纳洛酮对缺氧大鼠皮质神经元细胞内钙的影响

目的：观察缺氧对大鼠皮质神经元细胞内钙的影响及纳洛酮的保护作用。方法：实验于2003年在军事医学科学院神经生物学研究室进行。取体外培养12d的Wistar大鼠皮质神经元细胞，随机分为3组：①正常对照组：细胞置于36℃，含体积分数为0．9的空气、体积分数为0．1的CO2的培养箱内培养30h。②缺氧组：细胞移至4000cm^3的恒温（36℃）密闭容器内，连续充以无氧气体（体积分数为0．9氮气、体积分数为0．1的CO2），在缺氧条件下培养6h后改在常氧下继续培养24h。③纳洛酮组：在缺氧前24h在培养液中加入1 μmol／L的纳洛酮，其他处理同缺氧组。用流式细胞仪检测不同时间段培养的神经元细胞内钙。结果：3组在缺氧前神经元细胞内钙差别不显著（P〉0．05）。培养6h后缺氧组和纳洛酮组神经元细胞内钙明显高于正常对照组（7．94&;#177;0．13，6．68&;#177;0．33，3．39&;#177;0．36，P〈0．01），且缺氧组高于纳洛酮组（P〈0．01）。缺氧6h及再复氧24h纳洛酮组细胞内钙仍明显低于缺氧组（8.67&;#177;0．61，11．59&;#177;1．34，P〈0．01），但两组均高于正常对照组（3．48&;#177;0.28，P〈0．01）。结论：缺氧6h复氧24h时神经元细胞内钙显著升高，证实[Ca^2＋]i水平和神经细胞的缺氧损害密切相关，且恢复氧供并不能纠正[Ca^2＋]i异常。应用纳洛酮后，在缺氧条件下和缺氧后复氧期间的[Ca^2＋]i升高幅度较缺氧组明显减小，说明纳洛酮对缺氧的神经元[Ca^2＋]i具有一定的稳定作用，可以减轻神经元[Ca^2＋]i的升高，进而对神经元细胞起到保护作用。     

阿普卡林对低氧-复氧乳鼠心肌细胞保护作用的机制

目的探讨低氧/复氧(H/R)对心肌细胞内Ca浓度(犤Ca犦i)的影响,以及阿普卡林减轻H/R过程中钙超载的作用。方法采用SD大鼠乳鼠(n=80)进行心肌细胞培养,用Ca2+荧光指示剂Fluo-3/AM负载30min,然后分3组:(1)正常对照组;(2)H/R组:细胞低氧30min/复氧30min;(3)阿普卡林组:先加入终浓度为100μmol/L的阿普卡林,再行低氧30min/复氧30min。于两个实验组接受低氧处理前及刚开始复氧时、复氧30min后用激光共聚焦显微镜技术检测3个组心肌细胞犤Ca2+犦i的变化。实验重复8次,共观察24个细胞。结果对照组心肌细胞犤Ca2+犦i荧光强度和荧光光密度值较低,分别为645.5U,80.3U及0.5%,0.3%。低氧30min后复氧即刻,犤Ca2+犦i荧光光密度值开始增加,复氧30min后犤Ca2+犦i荧光强度和荧光光密度值显著增高(与对照组比较,P<0.01)。而阿普卡林组细胞内荧光光密度值显著低于H/R组(χ2=20.51,P<0.01)。结论心肌细胞H/R导致钙超载;而阿普卡林有明显减轻心肌细胞H/R时Ca2+超载的作用,从而保护心肌细胞。     

钙在嗜铬细胞瘤细胞缺氧性脑损伤中的作用研究

目的观察缺氧后大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤(PC12)细胞内游离钙的浓度(犤Ca2+犦i)、环磷酸腺苷(cAMP)、钙调蛋白(CaM)和钙调蛋白激酶II(Ca2+/CaM-PKII)的变化。方法采用放免技术,从细胞水平进一步观察缺氧对PC12细胞的毒性、细胞内犤Ca2+犦i变化,cAMP、CaM和Ca2+/CaM-PKII的变化。结果缺氧组PC12细胞cAMP、CaM含量在缺氧后24h明显高于正常对照组;Ca2+/CaM-PKII活性明显低于正常对照组。结论犤Ca2+犦i、cAMP、CaM和Ca2+/CaM-PKII在缺氧PC12细胞损伤机制中起了重要的作用。     

枸杞糖肽对缺氧乳鼠心肌细胞内游离钙浓度的影响

目的:研究低氧心肌细胞内游离钙(犤Ca2+犦i)浓度的变化,枸杞糖肽减轻缺氧诱导的心肌细胞钙超载以及对缺氧心肌的保护作用。方法:实验选用出生两三天的SD乳大鼠80只进行心肌细胞培养,建立心肌缺血模型,实验分3组:对照组;缺氧组:细胞缺氧6h;枸杞糖肽组:先加入终浓度为50mg/L的枸杞多糖,再行缺氧6h。以Fluo/AM荧光指示剂负载,通过激光扫描共聚焦显微系统和Flou-3/AM荧光指示剂标记技术,观察枸杞糖肽对缺氧心肌细胞游离钙含量的影响。结果:心肌细胞经缺氧处理6h后,细胞之间相互连接减少,大部分细胞肿胀,折光性减弱,部分细胞甚至呈圆形,少部分细胞胞膜破裂,提示心肌细胞损伤。枸杞糖肽处理组心肌细胞经缺氧后,可见部分细胞肿胀,内有颗粒,折光性减弱,但较缺氧模型组有一定的改善作用。心肌细胞Fluo-3/AM负载后在激光共聚焦显微镜下观察,细胞的分布和外形与倒置显微镜下所见相符,呈不规则棱形、多角形、星形细胞,轮廓清晰,成群的细胞出现自发性,同步性、有节律的搏动。经Flu3-AM标记后,细胞出现规律性闪烁。对照组心肌细胞犤Ca2+犦i荧光强度和吸光度(A值)较低,缺氧6h荧光强度明显增加(P<0.05);枸杞糖肽组心肌细胞犤Ca2+犦i荧光密度(62.86±28.71)低于缺氧组(156.76±55.39)(P<0.01)。结论:低氧导致心肌细胞钙超     

剪切应力作用下血小板活化反应对血栓形成的影响

目的:通过剪切应力对血小板细胞骨架和细胞内游离钙离子浓度(犤Ca2+犦i)及血栓形成的影响,探讨物理作用下血小板活化机制。方法:利用锥板式血小板聚集仪、SDS-PAGE方法及Fura-2/AM法观察剪切应力对血小板聚集、细胞支架和胞浆内犤Ca2+犦i变化。结果:剪切前肌动蛋白纤维含量为(40.16±15.03)%,细胞内犤Ca2+犦i浓度为(29.88±8.89)nmol/L,低剪切与高剪切作用1min后肌动蛋白纤维含量分别达(47.42±18.00)%与(48.62±18.04)%,而细胞内犤Ca2+犦i浓度升高达(57.32±18.32)nmol/L及(128.28±56.28)nmol/L,与剪切前相比差异均有显著性意义(P<0.05或0.01),此外,钙调蛋白抑制剂阻碍血小板肌动蛋白纤维的形成及血小板聚集。结论:剪切应力作用下血小板发生了肌动蛋白纤维含量及细胞内游离钙水平的增高,并与剪切诱导的血小板聚集存在着平行关系,物理作用对体内血栓形成的机制有助于对血栓形成和一级康复干预的进一步认识。     

党参总皂苷抗缺氧缺糖再给氧诱导大鼠皮质神经细胞凋亡的作用

目的:以原代培养的胚胎大鼠大脑皮质神经细胞进行缺氧缺糖再给氧处理,观察党参总皂苷对神经细胞凋亡的抑制作用。方法:胚胎大鼠大脑皮质神经细胞原代培养,含连二亚硫酸钠的无糖Earle's液进行缺氧缺糖处理造模,MTT法测定细胞存活率,Hoechst33342和PI原位双染法荧光显微镜观察细胞形态学变化和坏死、凋亡细胞百分率,APO-BRDU法流式细胞术检测凋亡细胞百分率,Fluo-3法流式细胞术检测细胞内Ca2+浓度,评价药效。结果:细胞存活率:与模型组犤(19.69±5.80)%犦比较党参总皂苷0.52mg/L组39.21±12.21)%,0.052mg/L组犤(犦犤(37.91±4.67)%犦能显著提高细胞存活率(P<0.001);细胞坏死率:与模型组犤(44.99±12.81)%犦比较党参总皂苷0.52mg/L组犤(15.66±4.67)%犦,0.052mg/L组犤(23.98±4.04)%犦和0.0052mg/L组犤(20.50±5.19)%犦能显著降低细胞坏死率P<0.001);原位双染法细胞凋亡(率:与模型组犤(17.44±4.82)%犦比较党参总皂苷0.52mg/L组犤(10.58±2.04)%犦,0.052mg/L组犤(11.61±2.35)%犦能显著降低细胞凋亡率(P<0.05);流式细胞术检测细胞凋亡率:与模型组犤(8.55±3.84)%犦比较党参总皂苷0.52mg/L组犤(3.85±1.92)%犦,0.0052mg/L组犤(3.45±2.22)%犦能显著降低细胞凋亡率P<0.05);(细胞内Ca2+平均荧光值,与模型组(47.     

刺五加皂甙对缺氧复氧性神经元损伤的保护作用

目的:从细胞分子水平研究刺五加皂甙(acanthopanaxsenticosussaponins,ASS)对培养神经元缺氧复氧损伤的保护作用及其机制。方法:取孕13～15dICR胎鼠大脑皮质神经元进行原代分离培养,建立缺氧复氧诱导的皮质神经元损伤模型。随机分成正常对照组、缺氧复氧组及ASS组;用MTT法测定神经元存活率,用硝酸还原酶法测定细胞培养上清液中一氧化氮合酶(NOS)的含量,用流式细胞仪检测神经元凋亡率。结果:神经元缺氧2,4,6,8h复氧24h后,存活率分别为(0.604±0.022)%,(0.592±0.017)%,(0.543±0.037)%,(0.534±0.021)%;缺氧8h复氧24h后,神经元凋亡率由(4.13±0.87)%增加至(31.34±0.85)%,NOS含量由(5.23±0.28)μmoL/L增加至(11.39±0.21)μmoL/L(P<0.01);ASS组神经元存活率、神经元凋亡率、NOS含量分别为(0.636±0.021),(16.37±0.66)%,(8.02±0.18)μmoL/L,与缺氧8h复氧24h比较差异有非常显著性意义(P<0.01)。结论:ASS对缺氧复氧引起的神经元损伤有保护作用;ASS可能是通过抑制一氧化氮的释放、抑制神经元凋亡来拮抗神经元损伤。     

激光共聚焦显微镜观察前胡丙素对新生大鼠缺氧再灌注心肌细胞内游离钙的影响

目的激光共聚焦显微镜观察缺氧再灌注损伤对心肌细胞内Ca2+浓度([Ca2+]i)的影响,以及前胡丙素对模拟心肌缺氧再灌注过程中减轻钙超载的作用。方法采用SD大鼠乳鼠进行心肌细胞培养,建立模拟缺氧再灌注模型。实验分4组:正常组:细胞正常培养;缺氧预适应组:预先缺氧2 h,复氧1 h,再缺氧12 h后,复氧2 h;前胡丙素预处理组:先予前胡丙素单体终浓度为100μmol/L作用1 h,再行缺氧12 h,后复氧2 h;模拟缺氧再灌注组缺氧12 h,后复氧2 h。细胞上清检测LDH值。心肌细胞以Fluo-3/AM荧光指示剂负载,应用激光共聚焦显微镜技术检测心肌细胞([Ca2+]i)变化。结果模拟缺氧再灌注组心肌细胞([Ca2+]i)荧光强度值显著高于前胡丙素预处理组及缺氧预适应组(P<0.01),前胡丙素预处理组与缺氧预适应组细胞内荧光强度无明显组间差异。结论心肌细胞缺氧再灌注损伤导致Ca2+超载,而前胡丙素有明显减轻心肌细胞模拟缺氧再灌注时Ca2+超载的作用。应用激光扫描共聚焦显微镜技术可以直观地进行细胞内钙离子研究。     

缺氧预适应小鼠缺氧耐受性、运动耐力及肺功能的改变

目的:观察缺氧预适应对小鼠缺氧耐受性、运动耐力及缺氧条件下小鼠肺功能的影响。方法:实验于2003-12/2004-12在解放军第四军医大学病理生理学实验室进行。①常压耐缺氧时间的测定:取昆明小鼠20只随机分为2组(n=10),正常对照组在正常氧环境(体积分数为0.21的氧)中,缺氧预适应组小鼠在低压低氧条件下(体积分数为0.21的O2与体积分数为0.08的O2交替循环4次,每种氧浓度下持续15min)复制缺氧预适应模型,将两组小鼠置于正常氧环境下1h后,观察其在缺氧中存活时间。②负重游泳实验:分组和处理同前,将两组小鼠置于正常氧环境下1h后,小鼠尾根部负荷7%体质量的铅丝,置游泳箱中游泳,观察小鼠游泳至力竭时间。③耐寒实验:分组和处理同前,将两组小鼠置于正常氧环境下1h后,记录小鼠在-8℃的条件下的存活时间。④肺水含量测定:取昆明小鼠20只随机分为4组(n=5),正常对照组和缺氧预适应组处理同前,单纯缺氧组小鼠置于体积分数为0.07的O2缺氧6h,缺氧预适应+缺氧组:缺氧预适应后1h,置于体积分数为0.07的O2缺氧6h。测定各组小鼠肺组织湿重/干重比值。⑤肺血管通透性测定:分组和处理同肺水含量测定实验,检测各组小鼠的肺灌洗液/血清吸光度比值。结果:经补充后100只小鼠进入结果分析。①常压缺氧耐受时间:缺氧预适应组长于正常对照组犤(20.5±2.4),(14.6±3.7)min,P<0.05犦。②负重游泳时间:缺氧预适应组长于正常对照组犤(173.9±37),(112.3±41)min,P<0.05犦。③耐寒时间:缺氧预适应组长于对照组犤(63.4±7.2),(50.1±4.8)min,P<0.05犦。④肺水含量和肺血管通透性:单纯缺氧组小鼠肺组织湿重/干重和肺灌洗液/血清吸光度比值高于正常对照组(P<0.05);缺氧预适应组和缺氧预适应+缺氧组小鼠明显低于单纯缺氧组(P<0.05)。结论:缺氧预适应可提高小鼠缺氧耐受性、运动耐力及耐寒能力,增强缺氧小鼠肺功能。     

体外冲击波碎石术致肾细胞内钙水平与氧自由基的变化

目的:观察体外冲击波碎石术(E SW L)对肾细胞内游离钙(犤C a2犦i)水平和肾组织氧自由基的影响及+钙通道阻滞剂的干预作用,探讨肾损伤机制。方法:30只家兔制成单肾模型,随机等分为对照组、E SW L组和E SW L+维拉帕米预处理组。E SW L后24h获取肾脏,采用Fura-2/A M荧光指示剂测定肾细胞内犤C a2+犦i浓度变化,同时测定肾组织超氧化物歧化酶(SO D)活性和脂质过氧化终产物丙二醛M D A。结果:ESW L后肾细胞内犤C a2+犦i增高,肾组()织SO D活性降低、M D A生成增加(P<0.01);维拉帕米预处理能抑制细胞内犤C a2犦i和M D A增加(P<0.01,P<+0.05),提高SO D活性P<0.01)。结论:E SW L所致肾细胞内C a2+犦i超载和肾组织氧自由基侵袭,可能在E SW L肾(犤损害病理过程中起重要作用。     

脓毒症大鼠小肠功能变化的研究

目的　探讨脓毒症大鼠小肠屏障、吸收、通透及其蠕动功能的变化。方法　以 Wistar大鼠缺血再灌注复合内毒素血症制备动物模型。将动物随机分为正常对照 ( N)、肠系膜上动脉夹闭 1h后再灌注 1h( I/ R1)、2 h( I/ R2 )和 4 h( I/ R4 )以及再灌注 2 h后复合内毒素 2 h( I/ RL)共 5个组。分别测定各组动物血或小肠组织二胺氧化酶 ( DAO)、D 乳酸、D 木糖水平及肠蠕动 ,同时进行小肠普通光镜检查。结果　 I/ R1、I/ R4和 I/ RL组血浆 DAO活性均显著升高 ( P均 <0 .0 5 ) ,小肠组织 DAO在 I/ R2和 I/ RL 组均显著降低( P均 <0 .0 5 ) ,从 N、I/ R1、I/ R2、I/ R4到 I/ RL,各组血浆 DAO和小肠 DAO的相关分析可见呈高度负相关( r= 0 .90 9,P<0 .0 0 1) ;I/ R 1、I/ R 2和 I/ RL组血浆 D乳酸均显著升高 ( P均 <0 .0 5 ) ;与 N组比较各组肠传输速度显著加快 ( P均 <0 .0 5 ) ;I/ R 1和 I/ RL组血中 D木糖浓度较 N组高 ,3h后仍高于 N组 ;血 DAO浓度与血 D乳酸浓度变化相关 ( r=0 .5 5 9,P<0 .0 5 )。结论　缺血再灌注后小肠的屏障、吸收、通透和蠕动功能均有不同程度的改变 ;缺血再灌注复合内毒素血症时再次加速或加重了小肠屏障、吸收、通透和传输功能的变化     

浙江省岱山县居民死因分析

目的 为掌握浙江省岱山县海岛地区居民健康状况和主要疾病死亡原因,评价居民健康水平,为政府和相关部门制定疾病预防控制策略提供参考依据.方法 对岱山县1986 -1988年和2009-2010年两个时期居民死亡资料进行比较分析,采用国际疾病分类法进行编码,以2000年全国标准人口构成比进行死亡率标化.结果 岱山县两个...     

论护理工作中的“慎独”与“慎众”

"慎独"一词出自《礼记·中庸》中"莫见乎隐,莫显乎微,故君子慎其独也"。即当君子独处,无人监督的时候,总是小心谨慎地不做任何不道德的事情。"慎众"则是指在许多人违反原则时,君子却不随波逐流,不盲目     

Achievements in hip joint surgery in adults in Poland

The treatment of diseases and injuries of the hip joint in both children and adults has been a major area of interest for surgeons treating injuries and non-traumatic conditions of the organs of locomotion. The work of prominent Polish surgeons and orthopaedists has contributed to progress in this branch of medicine over the last century.