1,TRPV1)通道是瞬时受体电位亚家族的一种具有多种激活机制的非选择性配体门控阳离子通道,近年来大量研究发现TRPV1在高血压、动脉粥样硬化等心血管疾病领域扮演着重要角色。随着中药的深入研究,研究人员发现中药单体及其有效成分具有激活或抑制TRPV1通道的作用,在心血管疾病的研究中具有一定的潜力。本文综述TRPV1通道在心血管疾病中的作用以及中药基于TRPV1通道防治心血管疾病的研究进展,以期为防治心血管系统疾病提供新的思路。     

Effects of SA13353, a Transient Receptor Potential Vanilloid 1 Agonist,on Leukocyte Infiltration in Lipopolysaccharide-Induced Acute Lung Injury and Ovalbumin-Induced Allergic Airway Inflammation

We recently demonstrated that SA13353, a transient receptor potential vanilloid 1 (TRPV1) agonist, reduced the severity of the symptoms of kidney injury, arthritis, and encephalomyelitis in disease models. Here, we investigated the effects of orally administered SA13353 on leukocyte infiltration in lipopolysaccharide (LPS)-induced acute lung injury and ovalbumin-induced allergic airway inflammation. In LPS-induced lung injury, SA13353 attenuated neutrophil infiltration and the increase of TNF-α and CINC-1 levels. In allergic airway inflammation, SA13353 tended to inhibit leukocyte infiltration and attenuated the increase of IL-4 and IL-12p40. These results suggest that somatosensory TRPV1 may play an anti-inflammatory role in lung inflammation.     

Phosphorylation of TRPV1 by neurokinin-1 receptor agonist exaggerates the capsaicin-mediated substance P release from cultured rat dorsal root ganglion neurons

The present study was conducted to determine whether the activation of neurokinin-1 receptor (NK-1R) by its agonist (GR73632) enhances the capsaicin-evoked substance P (SP) release using a radioimmunoassay. A pre-exposure to GR73632 enhanced the capsaicin-evoked SP release in a time- and dose-dependent manner. The augmentation of capsaicin-evoked SP release by GR73632 was completely inhibited by pharmacological blockade of NK-1R or transient receptor potential vanilloid receptor subtype 1 (TRPV1), and was partially attenuated by the inhibition of either protein kinase C (PKC), cyclooxygenase (COX) or phospholipase C (PLC), p38 or p42/44 mitogen-activated protein (MAP) kinase, but not protein kinase A. This augmentation of SP release was further increased by inhibition of c-Jun NH2-terminal kinase. A short-term (10min) exposure to GR73632 resulted in an increase in the TRPV1 phosphorylation. The increase in the TRPV1 phosphorylated forms induced by a 60-min exposure to GR73632 was completely abolished by the inhibition of either PKC, COX or PLC, p38 or p42/44 MAP kinases. Immunocytochemistry study demonstrated that the NK-1R and TRPV1 were mainly co-expressed in the small-sized neurons. These findings suggest that the activation of NK-1R by its agonist, by sensitizing the TRPV1 through the PKC phosphorylation of TRPV1, may play a role in the enhancement of the capsaicin-evoked SP release from cultured rat DRG neurons.     

Transient receptor potential vanilloid 1 - a polymodal nociceptive receptor - plays a crucial role in formaldehyde-induced skin inflammation in mice

Formaldehyde (FA) is irritating to the skin and is the main cause of sick building syndrome. However, the cutaneous reaction induced by long-term FA exposure has not been fully investigated. In our previous study, we demonstrated that repeated painting of 2% - 10% FA on mouse ears caused marked ear swelling and increased mRNA expression of transient receptor potential vanilloid 1 (TRPV1) and neurotrophins in the ear. TRPV1 is reported to be involved in neurogenic inflammation; therefore, in the present study, we investigated the role of TRPV1 in FA-induced skin inflammation using TRPV1 gene-knockout mice. Mice were painted with 5% FA once a week for 5 weeks, and ear swelling and mRNA expression were investigated. Ear swelling and increased expression of neurotrophins mRNA by FA provocation in wild-type mice were attenuated by disruption of the TRPV1 gene. Furthermore, painting with a threshold dose of capsaicin, which does not induce ear swelling in intact mice, caused marked ear swelling after painting the ear 5 times with FA, indicating that inflamed tissues after FA application are hypersensitive to various ligands of TRPV1 in mice. These results demonstrated that neurogenic inflammation via TRPV1 and neurotrophins could be involved in FA-induced dermatitis.     

TRPV1及其致敏因子在子宫内膜异位症患者血清、在位内膜、异位内膜中的表达变化

目的 本研究旨在探讨TRPV1及其致敏因子在子宫内膜异位症患者的血清、在位内膜、异位内膜的表达变化规律,以期对子宫内膜异位症部分发病机制进行研究.方法 随机选择2013年10月至2015年10月行手术治疗的子宫内膜异位症患者70例作为研究对象,其中痛经组45例,无痛组25例.另外选择同时期手术的子宫肌瘤患者30例,作为对照组.依据视觉模拟评分法将痛经组45例患者分组,包括轻度、中度和重度痛经患者各15例.在手术前空腹取静脉血,测定下列指标血清神经生长因子(NGF)、缓激肽(BK)和前列腺素F2α(PGF2α),手术中采集在位内膜及异位内膜标本,分别采用免疫组化法和免疫印记检测法检测在位内膜组织和异位内膜组织中NGF、BKB1R、TRPV1表达水平.结果 子宫内膜异位症痛经组患者血清中NGF、BK和PGF2α的含量显著高于对照组和无痛组(P<0.05);血清中NGF表达与PGF2α以及BK表达与PGF2α表达均呈正相关(P<0.05).而痛经患者按照VAS分级从轻度、中度和重度上升,患者血清中NGF、BK和PGF2α的含量亦呈逐渐升高趋势(P<0.05),Pearson相关分析也表明血清中NGF、BK和PGF2α表达均与VAS呈正相关(P<0.05).通过免疫组化和免疫印记方法检测对在位内膜和异位内膜进行研究发现NGF、BKB1R、TRPV1主要定位于细胞浆,在位、异位内膜的腺体内均有表达.痛经组患者在位内膜NGF、BKB1R、TRPV1的表达显著高于无痛组和对照组(P<0.05);而痛经组患者异位内膜NGF、BKB1R、TRPV1的表达显著高于无痛组(P<0.05).相关性亦表明NGF与TRPVl,BKB1R与TRPV1表达呈正相关(P<0.05).结论 TRPV1及其致敏因子NGF、BKB1R、PGF2α可能在子宫内膜异位症患者痛经的发生机制中发挥重要作用.     

胰腺癌细胞中TRPV1受体参与EGFR介导的细胞功能研究

目的 研究TRPV1受体的表达变化对表皮生长因子受体（EGFR）蛋白表达的调控作用,及其对相关细胞功能的影响。方法 利用过表达技术和siRNA技术研究TRPV1表达变化对EGFR蛋白表达的影响,用CCK-8实验检测细胞的增殖,并用Real-time PCR实验对功能相关的癌基因Akt2和K-ras的表达进行检测。结果 在胰腺癌细胞中TRPV1过表达或是受激动剂激活后,EGFR的蛋白含量下调;反之,干扰TRPV1表达会使EGFR的蛋白表达增加;过表达TRPV1的胰腺癌细胞其增殖速率减缓;过表达TRPV1的胰腺癌细胞中原癌基因Akt2和K-ras的表达明显受到抑制,反之则激活其表达。结论 胰腺癌细胞中TRPV1的表达调控了EGFR的蛋白含量,并对与其功能密切相关的细胞增殖和癌基因表达也有调节作用。     

皮肤角质形成细胞中TRPV1受体激活后的蛋白质组差异分析

目的 研究皮肤角质形成细胞中辣椒素受体TRPV1激活后细胞中蛋白质组学的变化,并鉴定差异蛋白质。方法 皮肤角质形成细胞株HaCaT细胞经辣椒素(CAP)刺激24 h后,提取蛋白样品,采用双向凝胶电泳技术分离HaCaT细胞总蛋白,用PDQuest软件分析对照组和CAP刺激组蛋白组图谱的表达差异点,再运用串联飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)鉴定差异蛋白。结果 CAP刺激HaCaT细胞后,磷酸甘油醛异构酶、烯醇化酶、6-磷酸葡萄糖酸内酯酶和组织蛋白酶D蛋白表达水平增高,角蛋白14和60S酸性核糖体蛋白P2表达量降低,这些蛋白可能在TRPV1激活后影响细胞功能的过程中有重要作用。结论 利用蛋白质组学技术,研究皮肤角质形成细胞株HaCaT细胞中TRPV1受体激活后蛋白表达差异,为研究TRPV1受体的作用机制,以及为研发针对性药物,提供新的线索和方向。     

Transient receptor potential vanilloid-1 antagonists: a survey of recent patent literature

Importance of the field: Transient receptor potential vanilloid-1 (TRPV1, vanilloid receptor-1) is a nonspecific cation channel that can be activated by multiple endogenous stimuli and by capsaicin, the active ingredient in chili peppers. TRPV1 is expressed predominantly on sensory neurons where it is proposed to serve as a key nodal point in pain transmission pathways. Pharmacological blockade of TRPV1 represents a compelling strategy for the treatment of a variety of disease states, particularly those requiring chronic pain management.

Area covered in the review: This review summarizes patent literature and progress in defining the utility of small molecule TRPV1 antagonists during 2008 – 2009.

What the reader will gain: Representative compounds and key characterization data comprising multiple chemical series are highlighted.

Take home message: The continued profusion of reports, in both the primary and patent literature, attests to the sustained interest in the TRPV1 class of therapeutics. Although a number of compounds have now been brought forward for human clinical trials, the therapeutic utility of TRPV1 antagonists is yet to be validated unequivocally.     

Anandamide induces endothelium-dependent vasoconstriction and CGRPergic nerve-mediated vasodilatation in the rat mesenteric vascular bed

An endogenous cannabinoid anandamide (N-arachidonoylethanolamide) has been shown to cause vasodilatation in vitro and a brief vasoconstriction followed by prolonged depressor response in vivo. This study investigated the vascular effects of anandamide and underlying mechanisms in rat mesenteric vascular beds. In preparations with an intact endothelium and active tone, anandamide at low concentrations (0.1 - 1 nM) caused a concentration-dependent decrease in perfusion pressure due to vasodilatation, but at high concentrations (10 nM - 1 μM) elicited an initial and sharp increase in perfusion pressure due to vasoconstriction followed by long-lasting vasodilatation in a concentration-dependent manner. Treatment with SR141716A [cannabinoid-1 (CB(1))-receptor antagonist] blunted both the vasoconstrictor and vasodilator responses. Also, removal of the endothelium and indomethacin (cyclooxygenase inhibitor), but not adrenergic denervation with 6-hydoxydopamine (adrenergic neurotoxin), markedly inhibited the vasoconstrictor response to anandamide, while these treatments did not affect vasodilatation. The vasodilatation, but not vasoconstriction, in response to anandamide was markedly attenuated by capsazepine [selective antagonist for transient receptor potential vanilloid-1 (TRPV1)], pretreatment with capsaicin [calcitonin gene-related peptide (CGRP)ergic-nerve depletor], or cold-storage denervation. These results suggest that in rat mesenteric vascular beds, anandamide causes CB(1)-receptor- and prostanoid-mediated endothelium-dependent vasoconstriction and perivascular capsaicin-sensitive CGRPergic nerve-mediated vasodilatation.