大鼠脑内白细胞介素-1Ⅰ型受体在致痫活动中的表达变化

为了探讨白细胞介素 -1I型受体 ( IL-1RI)在癫痫发病中的作用 ,本实验采用免疫组织化学方法观察了致痫大鼠行为改变与脑内 IL-1RI表达变化。结果发现 ,侧脑室注射白细胞介素 -1β( IL-1β)后再注射阈下剂量谷氨酸钠 ,可导致动物痫样发作 ,其大脑皮质及海马锥体细胞层 IL -1RI免疫反应阳性细胞数量较对照组明显增多 ,免疫反应增强 ;如先注射白细胞介素 1受体拮抗剂 ( IL-1ra)、再注射 IL-1β和阈下剂量谷氨酸钠 ,则动物无痫样发作 ,且大脑皮质及海马锥体细胞层 IL-1RI免疫反应阳性细胞数量较注射 IL -1β和阈下剂量谷氨酸钠组减少 ,免疫反应着色减弱。结果提示 ,IL -1β有明显促进谷氨酸钠致痫的作用 ,IL-1RI可能参与致痫过程 ,IL-1ra具有抗痫效应。     

大鼠脑内白细胞介素-1 I型受体在致痫活动中的表达变化

为了探讨白细胞介素1I型受体(IL—1RI)在癫痫发病中的作用，本实验采用免疫组织化学方法观察了致痫大鼠行为改变与脑内IL—1RI表达变化。结果发现，侧脑室注射白细胞介素—1β(IL—1β)后再注射阈下剂量谷氨酸钠，可导致动物痫样发作，其大脑皮质及海马锥体细胞层IL—1RI免疫反应阳性细胞数量较对照组明显增多，免疫反应增强；如先注射白细胞介素1受体拮抗剂(IL—1ra)、再注射IL—1β和阈下剂量谷氨酸钠，则动物无痫样发作，且大脑皮质及海马锥体细胞层IL—1RI免疫反应阳性细胞数量较注射IL—1β和阈下剂量谷氨酸钠组减少，免疫反应着色减弱。结果提示，IL—1β有明显促进谷氨酸钠致痫的作用，IL—1RI可能参与致病过程，IL—1ra具有抗痫效应。     

白细胞介素-1β或白细胞介素-6致痫大鼠脑内γ-氨基丁酸和谷氨酸免疫反应性的变化

目的研究白细胞介素-1β（IL-1β）和白细胞介素-6（IL-6）致痫过程中谷氨酸（Glu）和γ-氨基丁酸（GABA）在大脑皮质及海马内表达的变化,探讨IL-1β及IL-6在癫痫发病中的作用机制。方法大鼠随机分为生理盐水对照组、IL-1β组、IL-6组,侧脑室注射相应试剂120min后观察大鼠行为变化,并采用免疫组织化学方法检测大脑皮质及海马内Glu及GABA的表达变化。结果动物行为学观察,生理盐水对照组无明显癫痫发作,IL-1β组、IL-6组发作程度达中度。免疫组织化学染色显示,在注射IL-1β或IL-6 120min后,IL-1β、IL-6组Glu表达在大脑皮质及海马较对照组明显升高,GABA表达较对照组明显降低,差异显著。结论IL-1β或IL-6可能通过升高Glu含量并降低γ-氨基丁酸的含量参与促痫和致痫过程,从而使神经元兴奋性升高促进癫痫发作。     

脑缺血大鼠大脑皮质NMDA受体的早期表达

目的　探讨脑缺血和缺血再灌注早期大脑皮质NMDA受体的变化规律。方法　健康雄性SD大鼠 4 8只 ,随机分为 6组 :假手术对照组、单纯脑缺血 1 5min、2 0min和 30min组及脑缺血 1 5min再灌流 30min和 2 4h组 ;4血管脑缺血动物模型 ;连续冰冻冠状切片观察 ,NR1 免疫组化染色特异性地显著NMDA受体的变化 ,图象分析及计算阳性单位PU值。结果　①单纯脑缺血各组PU值分别为 7 5 5± 1 81、6 91± 2 5 3和 6 0 9± 1 5 0 ,与对照组PU值 9 0 4± 1 5 7相比呈下降趋势 (P≤ 0 0 5 ) ;②再灌流 30min和 2 4h组PU值分别为 5 76± 2 2 4和 4 73± 1 34,与对照组PU值相比明显减少 36 2 9%～ 4 7 6 8% ,有统计学意义(P <0 0 5 ) ;③再灌流 0min、30min和 2 4h组两两比较 ,除 2 4h和 0min组相比NR1 阳性反应物减少有统计学意义 (P <0 0 5 )外 ,其它组别间NMDA受体下降的变化无显著性差异 (P >0 0 5 )。结论　脑缺血和缺血再灌流早期NMDA受体都存在下行调节 ,这种调节可能是一种保护性作用     

癫痫发作敏感大鼠T区κ型阿片受体和NR_(2B)表达变化

为探讨前深梨状皮层T区(AT)κ型阿片受体与N-甲基-D-天门冬氨酸受体2B亚型(NR2B)表达在红藻氨酸(KA)诱导的癫痫发作敏感性长期增强中的作用。本研究采用颗叶癫痫(KA)模型,制备癫痫发作敏感大鼠,以免疫组化方法检测前深梨状皮层T区κ型阿片受体与NR2B表达变化,并结合行为学观察,与经蝎毒处理后癫痫发作敏感性明显降低的大鼠进行比较。结果显示,与对照组比较,癫痫发作敏感动物前深梨状皮层T区κ型阿片受体与NR2B免疫反应阳性细胞数目均明显减少,染色强度明显降低(P<0.05),以剂量为100 mg／(kg·d)的蝎毒(SV)给予动物连续灌胃4周,可明显降低其癫痫发作敏感性(P<0.05),丽脑内前深梨状皮层T区κ型阿片受体与NR2B免疫反应活性未见明显变化。以上结果提示:前深梨状皮层T区κ型受体免疫反应活性长期降低很可能是癫痫发作敏感性长期增强的重要原因之一,而NR2B免疫反应活性长期降低可能是一种对脑内神经元过度兴奋的代偿性内源性保护机制。     

N-甲基-D-天门冬氨酸受体2A亚单位在SD成年雄性大鼠不同脑区的分布

目的 获取大鼠脑部的N-甲基-D-天门冬氨酸受体2A（NMDAR _2A）表达强度分布的数据。方法 通过免疫组织化学染色和图像分析,对成年雄性SD大鼠（n=6）不同脑区的NMDAR _2A表达进行检测。结果 得到大鼠全脑各主要结构NMDAR _2A 表达强度的数据,并绘制图谱。结论
获得的NMDAR _2A表达图谱可为原位检测鼠 脑NMDAR _2A的实验提供参考。     

白细胞介素-1β对谷氨酸钠致痫大鼠海马Gs蛋白表达的影响

目的 探讨白细胞介素-1β(Interleukin-1,IL-1β)在谷氨酸钠致痫大鼠中对海马兴奋性G-蛋白α亚基(stimulated G-protein α subunit,Gsα)蛋白表达的影响,为阐明IL-1β在致痫中的作用机制提供线索。方法 免疫组织化学方法结合行为观察(SD大鼠随机分为对照组、GluNa组、IL-1β GluNa组、rhIL-1ra IL1β GluNa组和D-AP-5 IL-1β GluNa组)。结果 行为观察显示,IL-1β GluNa组大鼠痫性发作潜伏期(平均2min)较其他组(平均6min)明显缩短,且发作程度(Ⅲ～Ⅳ级)较其他组(Ⅰ～Ⅲ级)严重;对照组无痫性发作。免疫组织化学染色显示,Gsα蛋白在海马各区均有表达,IL-1β GluNa组大鼠在齿状回、CAl区和CA3区Gsa表达较其他组明显增强。结论 IL-1β参与致痫,且在谷氨酸致痫中可能通过Gs蛋白介导发挥作用。     

糖尿病大鼠视网膜N-甲基-D-天门冬氨酸受体表达的变化

目的:观察糖尿病不同时期视网膜 N-甲基-D-天门冬氨酸(NMDA)受体各亚基的表达.方法:采用雄性 SD 大鼠腹腔内注射链脲佐菌素建立糖尿病大鼠模型,分别于4、8、12周灌注,取眼球、冷冻切片;免疫组织化学、原位杂交方法检测NMDA 受体 NRl、NR2A、NR2B 亚基表达的变化;用 RS IMAGE 软件进行图像分析.结果:NRl、NR2A、NR2B 基因及其蛋白表达在糖尿病第 4 周时开始升高,至12周升高具有统计学意义,特别是 NRl 的变化更为显著.结论:NMDA 受体各亚基的高表达参与了糖尿病视网膜病变.     

大鼠脑内白细胞介素1I型受体mRNA的分布

目的 研究大鼠脑内白细胞介素１Ｉ型受体ｍＲＮＡ表达神经元的分布,材料和方法：以＾３６Ｓ标记的ＩＬ－１ＲｔＩｃＤＮＡ作为探针,采用原位杂交技术检测大鼠脑内ＩＬ－１ＲｔＩｍＲＮＡ表达神经元分布广泛而又不均匀,根据表达ＩＬ－１ＲｔＩｍＲＮＡ神经元的密度变化,大鼠脑可分为四种密度区,非常高,高,中等,低密度区,结论;提示脑内白细胞介素１通过其Ｉ型受体介导而发挥作用。     

IL-1β对谷氨酸致痫大鼠大脑皮质、海马内NMDAR_1免疫反应变化的影响

为了进一步探讨 IL -1β在促进癫痫发作中的机制 ,用免疫组织化学方法比较了单纯用致痫量谷氨酸钠致痫的大鼠和预先向侧脑室注射 IL-1β再用阈下剂量的谷氨酸钠共同致痫的大鼠脑内 NMDAR1 免疫反应的变化。结果表明 ,IL-1β和谷氨酸钠共同致痫的大鼠大脑皮质及海马 CA3区 NMDAR1 免疫反应较对照组明显增强 (P<0 .0 5 ) ,与单纯用谷氨酸钠致痫的大鼠没有明显区别。如果预先给予 IL-1ra或 D-AP5则 IL-1β和谷氨酸钠的共同致痫效果不出现 ,脑内 NMDAR1 免疫反应与对照组比较未见明显增强 (P>0 .0 5 )。本实验结果表明 ,IL -1β具有促进癫痫发作的效应 ,这种促癫痫效应的发挥与谷氨酸受体具有协同作用 ,并与通道型 NMDA受体 R1 亚单位表达的增加有关     

高湿热环境下谷氨酸及其受体在大鼠下丘脑的表达变化

目的 探讨高湿热环境下大鼠的耐热极限时间和下丘脑内谷氨酸(Glu)和N-甲基-D-天门冬氨酸(NMDA)受体2(NMDAR2)的表达及其意义.方法 将大鼠置于仿真气候舱[干球温度(40.0±0.5)℃,相对湿度(60±5)%]内,观察动物的行为反应,动物出现昏迷或抽搐则立即取出动物,常规固定、取脑制片,用免疫组织化学方法显示Glu、NMDAR2和加压素(VP)在下丘脑的室旁核(PVN)和视上核(SON)的表达.结果 动物在高湿热环境下表现躁动不安、呼吸加快、前爪抓挠面部,持续120min左右时部分动物死亡.切片观察湿热刺激组的下丘脑PVN和SON中Glu、NMDAR2以及VP表达比对照组明显上调(P＜0.01).结论 高湿热环境下大鼠的耐热极限时间约是120 min.下丘脑内的谷氨酸代谢参与机体对高湿热刺激的反应及其调节过程.     

免疫抑制剂对IL-2致痫大鼠大脑皮质内一氧化氮合酶表达的影响

为探讨免疫抑制剂对致痫大鼠大脑皮质内一氧化氮合酶(NOS)表达的影响,本实验采用Western blot法和图像分析技术观察了经免疫抑制剂预处理后致痫大鼠行为的改变与大脑皮质内NOS表达的变化。结果发现:(1)侧脑室注射白细胞介素-2(IL-2)可引起大鼠明显癫痫发作症状,可使大脑皮质内NOS表达较生理盐水对照组明显升高(P<0.05);(2)环胞素-A(cyclos-porine,CsA)预处理可减轻癫痫发作程度,并使NOS表达明显下降(P<0.05);(3)糖皮质激素(glucocorticoids,GC)注射组大鼠呈抑制状态,且其皮质内NOS表达较生理盐水组显著下降(P<0.05)。结果提示,IL-2具有致痫效应和促进NOS表达的作用,免疫抑制剂具有明显的抑制NOS表达的作用和抗痫效应。     

VR1受体在大鼠食管传入纤维的表达

目的研究辣椒素(capsaicin)受体VR1在大鼠食管传入神经纤维的表达,纤维的形态特征及分布。方法应用激光共聚焦显微镜结合免疫组织化学双标技术。结果VRl阳性(VR1-IR)纤维和终末主要分布于食管的黏膜层、黏膜下层、平滑肌以及血管周围,其形态多为一些含有小棘及串珠样结构的细纤维。有(92.3±3.7)%VR1-IR纤维与代表脊神经节源性传入纤维的神经肽CGRP共存。VR1在脊神经节和结状神经节中的表达类似,为中小型神经元。脊神经节中有(41.5±4.5)%VRl-IR神经元含有CGRP和(67.9±3.2)%CGRP-IR神经元表达VR1。CGRP-IR细胞在结状神经节较少,仅有(4.7±1.4)%VR1-IR神经元含有CGRP。结论大鼠食管壁内的脊神经源性感觉纤维表达VR1受体。     

大鼠实验性脾气虚胃溃疡证病结合模型回肠5-HT及其受体和IL-2、IL-6变化的研究

目的 研究大鼠脾气虚胃溃疡证病结合模型中回肠5-羟色胺 (5-HT)及其受体(5-HTR)、细胞因子IL-2、IL-6的变化,探讨脾虚胃溃疡的发病机制及加味四君子汤治疗脾虚证的机理.方法 采用免疫组织化学技术、图像分析、放射免疫和免疫印迹法.结果 大鼠脾气虚合并胃溃疡模型中5-HT阳性细胞主要分布于回肠黏膜上皮及肠腺细胞;5-HTR免疫反应阳性的细胞主要位于肠绒毛及腺体间结缔组织,在肠壁平滑肌、肌间神经丛也有表达;5-HT及其受体免疫反应阳性产物的含量均增加,免疫印迹法示回肠5-HTR含量增加,且随病程进展,而进一步升高;经过加味四君子汤治疗后,上述异常变化得到纠正.在造模初期,IL-2、IL-6的分泌活性增加,随着脾虚胃溃疡发病的进一步发展,IL-2、IL-6的分泌活性降低.结论 大鼠脾气虚胃溃疡模型中回肠组织5-HT及其受体含量的增高,是大鼠脾虚胃溃疡发病的机理之一,加味四君子汤能通过纠正这些变化而发挥治疗作用.IL-2、 IL-6分泌活性的改变可能与大鼠脾虚胃溃疡的病程发展相关.     

前脑缺血再灌流后大鼠海马 NMDA受体亚单位NR1蛋白的表达变化

目的　观察大鼠前脑缺血再灌流后海马各区域NMDA受体亚单位NR1表达的变化和差异 ,探讨NR1在缺血性脑损伤中的作用。　方法　免疫组织化学和图像处理技术。　结果　 1 在前脑缺血再灌流后早期 ,海马各区域NR1的表达水平显著下降 (P <0 0 5 )。CA1区 ,下降趋势持续存在且不可逆 ,直至再灌流后第 7d ,NR1在该区域的染色强度降至对照组的 17% (P <0 0 5 )。CA3区及齿状回 ,NR1的表达下降是可逆的 ,再灌流后 72h ,齿状回的表达恢复正常 ,再灌后第 7d ,CA3区的表达也恢复到对照组的 96 % ,两组间染色强度无显著差异。 2 在迟发性神经元坏死出现前的缺血再灌流的早期 ,NR1在CA1区、CA3区及齿状回表达下降的幅度不一致 ,再灌后 6h以前 ,CA1区的下降幅度明显小于CA3区及齿状回 (P <0 0 5 ) ,再灌后 12h ,CA1区的下降幅度仍低于CA3区 (P <0 0 5 )。结论　短暂性前脑缺血后 ,NR1在海马CA1区、CA3区及齿状回表达下降的幅度和可逆性存在显著差异 ,这种差异可能是造成CA1区缺血敏感性的重要原因。     

人可溶性IL－6受体在大肠杆菌中的克隆与表达

根据ｓＩＬ－６Ｒ的结构特点及其功能分析，利用ＰＣＲ技术选择性地扩增两个不同长度的ＩＬ－６ＲｃＤＮＡ胞外片段。经ＤＮＡ测序和Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ证实后，定向插入原核表达载体ｐＥＴ－３ａ中，获得了中、高效表达。     

新生儿脐血T细胞IL－2R表达和血清sIL－2R水平的研究

对新生儿脐血Ｔ细胞ＩＬ－２Ｒ表达率和血清ｓＩＬ－２Ｒ水平进行检测，结果显示：①早产儿脐血Ｔ细胞ＩＬ－２Ｒ自然表达率明显低于足月新生儿和正常儿童组，而后两者间无差异；②经ＰＨＡ活化后足月新生儿和早产儿Ｔ细胞ＩＬ－２Ｒ表达率皆显著低于正常儿童组，早产儿组也明显低于足月新生儿组；③足月新生儿和早产儿脐血血清ｓＩＬ－２Ｒ水平均明显高于正常儿童组，但前两者间无明显差异；④新生儿组（包括足月和早产儿）脐血Ｔ细胞ＩＬ－２Ｒ自然表达率与血清ｓＩＬ－２Ｒ水平呈直线负相关，而正常儿童组二者间呈直线正相关。     

呼吸道合胞病毒感染患儿免疫功能变化及PBL体外表达IL－2R的动态观察

探讨７２例确诊呼吸道合胞病毒（ＲＳＶ）特异性血清抗体及鼻咽分泌物脱落细胞中ＲＳＶ抗原阳性患儿急性期及恢复期Ｔ淋巴细胞亚群，血清ＩｇＧ、ＩｓＭ、ＩｇＡ及ＩＬ－２Ｒ的活性表达，动态观察了呼吸道合胞病毒感染患儿急性期、恢复期和正常对照组外周血淋巴细胞经ＰＨＡ刺激后，于不同时间（２４ｈ、４８ｈ、７２ｈ）细胞膜上ＩＬ－２Ｒ的活性表达。结果表明，抗体效价恢复期较急性期升高４～１２８倍，病例组急性期ＣＤ３、ＣＤ１６、Ｂ细胞升高，ＣＤ４／ＣＤ８的比值下降，ＩｇＧ、ＩｇＡ均降低，而ＩＬ－２Ｒ的活性表达呈下降趋势。此结果有助于探讨ＲＳＶ感染患儿的免疫紊乱发生机制。     

马桑内酯致痫大鼠海马内c－fos原癌基因表达及谷氨酸免疫反应的变化

用免疫细胞化学双重染色法对马桑内酯致痫大鼠齿状回及海马回ＣＡ３区内原癌基因表达、谷氨酸免疫反应的变化及其相互关系进行了研究。一侧侧脑室内注射马桑内酯诱发癫痫后，在双重免疫细胞化学染色的切片上，齿状回及海马回ＣＡ３区内均有３种不同类型的细胞：谷氨酸（Ｇｌｕ）单标细胞、Ｆｏｓ单标细胞和Ｆｏｓ／Ｇｌｕ双标细胞。癫痫发作后１ｈ，注射侧齿状回有大量Ｆｏｓ／Ｇｌｕ双标细胞，而海马回ＣＡ３区仅有散在的双标细胞；癫痫发作后１．５ｈ，海马回ＣＡ３区双标细胞数明显增多。Ｆｏｓ单标细胞数及谷氨酸免疫反应性与双标细胞数是平行的。根据以上结果，本文对马桑内酯致痫的机制进行了讨论。