In Vitro and in Vivo Anti-Tumor Effect of Oridonin on Ovarian Cancer

目的:探讨冬凌草甲素对体内外卵巢癌生长的影响及其作用机制.方法:冬凌草甲素作用人卵巢癌细胞株HO-8910PM后,MTT法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot检测卵巢癌细胞中核因子(NF)-KB和X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)表达;建立起裸鼠卵巢癌皮下移植瘤模型,观察冬凌草甲素对裸鼠卵巢癌皮下移植瘤生长的影响;免疫组织化学法检测肿瘤组织中Ki-67、NF-κB和XIAP的阳性表达.结果:HO-8910PM细胞经不同浓度冬凌草甲素(10、20、40 μmol· L-1)作用24h后,细胞存活率分别为(80.14±9.84)％、(71.68±6.51)％和(64.58±5.24)％,均低于对照组(96.12±4.23)％,差异有统计学意义(P＜0.05).冬凌草甲素(40 μmol·L-1)作用HO-8910PM细胞24 h后,诱导(15.9±3.4)％的HO-8910PM细胞发生早期凋亡,高于对照组的(1.7±0.3)％,差异有统计学意义.3种浓度(10、20、40 μmol·L-1)的冬凌草甲素作用24h,均可抑制HO-8910PM细胞中NF-κB的表达;而低浓度(10μmol·L-1)冬凌草甲素对HO-8910PM细胞中XIAP蛋白无明显抑制作用,高浓度冬凌草甲素(20和40 μmol·L-1)明显抑制XIAP蛋白的表达.冬凌草甲素可显著抑制裸鼠卵巢癌皮下移植瘤生长,实验组中Ki-67、NF-κB和XIAP的表达强度均低于对照组(P＜0.01).结论:冬凌草甲素可显著抑制体内外卵巢癌的生长,该作用机制可能是冬凌草甲素通过抑制NF-κB及其调控蛋白XIAP的表达来抑制卵巢癌的生长.     

冬凌草甲素抑制人胃腺癌细胞生长和诱导凋亡作用研究

目的:研究冬凌草甲素对人胃腺癌BGC-823细胞的生长抑制和诱导凋亡的作用及其机制。方法:采用MTT、透射电镜、流式细胞仪等方法对经冬凌草甲素体外作用的BGC-823细胞进行观察和检测。结果:16、32、64μg·mL-1冬凌草甲素能显著抑制BGC-823细胞的生长,并呈浓度-时间依赖性。64μg·mL-1的冬凌草甲素作用24、48、72h的抑制率分别为68·5%、90·8%、94·7%。32μg·mL-1冬凌草甲素作用2h后,电镜下BGC-823细胞的线粒体和内质网增殖肿胀;作用8h后,线粒体和内质网空泡化,内部结构消失,细胞核染色质边集呈凋亡的典型改变;作用24h后,流式细胞仪检测BGC-823细胞G2/M期阻滞,凋亡率为37·8%。结论:冬凌草甲素对人胃腺癌BGC-823细胞具有生长抑制和诱导凋亡作用,生长抑制可能与G2/M细胞周期阻滞有关,诱导凋亡可能通过线粒体和(或)内质网途径起作用。     

冬凌草甲素抗肿瘤的研究进展

冬凌草甲素是从冬凌草等植物中提取出的一种贝壳杉烯二萜类化合物,在抑制肿瘤细胞增殖、诱导自噬及凋亡等方面具有较好的抗肿瘤活性。本文对冬凌草甲素的抗肿瘤活性及作用机制的研究进展作一综述。     

冬凌草甲素诱导HL-60细胞凋亡

目的　研究冬凌草甲素诱导人白血病HL 6 0细胞凋亡的作用。方法　形态学观察 ,DNA凝胶电泳及流式细胞术。结果　冬凌草甲素能显著地诱导HL 6 0细胞发生凋亡 ,其作用呈明显的浓度效应关系和时间依赖性。形态学观察可见凋亡小体的形成 ,琼脂糖凝胶电泳可见明显的DNA梯带 ;流式细胞仪检测到G1亚峰。结论　冬凌草甲素能诱导HL 6 0细胞凋亡 ,并与其细胞杀伤活性相互平行 ,提示冬凌草甲素的抗癌活性与诱导肿瘤细胞凋亡相关     

冬凌草甲素通过下调XIAP增强吉西他滨对胰腺癌SW1990的抑制作用

【摘要】目的探讨冬凌草甲素在体外联合吉西他滨对胰腺癌细胞株SW1990抑制作用及其可能机制。方法 不同浓度的冬凌草甲素（0、10、20、40、80、160μmol/L）作用胰腺癌SW1990细胞24、48、72h后,CCK-8法检测胰腺癌细胞株SW1990细胞的增殖作用;冬凌草甲素（40μmol/L）与吉西他滨（20μmol/L）单独及联合处理细胞48h,并设立对照组, CCK-8法检测SW1990细胞的存活率;Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡情况;RTPCR检测SW1990细胞中NF-κB和XIAP基因的表达水平。结果冬凌草甲素对胰腺癌SW1990细胞的增殖抑制作用呈明显的剂量与时间依赖性;与其他各组相比,冬凌草甲素联合吉西他滨组细胞存活率明显降低（P<0.05）,凋亡率显著升高（P<0.05）;另外,联合组明显下调胰腺癌细胞中NF-κB和XIAP表达水平（P<0.05）。结论冬凌草甲素在体外能显著增强吉西他滨对胰腺癌SW1990细胞的抗瘤效果,其机制可能是通过下调NF-κB及其下游XIAP 的表达,进而诱导胰腺癌细胞的凋亡而实现.     

冬凌草甲素对MCF-7细胞的生长抑制作用及诱导凋亡作用的实验研究

目的探讨冬凌草甲素对人乳腺癌细胞MCF-7细胞的生长抑制作用及诱导凋亡作用。方法以不同浓度的冬凌草甲素作用于体外培养的MCF-7细胞,MTT法检测细胞生长抑制率,应用Hoechst 33258荧光染色法以及流式细胞仪观察细胞凋亡情况。结果冬凌草甲素可显著抑制MCF-7细胞的生长及诱导细胞发生凋亡,并呈现出一定的剂量-效应与时间-效应关系。Hoechst 33258荧光染色观察到典型的核浓缩、核碎裂等细胞凋亡的形态学变化。结论冬凌草甲素能显著抑制MCF-7细胞的生长,诱导细胞发生凋亡是其重要作用方式。     

冬凌草甲素通过激活caspase诱导HeLa细胞凋亡

目的　研究冬凌草甲素诱导人子宫颈癌HeLa细胞凋亡的作用机制。方法　采用形态学观察、DNA凝胶电泳及LDH法。结果　冬凌草甲素能显著诱导HeLa细胞发生凋亡 ,其作用呈明显的量效关系和时间依赖性。形态学观察可见凋亡小体的形成 ,琼脂糖凝胶电泳可见凋亡典型的DNA梯带 ;caspase家族抑制剂 ,caspase 1和 3抑制剂能抑制冬凌草甲素诱导HeLa细胞的凋亡 ,6 8 7μmol·L-1冬凌草甲素作用HeLa细胞 12h使caspase 3的活力提高 2倍。 结论　适宜浓度以下 ,冬凌草甲素 (6 8 7μmol·L-1)诱导HeLa细胞凋亡具有浓度与时间依赖性 ,大剂量 (137 4 μmol·L-1)时 ,冬凌草甲素诱导HeLa细胞坏死的程度强于凋亡 ,且通过激活caspase途径诱导HeLa细胞凋亡。     

七种人癌细胞系对冬凌草甲素的敏感性比较

采用体外集落培养技术测定剂量-存活率曲线,比较了七种常见肿瘤的人癌细胞系对冬凌草甲素的敏感性。除在肺鳞瘟LTEP-78仅测及肩段外,其他细胞的存活率曲线均为阈值指数型。对曲线参数的分析表明,食管唐CaES-17和胃腺癌MGc 80-3对冬凌草甲素最敏感。     

七种人癌细胞系对冬凌草甲素的敏感性比较

采用体外集落培养技术测定剂量-存活率曲线,比较了七种常见肿瘤的人癌细胞系对冬凌草甲素的敏感性。除在肺鳞瘟LTEP-78仅测及肩段外,其他细胞的存活率曲线均为阈值指数型。对曲线参数的分析表明,食管唐CaES-17和胃腺癌MGc 80-3对冬凌草甲素最敏感。     

冬凌草甲素上调人前列腺癌PC-3细胞PTEN基因的表达及其诱导凋亡作用

目的：研究冬凌草甲素诱导人前列腺癌PC-3细胞凋亡及与PTEN基因表达的关系。方法：MTT比色法测定冬凌草甲素诱导PC-3细胞的增长抑制;流式细胞术分析DNA倍体测定细胞凋亡;RT-PCR半定量分析冬凌草甲素诱导人前列腺癌PC-3细胞后PTENmRNA的表达情况。结果：MTT比色法测得冬凌草甲素对PC-3细胞具有明显的增殖抑制作用,并随冬凌草甲素浓度的升高及作用时间的延长而增强;流式细胞术分析PC-3细胞经冬凌草甲素诱导后,细胞凋亡比率随作用时间延长而增加。RT-PCR测得PTEN基因mRNA的表达随细胞凋亡的增加而逐渐增高。结论：冬凌草甲素能够明显抑制PC-3细胞的增殖,并诱导前列腺癌细胞凋亡,其作用途径可能与上调PTENmRNA表达有关。     

卵巢癌伴发子宫内膜异位症临床病理分析

目的:探讨卵巢癌伴发子宫内膜异位症(endometriosis,EM)的病理特点及相关危险因素。方法:分析286例原发卵巢癌患者资料。按术后病理是否合并子宫内膜异位症,将患者分为合并内膜异位症组(伴EM组,48例,16.8%)和不合并内膜异位症组(不伴EM组,238例,83.2%),比较2组的临床病理特征并统计5年生存率,Logrank检验绘制生存曲线。结果:伴EM组中33例(68.8%)肿瘤直径>8cm,透明细胞癌和子宫内膜样癌占68.8%(33例),患者下腹痛(29.2%)、月经改变(20.9%)、盆腔包块(18.7%)、腹胀(12.5%),不伴EM组下腹疼(17.7%)、月经改变(13.4%)、盆腔包块(25.6%)、腹胀(29.4%)。伴EM组以下腹痛和月经改变为主诉的比例较高,不伴EM组更多表现为盆腔包块和腹胀(χ2=10.08,P<0.05)。272例首次行手术治疗。随访5年,38例失访,213例中不伴EM患者5年生存率为35.6%,伴EM者5年生存率为58.4%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:应高度重视子宫内膜异位症的恶变问题,早期诊治可改善卵巢癌预后。     

卵巢癌组织芯片中PI3K p85α,AKT1及Ki-67表达的研究

目的:应用高通量组织芯片技术分析卵巢癌和正常卵巢组织中磷脂酰肌醇3-激酶调节亚基p85α(PI3Kp85α)、AKT1和Ki-67蛋白的表达,探讨其相关性及临床意义.方法:用组织芯片技术结合免疫组化法检测177例卵巢癌和10例正常卵巢组织中PI3Kp85α、AKT1及Ki-67的表达.结果:PI3Kp85α、AKT1及Ki-67的总阳性表达率在卵巢癌组织中分别为70.6%、79.1%和74.5%,正常卵巢组织中分别为30.0%、10.0%和10.0%,2者差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01);在高分化卵巢癌组织中分别为43.5%、52.2%、47.8%,中分化卵巢癌组织中分别为69.4%、77.4%、74.2%,低分化卵巢癌组织中分别为78.3%、86.9%和84.8%,3者差异有统计学意义(均P＜0.01),其阳性表达率及强度随癌症恶性程度增高而增高;PI3Kp85∝、AKT1与Ki-67蛋白3者的表达均存在相关性(均P＜0.01).结论:联合分析PI3Kp85α、AKT1和Ki-67的表达对预测卵巢癌的发生和发展有重要意义.     

幼少女卵巢肿瘤——附94例临床分析

对１９９０年１月￣１９９５年３月收治的≤２０岁的幼、少女卵巢肿瘤进行了回顾性分析。结果显示：１．幼少女卵巢肿瘤的发生率占全年龄组的７．２％。２．青春期少女发病率高于幼女发病率高于幼女，１２￣２０岁有８３例占８８．３％。３．青少年卵巢肿瘤中生殖细胞肿瘤占首位（５３％），且其恶性肿瘤发生率远高于其它类型组。４．并发症多，急诊就诊率高，本组卵巢肿瘤蒂扭转率（４１．５％）明显高于同期成年卵巢肿瘤蒂扭转（１     

地塞米松对卵巢癌SKOV-3细胞的影响

目的研究地塞米松对体外培养条件下的卵巢癌细胞SKOV-3细胞增殖的影响及诱导其凋亡的情况。方法取对数生长期的SKOV-3细胞（细胞数为5×10^4／mL）分别接种于不同细胞培养板上,试验组每孔加入200μL不同浓度的地塞米松,空白对照组加入等体积PRMI-1640培养液孵育,采用四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法检测吸光度（A490值）并计算SKOV-3细胞增殖抑制率;PI染色细胞后上流式细胞仪检测各个时间点的细胞凋亡率。结果MTT法检测结果显示,SKOV-3细胞增殖抑制率随着地塞米松浓度和作用时间的增加均明显增大,以40μmol／L浓度的试验组培养48h的抑制率最高,达（45．25±3．12）％。流式细胞仪检测显示。地塞米松处理后可引起G0／G1期细胞明显增加（P〈0．05）,且SKOV-3细胞凋亡率随着地塞米松浓度增加有升高趋势。结论地塞米松能诱导卵巢癌SKOV-3细胞凋亡。     

以角质形成细胞异常增生为特点的皮肤病hTR、hTERT mRNA表达

目的：探讨端粒酶RNA（hTR）／和端粒酶反转录酶（hTERT）在几种以角质形成细胞异常增生为特点的皮肤病中的表达及其与角质形成细胞增殖的关系。方法：应用原位杂交方法检测银屑病、基底细胞癌（BCC）、鳞癌（SCC）、脂溢性角化（SK）组织标本中hTR、hTERT mRNA的表达。应用免疫组织化学方法检测Ki-67抗原的表达，并对hTR、hTERT mRNA的表达与Ki-67抗原的表达行相关性分析。结果：hTR表达在基底细胞、棘细胞、颗粒层细胞层和所有有核细胞的胞浆。与细胞的增殖情况无关；其阳性细胞百分率在各组差异无统计学意义（P〉0．05）。而hTERT主要表达在癌巢和生长活跃的组织和细胞。与细胞的增殖状态有关。阳性细胞百分率高于正常皮肤（P〈0．05）。Ki-67抗原主要表达在细胞生发层和分裂旺盛的组织；其表达与hTERT的表达呈正相关（r=0．674。P〈0．01）：而与hTR（r=0．295，P〉0．05）无关。结论：hTERT mRNA与细胞增殖活性有关，在银屑病、基底细胞癌、鳞癌、脂溢性角化中的表达明显升高．可作为细胞增殖活性的分子生物学标志。     

姜黄素的抗胰腺癌作用及相关机制研究

【摘要】 目的 探讨姜黄素(curcumin)的抗胰腺癌作用及其可能的机制。 方法 采用免疫组化法检测 35 例胰腺癌组织及相邻非癌组织中 Smad4、Jab1 的表达情况, 并从中抽取 21 例胰腺癌组织测定 Jab1 与 Smad4 染色的阳性细胞百分比, 分析两者相关性。 将人胰腺癌细胞系 PANC-1 细胞分为 PANC-1 对照组（不做处理）和 PANC-1 cur? cumin 组（含 10 μmol/L 姜黄素的细胞培养液处理）, 采用 Western Blot 检测姜黄素对肿瘤抑制物 p53、Smad4 及细胞循环抑制剂 p27 蛋白表达的影响。 将人胚肾细胞系 293T 细胞分为 293T 对照组（不做处理）、293T curcumin 组（含 10 μmol/L 姜黄素的细胞培养液处理）和 293T Jab1 组（ 转染 HA-Jab1 质粒）, 采用免疫共沉淀法检测姜黄素对β- TrCP1 与 Smad4 结合的蛋白表达影响。 结果 与相邻非癌组织比较, 胰腺癌组织中 Smad4 呈低表达, Jab1 呈高表达（均 P＜ 0.01）, Jab1 与 Smad4 的表达呈负相关(n=21, r=-0.71, P=0.007)。 姜黄素可增加 PANC-1 细胞中 Smad4、p53 和 p27 蛋白表达的水平, 降低 293T 细胞中β-TrCP1 与 Smad4 结合的蛋白表达水平; Jab1 可增加 293T 细胞中β- TrCP1 与 Smad4 结合的蛋白表达水平（均 P＜ 0.05）。 结论 姜黄素可能通过上调 Smad4、p53 和 p27 的蛋白表达进而起到抗胰腺癌作用, 其上调 Smad4 表达的机制可能与其抑制 Smad4 蛋白的泛素化进程有关, 而 Jab1 也可能通过参与 Smad4 的泛素化进程影响 Smad4 蛋白降解。     

miR-489协同卡铂通过抑制XIAP的表达发挥抗乳腺癌作用

目的 研究miR-489对卡铂的协同抗乳腺癌效应及机制。方法 MTT细胞活力试验检测卡铂和miR-489对T-47D细胞的杀伤活性。生物信息学、western blot试验及荧光素酶报告基因试验验证X连锁凋亡抑制蛋白（X-linked inhibitor of apoptosis protein,XIAP）是否为miR-489的靶点。分离去除T-47D细胞中的线粒体,western blot试验检测miR-489、卡铂及XIAP质粒处理后T-47D细胞Smac/DIABLO的释放和caspase-9及caspase-3的活化。免疫共沉淀试验检测XIAP与Smac/DIABLO的相互作用。流式细胞术检测T-47D细胞的凋亡情况。结果 miR-489处理能显著增强卡铂对T-47D细胞的杀伤活性。XIAP是miR-489的靶点。miR-489不影响卡铂依赖的线粒体中Smac/DIABLO的释放,但能通过下调XIAP的表达减弱XIAP与Smac/DIABLO的相互作用。另外,转染XIAP质粒能显著抑制miR-489对卡铂的协同抗乳腺癌效应,XIAP质粒能显著抑制miR-489联合卡铂对T-47D细胞凋亡的诱导。XIAP质粒能显著抑制miR-489联合卡铂对T-47D细胞caspase-9及caspase-3的活化。结论 miR-489抑制XIAP的表达发挥对卡铂的协同抗乳腺癌作用。     

DJ-1蛋白在卵巢癌患者血清中的表达及意义

【摘要】目的 研究DJ-1蛋白在卵巢癌患者血清中的表达水平及其意义。方法 选取卵巢上皮性肿瘤患者 52例为患者组,其中良性卵巢肿瘤9例,交界性卵巢肿瘤5例,卵巢癌38例;非卵巢肿瘤患者20例为对照组,采用双抗体夹心法测定2组患者血清中DJ-1蛋白的水平。结果 对照组血清中DJ-1蛋白水平明显低于各种卵巢肿瘤患者（P < 0.05）。卵巢癌患者血清DJ-1蛋白水平高于交界性卵巢肿瘤和良性卵巢肿瘤患者,交界性卵巢肿瘤高于良性卵巢肿瘤患者（P < 0.05）;低分化和中分化卵巢癌患者血清DJ-1水平均高于高分化卵巢癌患者（P < 0.05）;不同手术病理分期和不同组织学分类的卵巢癌患者血清DJ-1水平差别无统计学意义（P > 0.05）。结论 DJ-1参与了卵巢癌的发生和发展,可作为卵巢癌诊断及预后预测的血清学指标。     

TNFSF15表达下调或缺失对卵巢癌组织中肿瘤新血管形成的影响

目的:探讨肿瘤坏死因子超家族-15(TNFSF15)在人卵巢癌标本中的表达及在小鼠体内TNFSF15对卵巢癌血管生成及卵巢癌生长的影响。方法:应用免疫组化法检测正常组(12例)、卵巢癌组(94例)中TNFSF15的表达情况及微血管密度(MVD);雌性C57BL/6小鼠24只随机分为对照组、重组TNFSF15注射组(实验组)、TNFSF15-shRNA处理组(A组)、shRNA-对照组(B组),每组6只,各组均采用皮下注射ID8细胞制备小鼠荷瘤模型,实验组采用腹腔注射重组TNFSF15蛋白,A、B组采用TNFSF15-shRNA干扰其内源性表达的方法,通过检测小鼠肿瘤组织MVD值并测量肿瘤体积大小,观察其对小鼠卵巢癌细胞系ID8在小鼠C57BL/6体内血管生成及肿瘤生长的影响。结果:与正常卵巢组织相比,卵巢癌组织标本中TNFSF15表达显著降低(P<0.01),且Ⅲ/Ⅳ期TNFSF15阳性表达率较Ⅰ/Ⅱ期降低(P<0.05);实验组较对照组小鼠肿瘤组织中MVD值降低且肿瘤体积减小(P<0.05),而A组较B组MVD值升高且肿瘤体积增大(P<0.05)。结论:卵巢癌微环境中TNFSF15表达下调或缺失是肿瘤新血管形成的前提条件。