LC/MS fingerprinting of Shenmai injection: a novel approach to quality control of herbal medicines

Chromatographic fingerprinting has been recommended as a potential and reliable strategy for the quality control of herbal medicines. Although varieties of chromatographic techniques, particularly HPLC, have been widely employed, hyphenated chromatographic approach has not been sufficiently exploited in chromatographic fingerprinting. In this work, LC/MS fingerprinting of Shenmai injection was developed. Thirty ginsenosides as well as seven ophioponins were selected to construct the LC/MS fingerprint using selective ion monitoring (SIM) mode, while previous HPLC fingerprint [H.J. Zhang, Y.J. Wu, Y.Y. Cheng, J. Pharm. Biomed. Anal. 31 (2003) 175-183] only represents the ginsenosides. Subsequently, the proposed LC/MS fingerprints were applied to identifying the product manufacturers. All the samples were accurately classified based on their LC/MS fingerprints in conjunction with principal components analysis (PCA). This study would be potentially helpful to improve the quality control ability of fingerprinting-based strategy for complex herbal medicines.     

High performance liquid chromatographic fingerprint evaluation of the quinolizidine alkaloids from commercial Radix Sophorae Flavescentis

Fifteen commercial samples of Radix Sophorae Flavescentis were collected from different parts of China. HPLC analysis showed that the commercial samples all contained quinolizidine alkaloids and a total of nine chromatographic peaks were identified by referring to standard compounds, HPLC/MS analysis and comparison of the physicochemical data of the isolated peak with the literature. The contents of the major alkaloids were determined and the ratio of the major alkaloids contents was shown to be correlated with their source of origin. The commercial samples from China gave a distinct HPLC pattern showing the main alkaloids contents. The sample preparations were researched and the extraction conditions of the alkaloids were optimized. Reproducible HPLC fingerprints can be obtained for the quinolizidine alkaloids under the well-controlled extraction conditions. The HPLC fingerprint analysis method is suitable for the quality control of the Radix Sophorae Flavescentis and the standardization of phytomedicines.     

中药色谱指纹图谱评价方法的不确定度和可靠度研究

目的建立中药指纹图谱不确定度和可靠度评价理论并用其评价二妙丸(Ermiao Wan,EMW)HPLC指纹图谱的不确定度和可靠度。方法采用RP-HPLC法测定EMW-HPLC指纹图谱,以系统指纹定量法综合评价12批EMW质量。结果以盐酸小檗碱(berberine hydrochloride,BBR)为参照物峰,确定55个共有指纹峰,建立了EMW-HPLC指纹图谱。用不确定度和可靠度评价EMW-HPLC对照指纹图谱和12批样品指纹图谱,EMW-HPLC对照指纹图谱的定性可靠度和定量可靠度均>0.95,表明对照指纹图谱反映的化学指纹数量和含量分布比例以及整体含量的可靠性很高。S2、S3和S7的定性和定量可靠度依次升高,表明其反映的化学指纹数量分布和含量分布与整体含量的可信性依次增强。质量为Ⅲ级的S8的定性定量可靠度均为0.98,而质量为Ⅱ级的S2的定性定量可靠度均为0.92,表明中药质量高低与可靠度不一定相关。结论所建立的不确定度评价方法能准确反映中药指纹图谱所代表质量的变动性,可靠度评价方法可准确评价对照指纹图谱和单批指纹图谱所表征的中药质量的定性和定量信息的可靠程度。     

不同产地艾纳香药材的GC指纹图谱研究

目的建立艾纳香的GC指纹图谱分析方法,为其质量评价提供依据。方法采用毛细管气相色谱法,以适宜的程序升温条件,对来自14个不同产区的艾纳香药材进行了指纹图谱测定;并以共有峰的相对峰面积值为参数,对各个产地的艾纳香药材进行指纹图谱相似度评价和聚类分析。结果 14个不同产地的艾纳香药材的GC指纹图谱有23个共有峰;相似度评价和聚类分析结果表明,不同产地艾纳香的成分种类上差异不大,但成分比例和量上差异较大。结论该分析方法对艾纳香中各成分的分离效率高,且精密度、稳定性和重复性均符合指纹图谱研究的技术要求(RSD<5%),可作为艾纳香药材质量评价的重要依据。     

一种评价多波长中药色谱指纹图谱新方法-均谱法

目的建立一种评价多波长中药色谱指纹图谱的新方法-均谱法(MFM),以桂附地黄丸(Guifu Dihuang Wan,GFDHW)平行五波长(PFW)高效液相色谱(HPLC)指纹图谱的均谱为基础,依据系统指纹定量法(SQFM)鉴定桂附地黄丸整体质量。方法采用反相RP-HPLC法,以丹皮酚(POL)为参照物峰,于210、230、246、265、280 nm紫外波长下检测,分别确定了54、58、47、47和44个共有指纹峰,用S1~S3和S5~S9等8批样品的HPLC指纹图谱生成对照指纹图谱,建立GFDHW的PFW-HPLC指纹图谱,并评价12批样品的质量。将同一样品的5个波长下HPLC指纹图谱的信号加和后求平均值作为该样品的均谱,用S1~S3和S5~S9等8批样品HPLC均谱按平均值法生成对照指纹均谱来综合评价12批样品均谱。结果 12批样品用MFM鉴定的结果与用PFW结合SQFM所鉴定的结果一致。结论 MFM能最大限度保留指纹峰,实现化学指纹信息最大化,同时能有效改善指纹信号质量,是HPLC-DAD三维指纹图谱的简化代表,因此可作为综合定量鉴定中药质量的有效、可靠和简便方法。     

色谱指纹图谱定性相似度和定量相似度的比较研究

以药材栀子为例，对中药色谱指纹图谱定性相似度和定量相似度的宏观评价方法进行比较研究。用栀子对照药材和不同产地的栀子药材的HPLC指纹图谱实验结果，分别从化学成分分布相似性和含量相似性两个方面评价各产地药材与对照指纹图谱的相似性。以对照药材供试液不同进样量时获得的数据比较定性和定量相似度差异。提出了指纹图谱比率定性相似度s_F′，投影含量相似度C%、定量相似度P%和平均质量百分数M%等一系列概念。结果显示，表征化学成分分布相似性的定性相似度不能揭示含量性质，只有在定性相似度合格基础上，定量相似度合格的药材才能满足生产和实际需要。可见，定性相似度和定量相似度的密切结合是用指纹图谱宏观控制药材质量的最佳方法。     

苦苣菜HPLC数字化指纹图谱研究

目的 建立苦苣菜的HPLC数字化指纹图谱。方法 用CenturySIL DS色谱柱（200mm×4．6mm，5μm），流动相为1％醋酸水和1％醋酸甲醇，梯度洗脱，流速为1．0mL·min^-1检测波长为265nm，柱温为（30±0．15）℃，进样量为5μL。用“中药色谱指纹图谱超信息特征数字化评价系统3．0”软件计算10批苦苣菜HPLC指纹图谱的色谱指纹图谱指数F和色谱指纹图分离量指数RF等42个参数进行潜信息特征数字化评价。以双参照物体系结合定量结构-性质相关（QSPR）原理标定指纹峰的表观分子量、峰位、洗脱动量数δ、折合相对积分函。结果以绿原酸为参照物峰，确定32个共有峰，建立了10批苦苣菜HPLC数字化指纹图谱，并以双定性双定量相似度评价10批苦苣菜的质量。结论本方法可清晰地揭示苦苣菜HPLC指纹图谱的超信息特征，为苦苣菜质量控制提供了参考依据。     

中国林蛙卵油气相色谱数字化指纹图谱和定量鉴别研究

目的建立中国林蛙卵油气相色谱（GC）数字化指纹图谱。方法采用气相色谱法,FFAP（30m×0．25mm×0．33μm）,氢焰离子化检测器（FID）,进样量1．0μL。采用程序升温：120℃（1min）→20℃·min^-1→220℃（54min）。以“中药色谱指纹图谱超信息特征数字化评价系统”软件进行数字化和定量评价。结果以正二十四烷峰为参照物峰,确定20个共有峰,建立了中国林蛙卵油GC数字化指纹图谱。获得了以色谱指纹图谱指数F等42参数对中国林蛙卵油GC指纹图谱的超信息特征数字化评价结果和系统指纹定量法定量鉴别结果。结论该气相色谱数字化指纹图谱具有较好的精密度和重现性,适用于中国林蛙卵油质量控制。     

复方丹参方快速UPLC指纹图谱研究

目的:建立复方丹参方中丹参、三七指纹图谱。方法:采用Waters Acquity UPLC(色谱柱为50 mm×2.6 mm,1.7μm),流动相为0.02%磷酸(A)和0.02%磷酸的80%乙腈(B)进行梯度洗脱,柱温为40±0.15℃,流速为0.42mL·min^-1,检测波长:203nm,进样量:3μL。对10批不同丹参饮片进行分析,使用(2004A版)由国家药典委员会制定颁布的相似度软件评估其相似度。结果:建立了复方丹参方中丹参、三七提取液的指纹图谱,10批丹参饮片在此指纹图谱中的相似度均大于0.932。因人参皂苷Rg1信号强,峰形好,故以人参皂苷Rg1为参照峰,确定了15个共有峰,相对保留时间的RSD<1%,相对峰面积的RSD<3%,确定了5个特征峰,其中2个特征峰来源于组方中的丹参,3个特征峰来源于组方中的三七。结论:此色谱条件能将丹参、三七简单、方便的于同一图谱中展现出来,10批丹参饮片质量稳定。为复方丹参方的质量评价、指导临床用药、制剂设计提供科学的依据。     

银黄片高效液相色谱数字化定量指纹图谱研究

目的 建立银黄片(Yinhuang tablet,YHT)数字化定量指纹图谱.方法 采用RP-HPLC法,以Agilent Poroshell 120 SB C18色谱柱(4.6mm×150 mm,2.7 μm),0.2％磷酸水溶液-甲醇为流动相,线性梯度洗脱,流速为0.5 mL·min-1,柱温(35±0.15)℃,紫外检测波长为278 nm,进样量为5μL.用“中药色谱指纹图谱超信息特征数字化评价系统4.0”软件计算13批银黄片的色谱指纹图谱指数等46个参数进行潜信息特征数字化评价.结果 以黄芩苷(BCL)为参照物峰,确定29个共有指纹峰,建立了YHT-HPLC数字化定量指纹图谱.用系统指纹定量法鉴定13批YHT中1批质量极好,3批质量很好,1批质量好,其余质量劣.结论 本法可清晰定量化揭示银黄片HPLC指纹图谱的超信息特征,为银黄片质量控制提供新参考.     

基于双波长HPLC指纹谱和其融合谱的系统指纹定量法鉴定甘草质量

目的建立甘草双波长HPLC指纹图谱及其融合谱,用系统指纹定量法鉴定其质量。方法采用RP-HPLC法,运用双波长融合谱技术分别对10批产地甘草提取具有代表性和互补性的203和254nm的局部色谱图,融合生成对照指纹图谱（RFP）。用系统指纹定量法通过对双波长谱及其融合谱的评价,实现对10批不同产地甘草真实质量的鉴别。并对甘草化学指纹进行破坏性试验考察。结果基于203nmHPLC指纹谱与融合谱的系统指纹定量法评价结果基本一致,用主成分分析和F值证明了融合谱优于此双波长HPLC指纹图谱可用于甘草药材质量控制。结论203和254nm及融合谱的含量相似度Pm有一定波动是由于不同波长谱反映的化学成分的信号大小有一定的差异,导致评价的结果有出入。基于此双波长融合谱的系统指纹定量法的评价结果反映化学指纹信息全面、真实可靠,可清晰准确鉴别甘草真实质量。     

Chromatographic fingerprint analysis of Cephalotaxus sinensis from various sources by high-performance liquid chromatography-diodearray detection-electrospray ionization-tandem mass spectrometry

Selective and efficient analytical methods are required not only for quality assurance but also for authentication of Chinese herbal medicine. A simple, rapid and valid fingerprint method has been first carried out for the quality control of Cephalotaxus sinensis by using high-performance liquid chromatography (HPLC) coupled with photodiode array detection (DAD) and electrospray ionisation-tandem mass spectrometry (ESI-MS). The characteristic analytical fingerprints of this plant extract showed 18 common peaks, and out of these, 10 compounds involving 2 new compounds were identified by comparing the retention time, UV and ESI-MS/MS spectrum of each standard with those of each peak separated by on-line HPLC-DAD-MS/MS. Moreover, the effects of collecting locations, harvesting time, storage time, drying methods, and medicinal portions on herbal chromatographic fingerprints were examined by similarity analysis and principal component analysis (PCA) along with markers. Using the reference fingerprint along with markers, the best harvesting time, cultivation location and medicinal part were determined. The results obtained suggest that the chromatographic fingerprint combining similarity evaluation and PCA along with markers or pharmacologically active constituents can efficiently identify raw herb of Cephalotaxus sinensis from different sources, which provide helpful clues to the study of plant's secondary metabolites and benefit quality control.     

基于HPLC指纹图谱和化学模式识别评价不同产地瓜蒌质量

目的 采用HPLC建立16批瓜蒌药材指纹图谱,结合化学模式识别的方法对不同产地瓜蒌进行区分。方法 采集不同产地瓜蒌药材的HPLC指纹图谱,利用\     

附子HPLC数字化指纹图谱研究

目的建立附子HPLC数字化指纹图谱。方法采用反相高效液相色谱法,以Century SILC18 AQ色谱柱,0.1mol.L-1NaH2PO4水溶液-甲醇为流动相,低压线性梯度洗脱,流速：1.0mL·min^-1,柱温：（30±0.15）℃,检测波长：280nm。用＂中药色谱指纹图谱超信息特征数字化评价系统3.0＂软件从分离度、信息量、定性定量相似度等6个方面对不同批次的附子HPLC指纹图谱进行潜信息特征数字化评价。结果以鸟苷峰为参照物峰,确定了41个共有峰,建立了四川江油地区附子的HPLC数字化指纹图谱。应用色谱指纹图谱指数F等参数对不同产地附子HPLC指纹图谱的超信息特征进行了数字化评价,获得了判别附子质量的重要数字信息,以双定性双定量相似度法评价附子批间质量稳定性。结论所建立的HPLC指纹图谱具有较好的精密度和重现性,适用于附子药材的信息质量控制。     

指纹图谱和化学模式识别研究黄芪的不同基原和生长方式

目的：基于化学组分信息探究不同基原、生长方式的黄芪药材的质量差异。方法：采用高效液相色谱-蒸发光散射检测技术（HPLC-ELSD）建立指纹图谱分析方法,对收集的28批不同基原、不同生长方式的黄芪样品进行相似度评价和化学模式识别分析。结果：建立的黄芪HPLC指纹图谱共鉴定出11个共有峰,聚类分析将28批样品分为蒙古黄芪和膜荚黄芪两类,其中蒙古黄芪明显分为野生/仿野生黄芪和移栽黄芪两类。正交偏最小二乘法判别分析（OPLS-DA）筛选出5个野生/仿野生黄芪与移栽黄芪的差异性成分。结论：本研究建立的黄芪HPLC-ELSD指纹图谱结合化学模式识别方法,较为全面地反映出黄芪药材化学成分的总体质量特征,可区分不同基原和不同生长方式的黄芪药材,可为黄芪药材质量控制提供参考。     

高乌头炮制品的HPLC指纹图谱研究及其2种生物碱成分含量测定

目的 建立不同产区高乌头炮制品的HPLC指纹图谱,并测定2种生物碱成分的含量,为高乌头制品质量控制提供参考依据。方法 通过HPLC梯度洗脱建立高乌头炮制品的指纹图谱,并采用中药指纹图谱相似度评价系统(2012版)、主成分分析(PCA)和聚类分析(CA)对指纹图谱进行分析。结果 建立了高乌头炮制品指纹图谱,10批高乌头制品的相似度均大于0.90,标定共有峰18个,并对其中2主要成分(高乌甲素、冉乌头碱)进行含量测定;聚类分析(CA)将所有批次高乌头制品分为4类,反映了10批不同产区高乌头制品的质量特征;主成分分析(PCA)筛选出累计贡献率达到88.824%的4个主成分,得到决定高乌头药材质量7个化学成分。结论 该方法重现性好、特征性强可用于高乌头炮制品全面质量评价。     

平行四波长高效液相指纹图谱鉴定十全大补丸质量

目的建立十全大补丸（Shiquan Dabu Wan,SQDBW）平行四波长高效液相色谱指纹图谱,依据系统指纹定量法结合全息整合法定量鉴定十全大补丸整体质量。方法采用RP-HPLC法,以5-羟甲基糠醛为参照物峰,在265、290、326和360 nm波长下检测,分别确定了51、44、37和17个共有峰,建立了SQDBW的平行四波长高效液相色谱指纹图谱。分别以独立权重法、均值法和投影参数法整合四波长下各样品的定性定量全信息,最终用最简捷准确的均值法评价10批样品的质量等级。结果 10批样品中6批的等级为良好以上,2批为一般,1批为次,1批为劣。结论平行多波长指纹图谱整合法是基于从全信息角度整体定性和定量鉴定中药质量的有效可信方法,其定量鉴定结果具有可靠性。     

用HPLC指纹图谱对佩兰的信息质量控制研究

目的建立佩兰HPLC数字化指纹图谱，采用双定性双定量相似度等46个参数作为评价的信息参数，对佩兰进行信息质量控制。方法采用RP-HPLC色谱法，以CenturySIL C18 AQ（20cm×4．6mm，5μm）色谱柱，1％醋酸水-1％醋酸乙腈为流动相进行低压梯度洗脱，检测波长为265nm，柱温：（30±0．15）℃，进样量：5μL，测定不同产地佩兰药材的HPLC指纹图谱。以10批佩兰的HPLC指纹图谱按平均值法计算生成对照指纹图谱（RFP），以此RFP为标准计算10批佩兰的双定性双定量相似度的均值，据此进行宏观定性定量质量评价；并以色谱指纹图谱指数F等42个信息参数进行超信息特征评价。结果以香豆素峰为参照物峰，确立了27个共有峰，建立了佩兰HPLC数字化指纹图谱，用双定性双定量相似度的均值评价了10批样品的化学成分数量和分布比例相似性较好，但含量差异很大。结论在选取的14个产地的佩兰药材中4批与其他相比化学成分分布比例差异较大，不建议使用，推荐使用定性定量相似度均很高的S2广东清平、S4江苏东台市等产地的佩兰药材。本研究对使用佩兰药材生产制剂具有宏观质控意义，证明了中药色谱指纹图谱技术结合多变量参数控制中药质量的信息质量控制方法具可行性及实用性。     

基于HPLC指纹图谱结合多种化学模式识别评价生脉饮(党参方)质量

目的：建立多批次生脉饮（党参方） HPLC指纹图谱并采用多种化学计量学分析评价多厂家多批次生脉饮（党参方）的整体质量。方法：采用Ultimate XB-C₁₈色谱柱（4.6 mm×250 mm,5 μm）,流动相为乙腈-0.15%甲酸水溶液,检测波长为260 nm,流速0.8 mL·min^-1,柱温20℃,对多批不同厂家和来源的生脉饮（党参方）制剂进行分析,建立中药色谱指纹图谱,并结合聚类分析、主成分分析与偏最小二乘法判别分析对生脉饮（党参方）质量进行评价。结果：建立了生脉饮（党参方） HPLC指纹图谱,确定了23个共有峰,并指认了其中7个色谱峰;多批次生脉饮（党参方） HPLC指纹图谱的相似度为0.061~0.798;聚类分析与主成分分析结果一致,结合正交偏最小二乘法判别分析发现3类主成分中包含的7个成分峰是造成不同批次生脉饮（党参方）质量差异的主要标志物。在多指标成分定量分析方法学考察结果中,7种指标性成分的加样回收率在97.32%~101.26%,RSD为1.89%~3.56%。结论：不同批次的生脉饮（党参方）之间虽有一定的相关性,但存在质量差异。生脉饮（党参方）检测方法的建立可以为其质量控制及评价提供参考依据,且具有一定的药用开发价值,为其进一步药效及制剂研究奠定基础。     

羌活与宽叶羌活的GC/HPLC指纹图谱研究

目的：分别建立羌活与宽叶羌活的GC指纹图谱、HPLC指纹图谱,为羌活的挥发性及非挥发性成分质量评价与控制提供有效可靠方法。方法：采用GC、HPLC色谱法分别建立羌活与宽叶羌活的指纹图谱,通过相似度评价软件,综合GC、HPLC指纹图谱相似度结果对222批样品的挥发性及非挥发性成分进行质量分析。结果：建立的GC指纹图谱结果显示,羌活共有峰有10个,宽叶羌活共有峰有12个,二者共有成分有9个。HPLC指纹图谱结果显示,羌活共有峰有9个,宽叶羌活共有峰有7个,二者共有成分6个。其中,羌活醇与异欧前胡素在羌活和宽叶羌活中的含量存在明显差异。GC和HPLC指纹图谱结果均显示,222批样品中有7批伪品,有21批宽叶羌活样品,有118批羌活样品,有76批含有两种基原羌活的样品,二者结果一致。结论：建立的气相及液相指纹图谱能有效区分羌活的基原与真伪,并能够有效表征药材的质量优劣,可为羌活的整体质量评价及控制提供依据。