BMP-2在骨缺损修复过程中的动态定量分析

目的 探讨骨缺损修复过程中骨形态发生蛋白-2(BMP-2)的动态定量变化及意义.方法 家兔30只,取右桡骨用骨磨钻制成长20mm的骨缺损,取自体髂骨制成直径1～2mm颗粒状移植于骨缺损处.术后第1、2.4、6、8周各处死6只取材,行BMP-2的RT-PCR检测.结果 术后第1、2.4、6、8周时,BMP-2的相对表达量为1.00、2.19、3.20、2.29、1.42.结论 BMP-2的动态定量变化可反映骨缺损的修复过程,为临床治疗提供理论依据.     

接骨合剂在同种异体骨修复骨缺损过程中对TGF-β2基因表达的影响

家兔20只,左右桡骨制成1.5 cm的骨缺损模型,于骨缺损处用同种异体髂骨骨松质制成颗粒状植骨后分成两组各10例,观察组用接骨合剂（骨碎补、续断、自然铜、土鳖虫）饲养,对照组用普通饲料饲养,于手术后1、2、4、6、8周处死动物取材骨痂行HE、TGF-β2免疫组化及cDNA探针原位杂交,并在光镜和电镜下观察。结果 病理学示观察组骨缺损愈合快于对照组;1周时骨缺损处TGF-β2染色两组均呈弱阳性,其后观察组TGF-β2表达均强于对照组;电镜观察各时点观察组软骨细胞的形成及血管的数量多于对照组。提示接骨合剂可增加TGF-β2在同种异体骨缺损修复中的表达并对骨缺损修复有明显促进作用。     

血清BMP-2、BMP-4检测在慢性肾脏病大鼠主动脉钙化中的意义

目的建立慢性肾脏病(CKD)大鼠主动脉钙化模型,探讨血清骨形态发生蛋白2(BMP-2)、骨形态发生蛋白4(BMP-4)与主动脉钙化程度的相关性。方法 55只SD大鼠随机分为对照组(20只)和CKD组(35只,由于预实验中CKD组大鼠后期存在死亡现象,为保证实验过程每个时间的实验样本量充足,因此CKD组样本量较对照组多),分别于第2、4、6、8周收集血液、尿液、主动脉、肾脏;肾脏HE染色评估肾脏病理改变;茜素红染色法、钙含量测定评估主动脉钙化程度; ELISA测定大鼠血清BMP-2、BMP-4水平;免疫组织化学检测主动脉BMP-2、BMP-4蛋白表达。结果与对照组各时间点相比,CKD组大鼠24 h尿蛋白定量、血清尿素氮、肌酐、胱抑素C水平明显增加(P0.05)。肾脏HE染色显示,自第2周起,肾小管出现扩张,小管内棕黄色物质沉积,随时间进展,逐渐出现间质纤维化,肾小球部分萎缩,血管减少,炎性细胞浸润。茜素红染色随时间进展,第8周出现大量橘红色颗粒物沉积伴钙结节形成。CKD组钙含量明显增加且与血清BMP-2 (r=0.929,P0.01)及BMP-4 (r=0.702,P0.01)明显正相关。同时,自模型成功建立第4周,主动脉BMP-2、BMP-4蛋白表达即明显增加。结论血清BMP-2、BMP-4表达增加可作为CKD血管钙化的血清标志物。     

冠状动脉钙化患者的血浆BMP-2水平及其临床意义

目的:研究冠状动脉钙化患者血浆骨形态发生蛋白-2(BMP-2)的水平及临床意义。方法:根据冠状动脉造影(CAG)结果将171例患者分3组:正常对照组、冠状动脉狭窄无钙化组,冠状动脉狭窄伴钙化组,比较3组患者BMP-2水平的差异。结果:CAG发现有冠状动脉钙化的患者组BMP-2水平高于正常组及冠状动脉狭窄而无钙化组。结论:BMP-2水平升高可能是动脉钙化标志之一。     

不同剂量氟对大鼠成骨细胞激活与BMP-4、BMP-2和Smad-4表达的影响

目的探讨过量氟对大鼠成骨细胞系BMP-2、BMP-4及其信号转导物Smad-4表达水平的影响及其与氟骨症发病机制的关系。方法利用饮水加入氟化钠(NaF)进行大鼠染氟实验,采用原位杂交技术、 Western blot技术、免疫组织化学方法,对氟中毒大鼠骨组织成骨细胞系进行BMP-4、Smad-4的mRNA水平和 BMP-2、BMP-4蛋白质水平的定量分析。结果 NaF可刺激慢性氟中毒大鼠椎骨各包被成骨细胞增殖,并诱导 BMP-2、BMP-4和Smad-4的表达。在低钙偏食组慢性氟中毒大鼠BMP-4、Smad-4 mRNA和BMP-2、BMP-4 蛋白质水平稍增高但与对照组相比差异无统计学意义(P>0．05);在高钙和低钙加氟组Smad-4 mRNA的表达均增高,与对照组相比差异有统计学意义(P<0．001);在低钙加氟组Smad-4 mRNA水平与BMP-4 mRNA水平和BMP-2、BMP-4蛋白质表达水平具有一定相关性(r=0．53)。结论过量氟可刺激大鼠成骨细胞系激活、增殖能力增强,但在增殖能力增强的成骨细胞中BMP-4 mRNA和BMP-2、BMP-4蛋白质水平表达无明显增高,可能与氟骨症的骨化不良有关;NaF刺激Smad-4 mRNA过表达可能与氟骨症骨相损害的信号转导途径激活有关。     

脊柱融合术患者BMP-2基因突变的检测及其意义

目的检测脊柱融合术患者的骨形态发生蛋白-2(BMP-2)基因突变状况。方法从80例行脊柱融合术患者的术前空腹静脉血中提取DNA,采用聚合酶链反应—单链构象多态性分析(PCR-SSCP)及测序技术,检测其BMP-2基因部分编码区及其侧翼序列的突变。结果脊柱融合术患者的外周静脉血中BMP-2基因有突变:TCG→GCG,TCA→TCG,并引起相应多肽的结构改变。结论脊柱融合术患者中存在BMP-2基因突变及多态性分布,并有可能影响植骨融合效果。     

骨科常用补肾活血中药饲养对家兔骨缺损修复过程中VEGF表达的影响

取家兔20只制作左右桡骨骨缺损模型,于骨缺损处行同种异体髂骨骨松质植骨,并随机分为两组,实验组用补肾活血中药(骨碎补、续断、自然铜、土鳖虫)饲养,对照组用普通饲料饲养,于术后1、2、4、6、8周处死动物取骨痂,行HE染色镜下观察其病理变化,免疫组织化学法检测血管内皮生长因子(VEGF)表达水平.结果两组1周时VEGF表达均呈弱阳性,其后实验组VEGF表达均强于对照组;镜下实验组各时点软骨细胞形成及血管数量多于对照组.提示补肾活血中药可促进骨缺损修复,其机制可能与增加VEGF表达有关.     

骨形态发生蛋白在修复长段骨缺损模型中的表达及意义

将32只普通家兔随机分为6组,制成左、右桡骨15mm骨缺损模型,左侧桡骨骨缺损处用自体髂骨骨松质颗粒、骨髓及部分旋前圆肌肌肉联合移植作为实验组,右侧作为对照组,不做任何处理,任其自然生长。于术后1、2、4、6、8周后处死动物取材,标本进行X线检查及骨形态发生蛋白（BMP）免疫组化染色和BMP2的cDNA探针原位杂交并在光镜下观察BMP在修复的长段缺损骨中表达。结果：为实验组在术后1周时与对照组无明显区别,2、4、6、8周相同时间内BMP在修复长段骨缺损模型中的表达强度均强于对照组。认为BMP是骨缺损修复过程中的一种重要生长因子。     

BMP-2复合涂层多孔钛合金试件植入对兔股骨中段骨整合的影响

目的 探讨骨形态发生蛋白2(BMP-2)复合涂层多孔钛合金试件植入对兔股骨中段骨整合的影响。方法构建多孔钛合金试件48件,随机取24件制备BMP-2复合涂层多孔钛合金试件。选择雄性新西兰兔24只,随机分为观察组、对照组,每组12只。对照组双侧股骨植入多孔钛合金试件,观察组双侧股骨植入BMP-2复合涂层多孔钛合金试件。多孔钛合金试件植入4、8周后,每组随机取6只,空气栓塞法处死,右侧股骨Micro-CT断层扫描,获取股骨骨体积分数（BVF）、组织矿物密度（TMD）和骨微观结构指标骨小梁相对体积（TBV）、骨小梁厚度（Tb. Th）、骨小梁间隙（Tb. Sp）,并测试植入体与股骨结合强度（即拔出多孔钛合金试件时最大拔出力）;左侧股骨于低真空扫描电镜下观察植入体-股骨界面骨形成情况,丽春红法染色检测植入体骨长入面积百分比,实时荧光定量PCR法检测植入体-股骨界面骨组织成骨相关基因Runt相关转录因子2(Runx2)、骨钙素（OCN）、成骨细胞特异性转录因子Osterix(Osx)表达。结果 与对照组比较,观察组多孔钛合金试件植入4、8周股骨BVF、TMD、TBV、Tb. Th均显著升高,Tb...     

Ad-hBMP-2对促进软骨细胞分泌Ⅱ型胶原影响的实验研究

目的观察腺病毒-人骨形态发生蛋白-2-绿色荧光蛋白(Ad-hBMP-2-GFP)转染兔软骨细胞后,hBMP-2蛋白的表达和其对软骨细胞分泌Ⅱ型胶原功能的影响。方法包装hBMP-2-GFP腺病毒载体,测定病毒滴度。分离培养并鉴定原代兔软骨细胞,通过基因转染技术,转染Ad-hBMP-2-GFP至兔第三代软骨细胞,RT-PCR检测hBMP-2mRNA的表达,细胞免疫荧光法和Western印迹检测软骨细胞中hBMP-2蛋白的表达和Ⅱ型胶原的变化情况,用未转染组和空病毒组(Ad-GFP)做对照。结果转染后,hBMP-2的mRNA在48h有明显阳性条带表达,对照组呈阴性,hBMP-2蛋白在48、72h的表达量随时间而逐渐增强(P0.05),同时,软骨细胞分泌Ⅱ型胶原的量也逐渐增加(P0.05)。结论Ad-hBMP-2-GFP能成功转染兔软骨细胞,并能促进软骨细胞分泌Ⅱ型胶原,为软骨组织工程提供功能良好的种子细胞,且为hBMP-2基因治疗骨性关节炎提供实验依据。     

慢性肾脏病患者血清PTH与BMP-2的变化及意义

选择慢性肾脏病(CKD)患者65例和健康查体者20例(对照组),根据肾小球滤过率(GFR)将CKD患者分为五组,分别采用化学发光法和酶联免疫吸附法测定血清血清甲状旁腺激素(PTH)及骨形态发生蛋白-2(BMP-2)浓度,分析血清PTH及BMP-2浓度变化的规律.结果 CKD患者血清PTH、BMP-2浓度均明显高于对照组(P<0.01);CKD患者血清BMP-2浓度与PTH呈正相关(r=0.678,P=0.006).认为CKD患者血清PTH及BMP-2浓度随肾功能损害程度加重逐渐升高,提示PTH、BMP-2与CKD患者病情进展有一定关系.     

氟伐他汀对骨质疏松大鼠骨折愈合过程中骨形态发生蛋白-7的影响

目的探讨氟伐他汀对骨质疏松大鼠骨折愈合过程中骨形态发生蛋白7(BMP7)的影响。方法6个月龄雌性SD大鼠96只,随机分为去势组和非去势组,每组48只,分别行双侧卵巢切除术和假性手术;3个月后,去势组于股骨中段制造骨折模型,再随机分为给药组和对照组,每组24只,给药组手术次日给予10mg/(kg·d)氟伐他汀灌胃,疗程为2w,对照组给予安慰剂。利用免疫组化及原位杂交检测骨折愈合过程中给药组和对照组骨折后3、7、14、21、28和42d骨痂中BMP7、BMP7mRNA的表达,并用真彩色图像分析仪作图像分析。结果给药组和对照组在骨折愈合过程中BMP7及BMP7mRNA基因表达的细胞定位无差别,且表达模式基本相似。术后14d,阳性细胞的阳性程度给药组比对照组强(P<0.05)。结论氟伐他汀对骨质疏松大鼠骨折愈合过程中BMP7有一定促进作用。     

BMP-7水平与肾移植慢性排异患者肾功能的关系

目的探讨肾移植慢性排异患者血清和尿液中骨形态发生蛋白（BMP）-7水平与肾功能的相关性。方法采用ELISA法检测肾移植慢性排异患者的血、尿BMP-7及转化生长因子-β1（TGF-β1）表达,比较其在不同肾功能分期中的表达。结果随着肾功能分期升高,肾移植慢性非异患者血清和尿液BMP-7水平呈降低趋势,TGF-β1呈增高趋势（P均〈0.05）。结论肾移植慢性排异患者血清和尿液BMP-7水平变化与肾功能损伤程度呈反比,可作为评价肾移植慢性排异的疗效及预后的指标。     

人重组骨形态发生蛋白2和13对软骨细胞蛋白多糖基因表达调控的研究

目的 研究重组人骨形态发生蛋白(rhBMP)2和rhBMPl3对软骨细胞蛋白多糖基因表达的调控作用.方法 采用1,9二甲基亚甲蓝比色法检测高(625 ng/ml)、中(125 ng/ml)和低(25 ng/ml)浓度组的rhBMP2和rhBMP13对软骨细胞硫化糖胺聚糖生成的影响;采用反转录聚合酶链反应测定3种不同浓度组的rhBMP2和rhBMP13对软骨细胞聚集蛋白聚糖mRNA表达的影响;用Hoechst Dve法检测不同浓度组的rhBMP2和rhBMP13对软骨细胞的增殖作用.结果 与对照相比,不同浓度的rhBMP2和rhBMP13促进软骨聚集蛋白聚糖mRNA的表达差异均有统计学意义(P＜0.05);在DNA的检测中,与对照相比,不同浓度组的rhBMP2和rhBMP13促进软骨细胞增殖差异均无统计学意义.结论 rhBMP2和rhBMP13均能增加软骨细胞聚集蛋白聚糖的表达,rhBMP2比rhBMP13对软骨细胞基因表达有更大的正向调控作用.但rhBMP2和rhBMP13对软骨细胞增殖差异无统计学意义.     

3D打印对多孔BMP-2复合涂层钛合金试件BMP-2装载、释放及成骨细胞增殖、分化的影响

目的 探讨3D打印对多孔BMP-2复合涂层钛合金试件BMP-2装载率、累计释放率及成骨细胞增殖、分化的影响。方法 取制备成功的3D打印多孔BMP-2复合涂层钛合金试件作为实验组,高温烧结多孔BMP-2复合涂层钛合金试件作为对照组。扫描电镜观察多孔BMP-2复合涂层钛合金试件微孔的大小、形状、孔径、孔隙率、孔深度等表征;¹²⁵I放射性标记法测定BMP-2的装载率;ELISA试剂盒测定BMP-2累计释放率;扫描电镜观察MC3T3-E1细胞在多孔BMP-2复合涂层钛合金试件上的生长情况;CCK-8法检测细胞增殖能力;qRT-PCR法检测RUNX2、ALP、OCN、OPN mRNA表达;Western blotting法检测RUNX2、ALP、OCN、OPN蛋白表达。结果 与对照组比较,实验组孔径、孔深度、BMP-2装载率、BMP-2累计释放率(1、3、6、9、12、15、18、21 d)、MC3T3-E1细胞的增殖能力(3、5 d时)、RUNX2、ALP、OCN、OPN mRNA及蛋白表达升高(P均<0.05),孔隙率为(68.24±2.31)%。培养7 d后,对...     

BMSCs-BMP2-煅烧牛骨复合物的制作及其在兔尺骨骨缺损修复中的应用

目的制作兔骨髓间充质干细胞(BMSCs)-骨形态蛋白2(BMP2)-煅烧牛骨复合物,并观察其在兔尺骨骨缺损修复中的应用。方法将兔BMSCs分离、培养及成骨诱导后,接种于BMP2-煅烧牛骨复合物,扫描电镜下观察复合情况。将54只新西兰大白兔随机分为观察组、对照组、空白组各18只,于无菌条件下造成右侧尺骨中段10mm长缺损。观察组植入BMSCs-BMP2-煅烧牛骨复合物,对照组植入BMP2-煅烧牛骨复合物,空白组不植入任何材料,术后均不做任何内外固定。各组术后4、8、12周每组随机处死6只,分别行骨缺损处的放射学和组织学检查。结果成骨诱导后的BMSCs均匀分布在煅烧骨表面及孔洞内,与煅烧骨表面贴附紧密,细胞呈圆形,表面光滑,胞体较大,直径15μm。随着术后时间的延长,观察组和对照组Lane-Sandhu放射学评分、组织学评分均逐渐升高,P均<0.05;空白组无变化,P均>0.05。术后4、8、12周,观察组和对照组Lane-Sandhu放射学评分、组织学评分均高于空白组,观察组升高更明显,P均<0.05。结论 BMSCs能够较好地与BMP2-煅烧牛骨复合物进行体外复合培养,BMSCs-BMP2-煅烧牛骨复合物植入有助于兔尺骨骨缺损的修复。     

斑马鱼中骨形态发生蛋白2a敲降对骨代谢的影响

目的通过显微注射吗啉环反义寡核苷酸(morpholino oligo,MO),使斑马鱼骨形态发生蛋白2a (bone morphgenetic protein 2a,BMP2a)基因敲降,观察BMP2a基因表达抑制后对斑马鱼骨代谢的影响。方法以受精后半小时斑马鱼受精卵为模型,将MO显微注射到受精卵(20个,对照组相同处理),对注射MO后及野生型(wild type,WT)的幼鱼于第9天分别进行茜素红染色,比较硬骨的形态差异,同时运用Image J软件对染色体积进行统计,比较差异。对注射MO后的幼鱼于第4天提取的c DNA采用实时荧光定量PCR(QPCR)方法检测Runx2a、Runx2b、Sp7、Alp骨形成相关基因和WT基因组的成骨下游基因表达的差异。对注射MO后第4天的斑马鱼予以成骨代表性的两个基因Runx2a进行原位杂交,比较WT幼鱼相关成骨基因表达部位的差异和信号强弱。结果与WT染色相比,注射抑制BMP2a的MO后第9天斑马鱼硬骨茜素红染色变浅,体积更小(MO vs. WT:3 276±153 vs. 4 768±231,P<0. 05)。QPCR检测显示,注射MO后第4天的斑马鱼成骨代谢基因表达量与WT斑马鱼对应基因相比均下调(Runx2a:0. 348±0. 002 vs. 1. 007±0. 032;Runx2b:0. 525±0. 021 vs. 1. 013±0. 021; Sp7:0. 483±0. 026 vs. 1. 124±0. 173; Alp:0. 136±0. 012 vs. 1. 233±0. 237; P<0. 05)。就Runx2a原位杂交而言,注射MO后第4天斑马鱼信号表达弱于同期WT斑马鱼。结论通过基因敲降技术使得斑马鱼BMP2下调,直观地观察到斑马鱼的骨发育迟缓,运用分子手段发现其基因下调造成一系列的成骨基因降低,用原位半定量方法靶向定位到斑马鱼蝶骨上,基因下调后造成斑马鱼的蝶骨信号消失。     

体外冲击波联合仙桃草治疗骨不连对骨痂中BMP-2和VEGF mRNA表达的影响

目的探讨体外冲击波联合中草药仙桃草疗法对兔桡骨骨不连骨痂中骨形态发生蛋白-2(BMP-2)、血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法制作120只新西兰大白兔兔桡骨骨不连模型,按随机数字表方法分为A、B、C、D四组,A组为冲击波联合仙桃草治疗组,B组为仙桃草治疗组,C组为冲击波治疗组,D组为对照组。体外冲击波治疗方法:在骨不连两断端部位冲击,冲击量为800次/min,焦点能量0.5 mj/mm2,频率为70~80次/min。于治疗后不同时相点(48 h、1、2、4、6、12周)取材,比较各组标本BMP-2和VEGF的免疫组化表达,并作统计分析。结果 (1)各时相点骨痂中BMP-2的表达:48 h各组相比差异无统计学意义。1、2、4、6、12周各组不同时相点比较,A、C组与D组比较差异有统计学意义(P0.05),B组与D组比较差异无统计学意义(P0.05),且A组与B、C组比较差异同样有统计学意义(P0.05)。(2)各时相点骨痂中VEGF的表达:A、B、C组与D组比较差异均有统计学意义(P0.05),且A组与B、C组比较差异也有统计学意义(P0.05)。结论体外冲击波联合仙桃草疗法可以同时上调BMP-2、VEGF表达,从而刺激成骨,共同促进骨不连愈合。     

老年骨肉瘤患者VEGF、bFGF和BMP-2的表达与意义

目的探讨血管内皮生长因子(VEGF)、碱性成纤维因子(b FGF)和骨形态发生蛋白(BMP)-2在老年骨肉瘤患者中的表达情况。方法随机选取老年骨肉瘤患者57例,利用免疫组化法(S-P法)测定肿瘤组织中VEGF、b FGF和BMP-2的表达情况,并结合临床资料综合评价。结果VEGF在正常骨组织和骨肉瘤中的阳性表达率分别为5.0%和71.93%;b FGF在正常骨组织和骨肉瘤中的阳性表达率分别为0%和78.95%;BMP-2在正常骨组织和骨肉瘤中的阳性表达率分别为0%和77.19%。三项指标的阳性表达率与年龄、性别、骨肉瘤发生部位和组织学类型无关(P0.05),而与骨肉瘤的病理分期和肿瘤直径有关,Ⅱb~Ⅲ期骨肉瘤中VEGF、b FGF和BMP-2的阳性表达率也显著高于Ⅰ~Ⅱa期(P0.05)。VEGF、b FGF和BMP-2在骨肉瘤中的表达具有显著相关性(P0.001)。结论 VEGF、b FGF和BMP-2在骨肉瘤的发生和发展中具有重要的作用,可以作为扼制肿瘤的新靶点,而三者在骨肉瘤的发展过程中又具有相关性,可以通过联合检测判断肿瘤的状态,并为肿瘤的转移和预后提供参考。     

氟化物对成纤维细胞和成骨细胞骨形态发生蛋白-2表达的影响

目的观察氟化物对成纤维细胞和成骨细胞骨形态发生蛋白-2（BMP-2）表达的影响。方法采用体外细胞培养的方法，将细胞分为对照组和6个染氟（F^-，0．1、1．0、100．0、1000．0、10000．0、20000．0μg／L）组，分别在5个染氟时间段（2、4、24、48、72h）收集培养上清液和细胞，应用酶联免疫吸附法（ELISA）和免疫组化方法检测BMP-2蛋白，RT-PCR方法检测染氟48hBMP-2mRNA的表达。结果与对照组比较．成纤维细胞染氟48hBMP-2mRNA表达呈普遍增强趋势，但差异无统计学意义（P〉0．05）；免疫组化检查，可见染氟0．1、1．0、1000．0μg／L组成纤维细胞BMP-2阳性着色较对照组增强；染氟72h，培养上清中BMP-2蛋白在1．0、100．0、20000．0μg／L组分别为（0．11±0．01）、（0．11±0．01）、（0．11±0．01），与对照组（0．07±0．01）比较有明显增高（P〈0．05）。与染氟成纤维细胞比较，染氟成骨细胞BMP-2mRNA和蛋白表达升高出现早．持续时间较长．增强程度更为明显。结论成纤维细胞和成骨细胞在氟化物的刺激下，BMP-2mRNA和蛋白表达有所升高，推测BMP-2可能是氟化物诱导成纤维细胞中成骨细胞核心结合因子α1（cbfa1）和骨钙素（OCN）表达的重要中介环节。