Cyclin-dependent kinase inhibitor p16(INK4a) and telomerase may co-modulate endothelial progenitor cells senescence

Endothelial cells (ECs) damage is an initial and pivotal step in the formation of atherosclerosis. Endothelial progenitor cells (EPCs), which have been considered as the precursor of ECs, can migrate and home to the site of injured ECs to divide into mature ECs and keep the integrity of the endothelial monolayer. It has been shown that the number and function of EPCs are negatively correlated with various atherosclerotic risk factors. This finding may be explained partly by accelerated senescence of EPCs induced by telomere attrition or shortening owning to oxidative stress and accumulative ROS. However, elevated telomerase activity which extends the telomere cannot lead to cellular immortal in the presence of the cyclin-dependent kinase inhibitor p16(INK4a). Researchers have the opinion that senescence is the balance between the regeneration and cancer. High expression of phosphorylated p16(INK4a), which is caused by oxidative stress and accumulative ROS, can prevent tumor cells from unlimited division and becoming malignant ones by accelerating premalignant cells premature senescence. It has been demonstrated that the expression of p16(INK4a) increases remarkably with age due to oxidative stress and accumulative ROS in some stem and progenitor cells, and regulates these cells age-dependent senescence. It is observed that telomeres shortening exists in these cells. Therefore, it can be hypothesized that p16(INK4a), together with telomerase, may co-modulate EPCs senescence.     

同型半胱氨酸影响内皮祖细胞机制的探讨

目的：探讨同型半胱氨酸（Hcy）影响内皮祖细胞（EPCs）数量和功能的可能机制。 方法：采用密度梯度离心法从外周血获取单个核细胞,将其接种在人纤维连接蛋白包被的培养板,培养4 d后,收集贴壁细胞,加入不同浓度Hcy（10 μmol/L、30 μmol/L、100 μmol/L和200 μmol/L）干预,或先予以1 μmol/L 阿托伐他汀预处理1 h,然后再用200 μmol/L Hcy干预。采用SA-β-半乳糖苷酶染色试剂盒检测衰老细胞,细胞增殖ELISA试剂盒和集落生成能力测定实验检测EPCs的增殖能力和集落形成能力,端粒重复序列扩增法(TRAP)-ELISA定量检测端粒酶活性,Western blotting检测EPCs Akt Ser473磷酸化水平。结果：Hcy呈浓度依赖性增加SA-β-半乳糖苷酶阳性细胞数量,200 μmol/L最为显著,较对照增加了2倍（15.2±9.8 vs 51.9±13.5,P<0.01）,而阿托伐他汀能显著减少Hcy诱导的衰老细胞的数量。此外,Hcy干预后伴随EPCs增殖和集落形成能力的显著损害。Hcy随着浓度的增加而显著降低EPCs端粒酶活性。进一步研究发现Hcy显著减少Akt磷酸化。结论：Hcy加速EPCs衰老,伴随EPCs增殖和集落形成能力的损害,提示细胞衰老也许是Hcy损害EPCs的机制之一。Hcy加速EPCs衰老可能跟EPCs端粒酶活性下降以及Akt磷酸化水平的下降有关。阿托伐他汀可以预防Hcy对EPCs的损害效应。     

血管内皮生长因子对外周血内皮祖细胞功能的影响

目的: 观察不同浓度血管内皮生长因子(VEGF）对体外培养人外周血内皮祖细胞（EPCs）生物学功能的影响，探讨VEGF促进EPCs分裂生长的合适浓度。方法: 密度梯度离心法获取人外周血单个核细胞（MNCs），接种至人纤维连接蛋白（HFN）包被的培养板上，培养4 d后收集贴壁细胞，换用配有不同浓度（对照组、10 μg/L、20 μg/L、50 μg/L）VEGF的培养基继续培养3 d后进行细胞免疫组化鉴定EPCs，采用MTT比色法、改良的Boyden小室和黏附能力测定实验，观察EPCs的增殖、迁移和黏附能力。结果: 从人外周血能成功分离EPCs细胞，并能分化为血管内皮细胞；从冠心病患者分离的EPCs增殖能力较非冠心病患者弱；VEGF在较低浓度（10 μg/L和20 μg/L）时即能显著促进EPCs生长的各项生物学指标，但高浓度（50 μg/L）时并不能进一步增强这一效应；低浓度（10 μg/L）下VEGF对冠心病患者作用较非冠心病患者弱，高浓度时对两者促进作用相近。结论: 冠心病患者EPCs功能显著减弱，较低浓度的VEGF即可显著增强EPCs的各项生物学功能，可能对损伤血管的再内皮化有益。     

Paracrine mechanisms of endothelial progenitor cells in vascular repair

Endothelial progenitor cells (EPCs) play an important role in repairing damaged blood vessels and promoting neovascularization. However, the specific mechanism of EPCs promoting vascular repair is still unclear. Currently, there are two different views on the repair of damaged vessels by EPCs, one is that EPCs can directly differentiate into endothelial cells (ECs) and integrate into injured vessels, the other is that EPCs act on cells and blood vessels by releasing paracrine substances. But more evidence now supports the latter. Therefore, the paracrine mechanisms of EPCs are worth further study. This review describes the substances secreted by EPCs, some applications based on paracrine effects of EPCs, and the studies of paracrine mechanisms in cardiovascular diseases--all of these are to support the view that EPCs repair blood vessels through paracrine effects rather than integrating directly into damaged vessels.     

内皮祖细胞移植对血管内膜修复的影响

目的： 从脾源性单个核细胞中分离并扩增血管内皮祖细胞（EPCs）,研究EPCs移植对血管损伤后内膜修复的影响。 方法: 大鼠脾源性单个核细胞贴壁培养法定向扩增EPCs，检测其内皮细胞特性。荧光标记EPCs从尾静脉移植到颈动脉内皮损伤的大鼠体内。 结果: 脾源性单个核细胞体外可诱导出内皮祖细胞，表现为表达内皮细胞特异性标志。移植后，EPCs可归巢至血管损伤部位。EPCs移植组在球囊损伤2周后血管新生内膜明显减少，血管腔狭窄程度显著减轻。EPCs移植组新生内膜/中膜比值显著低于单纯球囊损伤组及M199组(0.82±0.09 vs 1.52±0.21, 1.48±0.19,P＜0.01)。EPCs移植组PCNA 阳性表达细胞明显少于单纯球囊损伤组及M199组（19.25±3.96 vs 31.42±5.23, 29.37±3.16, P＜0.05）。 结论: EPCs能有效移植到内皮损伤血管段，参与损伤血管的内膜修复过程。     

红景天苷对内皮祖细胞的辐射防护作用

 目的: 探讨红景天苷对内皮祖细胞(EPCs)的辐射防护作用,并分析其机制。方法: 体外培养正常人外周血EPCs,观察红景天苷对辐射后EPCs活性、黏附、迁移及凋亡的影响。应用CCK-8法检测细胞活性,流式细胞术检测细胞凋亡率, Western blotting法检测细胞内磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/Akt通路中Akt蛋白表达水平。结果: 4 Gy [⁶⁰Co]γ射线辐射可导致EPCs损伤,不仅细胞活性、黏附和迁移能力下降,而且细胞凋亡增加;与辐射对照组比较, 红景天苷则能部分逆转辐射对EPCs的损伤,提高EPCs的活性、黏附和迁移能力,减少辐射导致的细胞凋亡,增加细胞内磷酸化Akt蛋白的水平。但这些作用可被PI3K特异性抑制剂LY294002削弱。结论: 红景天苷对内皮祖细胞辐射损伤具有一定的防护作用,其机制可能与增强PI3K/Akt通路的作用有关。     

人外周血内皮祖细胞的分离、培养和扩增

目的:改进从人外周血中分离、培养和体外扩增血管内皮祖细胞(EPC)的方法。方法:采用不同淋巴细胞分离液,用密度梯度离心法从外周血分离EPC;用CD34免疫磁性活化细胞分选系统(MACS)分离CD34 细胞;分别培养在包被和不包被有人纤维连接蛋白(HFN)的培养板内;采用细胞免疫化学法检测内皮细胞表面标志CD31、CD34和vWF的表达。结果:从成人外周血可分离获得EPC;不同的分离条件可影响获得EPC的数量和质量,HFN对EPC的生长有促进作用。结论:进一步改进从人外周血分离获取EPC并行体外扩增的方法,为EPC的研究奠定了基础。     

人外周血来源内皮祖细胞诱导分化为心肌样细胞的实验研究及机制探讨

目的： 研究人外周血来源内皮祖细胞（EPCs）在体外定向分化为心肌样细胞的能力及其可能机制。方法： 分离培养及鉴定健康人群（对照组）及冠心病（CAD）患者（实验组）EPCs。将对照组及实验组EPCs分别分成3组在体外进行分化诱导实验：A组 EPCs与乳鼠心肌共培养；B组 EPCs与多聚甲醛固定后的乳鼠心肌共培养；C组 于EPCs中加入收集到的乳鼠心肌培养液上清诱导培养。观察心肌样细胞形态变化;2周后免疫荧光法检测心肌肌钙蛋白 （cTnT）和结蛋白（desmin）的表达；逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测心肌相关基因ANP、cTnT、cTnI和主要组织相容性复合物α链（αMHC）的表达；流式细胞仪检测HLA-DR和人desmin的表达，计数desmin阳性表达细胞。结果： 实验及对照A、B组EPCs均可呈现心肌样细胞形态;ANP、cTnT、cTnI和αMHC基因及cTnT和desmin蛋白均呈阳性表达；流式检测HLA-DR及desmin呈双阳性表达，对照A组分化率为（9±2）％，实验A组分化率约为（4±1）％，差异显著（P<0.01）。实验及对照C组EPCs形态未发生变化，各项检测指标均为阴性表达。结论： 与乳鼠心肌共培养可诱导人外周血来源EPCs分化为心肌样细胞，且其可能机制为细胞间的直接接触。     

雷公藤内酯醇对外周血内皮祖细胞的影响

目的： 观察雷公藤内酯醇对人外周血内皮祖细胞（endothelial progenitor cells,EPCs）的影响。方法: 密度梯度离心法获取人外周血单个核细胞，接种至人纤维连接蛋白包被的培养板，培养7 d后收集贴壁细胞进行细胞免疫化学鉴定。实验加入不同浓度雷公藤内酯醇（2.5 μg/L，5.0 μg/L，10.0 μg/L，20.0 μg/L）干预24 h,采用MTT比色法、改良的Boyden小室和黏附能力测定实验，分别观察EPCs 的增殖、迁移和黏附能力。 结果: 雷公藤内酯醇显著影响EPCs的各项生物学功能，使EPCs的黏附能力显著减弱，迁移功能显著下降,增殖能力显著被抑制，这些改变均存在明显的浓度依赖性，20 μg/L浓度组达最大抑制；在雷公藤内酯醇低浓度组，冠心病患者EPCs细胞的各项功能明显低于非冠心病患者组，高浓度组两组相近。结论: 雷公藤内酯醇可能通过抑制EPCs增殖、迁移和黏附功能，抑制血管再内皮化和血管新生。     

内皮祖细胞在肺动脉高压中的研究进展

肺动脉高压(pulmonary hypertension,PH)是指在海平面静息状态下平均肺动脉压(mean pulmonaryarterial pressure,mPAP)≥20 mmHg,肺血管阻力(pulmonaryvascular resistance,PVR)≥3 Wood units 的一种疾病或病理生理综...     

内皮祖细胞在体外培养成血管样结构的初步观察

目的：探索体外培养脐血、外周血内皮祖细胞（EPCs）的方法，观察其形成血管样结构的可能性及条件。 方法： 采用贴壁选择法培养人脐血及兔外周血内皮祖细胞，光镜下观察细胞形态，用荧光显微镜、流式细胞仪分析贴壁细胞CD34、VEGFR-2、AC133、血管内皮钙粘素（VE-cadherin）的表达，DiI-ac-LDL 吞噬试验及Ⅷ因子免疫组化证实细胞属性。 结果： 体外成功培养出人脐血及兔外周血内皮祖细胞，形成条索状、管状结构，兔外周血EPCs分化较成熟，形成典型铺路石形状及血管样结构。 结论： 脐血、兔外周血内皮祖细胞可在体外培养成功并表现成血管倾向，可能是血管组织工程的潜在资源。     

促红细胞生成素促进内皮祖细胞增殖的体外研究及机制探讨

目的：研究人重组促红细胞生成素（rhEPO）对人内皮祖细胞（EPCs）数量和功能的影响并探讨其作用机制。方法: 以不同浓度rhEPO分别作用于15例处于肾衰竭期的患者以及15例健康志愿者EPCs，MTT法检测其增殖，Annexin-V法检测其凋亡，Western blotting法检测Akt蛋白激酶。结果: 100 U/L、600 U/L及1 200 U/L rhEPO均能提高实验组和对照组EPCs的数量及增殖能力，呈剂量依赖性，实验组EPCs数量及功能均显著低于对照组。1 200 U/L rhEPO能显著降低EPCs的凋亡率，提高 Akt蛋白激酶的表达。加入Wortmannin后能阻断这一效应。结论: rhEPO可以显著提高健康人群和肾衰竭患者EPCs的数量与功能，且这一效应与PI3K/Akt信号通路有关。     

白藜芦醇抑制叔丁基过氧化物诱导的外周血内皮祖细胞损伤

目的:观察白藜芦醇对叔丁基过氧化物诱导的人外周血内皮祖细胞(EPC)凋亡的影响,探讨其可能机制。方法:密度梯度离心法获取人外周血单个核细胞,培养4 d后,收集贴壁细胞。实验分为对照组、叔丁基过氧化物诱导组和白藜芦醇+叔丁基过氧化物组。采用二苯基四氮唑溴盐(MTT)比色法和5-溴脱氧尿嘧啶核苷(Brd U)ELISA法检测EPC增殖能力;采用改良Boyden小室法检测EPC增殖及迁移能力;Annexin V-FITC/PI染色及流式细胞术检测EPC凋亡率;比色法检测caspase-3活性;荧光探针H_2DCF-DA法检测细胞内活性氧簇(ROS)水平;Western blot检测cleaved caspase-3、Bax及Bcl-2蛋白的表达。结果:白藜芦醇能抑制叔丁基过氧化物诱导的EPC凋亡,并增加EPC增殖及迁移能力;白藜芦醇降低EPC细胞内ROS水平,抑制caspase-3的活性及cleaved caspase-3的蛋白水平,同时能促进Bcl-2及抑制Bax蛋白表达。结论:白藜芦醇对叔丁基过氧化物诱导的EPC凋亡有抑制作用,其机制可能与抗氧化应激有关。     

小鼠骨髓来源内皮祖细胞体外诱导培养及分化特征

目的: 研究小鼠骨髓来源内皮祖细胞(EPCs)的体外培养方法及体外分化特征。方法: 采用梯度离心法分离小鼠骨髓单个核细胞并进行诱导培养,用流式细胞术和免疫细胞化学对细胞表型特征进行检测,分别采用MTT和Transwell方法对其增殖、迁移能力进行检测。结果: 体外培养4 d至14 d,CD133、SCA-1及CD117的表达率分别从11.05%、29.32%及16.45 %降至2.29%、7.82%及3.92%;而VEGFR-2、CD31、VE-cadherin、eNOS及vWF的表达率分别从12.21%、8.43%、18.27%、7.11%及32.61%增加至62.13%、32.96%、67.73%、27.89%及82.16%;吞噬acLDL和结合UEA-I的细胞从57.18%增加至86.70%。在0 μg/L至80 μg/L VEGF浓度梯度下,细胞增殖率和迁移率分别增加58.03%和33.83%。结论: EGM-2内皮培养基可稳定培养小鼠骨髓来源EPCs,培养过程中其干细胞标志物表达逐渐降低,而内皮细胞标志物表达及特性不断增加,VEGF可显著促进其增殖和迁移。     

高糖对内皮祖细胞功能的损害及胰岛素的影响

目的： 探讨各浓度葡萄糖及高糖条件下胰岛素对内皮祖细胞（EPCs）增殖能力、衰老程度及分泌NO能力的影响。方法: 密度梯度离心法获取大鼠骨髓单核细胞，培养扩增EPCs并进行鉴定。收集培养第4 d的细胞分别给予不同浓度的葡萄糖（5、10、20、40 mmol/L）及在高糖（40 mmol/L）条件下给予不同浓度的胰岛素（0.1、1、10、100 nmol/L）或空白培养液干预7 d，观察细胞增殖能力、衰老细胞百分率以及NO分泌功能的变化。结果: 葡萄糖可浓度依赖性地损害EPCs的增殖，促进衰老，减少EPCs的NO分泌。在高糖条件下，胰岛素干预组与对照相比可促进EPCs增殖，延缓衰老（在1 nmol/L效应达峰值），促进NO分泌（在10 nmol/L效应达峰值）。结论: 葡萄糖剂量依赖性地损害EPCs增殖和功能，而胰岛素可对抗此作用，从而对心血管系统起到一定的保护作用。     

经皮冠状动脉介入术前他汀再负荷对围术期循环内皮祖细胞及炎症因子的影响

 目的:探讨经皮冠状动脉介入术（PCI）术前大剂量阿托伐他汀再负荷治疗对长期他汀治疗的稳定性冠心病病人围术期循环内皮祖细胞（EPCs）及炎症因子的影响。方法:将长期他汀治疗并择期PCI的稳定性心绞痛患者随机分为3组：术前12 h 80 mg阿托伐他汀负荷及术前2 h追加40 mg阿托伐他汀再负荷治疗（80 mg再负荷组）、连续7 d 40 mg阿托伐他汀再负荷治疗（40 mg再负荷组）和无阿托伐他汀再负荷治疗（无再负荷组）。应用流式细胞术分别测定所有患者PCI术前1 h、术后1 h、6 h及24 h外周血中标记为CD45-/CD133+/CD34+、CD45-/CD34+/KDR+ 和CD45-/CD144+/KDR+的EPCs数量;术前即刻及术后24 h分别测定血清可溶性细胞间黏附分子1（sICAM-1）、C反应蛋白（CRP）和肌钙蛋白（TnI）水平。结果:（1）80 mg再负荷组患者PCI术前与术后1 h外周血标记为CD45-/CD133+/CD34+和 CD45-/CD34+/KDR+的EPCs数量均有显著差异（P<0.05）,PCI术前与术后6 h外周血标记为上述两种指标的EPCs差异显著（P<0.05）;外周血标记为CD45-/CD144+/KDR+的EPCs在PCI术前和术后无显著变化;无再负荷组及40 mg再负荷组患者外周血EPCs在PCI术前和术后无显著变化。（2）PCI术后24 h无再负荷组sICAM-1及CRP水平较术前显著升高（P<0.05）。PCI术后24 h 80 mg再负荷组和40 mg再负荷组sICAM-1和CRP的升高幅度有减少趋势。（3）与无再负荷组相比,80 mg再负荷组PCI术后24 h 血清TnI升高幅度显著降低（P<0.05）。结论: PCI术前阿托伐他汀再负荷方式影响围术期外周血EPCs数量。术前大剂量他汀短时间再负荷治疗提高围术期外周血中早期EPCs的数量。PCI术前阿托伐他汀再负荷治疗减少围术期炎症反应及心肌损伤。     

Mobilization of circulating endothelial progenitor cells after endovascular therapy for ruptured cerebral aneurysms

Emerging evidence shows that circulating endothelial progenitor cells (EPCs) promote regeneration of the endothelium at sites of vessel injury. This study was designed to test the hypothesis that EPCs are mobilized in patients who had ruptured cerebral aneurysm (CA) and underwent endovascular therapy. Fourteen patients with ruptured CAs were recruited and blood samples were analyzed after coil embolization surgery. Blood samples were also obtained from 18 healthy control subjects who had no evidence of CAs and did not undergo endovascular surgery. We measured the numbers of circulating EPCs, levels of plasma vascular endothelial growth factor (VEGF) and platelet counts. EPCs significantly increased in patients with ruptured CAs and underwent surgical coil embolization, reaching a peak level on day 14 post operation. The levels of plasma VEGF and platelet counts also significantly increased in parallel with the increase in EPCs, leading to significant positive correlations of circulating EPCs with VEGF in plasma (r = 0.636, P < 0.01) and platelet counts (r = 0.721, P < 0.001), respectively. The finding suggests that EPCs are mobilized upon surgery and may play a critical role in repairing injured vascular endothelium. Levels of EPCs in peripheral blood could also serve as a prognostic marker for the outcomes of ruptured cerebral aneurysms after surgical repair.     

黄酒对同型半胱氨酸诱导的内皮祖细胞功能障碍的影响

目的:探索同型半胱氨酸(Hcy)诱导的内皮祖细胞(EPCs)的功能障碍能否被黄酒所逆转。方法:密度梯度离心法从大鼠骨髓细胞悬液中获取单个核细胞,将其接种在人纤维连接蛋白包被的培养板,诱导单个核细胞向EPCs分化,孵箱中培养7 d后,收集贴壁细胞用于实验。激光共聚焦显微镜鉴定Di I-ac-LDL和FITC-UEA-I双染色阳性细胞被认定是正在分化的EPCs。上述细胞培养24 h后收集样品,采用MTT比色法、Transwell小室、凋亡试剂盒和体外血管生成试剂盒分别观察EPCs的活力、迁移能力、凋亡和体外血管生成能力。结果:与对照组相比,Hcy干预下EPCs的活力、迁移和体外血管生成能力均显著减弱(P0.01);黄酒或红酒的干预则能明显改善Hcy对EPCs上述功能的影响(P0.01);进一步与对照组比较后,发现黄酒或红酒的干预还能使EPCs的活力、迁移和体外血管生成能力较对照组也有明显改善(P0.05);乙醇组EPCs的上述功能较Hcy组没有明显的变化。各组对EPCs的凋亡没有影响。结论:Hcy能显著减弱EPCs的活力、迁移能力和体外血管生成能力,小剂量的黄酒能改善EPCs的上述功能。     

雌激素对孕妇外周血内皮祖细胞动员作用的体外研究

目的探讨雌激素对孕妇外周血内皮祖细胞（EPC）的动员作用。方法取孕期为10、20、30周的健康、单胎孕妇外周静脉血，采用Ficoll密度梯度离心法分离单个核细胞并进行体外培养。采用免疫荧光细胞化学染色方法进行EPC鉴定，取培养4d的细胞，加入DiI标记的乙酰化低密度脂蛋白（acLDL）和FITC标记的荆豆凝集素（UEA—I），用激光共聚焦扫描显微镜观察和记录图像。取培养7d的细胞，在相差显微镜下计数不同孕期孕妇外周血EPC集落（≥50个细胞）形成数（CFU）。分别通过跨膜迁移和增殖实验观察雌激素对EPC的动员和促增殖作用，随机选取培养7d的细胞，分别加入浓度为1×10^-10、1×10^-9、1×10^-8mol／L的雌二醇（雌二醇作用组），在相差显微镜下分别计数培养24h后EPC的跨膜迁移数和培养48h后EPC的增殖数，以加入PBS作为对照组，实验均重复3次。结果免疫荧光细胞化学染色显示，平均85％以上的细胞摄取DiI-acLDL并结合FITC—UEA—I，可以鉴定为EPC。孕期为10、20、30周孕妇外周血EPC的CFU分别为1．67±0．33、4．83±0．60、7．50±0．67，组间差异均有统计学意义（P〈0．05）。浓度为1×10^-10、1×10^-9、1×10^-8mol／L雌二醇作用组EPC跨膜迁移数（×10 ^3个／膜）分别为1．50±0，09、1．61±0．06、1．90±0．07，均明显高于对照组（1．03±0．06，P〈0．01）：EPC增殖数（×10^5个）分别为1．07±0．05、1．33±0．05、1．19±0．03，均明显高于对照组（1．00±0．03，P〈0．01）。结论孕妇外周血EPC的功能状态可能与雌激素水平有关，雌激素对EPC的动员具有重要作用。     

兔外周血内皮祖细胞培养及HTK基因体外修饰

目的探讨兔外周血来源的内皮祖细胞(EPCs)经体外基因修饰后能否成功表达目的基因。方法分离兔外周血单个核细胞进行定向培养,观察细胞摄取DiI-Ac-LDL的能力,免疫荧光法检测EPCs的细胞表面标记。同时PCR扩增人组织激肽释放酶(HTK)基因,构建以GFP为报告基因的重组真核表达载体,转染体外培养的EPCs后,荧光显微镜下观察HTK-EGFP融合蛋白的表达,通过RT-PCR与ELISA方法检测HTK的表达水平。结果细胞培养5～6d开始出现成簇的短梭形贴壁细胞,15d后形成鹅卵石样细胞层,传代后的细胞能摄取DiI-Ac-LDL,免疫荧光显示vWF和CD133 ;pEGFP-HTK重组质粒在EPCs中可以稳定表达,表达的融合蛋白具有HTK和EGFP的双重活性。结论HTK基因修饰兔外周血EPCs对于血管病的治疗可能具有良好的前景。