C6细胞表达的人Angiostatin Kringle（1—3）体外抑制血管内皮细 …

为研究人Ａｎｇｉｏｓｔａｔｉｎ Ｋｒｉｎｇｌｅ（１－３）〖ＡＫ（１－３）〗抑制血管内皮细胞生长的活性,利用脂质体法将带有大鼠血清白蛋白分泌信号的人ＡＫ（１－３）基因导入大鼠Ｃ６胶质瘤细胞,并用Ｇ４１８筛选获得目的细胞株。采用电镜、流式细胞术、免疫组化和Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ等方法,检测转染前后细胞超微结构、细胞周期及ＡＫ（１－３）蛋白达情况,并用人脐静脉内皮细胞增殖实验检测目的细胞株表达的ＡＫ（     

AngiostatinK(1-3)裸DNA治疗人脑胶质瘤的实验研究

探讨ＡｎｇｉｏｓｔａｔｉｎＫ（１－３）〖ＡＫ（１－３）〗裸ＤＮＡ治疗人脑胶质可行性和作用机制。用脂质体包埋法将ＡＫ（１－３）基因的真表达载体ｐｃＤＮＡ－ＳＡＫ（１－３）注入裸以下ＳＨＧ４４人脑胶质瘤的特点。ＡＫ（１－３）裸ＤＮＡ在荷瘤裸本内获得表达,裸鼠皮下胶质瘤血管生成能力显著下降,肿瘤生长受到抑制,抑瘤率达４３％。本研究证明,ＡＫ（１－３）裸ＤＮＡ能抑制人脑质瘤生长,为非病毒载体介导的抗血管生     

日本血吸虫多价分子疫苗的制备及其抗原性的研究

为了制备足量、高纯度的供血吸虫保护性免疫力研究的多价分子疫苗。通过制备型ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和电渗方法从日本血吸虫成虫分离纯化出２８ＫＤ，３１／３２ＫＤ及９７ＫＤ蛋白。经ＢＣＡ法检测蛋白含量，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ检测蛋白纯度和分子量，Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ及ＥＬＩＳＡ检测其抗原活性。结果日本血吸虫成虫２８ＫＤ，３１／３２ＫＤ及９７ＫＤ三种纯化蛋白经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ检测均为单一条带并与所分离的蛋白分子量相符；其蛋白含量分别为０．３５ｍｇ／ｍｌ，０．４ｍｇ／ｍｌ和０．３ｍｇ／ｍｌ；Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ均为单一反应区带；ＥＬＩＳＡ反应滴度分别为１∶６４０、１∶１２８０和１∶３２０。结果说明，由制备型ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和电渗析方法制备的日本血吸虫成虫２８ＫＤ，３１／３２ＫＤ及９７ＫＤ蛋白多价分子疫苗，具有纯度高、制备快、回收率高等优点，且不影响所纯化的抗原活性     

鼠抗人纤维蛋白单链抗体-低分子量尿激酶融合蛋白在中国仓鼠卵巢细胞中的高效表达

目的：构建鼠抗人纤维蛋白单链抗体－低分子量尿激酶融合基因,并在中国仓鼠卵巢细胞（ＣＨＯ）中高效表达。方法：应用重组ＤＮＡ 技术,将编码尿激酶原信号肽的ＤＮＡ 片段,与鼠抗人纤维蛋白单链抗体－低分子量尿激酶基因融合在一起,并插入真核表达载体ｐＭＪＫ３ 中,构建成重组质粒ｐＭＪＫ３Ｄ。通过细胞电击穿孔法,将该重组质粒转染到中国仓鼠卵巢细胞二氢叶酸还原酶基因缺陷株（ＣＨＯ－ｄｈｆｒ－ ）中,转染细胞经选择培养基筛选,并采用ＭＴＸ加压扩增培养。结果：得到了高效表达融合蛋白的细胞株,表达水平为３００ Ｕ／（１０６ 细胞·ｄ）。通过ＥＬＩＳＡ 和溶解圈方法鉴定,该融合蛋白可与Ｄ－二聚体结合,并具有激活纤溶酶原溶解纤维蛋白的活性。结论：成功构建并获得高效表达双功能融合蛋白的细胞株,为进一步研究这一双功能融合蛋白的体内外特异溶栓活性以及评价其作为新型导向溶栓制剂奠定了基础。     

小鼠内皮抑素基因克隆、表达及其抑瘤活性鉴定

利用ＲＴ－ＰＣＲ法从小鼠肝细胞扩增出Ｅｎｄｏｓｔａｔｉｎ基因,重组人ｐＵＣ１９质粒。经测序后,将片段重且人大肠杆菌表达载体ｐＤＨ并用温度诱导表达。将表达的蛋白经纯化及复性后直接注入大鼠Ｃ６胶质瘤模型内,检测其对胶质瘤生长的抑制作用。结果,在小鼠肝组织中成功扩增到Ｅｎｄｏｗｓｔａｔｉｎ基因,测序与报道列一致重组进一致。重组进ＰＤＨ后经温度诱导表达,在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳上得到一条新的蛋白表达带,分子     

人血小板生成素在大肠杆菌中的高效表达

目的：人血小板生成素（ＴＰＯ）在大肠杆菌中的高效表达。方法：利用ＰＣＲ技术,扩增出了（１－１７４个氨基酸的）人血小板生成素ｃＤＮＡ,并将其克隆到ｐＧＥＸ－１λＴ载体中,构建了融合蛋白表达质粒。重组子用限制性内切酶酶切鉴定。表达产物ＳＤＳ－聚丙烯胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）。结果：限制性内切酶酶切鉴定表明重组子含有正确的（１－１７４氨基酸）ＴＰＯｃＤＮＡ片段;表达产物经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ相对分子质量     

人β－干扰素在杆状病毒载体与Sf细胞体系中的表达

采用苜蓿尺蠖核多角休病毒（Ａｕｔｏｇｒａｐｈａｃａｌｉｆｏｒｎｉｃａｎｕｃｌｅａｒｐｏｌｙｈｅｄｒｏｓｉｓｖｉｒｕｓ，ＡｃＮＰＶ）ＤＮＡ中多角体蛋白基因启动子及其前后序列作为转移载体，将人β－干扰素（ＨｕＩＦＮ－β基因插入转移载体ｐＵＡｃ－５，构建成ｐＡｃ－ＩＦＮ－β载体。该质粒ＤＮＡ与野生型ＡｃＮＰＶＤＮＡ经ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ共转染秋粘虫（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）传代细胞（Ｓｆ９细胞），利用重组病毒不产生多角体蛋白的特征，进行病毒空斑筛选。用核酸杂交方法鉴定出携带ＨｕＩＦＮ－β基因的主组病毒。用重组病毒感染Ｓｆ９细胞，可表达ｒＨｕＩＦＮ－β。在１．０×１０￣６细胞／ｍｌ感染上清中测定ｒＨｕＩＦＮ－β最高活性为３．０×１０￣６ＩＵ／ｍｌ，抗天然ＨｕＩＦＮ－β抗体能完全中和ｒＨｕＩＦＮ－β的抗病毒活性。     

骨髓增生异常综合征和急非淋白血病患者Ki－ras癌基因12位密码子点突变

应用ＰＣＲ技术和寡核苷酸探针杂交检测４２例患者骨髓Ｋｉ－ｒａｓ癌基因第１２位密码子点突变。结果表明，在骨髓增生异常综合征（ＭＤＳ）患者中１例ＭＤＳ（ＲＡＥＢ－Ｔ）患者（１／６）发生了ＧＧＴ→ＡＧＴ的点突变，此患者诊断后３个月转为急性白血病。在急非淋白血病（ＡＮＬＬ）患者中（３／９）检测到上述同样位点点突变，其中１例发生了ＧＧＴ→ＡＧＴ和ＧＧＴ→ＴＧＴ的双突变；７例ＡＮＬＬ缓解期患者未检测到Ｋｉ－ｒａｓ的突变；２例小细胞低血色素贫血和１例巨核细胞增生性血小板降低患者亦检测到突变。对实验结果特别是Ｋｉ－ｒａｓ癌基因的点突变在ＭＤＳ转急性白血病中的意义进行了讨论。     

反义核酸对辐射所致白血病的逆转作用

目的探讨ｃ－ｍｙｂ基因反义核酸对辐射所致白血病的逆转作用。方法以脂质体为载体,用人工合成的ｃ－ｍｙｂ基因反义寡核苷酸（ＡＳＯＤＮ）及无关寡核苷酸（Ｎ－ＡＳＯＤＮ）作用于人急性红白血病Ｋ５６２细胞系,以观察Ｋ５６２细胞的增殖、集落形成、ＤＮＡ合成及ｃ－ｍｙｂ癌基因的表达。结果ＡＳＯＤＮ可抑制Ｋ５６２细胞的增殖［作用２４小时,２０μｍｏｌ／Ｌ的ＡＳＯＤＮ的抑制率为（６６．８１±７．５４）％,Ｐ＜０．０１］、集落形成、ＤＮＡ合成［２０μｍｏｌ／Ｌ的ＡＳＯＤＮ作用１２小时、２４小时、４８小时时抑制率分别为（４８．９３±６．７４）％、（６９．５５±１．７８）％和（５７．６２±５．５０）％,Ｐ＜０．０１］及ｃ－ｍｙｂ癌基因的表达;而对照组对Ｋ５６２细胞则无明显影响。结论ｃ－ｍｙｂ基因ＡＳＯＤＮ可逆转Ｋ５６２细胞恶性表型,反义技术对白血病的防治指出了新方向。     

PCR-SSCP在恶性血液病N-ras癌基因点突变检测中的应用

目的：检测血液系统肿瘤中Ｎ－ｒａｓ癌基因点突变的活性。方法：采用ＰＣＲＳＳＣＰ技术分析了２８例恶性血液病Ｎｒａｓ基因的突变活性，包括：ＡＮＬＬ６例，ＡＬＬ１２例，ＨＤ２例，ＮＨＬ３例，ＭＤＳ５例。结果：２８例中ＰＣＲＳＳＣＰ检测与正常对照，发生阳性者４例（１４．６％），其中ＡＬＬ１例（８．３％）、ＡＮＬＬ１例（１６．６％）、ＭＤＳ２例（４０％）。４例中有２例临床缓解后持续阳性，１例为ＡＬＬ患者，于骨髓移植后１０４ｄ复发死亡。１例ＭＤＳ患者转化为急性白血病，另２例临床缓解后３个月检测转阴，其中１例为ＡＮＬＬ，１例为ＭＤＳ。结论：ＰＣＲＳＳＣＰ方法可作为一种癌基因点突变检测手段常规应用于临床，但值得注意的是，ＰＣＲＳＳＣＰ方法只能提供分析区域是否存在突变点，而不能提供突变性质的信息     

手背深度烧伤早期治疗不当的原因分析

手为暴露部位 ,烧伤机会多 ,约占 4 4 % 〔1〕。临床上以手背烧伤最多见 ,深度烧伤后如果早期治疗不当常造成严重畸形和功能障碍。我科自 1996年以来共收治手背深度烧伤 98例 ,其中 11例因早期治疗不当造成不良后果。现报告如下 :1　临床资料1 1　一般资料　本组 11例 ,男 7例 ,女 4例 ;年龄2 0岁～ 4 8岁。火焰烧伤 7例 ,热液烫伤 4例 ;手背烧伤为深Ⅱ度～Ⅲ度。入院后手部创面均采用暴露疗法 ,涂ＳＤ—ＡＧ液 ,手的姿势任患者自由摆置。 5例手背深Ⅱ度～Ⅲ度烧伤患者于伤后 3周行创面切削痂游离点状植皮术 ;6例手背深Ⅱ度烧伤患者任其自然…     

毛细支气管炎免疫机理及干扰素疗效研究

本文测定50例毛细支气管炎患儿T淋巴细胞亚群,同时观察干扰素(INF)治疗前后的变化并判定临床疗效,结果表明急性期呼吸道合胞病毒毛细支气管炎患儿CD_8细胞明显升高,CD_4/CD_8比值明显降低(P<0.01),CD_3、CD_4细胞与正常对照组比较无明显差异(P>0.05);INF治疗后CD_8细胞显著降低,CD_4/CD_8比值明显升高(P<0.01);且临床疗效及病程均明显优于未用INF组。作者对本病发病机理及INF作用机制进行了讨论。     

八种动物甲状腺组织几何学参数的定量分析(一)

用图象分析仪测定了8种动物甲状腺随机切片的显微照片(经涂墨加工),获得了该组织胶体的二维平面的图象数据。根据体视学原理计算了与胶体有关的几何学参数值,包括体积密度、表面积密度、平均自由程、数密度、平均体积、平均表面积、平均半径以及三维空间截线平均长度。结合对滤泡上皮细胞高、宽的测量结果,进一步计算了与滤泡有关的上述参数值。分析表明,甲状腺对碘的代谢功能与表征胶体结构的5项参数值显著相关。综合胶体的8项参数,各类动物可构成各自的种系星座图;分类判别有很高的正确判别率。     

大规模猪肝细胞低温保存方法的建立

目的　建立大规模猪肝细胞的低温保存方法以满足生物型人工肝治疗的需要。方法　用酶法从中国实验用小型猪肝脏分离出猪肝细胞 ;加入本实验室配制的含有 10 %二甲基亚砜 (dimethylsulfoxide,DMSO)的营养液中 ;分别采用两种降温方法使 (12 )× 10 10 猪肝细胞保存在 - 196℃液氮中 ;1个月后复温 ,观察在同一条件下培养不同时间后猪肝细胞形态、存活率和白蛋白、尿素、葡萄糖合成功能及对利多卡因的转化功能。结果　用两种降温方法保存的肝细胞 ,复温后细胞的存活率均较高 (梯度降温组和程控降温组存活率分别较冻存前降低了 4 7%和 8 6 %) ,其中前者肝细胞的尿素、葡萄糖合成功能较后者高。结论　所建立的冻存方法简单易行 ,可保存大量的猪肝细胞。     

胰腺囊性肿瘤15例分析

作者报告了该院３０年来经手术及病理证实的１５例胰腺囊性肿瘤，男５例，女１０例，其中囊腺瘤３例，囊腺瘤恶变３例，囊朱癌９例，肿瘤位于胰尾部８例，体尾部６例，胰头部１例。２例有肝转移，１例肿瘤浸润胃后壁，根治生切除１０例，单纯肿瘤切除、肿瘤切除加肝转移瘤局部切除、囊腺癌内外引流、肿瘤活检各１例。术后死亡１例。随访１２例，１０例效果满意，２例囊腺癌行内外引流者术后６、９个月死亡。文中讨论了胰腺囊性肿瘤的     

卵巢破裂28例临床分析

我院从 1992 - 0 1～ 2 0 0 0 - 12收治 2 8例卵巢破裂出血病人。其中经手术治疗 2 3例 ,另 5例保守治疗 ,均获治愈。现分析如下 :1　临床资料1 1　一般资料　年龄 18岁～ 4 9岁 ,平均年龄 2 8 6岁。其中已婚 2 6例 ,生育 1胎 2 1例 ,2胎 1例 ,5胎 1例 ,未孕 3例 ;未婚 2例。置环 2 5例。1 2　临床表现　 2 8例患者的月经周期为 2 5ｄ～ 5 0ｄ ,>30ｄ者 3例。急腹症发生时间在月经周期第 9ｄ～60ｄ。其中卵泡囊肿破裂者在第 15ｄ～ 18ｄ ,卵巢黄体血肿破裂者在第 9ｄ～ 14ｄ 6例 ,第 15ｄ～ 2 0ｄ 4例 ,第2 2ｄ～ 30ｄ 8例 ,第 4 5ｄ～ 60ｄ…     

中药对超长皮瓣成活影响的SOD动态观察

组织的坏死与脂质过氧化物质(LPO)密切相关。SOD是氧自由基的清除剂,能清除脂质过氧化产物,对组织细胞产生保护作用。在采用中药生脉注射液、复方丹参注射液、红花注射液对超长随意皮瓣成活影响的研究中,观察了红细胞SOD的变化。结果表明所用药物具有抗氧化能力,给药后静脉血中SOD活力升高,LPO降低,提示此类药物可诱导机体合成SOD以对抗自由基。随着LPO的清除,组织的损害减轻并得恢复,对皮瓣成活有良好作用。     

糖尿病患者血液流变学检测的意义

目的:研究探讨糖尿病患者血液流变性的改变。方法:用R—20锥板式粘度计检测58例糖尿病患者血液流变学指标,与50例正常人对照。结果:糖尿病患者全血粘度增高,以中切L和低切为明显,血浆粘度增高,血沉加快,(P<0.05以上),显示出高粘滞综合征的特点。结论:糖尿病患者血液流变学有明显高粘倾向,表明患者红细胞聚集性增高,容易导致微循环障碍,是糖尿病并发微血管损伤的流变学基础,为临床治疗提供了实验报告依据。     

结肠息肉癌变相关因素分析

目的　更好地认识癌变息肉的临床特点 ,找出与癌变息肉相关的因素 ,为临床初步判断息肉的性质提供依据。方法　回顾整理连续 4年内资料完整可用的结肠息肉病例 ,分析性别、年龄、息肉部位、数目、是否有蒂、黏膜情况、是否分叶、病理类型、息肉大小、不典型增生程度等因素。结果　单因素分析显示癌变与未癌变息肉在大小、黏膜情况、不典型增生程度、病理类型、是否分叶状等因素方面的差别具有统计学意义。逐步Logistic分析显示与癌变息肉独立相关的因素包括息肉大小、不典型增生程度、黏膜情况、是否有蒂及病理类型。结论　息肉越大、病理为腺瘤、不典型增生程度越重、黏膜有糜烂甚至溃疡、亚蒂或无蒂是与癌变息肉独立相关的因素 ,以上因素符合的越多则该息肉为恶性的可能性越大     

益欣康泰胶囊对老龄小鼠体内睾酮水平的影响

目的：研究益欣康泰胶囊对老龄小鼠体内睾酮的影响。方法：选用昆明种雄性小鼠５０只,随机分为五组,即对照组,阳性药物组及益欣康泰胶囊高,中,低剂量组,分别灌服蒸馏水,红参水煎液及益欣康泰胶囊高,中低,剂量的水溶液,于第１０天时统一在颈动脉取血做Ｔ测定;结果：红参组及益欣康泰胶囊三组与对照组比较,灌服益欣康泰胶囊后Ｔ含量明显升高,益欣康泰胶囊高剂量组与红参组比较Ｔ明显升高;