人胃癌结合β半乳糖苷凝集素的免疫效应研究

为了探讨人胃癌结合β半乳糖苷凝集素的免疫效应，将不同剂量的凝集素注入小鼠腹腔，观察其对小鼠溶血素、抗体形成细胞、大颗粒淋巴细胞及淋巴细胞转化率的影响。结果表明，β半乳糖苷凝集素具有促进淋巴细胞转化并抑制抗体产生的作用。实验组与对照组相比Ｐ＜０．０１，差异有高度显著性。表明该凝集素具有增强细胞免疫、抑制体液免疫的作用。     

凝集素半乳糖结合蛋白3在人子宫内膜的表达

目的探讨凝集素半乳糖结合蛋白3（galectin-3）在子宫内膜的表达与子宫内膜容受性的形成和胚泡着床的关系。方法用RT-PCR和蛋白印迹法（Western blot）检测galectin-3 mRNA和蛋白在增生晚期和分泌中期子宫内膜的表达。用免疫组化方法检测galectin-3蛋白在子宫内膜的定位和表达。结果galectin-3mRNA和蛋白在分泌中期子宫内膜的表达高于增生晚期,galectin-3蛋白定位于上皮细胞和间质细胞。结论结果提示galeetin-3在分泌中期子宫内膜的高表达可能与子宫内膜容受性的形成和胚泡着床的过程有关。     

人Fn14基因真核重组质粒的构建及其表达

目的构建人成纤维细胞生长因子诱导早期反应蛋白14（fibroblast growth factor—inducible 14，Fn14）基因真核重组质粒及其表达。方法从人肝细胞癌组织抽取总RNA，RT—PCR扩增出Fn14基因全长cDNA，经测序正确后，核酸内切酶EcoR I、Xba I酶切PCR产物，亚克隆人pcDNA3．1-Myc载体，重组质粒pcDNA3．1-Myc—Fn14经酶切及测序鉴定正确后转染COS-7细胞，通过免疫组织化学DAB法检测Myc—Fn14融合蛋白的表达。结果重组质粒pcDNA3．1-Myc—Fn14经EcoR I、Xba I酶切及测序鉴定正确，重组质粒包含人Fn14基因完整编码区。免疫组织化学检测结果显示，重组质粒转染COS-7细胞后成功表达Myc—Fn14融合蛋白，转染空载体pcD—NA3．1-Myc的COS-7细胞未见Myc—Fn14融合蛋白表达。结论构建了人Fn14基因真核表达载体，该重组质粒可表达含Myc-Fn14的融合蛋白，为研究Fn14功能奠定了基础。     

半乳糖凝集素-8的研究进展

半乳糖凝集素-8(Gal-8)是半乳糖凝集素家族中的一员,广泛分布在各种动植物组织中,具有细胞黏附、生长、中性粒细胞调节、免疫调节、血小板功能调节等多种作用.近年来,Gal-8在生理及病理过程中所起作用正日益引起科研工作者们的重视.目前已发现Gal-8的表达水平不仅与肾癌、胃癌、肺癌、膀胱癌等多种肿瘤的转移、恶性程度、...     

胃癌组织中Pokemon和半乳糖凝集素-3蛋白的表达

目的:检测胃癌组织中Pokemon和半乳糖凝集素-3(Galectin-3)蛋白的表达情况.方法:采用免疫组织化学SP法检测76例胃癌组织和16例正常胃黏膜组织中Pokemon和Galectin-3的表达,并分析其与临床病理特征的关系.结果:胃癌组织中Pokemon蛋白阳性表达率为59.2%(45/76),Galectin-3蛋白阳性表达率为82.9%(63/76),均高于正常胃黏膜组织的18.8%(3/16)和12.5%(2/16)(χ2＝8.671,P＝0.003;χ2＝28.284,P<0.001).胃癌组织中Pokemon与Galectin-3的阳性表达与淋巴结转移(χ2分别为10.787和11.626,P均=0.001)、pTNM分期(χ2＝12.903,P<0.0010;χ2＝6.435,P=0.011)和浸润深度(χ2分别为11.849和11.701,P均=0.003)有关,且Pokemon与Galectin-3表达有关联(χ2＝5.253,rP=0.254,P=0.022).结论:Pokemon及Galectin-3与胃癌的侵袭、转移有关.     

Galectin-9在小鼠病毒性心肌炎中的表达及意义

目的检测病毒性心肌炎小鼠不同时间点血清中半乳糖凝集素-9(Galectin-9)的水平及心肌组织中Galec-tin-9mRNA的表达,探讨Galectin-9在病毒性心肌炎发生发展中的作用。方法选取58只5~6周BALB/c小鼠,随机分为病毒组50只和对照组8只。病毒组小鼠腹腔接种0.10mL TC ID50为10-5/L的柯萨奇病毒B3(CVB3)N ancy株病毒液,分别于接种病毒后第7、10、14、28天处死8只小鼠;对照组小鼠腹腔接种0.10mL不含病毒的Eag le氏液,28d时处死小鼠。取心脏,在光镜下观察心肌病理变化,计算心肌组织病理学积分。取外周血,用ELISA检测血清中Galectin-9的含量。采用实时荧光定量PCR(RQ-PCR)检测心肌组织中Galectin-9mRNA的表达。结果病毒组小鼠血清中Galectin-9含量在第7、10、14天均较对照组明显增高(P<0.01)。病毒组小鼠心肌组织Galectin-9mRNA的表达在第7、10天均较对照组增强(P<0.01)。病毒组小鼠血清中Galectin-9的含量及心肌组织中Galectin-9mRNA的表达均与心肌组织病理积分呈正相关(r分别为0.75,0.74;P<0.05)。病毒组小鼠血清中Galectin-9的含量与心肌组织中Galectin-9mRNA的表达呈正相关(r=0.71,P<0.05)。结论急性期病毒性心肌炎小鼠Galectin-9表达明显升高,且与心肌炎病变严重程度呈正相关,Galectin-9可能在病毒性心肌炎的发生发展中起一定作用。     

人巨细胞病毒重组基因表达质粒的构建

目的 用基因工程技术克隆人巨细胞病毒（Human cycomegalovirus,HCMV)中抗原性较强的蛋白片段-gp52C末端和pp150C末端的DNA序列，插入pPIC9K质粒，构建适于酵母表达系统的重组表达质粒，方法 根据人巨细胞病毒糖蛋白gp52和磷酸蛋白pp150C末端的cDNA序列，设计出2对引物，利用PCR的方法，以病毒培养液上清为模板，进行二轮PCR扩增，把两个目的基因串联在一起，将所得的DNA片段经EcoRⅠ和NotⅠ双酶切后用T4连接酶与pPIC9K质粒进行连接，然后导入大肠杆菌DH5α筛选出阳性转化子，并用PCR和双酶切鉴定阳性重组子，结果 从人巨细胞病毒培养液上清中扩增出目的基因，PCR反应和双酶切鉴定结果与预期相符。结论 重组表达质粒成功地克隆了目的基因片段。     

介导人血红素加氧酶-1基因真核表达质粒的构建及鉴定

目的:构建含人血红素加氧酶-1(HO-1)基因的重组pcDNA3.1质粒并进行鉴定.方法:利用分子生物学技术,从人肝脏标本中提取出RNA,进行RT-PCR后,做TA克隆,成功获得pMD/19-HO-1质粒,采用限制性内切酶BamH Ⅰ、EcoR Ⅰ从pMD/19-HO-1质粒中将目的基因片段切出,克隆到质粒pcDNA3.1的相应酶切位点中,构建重组质粒pcDNA3.1-HO-1,采用限制性酶切、DNA测序鉴定,将构建好的质粒瞬时转染ECV304细胞株,Western blot测定HO-1表达.结果:酶切、测序鉴定证实插入位点及方向与预期完全一致,测序证实hHO-1与Gene Bank提供的原始序列完全一致,瞬时转染细胞后HO-1蛋白表达明显增高.结论:成功构建了含人血红素加氧酶-1基因的真核表达质粒,为进一步研究该基因在糖尿病血管并发症中的作用奠定基础.     

半乳糖凝集素-1与恶性肿瘤的关系研究进展

半乳糖凝集素（Galectin）是凝集素超家族中的一个家族,其中半乳糖凝集素-1参与恶性肿瘤的生长、增殖、侵袭转移及血管生成,与恶性肿瘤的发生发展密切相关,而针对半乳糖凝集素-1作为靶点治疗恶性肿瘤已成为肿瘤防治的研究热点,同时也为恶性肿瘤的治疗提供了一个新的思路和方向。     

黑曲霉菌为宿主菌的重组表达性质粒的构建

目的：建立以pyrG基因为选择标志，以黑曲霉菌为宿主菌的蛋白质表达系统，方法：以PCR扩增获得的黑曲霉菌pryG基因的部分序列片段的为探针作两次噬菌斑原位杂交，从黑曲霉菌ACC 12049基因文库中克隆获得长度为9．8kb的DNA片段，将其中含pyrG基因的2．3kb片段亚克隆至表达性载体PIGF中，获得重组质粒，对克隆基因进行了全基因测定和分析，以黑曲霉菌ATCC 12049的pryG缺陷株M54为受体菌，用聚乙二醇／氯化钙方法作基因转化实验，将重组质粒导入该受体菌并在其中表达。结果：从黑曲霉菌ATCC 12049基因文库中克隆获得了pryG基因，构建了含该基因的重组表达性载体pYG 1.2 ,序列分析表明该基因与黑曲霉菌L112的pryG基因编码序列的同源性为93．9％，两者经推导的氨基酸的同源性为98．9％，重组质粒pYG1．2可使黑曲霉菌ATCC 12049的pryG缺陷株M54发生基因转化，成为Pry^ ，结论：在克隆了pryG基因的基础上成功构建了以pryG基因为选择标志，以黑曲霉菌为宿主菌的重组表达性质质粒。     

小鼠内皮抑制素原核表达质粒的构建及表达

内皮抑制素具有强烈的抑制新生血管形成的作用，其主要在肝脏合成。提取小鼠肝细胞总RNA，设计合适的引物，用RT－PCR扩增出小鼠内皮抑制素cDNA片段，插入原核表达载体pRSET-A中，构建出重组质粒pRSET-ES。将其转化入大肠杆菌DH5α中扩增，质粒酶切筛选，DNA测序予以证实。重组质粒转化入大肠杆菌BDPS中，经IPTG诱导，SDS－PAGE检测到约19.8ku大小的融合蛋白。     

pCD-rbFGF重组质粒的构建及其在成骨细胞中的表达

为了构建碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)真核表达质粒,并探讨应用bFGF基因治疗骨科各种疾患的可能性,将鼠碱性成纤维细胞生长因子cDNA克隆至真核表达载体pcDNA3中,构建了重组质粒pCD-rbFGF.通过Liofectin介导将pCD-rbFGF转染兔成骨细胞,经免疫组化检测证实兔成骨细胞获得了bFGF的瞬时表达.提示该bFGF真核表达质粒有效,可用于进一步基因治疗研究.     

GAPDH基因重组质粒的构建

目的构建人GAPDH基因的重组质粒。方法采用PCR方法，从人全血基因组DNA中扩增出GAPDH基因，并克隆到PUCl8载体，转化入大肠杆菌DH5ct，阳性克隆用酶切和DNA测序鉴定。结果酶切鉴定所切下的片段大小与预计相符，测序结果与文献报道一致。结论成功地构建了人GAPDH基因的重组质粒PUCl8-GAPDH。     

人脂蛋白脂酶基因重组质粒的构建及其表达

目的研究野生型人脂蛋白脂酶(LPL)cDNA重组表达质粒的构建了及其在COS-1细胞中的表达。方法采用RT-PCR法从人大网膜脂肪组织获取LPL cDNA基因,以pcDNA3.1Zeo( )质粒作为载体,运用基因克隆技术构建野生型人LPLcDNA重组质粒,限制性内切酶酶切、PCR以及双向测序鉴定重组质粒;运用L ipofectam ine 2000TM将重组pcDNA3.1Zeo( )-LPLcDNA质粒导入COS-1细胞,RT-PCR法检测LPL mRNA,ELISA法和比色法分别检测细胞裂解液及细胞培养基中LPL浓度及活性。结果经限制性内切酶酶切及PCR鉴定,证实LPL基因已被连接到pcDNA3.1Zeo( )质粒中;DNA双向测序证实其产物与基因库中LPL基因序列完全一致。LPL mRNA和蛋白表达及其活性测定结果表明,pcDNA3.1Zeo( )-LPL cDNA重组质粒已转染入COS-1细胞中。结论实验成功构建野生型人LPL cDNA重组表达质粒,并证实其能在COS-1细胞中有效表达。     

hLMO1编码基因重组质粒的构建及蛋白的表达和定位

目的 构建hLMO1真核表达载体并证实融合蛋白在细胞内的表达及定位.方法 以人胎脑文库cDNA为模板,PCR扩增hLMO1基因cDNA全长,亚克隆至pEGFP表达载体中.将构建的重组质粒进行酶切测序鉴定,并转染到人上皮细胞---HEK293细胞中,提取细胞蛋白进行Western blot检测.利用激光扫描共聚焦显微镜观察pEGFP-hLMO1在HEK293细胞内的定位.结果 hLMO1基因cDNA全长克隆到了真核表达载体pEGFP中,酶切鉴定片段为471 bp.Western blot检测到了融合蛋白表达,分子量约为45 kDa.pEGFR-LMO1在人HEK293细胞核与细胞质均有表达.结论 成功构建了hLMO1基因cDNA全长的真核表达载体,pEGFP-LMO1蛋白定位于HEK293细胞的细胞质和细胞核内.     

淋病奈瑟菌孔蛋白B原核重组质粒的构建、表达与蛋白鉴定

目的克隆和分析淋病奈瑟菌孔蛋白（porinⅠB，PⅠB）的基因序列并表达相应的蛋白质，为淋病奈瑟菌感染的检测和基因工程疫卣的研究与开发建立基础。方法PCR扩增出孔蛋白PⅠBDNA片段后构建出重组质粒pET—PⅠB，并经质粒酶切筛选、DNA测序和异丙基硫-β-D-半乳糖苷（IPTG）诱导大肠埃希菌DE3表达蛋白予以证实。结果所得PⅠB核苷酸序列与GenBank（AF090801）公布的序列相比较，同源性达99．28％，推导氨基酸序列同源性为98．14％。SDS-PAGE检测到40kD大小的融合蛋白。结论淋病奈瑟菌孔蛋白PⅠB原核表达质粒构建正确。     

癌胚抗原真核表达质粒的构建

目的 癌胚抗原（CEA）是1种国际上公认的肿瘤标志物，是某些肿瘤诊断和治疗的靶分子，为了增强表达CEA的重组质粒对肿瘤的免疫防治效果，我们构建了1套表达CEA的真核表达质粒。方法 运用基因工程技术将编码人CEA全长2.4kb cDNA片段插入到表达载体pCI-neo中，用限制性内切酶法对其进行鉴定。结果 构建的重组质粒含有2.4kb CEA cDNA片段，且正向插入。结论 这为更好地研究CEA的重组质粒对CEA阳性肿瘤的免疫效应打下基础。     

蛇毒cystatin基因真核表达质粒的构建与表达

目的 构建蛇毒cystatin真核表达载体pcDNA3.1/His-cystatin,对其在COS7细胞中的表达进行初步研究.方法 采用PCR法扩增蛇毒cystatin基因片段,插入pcDNA3.1/His C载体中,测定DNA序列后,转染COS7细胞,利用Western-blot检测COS7细胞中cystatin基因的表达.结果 经酶切、测序鉴定证实插入片断已正确,Western-blot检测表明融合蛋白能够在COS7细胞中表达.结论 构建的真核表达载体peDNA3.1/His-cystatin能够在COS7细胞中表达蛇毒cystatin融合蛋白.     

HMGB1基因真核细胞表达载体的构建及其在人脐静脉血管内皮细胞中的表达

  目的 构建HMGB1基因真核细胞表达载体并检测其在真核细胞中的表达?方法 提取人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)mRNA,反转录为cDNA?PCR 扩增HMGB1全长编码基因,构建成pcDNA-3.1-myc-his-B-HMGB1真核细胞表达载体?转染HUVEC,Western blot 检测转染后HMGB1基因的表达改变?结果 构建HMGB1全长基因真核细胞表达载体成功,酶切鉴定及测序鉴定表明载体构建正确,转染HUVEC后可检测到外源性蛋白的表达,对照组无外源性蛋白表达?结论 成功构建了HMGB1全长基因真核细胞表达载体并可转染至HUVEC中