缅甸人类免疫缺陷病毒-1的二重感染

目的 了解缅甸高危人群HIV-1二重感染的发生情况与特征.方法 收集缅甸HIV-1阳性血浆46份,通过不同PCR测序引物得到不同测序结果或直接测序时碱基模糊,从而确定可能为二重感染病例,然后采用TA克隆的方法对单个PCR克隆进行测序,找到血浆标本中的HIV-1准种,并分析其系统发生和重组结构.结果 46例HIV-1阳性患者中,3例为HIV-1二重感染,发生率为6.5%.此3例患者均通过异性性接触感染,均为CRF01_AE和B′以及两者的重组病毒准种构成的混合感染.结论 缅甸高危人群HIV-1的二重感染较为常见,为快速产生新的重组病毒株提供了基础.

Abstract：

Objective To investigate the occurrence and the characteristics of human immunodeficiency virus (HIV)-1 co/super-infection among high-risk populations in Myanmar.Methods Forty-six HIV-1 positive plasma in Myanmar were collected. Possible cases with HIV-1 co/super infection were identified by discordant sequence results obtained with different polymerase chain reaction (PCR)/sequencing primers or by ambiguous readings in direct sequencing. HIV-1 quasispecies in plasma were then characterized by clonal sequence analysis of independent PCR-clones generated by TA cloning method. Thereafter, their phylogeny and recombinant structure were investigated. Results Co/super infection was identified in 3 (6.5 %) cases among the 46 screened HIV-1 positive patients.All of these three patients were heterosexuals and were co/super infected with CRF01_AE/subtype B′recombinants. Conclusions HIV-1 co/super infections are relatively common and provide a prerequisite for rapid generation of new recombinant forms in Myanmar.     

缅甸人类免疫缺陷病毒-1的二重感染

Objective To investigate the occurrence and the characteristics of human immunodeficiency virus (HIV)-1 co/super-infection among high-risk populations in Myanmar.Methods Forty-six HIV-1 positive plasma in Myanmar were collected. Possible cases with HIV-1 co/super infection were identified by discordant sequence results obtained with different polymerase chain reaction (PCR)/sequencing primers or by ambiguous readings in direct sequencing. HIV-1 quasispecies in plasma were then characterized by clonal sequence analysis of independent PCR-clones generated by TA cloning method. Thereafter, their phylogeny and recombinant structure were investigated. Results Co/super infection was identified in 3 (6.5 %) cases among the 46 screened HIV-1 positive patients.All of these three patients were heterosexuals and were co/super infected with CRF01_AE/subtype B′recombinants. Conclusions HIV-1 co/super infections are relatively common and provide a prerequisite for rapid generation of new recombinant forms in Myanmar.     

缅甸人类免疫缺陷病毒-1的二重感染

Objective To investigate the occurrence and the characteristics of human immunodeficiency virus (HIV)-1 co/super-infection among high-risk populations in Myanmar.Methods Forty-six HIV-1 positive plasma in Myanmar were collected. Possible cases with HIV-1 co/super infection were identified by discordant sequence results obtained with different polymerase chain reaction (PCR)/sequencing primers or by ambiguous readings in direct sequencing. HIV-1 quasispecies in plasma were then characterized by clonal sequence analysis of independent PCR-clones generated by TA cloning method. Thereafter, their phylogeny and recombinant structure were investigated. Results Co/super infection was identified in 3 (6.5 %) cases among the 46 screened HIV-1 positive patients.All of these three patients were heterosexuals and were co/super infected with CRF01_AE/subtype B′recombinants. Conclusions HIV-1 co/super infections are relatively common and provide a prerequisite for rapid generation of new recombinant forms in Myanmar.     

中国人类免疫缺陷病毒-1 vpr基因多态性及其临床意义

目的 分析来自中国不同地区HIV-1感染者的vpr基因序列变异位点及与国外以往研究的异同,为进一步研究HIV-1 vpr基因变异的意义及其与感染者临床病情的关系奠定基础.方法 RT-PCR及套式PCR法对398例HIV-1感染者行HIV-1 vpr基凶扩增,并进行氨基酸序列分析,了解HIV vpr基冈的多念性、离散率和常见变异位点.同时将发现常见变异位点感染者的相应病毒水平、淋巴细胞亚群及临床病程的进展进行对比分析.结果 对398份血标本行HIV-1 vpr基因扩增,分析后可用氨基酸序列为153份.HIV-1 Vpr氨基酸序列分型主要足CRF01_AE 51,63%,C亚型24.84%,B亚型17.65%,CRF03_AB 3.92%,CRF08_BC 1.31%.HIV Vpr序列中第77位氨基酸84.3%为谷氨酸,与以往国外报道的R77Q变异与AIDS长期病情无进展(LTNP)璃彳切卡廿关的观点有明显差异.HIV Vpr第、63、70、85、86、89、94位氨基酸的变异,有可能使感染者的临床进展趋缓.结论 我围HIV Vpr分型仍以M组为主,其中 CRF01_AE占优势.HIV-1 Vpr中氨基酸序列某些位点的变异可能与感染者临床表现相关.     

人类免疫缺陷病毒-1感染者对重组乙型肝炎疫苗的免疫应答

目的 比较HIV-1感染者与健康者接种乙型肝炎(乙肝)疫苗后免疫应答的差异.方法 健康对照者19例和HIV-1感染者20例分别在0、1、6个月肌内注射重组乙肝疫苗20 μg,并在第1、3次疫苗注射后1个月检测抗-HBs水平,高于10 mIU/mL即为阳性.抗-HBs水平比较采用几何均数进行单因素方差分析,两两比较用Scheffe法,率的比较用Fisher's精确概率检验.结果 健康对照组第1、3次疫苗注射后1个月,抗-HBs阳性血清转换者分别为10例和18例,而HIV-1感染组分别为3例和11例,两组比较差异有统计学意义(P=0.015、0.005).CD4+T淋巴细胞≥200×106/L的HIV-1感染者在第1、3次疫苗注射后1个月,抗-HBs阳性血清转换者分别为2例和6例,而CD4+T淋巴细胞＜200×106/L的分别为1例和4例,两组比较在第1次疫苗注射后1个月差异无统计学意义(P=0.202),在第3次疫苗注射后1个月差异有统计学意义(P=0.005).CD4+T淋巴细胞＜200×106/L组(A组)、CD4+≥200X106/L组(B组)和健康对照组(C组)完成3次疫苗接种后1个月抗-HBs水平分别为(101±210)、(529±704)、(5989±10 704)mIU/mL,三组比较差异有统计学意义(F=18.53,P＜0.001),A组分别与C、B组比较,差异有统计学意义(P＜0.001、＜0.05),B组与C组比较,差异无统计学意义(P=0.353).所有入组者对乙肝疫苗均有良好耐受.结论 HIV-1感染者接种乙肝疫苗后与HIV-1阴性者相比,血清转换率和抗-HBs水平降低,尤其是CD4+T淋巴细胞＜200×106/L组.     

湖北省汉族人类免疫缺陷病毒感染人群白细胞介素28B的基因多态性

目的 了解湖北省汉族HIV、HCV合并感染人群IL28B基因型的分布.方法 纳入100例抗HIV、抗-HCV均阳性的汉族人群,荧光定量PCR检测HCV RNA,基因测序法对IL28B进行基因分型.数据行x2检验.结果 目标人群IL-28B基因型中,95例为C/C基因型,C/C基因型频率为96.0％,其中,HCV RNA阴性20例,占21.1％;5例C/T和T/T基因型患者中,无HCV RNA阴性病例(x2=1.043,P-0.588).结论 湖北省汉族HIV、HCV合并感染人群IL-28B 基因型中C/C基因型所占比例较高.     

长期不进展人类免疫缺陷病毒-1感染者准种膜蛋白V3环氨基酸特点分析

目的 了解长期不进展HIV-1感染者HIV-1准种膜蛋白V3环氨基酸序列特征及变异特点.方法 应用终点有限稀释套式PCR方法,对5例长期不进展HIV-1感染者不同时间点单个HIV-1前病毒env基因c2-v3-c3区域进行扩增和序列测定,用序列确证分析技术分析env基因区V3环氨基酸序列特征.结果 5例患者不同随访时间点获得的准种序列中,V3环35个氨基酸中出现多样性的位点分别有1～10个不等,同一患者不同随访时间点准种优势株序列完全一致或仅有1～2个位点不同;4例患者V3环顶端四肽为GPGR,1例患者为GPGK,同一患者不同随访时间点V3环顶端四肽一致;根据V3环11和25位氨基酸及V3环的电荷推测HIV-1辅助受体均为趋化因子受体(CCR)5.结论 长期不进展HIV-1感染者V3环序列存在不同程度变异,顶端四肽稳定性高,感染的HIV-1毒株可能为非合胞体诱导型毒株.     

静脉药瘾者人类免疫缺陷病毒核酸测定及亚型分析

目的：了解静脉药瘾者人类免疫缺陷病毒（HIV）感染情况及感染亚型，追踪传染源，预测未来流行株。方法：对1997年从新疆至杭州的15例静脉药瘾者血清进行抗－HIV的初步筛选，结果为阳性者再行免疫印迹（Western blot)、套式聚合酶链反应（Nest-PCR)及HIV核酸序列分析，结果：15例新疆籍静脉药者均感染了HIV－1，其中有2例E亚型，其余均为C亚型。结论：静脉吸毒者主要感染HIV－1C亚型，我国HIV－1主要流行株可能已经发生变化。     

Sicca syndrome in patients infected with human immunodeficiency virus-1

We investigated human immunodeficiency virus-1 (HIV-1)-associated sicca syndrome. The average saliva production in HIV-infected patients was 15.9 ± 6.3?ml, and the average tear production was 9.8 ± 4.5?mm. In particular, 6 patients (42.9%) showed a significant decrease in tear production. This sicca syndrome mimicked autoimmune Sjögren's syndrome (SS) because of the presence of dry eye, dry mouth, hyperamylasemia, and hypergammaglobulinemia; however, no antinuclear antibodies, anti-SS-A, or anti-SS-B were detected in sera from HIV-1-infected patients. In addition, no relationship was observed between saliva and tear production and CD4, HIV-RNA. Hepatitis C virus (HCV) and human T-lymphotrophic virus (HTLV-1) are considered to be possible causative agents of SS. However, coinfection with HCV did not affect the decrease of saliva and tear production, and only one patient was coinfected with HTLV-1. Epstein-Barr virus (EBV) and cytomegalovirus (CMV) are also potential causative agents of SS, and they are sometimes detected in the saliva of HIV-1-infected patients. However, the detection of EBV and CMV in the saliva was not related to the decrease in saliva production. Furthermore, HIV therapy (highly active anti-retroviral therapy; HAART) did not affect the state of sicca syndrome.The pathogenesis of sicca syndrome in HIV-1-infected patients is not clear, but we did find some infiltration of CD8 lymphocytes in salivary gland biopsy. Usually, CD8 lymphocytosis is found in peripheral blood in HIV-infected patients. Diffuse infiltrative lymphocytosis syndrome by predominant CD8 lymphocytes is occasionally found in HIV-infected patients. Such CD8 infiltration may induce the destruction of both the salivary and lacrimal glands.     

R5嗜性的人类免疫缺陷病毒-1在疾病不同阶段的生物学特性

目的 研究HIV-1感染者不同时期分离的R5毒株的生物学特性.方法 采用传统的共培养方法分离并培养HIV-1,用表达CD4和CC趋化因子受体5(CCR5)或CXC趋化因子受体4(CXCR4)的GHOST细胞系,通过流式细胞仪测定病毒辅助受体的利用和感染性,从而判断所分离毒株的CCR5嗜型(R5型毒株);使用2 ng P24病毒量感染正常人分离的外周血单个核细胞(PBMC),ELISA法检测第1、3、5、7、10、15天的HIV-1 P24抗原,反映病毒复制能力;采用HIV-1核酸荧光定量检测试剂盒测定血浆病毒载量.数据分析采用t检验.结果 HIV-1B'亚型感染者22例,其中CD4+细胞>0.2×109/L和CD4+细胞≤0.2×109/L各11例;所分离的病毒仅利用CCR5辅助受体,均为R5型毒株,感染性的结果显示,来自CD4+细胞≤0.2×109/L的11株R5毒株的感染性为(7.392 7±4.584 2)%,而CD4+细胞>0.2×109/L的为(2.613 6±1.610 5)%,差异有统计学意义(t=3.262,P<0.05);两组病毒复制滴度在第7天开始明显上升,培养第7、10、15天,两组病毒复制动力学差异有统计学意义(t值分别为3.771、2.509和2.260;P<0.05),CD4+细胞≤0.2×109/L的R5毒株的复制能力较CD4+细胞>0.2×109/L的明显增强;CD4+细胞≤0.2 × 109/L R5型毒株的病毒载量的对数值为(5.606 8±0.815 1)拷贝/mL,CD4+细胞>0.2 × 109/L的为(4.729 8±0.431 6)拷贝/mL,两组差异有统计学意义(t=3.771,P<0.05).结论 疾病进展过程中,即使病毒的辅助受体利用未从CCR5转变为CXCR4,但病毒的感染性和复制能力已有明显改变.     

123株人类免疫缺陷病毒-1重组亚型主要耐药性突变的基因屏障

目的 比较HIV-1 CRF01_AE、CRF07_BC和CRF08_BC毒株发生蛋白酶抑制剂(PI)、核苷类反转录酶抑制剂(NRTI)和非核苷类反转录酶抑制剂(NNRTI)主要耐药性突变的基因屏障,分析不同亚型耐药模式的差异.方法 纳入在广西壮族自治区南宁、柳州两市未经治疗的HIV感染者190例,采集外周静脉血,从血浆中提取HIV-1 RNA,扩增pol区并测序,用系统进化树分析序列的亚型,统计各序列每个主要突变位点由野生型密码子突变为耐药密码子所需的碱基转换和颠换的数量,根据转换与颠换发生概率约2.5:1的规律,将每个转换赋值设为1,每个颠换赋值设为2.5,计算各突变赋值之和,即为基因屏障值,采用Kruskal-Wallis检验法和Nemenyi法比较不同亚型的基因屏障差异.结果 共获得CRF01_AE、CRF07_BC和CRF08_BC毒株123株.CRF08_BC发生T/S69D的基因屏障低于CRF01_AE和CRF07_BC(χ2=107.501,P＜0.01),CRF01_AE和CRF07_BC发生V118I和L210W的基因屏障低于CRF08_BC,CRF07_BC发生V106M的基因屏障低于CRF01_AE和CRF08_BC.结论 在相同的选择压力下,CRF01_AE和CRF07_BC比CRF08_BC易发生V118I和L210W,CRF08_BC比CRF01_AE和CRF07_BC易发生T/S69D,CRF07_BC比CRF08_BC和CRF01_AE易发生V106M.     

云南省红河州地区60例人类免疫缺陷病毒-1患者分子流行病学研究

目的 对云南省红河州地区部分HIV-1感染者进行分子流行病学调查,为确定该地区流行的HIV-1分子生物学特征提供监测依据.方法 应用反转录(RT)-PCR扩增HIV-1多聚酶基因,DNA测序后进行进化系统树分析,确定基因亚型,并与国际耐药数据库比对,辨别耐药性突变位点.结果 60例患者中,男39例,女21例,平均年龄35.5岁.静脉注射毒品感染34例,性传播感染12例,采供血和输血感染2例,感染途径不详12例.基因亚型分别为08-BC亚型53例,占88.3%;07-BC亚型6例,占10.0%;01-AE亚型1例,占1.7%.耐药相关基因总突变率为33.3%.与蛋白酶抑制剂(PRI)和反转录酶抑制剂(RTI)耐药相关的基因突变率分别为5.0%和31.7%;蛋白酶基因主突变位点为1541M、V82VFIL、M46MI,各占1例.反转录酶基因突变位点分别为T69D 4例,A62V 6例,D67DE 1例,E44D 1例,V179D 2例,V179E 1例,K238KN 1例,L234T+P236S 1例,V106E 1例.结论 云南省红河州地区HIV-1感染以静脉注射毒品为主.HIV-1基因亚型以08-BC亚型为主;已存在与PRI和RTI耐药相关的基因突变.     

HIV感染长期不进展者与艾滋病患者HIV-1 gag特异性CD+8 T细胞应答

目的探讨欧美流行的人类免疫缺陷病毒(HIV)-1 B亚型株与我国HIV感染和艾滋病(AIDS)病人 gag特异性CD+8 T细胞应答交叉反应性.方法研究对象为长期不进展者(LTNP)7例和艾滋病患者9例,将覆盖HXB2 HIV-1 gag全长的125个重叠肽段组成11个肽段库作为抗原,用γ干扰素刺激原酶联免疫斑点试验方法检测LTNP和AIDS病人的特异性CD+8 T细胞应答,观察两组病人间的差异及其与CD+4 T细胞和病毒载量的相关性.结果 LTNP组和AIDS组HIV-1 gag特异性CD+8 T细胞应答强度分别为(1212±796)斑点形成细胞数(SFC)/106外周血单个核细胞(PBMC)和(182±203) SFC/106PBMC,识别肽段库的个数(间接反应了细胞毒性T淋巴细胞应答的宽度)分别为3.0±0.8和0.8±0.7,LTNP组显著高于AIDS组.CD+8 T细胞应答的强度和宽度与CD+4 T细胞计数呈正相关,与病毒载量呈负相关.结论欧美流行株与我国病毒株之间具有交叉反应性,HIV-1 gag特异性CD+8 T细胞应答在阻止疾病进展中可能发挥重要作用.     

河南及上海患者的HIV-1 gag基因p24蛋白编码序列及亚型初步分析

目的了解河南及上海地区人类免疫缺陷病毒(HIV)感染者p24蛋白编码区的基因变异性以及亚型的分布状况.方法收集37份HIV-1感染患者的血浆标本,河南25份,感染途径主要是有偿供血;上海12份,主要是血制品感染及性接触感染.采用逆转录和套式聚合酶链反应(PCR)扩增并直接测序,然后进行序列比对及进化树分析.结果83.8%(31/37)为B亚型,河南患者中23例为B亚型,2例为A亚型;上海患者中8例为B亚型,1例为A亚型,2例为CRF01-AE亚型,1例为CRF02-AG亚型.与国际共享序列相比,B亚型p24编码区中发生核苷酸改变的位点比例河南为1.6%～4.2%,平均3 2%;上海为2.0%～3.8%,平均3.4%.在所有变异位点中均未发现连续G-＞A的高度突变.两组B亚型内平均基因离散率分别为3.7%和3.5%,B亚型与其他亚型之间的基因离散率则为11.1%～12.5%.河南及上海地区B亚型共享序列与国际共享序列进行比对,氨基酸变异的比例均为2.2%(5/231),其中有3个变异位点相同,分别为A14P、191V及E180D,而这两个共享序列之间的差异仅为0.9%(2/231).进化树分析亦表明所有样本中大多为B亚型,且与源自泰国的B'亚型相距较近.结论河南及上海地区的B亚型之间有较高的同源性,p24蛋白有共同的氨基酸变异位点.