基因mdr1高表达多药耐药肿瘤细胞对力达霉素的药物敏感性

目的利用经药物诱导获得的mdr1基因高表达细胞株以及通过mdr1基因转染建立的稳定高表达细胞株，研究多药耐药肿瘤细胞对力达霉素(C-1027)的药物敏感性。方法构建mdr1重组真核表达质粒pcDNA3.1/mdr1，利用脂质体转染技术，获得mdr1高表达HepG2肝癌细胞。经RT-PCR、细胞荧光免疫化学及罗丹明外排实验，鉴定了细胞的mdr1表达水平和药物外排活性。MTT方法测定敏感细胞及相对应的多药耐药细胞对力达霉素等多种抗肿瘤药物的药物敏感性。结果mdr1稳定转染细胞株HepG2/mdr1、多药耐药KBv200细胞和MCF-7/ADR细胞对力达霉素的IC₅₀值分别为(0.020±0.011) nmol·L^-1，(0.24±0.20) nmol·L^-1和(0.028±0.011) nmol·L^-1。相对于各自的敏感细胞，多药耐药细胞HepG2/mdr1，KBv200和MCF-7/ADR对力达霉素的抗药倍数分别是1.3，6.8和1.6倍，对阿霉素的抗药倍数分别是8.8， 37.2和181.3倍，对紫杉醇的抗药倍数分别是40.3， 336.8和49.2倍。结论 mdr1高表达的多药耐药肿瘤细胞对力达霉素仍高度敏感，未表现出抗药性。     

M3受体对体外H2O2诱导大鼠心肌细胞凋亡的保护作用

目的探讨M₃受体激动对H₂O₂诱导的大鼠培养心肌细胞凋亡的作用，进一步阐明其机制。方法末端标记法 (TUNEL)进行细胞凋亡检测；免疫组化方法检测Bcl-2和Fas的表达；共聚焦显微镜观察［Ca²⁺］_i荧光强度变化。结果M₃受体激动剂胆碱(10 mmol·L^-1)可减少H₂O₂诱导的心肌细胞凋亡的数量，并可增加心肌Bcl-2的表达，减少Fas表达，抑制H₂O₂诱导的［Ca²⁺］_i荧光强度的升高。但预先应用4DAMP (10 nmol·L^-1)阻断M₃受体可逆转胆碱作用。结论激动M₃受体对H₂O₂诱导的心肌细胞凋亡有保护作用，其机制可能与Bcl-2和Fas表达以及下调［Ca²⁺］_i有关。     

苯氧茚酮类衍生物的合成和乙酰胆碱酯酶抑制活性

目的设计、合成新型的AchE抑制剂。方法在K₂CO₃和乙腈存在下，将2-溴-5,6-二甲氧基-1-茚酮与多种胺烷基苯酚缩合得到一系列苯氧茚酮类衍生物，并采用改进的Ellman方法研究它们的体外AchE和BchE抑制活性。结果合成了16个未见文献报道的化合物8a～p，结构经IR，¹H NMR，MS及元素分析确证。初步体外AchE，BchE抑制活性试验表明，绝大部分化合物都显示出良好的抑制AchE活性，其中8h的IC₅₀为50.0 nmol·L^-1，与石杉碱甲相近(IC₅₀＝53.0 nmol·L^-1)；而所有化合物基本都无BchE抑制活性。结论该类衍生物具有较强的AchE抑制活性，有进一步研究的价值。     

银杏内酯B对血小板活化因子刺激的大鼠中性粒细胞功能的影响银杏内酯B对血小板活化因子刺激的大鼠中性粒细胞功能的影响

目的 研究银杏内酯B对血小板活化因子(PAF)刺激的大鼠中性粒细胞粘附、趋化及脱颗粒功能的影响。方法 从大鼠外周血分离中性粒细胞,用MTT比色法、Boyden小室法及β-葡萄糖苷酸酶释放法分别检测PAF诱导的粒细胞粘附、趋化及脱颗粒反应。结果10 μmol·L^-1 银杏内酯B可显著抑制中性粒细胞的粘附反应;1～1 000 nmol·L^-1 可剂量依赖性抑制10 nmol·L^-1 PAF诱发的粒细胞趋化反应,其IC₅₀为4.84 nmol·L^-1; 0.01～10 μmol·L^-1可抑制1 μmol·L^-1 PAF诱发的粒细胞释放β-葡糖苷酸酶,其IC₅₀为3.56 μmol·L^-1。结论银杏内酯B能够抑制PAF刺激的大鼠中性粒细胞粘附、趋化及脱颗粒反应。     

有机锡化合物抗肿瘤生物活性研究

有机锡(IV)化合物能明显地抑制大鼠脑组织中PKC活性和肿瘤细胞增殖，且两者之间存在着相关性。抗肿瘤活性的构效关系是：(1)有机基团R决定整个化合物的生物活性，Ph>Et>n-Bu；(2)卤素的电负性影响化合物活性的大小。抗肿瘤活性可能通过[snR₂]²⁺实现。并能部分地阻断HL-60细胞周期中的G_I期向S期的移行。[SnPh₂F₂]，[SnPh₂(CysOS)]H₂O和[SnPh₂Cl2·phen(CH₃)₂]对PKC的IC₅₀值分别为25，15和20 umol·L^-1，对HL-60细胞的IC₅₀值分别为0．5，4．0和0．3umol·L^-1。但它们无诱导分化HL-60和K562细胞的作用。     

毒毛旋花子苷元对豚鼠心室肌细胞内钙浓度的影响

观察毒毛旋花子苷元(strophanthidin, Str)对分离豚鼠心室肌细胞内游离钙浓度(［Ca²⁺］_i)的影响。酶解分离豚鼠心室肌细胞, 用Fluo 3-AM负载, 激光共聚焦显微镜法测定单个豚鼠心室肌细胞［Ca²⁺］_i的荧光密度。Str可浓度依赖性地升高［Ca²⁺］_i, Str (10 μmol·L^-1)在［Ca²⁺］_i升高达峰值时, 可使细胞挛缩, 而Str (1和10 nmol·L^-1)对细胞形态无影响。TTX、 尼索地平或升高细胞外钙可影响Str (1和100 nmol·L^-1)对［Ca²⁺］_i的升高作用,而对Str (10 μmol·L^-1)无明显影响。在外液中加入ryanodine或去除细胞外钙, 则3个检测浓度的Str升高［Ca²⁺］_i作用均被明显抑制。在无K⁺、 无Na⁺液中, 10 μmol·L^-1 Str升高［Ca²⁺］_i的作用减弱, 而Str (1和100 nmol·L^-1)升高［Ca²⁺］_i的作用无明显影响。加入TTX、 尼索地平或增加细胞外的钙离子浓度, 则3个检测浓度Str的作用均受到影响。提示低浓度Str对［Ca²⁺］_i的升高作用与抑制Na⁺、K⁺-ATP酶活性无关, 而与促进L-型钙通道和TTX敏感性钠通道的“slip-mode”钙电导有关; 高浓度Str升高［Ca²⁺］_i的作用则是抑制Na⁺、K⁺-ATP酶的结果。此外, Str对［Ca²⁺］_i的升高作用还与直接作用于ryanodine受体促进内钙释放有关。     

紫杉醇诱导人乳腺癌MCF-7细胞周期阻断及凋亡的基因表达谱分析

目的研究紫杉醇诱导人MCF-7细胞周期阻断及凋亡的分子机制。方法用流式细胞仪分析紫杉醇对MCF-7细胞周期变化的影响，用自制的含9 984个已知基因和EST的高密度基因芯片检测MCF-7细胞在不同浓度紫杉醇作用下的基因表达变化。结果MCF-7细胞在100 nmol·L^-1紫杉醇作用24 h，流式细胞仪结果显示77.8%细胞阻断在G₂/M期和1.3%细胞发生凋亡；基因表达谱分析发现：在12.5 nmol·L^-1 (IC₅₀)及100 nmol·L^-1紫杉醇作用下，分别有27及77个基因差异表达。结论紫杉醇可诱导MCF-7细胞周期阻断在G₂/M期并引起部分细胞凋亡，该作用与药物浓度有关。基因表达谱分析显示部分差异表达基因参与细胞微管及骨架结构、细胞周期调控、以及DNA损伤修复和凋亡过程。     

四肽FMRFa对大鼠心室肌Na+/Ca2+交换的抑制

目的　研究四肽FMRFa对大鼠单个心室肌细胞Na⁺/Ca²⁺交换的作用。方法　用膜片钳全细胞记录法测定成年大鼠心室肌细胞Na⁺/Ca²⁺交换电流(I_Na⁺/Ca²⁺)和其他离子通道电流。结果　FMRFa对大鼠心室肌细胞I_Na⁺/Ca²⁺呈浓度依赖性抑制,100μmol·L^-1浓度时抑制内向和外向I_Na⁺/Ca²⁺密度分别达60.1%和56.5%,对内向电流及外向电流的IC₅₀分别为20μmol·L^-1和34μmol·L^-1。FMRFa5μmol·L^-1抑制I_Na⁺/Ca²⁺内向和外向电流密度分别为38.7%和34.9%,但FMRFa5μmol·L^-1及20μmol·L^-1对L型钙电流、钠电流、瞬时外向电流和内向整流钾电流均无显著抑制作用。结论　FMRFa对大鼠心室肌细胞是一个特异性Na⁺/Ca²⁺交换抑制剂。     

常用中药单体及其制剂对CYP3A活性的体外抑制作用研究

摘 要 目的:研究常用中药单体及其制剂对CYP3A活性的抑制作用。方法: 在体外肝微粒体孵育体系中加入底物睾酮和不同浓度的中药单体或其制剂,以高效液相色谱法检测6β羟基睾酮的生成量,计算CYP3A酶活性。用GraphPad Prism v5.0软件,按照非线性回归计算出药物对CYP3A抑制作用的IC₅₀值。结果:不同中药单体及其制剂对CYP3A抑制作用的IC₅₀值如下：大黄酸IC₅₀值为36.74 μmol·L^-1;大黄素IC₅₀值为23.09 μmol·L^-1、芦荟大黄素IC₅₀值为23.91 μmol·L^-1,蜂胶IC₅₀值为60.3 μg·mL^-1;水飞蓟素胶囊IC₅₀值为24.5μg·mL^-1;丹参酮ⅡA磺酸钠注射液IC₅₀值为0.14%(v/v);五味子酯甲IC₅₀值为0.56 μmol·L^-1。结论: 大黄中的蒽醌、五味子酯甲、蜂胶、水飞蓟胶囊以及丹参酮ⅡA磺酸钠注射液在体外对鼠或人肝CYP3A酶具有抑制作用,临床上使用相关制剂时应密切关注其可能引起的药物相互作用。     

小檗碱对培养大鼠神经细胞内游离Ca2+的影响

以Fura-2/AM为细胞内钙离子的荧光指示剂,用AR-CM-MIC阳离子测定系统,直接测定了体外培养的新生大鼠神经细胞内游离钙([Ca²⁺]i)值,并观察了小檗碱(Ber)的影响。结果表明,Ber对神经细胞静息[Ca²⁺]i无明显影响,Ber1～100μmol·L^-1能剂量依赖地抑制去甲肾上腺素和H₂O₂引起的[Ca²⁺]i升高,其IC₅₀分别为39.9和17.9μmol·L^-1。高剂量Ber(10～100μmol·L^-1)能抑制高K+引起的[Ca²⁺]i升高。姐果提示,Ber对去甲肾上腺素,高K⁺及H₂O₂引起的[Ca²⁺]i升高的抑制作用可能是其抗脑缺血作用机制之一。     

力达霉素对钾离子通道HERG高表达肿瘤细胞的增殖抑制及其与化疗药物的协同作用

探讨力达霉素(LDM)对钾离子通道HERG高表达肿瘤细胞的增殖抑制及其与化疗药物的协同作用。用MTT法观察LDM和多种抗癌药的联合应用对人A549和HT-29细胞以及转染HERG钾通道A549细胞的抑制作用;用人结肠癌HT-29裸鼠模型,观察LDM和HCPT联合的抑瘤作用,用药物相互作用指数评价药物联合作用。LDM显著抑制A549细胞和HT-29细胞的增殖,其IC50值分别为2.14和4.64 ng.mL-1,其对HERG钾通道高表达的HT-29细胞的增殖抑制作用弱于对HERG钾通道低表达A549细胞的作用;从IC50值来看,LDM也能抑制HERG钾通道稳定转染的A549细胞的增殖,但这种抑制作用明显弱于稳定转染了空白质粒的A549细胞;LDM分别与氟尿嘧啶(5-FU)、多柔比星(DOX)、羟喜树碱(HCPT)联用,能协同抑制HERG钾通道高表达的HT-29细胞的增殖。LDM与5-FU联用,CDI值均大于0.75;LDM与DOX联用,CDI值均大于0.70;LDM与HCPT联用,CDI值小于0.70;其中,与HCPT联用的协同作用效果最强。5-FU对肿瘤细胞的生长抑制作用不受HERG钾通道的调节,DOX的化疗...     

力达霉素诱导人胃癌BGC823细胞凋亡和抑制裸鼠移植瘤生长

观察力达霉素(LDM)对人胃癌BGC823细胞的诱导凋亡作用及体内抗肿瘤活性。采用MTT法观察LDM对人胃癌BGC823细胞增殖的抑制作用。利用Annexin V-FITC/PI双染结合流式细胞仪和脱氧核糖核酸末端转移酶介导的缺口末端标记技术检测细胞凋亡的改变。采用Western blotting法检测细胞中VEGF蛋白的表达情况。建立裸鼠胃癌皮下移植瘤模型，观察LDM的体内抗肿瘤活性。LDM能够明显抑制BGC823细胞增殖，诱导细胞凋亡，降低细胞VEGF蛋白的表达，抑制胃癌裸鼠移植瘤的生长。LDM剂量0.02和0.04 mg·kg^-1的抑瘤率分别为57%和72%(P<0.01)。LDM可诱导胃癌细胞凋亡并抑制裸鼠移植肿瘤的生长。     

力达霉素抗肝癌作用的实验研究

目的观察力达霉素(LDM)在体外、体内对肝癌的抑制作用。方法用四甲基偶氮唑蓝(MTT)方法测定力达霉素和丝裂霉素C对人肝癌BEL-7402细胞及小鼠肝癌22细胞的增生抑制作用。以小鼠移植性肝癌22模型观察不同剂量力达霉素的治疗效果。结果力达霉素和丝裂霉素对人肝癌BEL-7402细胞的半数抑制浓度(IC50)分别为(0.0030±0.0006)nmol/L和(150±27)nmol/L。力达霉素对小鼠肝癌22细胞的IC50为0.025nmol/L。体内试验:力达霉素静脉给药1次及延迟静脉给药3次对小鼠移植性肝癌22细胞的生长均有显著抑制作用。当通过静脉给予1次力达霉素剂量为0.025、0.05和0.1mg/kg时对肝癌22细胞抑瘤率分别为62%、72%和85%。结论力达霉素在体外对肝癌细胞增生有强烈的抑制作用,动物试验有显著疗效     

力达霉素抑制内皮细胞增殖和诱导细胞凋亡

目的研究力达霉素(lidamyein,LDM)对内皮细胞的增殖抑制作用和诱导细胞凋亡作用。方法用MTT测定法和[^2H]胸苷掺入测定法观察LDM对内皮细胞的增殖抑制；用流式细胞分析、形态观察、蛋白质印迹分析等方法研究LDM诱导内皮细胞凋亡及对相关调节蛋白的影响。结果 LDM呈浓度依赖性抑制内皮细胞增殖和诱导内皮细胞凋亡。LDM浓度1～10nmol／L可将内皮细胞阻断在G2／M期。LDM可导致内皮细胞中的游离钙增高，可使Bcl-2和PCNA蛋白的表达下调，但对Bax蛋白的表达无影响。结论 力达霉素抑制内皮细胞增殖与诱导内皮细胞凋亡。可进一步说明其抑制血管生成的相关机制。     

红景天苷对力达霉素诱导人二倍体成纤维细胞衰老的干预作用

目的:研究红景天苷对力达霉素导致DNA损伤后所诱导的细胞衰老的调节作用。方法:采用MTT法测定药物对人胚肺二倍体成纤维细胞2BS活力的影响;衰老相关的β-半乳糖苷酶染色法观察细胞衰老形态变化;流式细胞术检测细胞周期分布以及γ-H2AX蛋白表达变化;蛋白免疫印迹技术观察p53和p21蛋白表达水平变化。结果:较低浓度(低于0.1 nmol.L-1)力达霉素能够抑制2BS细胞增殖,诱导β-半乳糖苷酶染色率显著升高和G2/M期阻滞,并使DNA损伤相关的γ-H2AX蛋白以及p53和p21蛋白表达升高。红景天苷能够显著干预力达霉素诱导的上述细胞衰老样表型及相关分子信号变化。结论:红景天苷能够抑制基因毒药物所致DNA损伤及其诱导的细胞衰老。     

基因工程重组力达霉素的制备及抗肿瘤活性

目的 制备重组力达霉素rLDM,研究其抗肿瘤活性。方法 构建完整力达霉素辅基蛋白表达载体pET30-sldp,并在大肠埃希菌中诱导表达重组辅基蛋白rLDP,纯化后的rLDP蛋白与力达霉素发色团AE在体外进行组装制备rLDM,MTT法检测rLDM和LDM的体外抗肿瘤活性,利用流式细胞仪检测两者对肿瘤细胞周期的影响。结果 rLDP蛋白以可溶形式在大肠埃希菌中分泌表达,与发色团组装后经HPLC检测在340nm处出现特定吸收峰,表明rLDM制备成功;MTT实验结果显示rLDM和LDM对SKOV3细胞的IC50值相近,无显著性差异;流式细胞仪检测结果证明两者对SKOV3细胞周期的影响趋势相似。结论     

力达霉素对人结肠癌HCT-8细胞侵袭调节基因表达的影响

目的研究抗肿瘤抗生素力达霉素对人结肠癌HCT-8细胞侵袭调节基因表达的影响。方法利用cDNA排列(cDNAarrays)、Northern杂交、RT-PCR技术。结果力达霉素可以促进TIMP-1的表达,抑制MMP-9的表达,cDNA排列、Northern杂交、RT-PCR检测得到了同样的结果。结论力达霉素可能通过抑制IV型胶原酶的产生,同时诱导金属蛋白酶抑制因子的产生,从而表现出抗侵袭活性。     

抗IV型胶原酶单抗3G11与力达霉素偶联物的抗肿瘤作用

目的观察抗IV型胶原酶单抗3G11与力达霉素（LDM）偶联物的抗肿瘤作用。方法 用MTT法测定其对肿瘤细胞的增殖抑制作用；用小鼠移植性肝癌H22观察体内抗肿瘤作用。结果3G11-LDM偶联物保留了单抗3G11与IV型胶原酶和靶细胞H22细胞的结合能力，体外试验H22细胞显示比游离LDM更强的细胞增殖抑制作用。体内3G11-LDM偶联物0.05和0.10 mg·kg^-1对小鼠移植性肝癌H22的抑瘤率分别为87.8%和97.2%，而游离LDM 0.05 mg·kg^-1的抑瘤率为67.1%， 且3G11-LDM偶联物组小鼠的中位生存时间比LDM组明显延长。结论3G11-LDM偶联物对小鼠移植性肝癌H22的抑瘤作用比LDM强，可能成为抗肿瘤靶向药物。     

正常人肝细胞和肝癌细胞对力达霉素诱导的有丝分裂性细胞死亡的差异

[摘要]目的：探讨力达霉素（lidamycin, LDM）诱导人肝癌BEL-7402和正常人肝L-02细胞出现的有丝分裂性细胞死亡的差异。方法：采用MTT法观察LDM对BEL-7402和L-02细胞生长曲线的影响;使用Giemsa染色和流式细胞术观察有丝分裂性细胞死亡特征;用Western blot法检测蛋白表达变化。结果：LDM抑制BEL-7402和L-02细胞的生长,二者均表现出有丝分裂性细胞死亡的特征,即细胞体积增大、G2/M期阻滞、出现多核化,但BEL-7402细胞对LDM更敏感。在LDM处理的BEL-7402和L-02细胞中,与凋亡相关的Bax和Smac的蛋白表达水平没有增加,caspase-3和caspase-9未被活化,但L-02细胞的Akt通路被激活。结论：人正常L-02细胞对LDM引起的有丝分裂性细胞死亡明显低于人肝癌BEL-7402细胞,对LDM的反应敏感性存在差异的原因可能与Akt信号通路有关。