五味子乙素通过上调miR-486-5 p的表达对甲状腺癌细胞生物学行为的影响

目的 研究五味子乙素对miR-486-5p表达及人甲状腺癌B-CPAP细胞增殖和侵袭的影响.方法 实时定量PCR检测人甲状腺癌B-CPAP细胞中miR-486-5p的表达量,Western-blot法检测人甲状腺癌B-CPAP细胞中Caspase-3、Bcl-2和Bax的表达.脂质体转染方法构建过表达miR-486-5p的人甲状腺癌B-CPAP细胞,MTT法检测人甲状腺癌B-CPAP细胞的增殖率,流式细胞仪检测人甲状腺癌B-CPAP细胞的凋亡率.结果 与空白对照组比较,随着五味子乙素浓度的增加人甲状腺癌B-CPAP细胞增殖率和Bcl-2表达呈不断降低趋势(P<0.05),miR-486-5p、Caspase-3和Bax表达呈不断增加趋势(P<0.05).转染miR-486-5p模拟物组的细胞增殖率在转染3 h与4 h后低于转染miRNA模拟物组,细胞凋亡率显著高于转染miRNA模拟物组(P<0.05,P<0.01).结论 五味子乙素可能通过上调miR-486-5p表达,诱导人甲状腺癌B-CPAP细胞发生凋亡,miR-486-5p可作为对人甲状腺癌靶向治疗的靶点.     

咪达唑仑上调miR-137影响胃癌细胞的增殖、凋亡的机制研究

摘要：目的:探讨咪达唑仑（MID）对胃癌细胞的增殖、凋亡的影响及其作用机制。方法:以胃癌HGC-27细胞为研究对象,采用不同浓度的MID处理,采用细胞增殖/毒性检测试剂盒（CCK-8）检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞的凋亡;实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测微小RNA（miR）-137的表达量; miR-137 mimics转染至HGC-27细胞,采用上述方法检测细胞增殖及凋亡;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测细胞周期蛋白1（CyclinD1）、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3（C-caspase-3）蛋白表达。结果:MID可降低细胞存活率、增高细胞凋亡率、促进miR-137与C-caspase-3的表达（P<0.05）; miR-137过表达可降低细胞存活率、增加细胞凋亡率、抑制CyclinD1表达、促进C-caspase-3表达（P<0.05）;抑制miR-137的表达可减弱MID对HGC-27细胞增殖及凋亡的作用。结论:MID可通过上调miR-137的表达从而抑制胃癌细胞增殖,促进细胞凋亡。     

紫杉醇联合miR-200b对胃腺癌SGC-7901细胞增殖侵袭能力的影响

【摘要】目的 体外观察紫杉醇联合应用miR-200b模拟物（miR-200b mimics）对抑制胃癌SGC-7901细胞增殖侵袭能力的影响。方法 分别单独应用miR-200b转染细胞（200b组）及50 nmol/L紫杉醇单独处理胃癌SGC-7901细胞（紫杉醇组）,并联合应用上述两者（联合组）,同时设转染无义序列组和对照组。通过流式细胞技术检测细胞的凋亡水平和周期分布情况,克隆形成实验检测细胞的增殖能力,Transwell侵袭实验和细胞划痕实验观测细胞的侵袭迁移能力,Western-blot检测E2F3蛋白的表达水平。结果 与单药组相比,联合组早期凋亡率显著升高;克隆形成率显著降低,穿过Transwell小室的细胞数目显著减少;划痕48 h后的细胞迁移能力明显降低;E2F3蛋白在200b组及联合组中表达水平降低（均P< 0.001）。联合组阻滞于G2/M期细胞的比例高于200b组、无义序列组及对照组,但和紫杉醇组比较差异无统计学意义。结论 miR-200b可能通过降低E2F3表达增强紫杉醇对胃癌SGC-7901细胞增殖侵袭能力的抑制作用。     

过表达miRNA-495联合替莫唑胺对神经胶质瘤细胞增殖和凋亡的影响 #br#

目的探讨过表达微小RNA（miRNA）-495联合替莫唑胺（TMZ）对神经胶质瘤细胞增殖、凋亡的影响及其 作 用 机 制 。 方法 将 miRNA-495 类 似 物（miRNA-495 mimics）以 及 阴 性 对 照 序 列（miRNA-495 NC）应 用 LipofectamineTM 2000转染至神经胶质瘤U251、A172细胞中,并设空白对照组。采用实时荧光定量PCR（qPCR）检测 转染后miRNA-495、高迁移率族核小体结合域5（HMGN5）mRNA的相对表达量;Western blot法检测HMGN5及基质金 属蛋白酶-9（MMP-9）蛋白表达水平;CCK-8检测神经胶质瘤细胞的增殖能力。miRNA-495 mimics和TMZ单独或联 合作用于U251细胞后,应用CCK-8、流式细胞术检测神经胶质瘤细胞增殖及凋亡情况。 结果在神经胶质瘤U251、 A172 细胞中,与空白对照组和 miRNA-495 NC 组比较,miRNA-495 mimics 组 miR-495 相对表达量升高,HMGN5 mRNA相对表达量及HMGN5、MMP-9蛋白表达量均降低;且细胞增殖能力明显减弱（P＜0.05）。在神经胶质瘤U251 细胞中,与TMZ组和miRNA-495 mimics组比较,TMZ+miRNA-495 mimics组细胞增殖能力明显被抑制,细胞凋亡明 显增加。 结论过表达miRNA-495与化疗药物TMZ联合应用可协同抑制神经胶质瘤细胞增殖、促进细胞凋亡;其机 制可能是通过抑制HMGN5/MMP-9信号通路实现的。     

苦参醇A对高糖诱导人视网膜血管内皮细胞增殖凋亡的影响研究

摘要：目的:探讨苦参醇A（KA）对高糖诱导人视网膜血管内皮细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制。方法:体外培养人视网膜血管内皮细胞,使用高糖诱导细胞,分别加入不同剂量的KA处理细胞;采用CCK-8检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡率;采用qRT-PCR检测LncRNA DLX6-AS1、miR-145-5p的表达量;双荧光素酶报告实验与RIP实验验证DLX6-AS1、miR-145-5p的靶向关系;分别将si-DLX6-AS1、pc DNA-DLX6-AS1转染至高糖诱导的细胞中,采用上述方法检测细胞增殖及凋亡能力。结果:高糖诱导细胞可降低细胞活力、增高凋亡率（P<0.05）,DLX6-AS1的表达水平显著升高（P<0.05）,miR-145-5p的表达水平显著降低（P<0.05）,而KA可明显逆转高糖对细胞增殖、凋亡及DLX6-AS1、miR-145-5p表达的作用（P<0.05）,且呈剂量依赖性;双荧光素酶报告实验与RIP实验证实DLX6-AS1能够靶向结合miR-145-5p;转染si-DLX6-AS1后细胞活力升高（P<0.05）,凋亡率降低（P<0.05）,而转染pc DNA-DLX6-AS1能够明显减弱KA对高糖诱导视网膜血管内皮细胞增殖、凋亡的作用。结论:苦参醇A可能通过调控DLX6-AS1/miR-145-5p分子轴从而促进高糖诱导的人视网膜血管内皮细胞增殖及抑制细胞凋亡。     

氧化苦参碱通过下调miR-155-5p对胃癌细胞的增殖、凋亡、迁移、侵袭作用

目的 探讨氧化苦参碱通过调节miR-155-5p表达对胃癌细胞的增殖、凋亡、迁移、侵袭中的作用和其潜在机制。方法 使用TRIzol法提取组织标本和细胞系的总RNA,检测胃癌组织与癌旁组织中的miR-155-5p表达情况。采用qRT-PCR评估miR-155-5p在人胃癌细胞系（SGC7901、MGC803）与正常胃黏膜上皮（GES-1、AGS）细胞中的表达情况。将MGC803分为空白组、转染错义序列siRNA组、miR-155-5p模拟物组、miR-155-5p抑制剂组、氧化苦参碱（100 μmol/L）组、氧化苦参碱＋miR-155-5p模拟物组。采用MTT法观察不同干预下胃癌细胞的生长抑制作用,用细胞集落形成试验检测不同干预下胃癌细胞的增殖情况。用流式细胞技术分析不同干预对胃癌细胞凋亡的影响。Transwell法检测不同干预后胃癌细胞的迁移、侵袭情况。蛋白质印迹法检测MGC803细胞中Claudin 1、c-Myc、cyclin D1、Bcl-2、Caspase-3蛋白的相对表达量。结果 与癌旁组织和胃黏膜细胞（GES-1、AGS）相比,在胃癌组织和胃癌细胞系（SGC7901、MGC803）中miR-155-5p相对表达量升高（P＜0.001）。而氧化苦参碱通过调节miR-155-5p表达抑制胃癌细胞生长。MTT实验表明,miR-155-5p模拟物的转染后MGC803细胞活力显著增加,而氧化苦参碱可显著抑制胃癌细胞、转染和miR-155-5p模拟物的细胞活力（P＜0.001）。与空白组、错义序列siRNA组相比,miR-155-5p模拟物转染后MGC803细胞活力显著增加,细胞集落生成增加,而氧化苦参碱可显著抑制胃癌细胞的活力和转染miR-155-5p模拟物的细胞活力,及细胞集落生成数（P＜0.001）。miR-155-5p-模拟物组的细胞迁移和侵袭细胞数显著增加、凋亡比例降低,而氧化苦参碱组和miR-155-5p-抑制剂组细胞迁移和侵袭细胞数量降低、凋亡比例升高（P＜0.001）。miR-155-5p模拟组的Claudin 1、c-Myc、Cyclin D1、Bcl-2相对表达量增加,而Caspase-3相对表达量降低（P＜0.01、0.001）。而miR-155-5p抑制剂组、氧化苦参碱组和氧化苦参碱＋miR-155-5p抑制剂组的Claudin 1、c-Myc、Cyclin D1、Bcl-2表达较miR-155-5p模拟组显著下降,Caspase-3表达增加（P＜0.001）。结论 miR-155-5p可能是胃癌的治疗靶点,氧化苦参碱可通过miR-155-5p的调节作用发挥抗肿瘤作用。     

蒺藜皂苷抑制胃癌细胞AGS增殖并促进其凋亡的机制研究

摘要：目的:研究蒺藜皂苷对胃癌细胞AGS增殖和凋亡的影响及机制。方法:以胃癌细胞AGS作为研究对象,用蒺藜皂苷处理细胞,噻唑蓝（MTT）检测细胞增殖,碘化丙啶（PI）单染法检测细胞周期,膜联蛋白V-FITC（Annexin V-FITC）/PI双染法检测细胞凋亡,Western blot检测细胞周期蛋白D1（cyclin D1）、剪切的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3（cleaved caspase3）、Nin1结合蛋白（NOB1）蛋白表达。在胃癌细胞中转染pc DNA3.1-NOB1,给予蒺藜皂苷处理,检测细胞增殖、周期、凋亡和Cyclin D1、cleaved caspase 3、NOB1蛋白表达变化。结果:蒺藜皂苷处理后,胃癌细胞增殖能力和Cyclin D1、NOB1蛋白表达水平下降（P<0.05）,细胞G1期比例、细胞凋亡率、cleaved caspase 3蛋白表达水平升高（P<0.05）。转染pc DNA3.1-NOB1后,胃癌细胞增殖能力和Cyclin D1、NOB1蛋白表达水平升高（P<0.05）,细胞G1期比例、细胞凋亡率、cleaved caspase 3蛋白表达水平下降（P<0.05）。结论:蒺藜皂苷通过下调NOB1抑制胃癌细胞增殖并诱导细胞凋亡。     

microRNA-34a对食管鳞癌细胞增殖、凋亡的影响

分析microRNA-34a（miR-34a）对人食管鳞癌（ESCC）细胞Eca109增殖、凋亡的影响。用miR-34a模拟物/抑制剂转染Eca109,实时荧光定量PCR检测Eca109细胞中miR-34a的表达;MTT法、流式细胞仪和Western blot分别检测转染miR-34a模拟物/抑制剂后对Eca109细胞增殖、凋亡的影响及凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax变化。（1）转染miR-34a模拟物/抑制剂后miR-34a的表达明显增高（P＜0.01）/降低（P＜0.05）。（2）转染miR-34a模拟物组细胞的吸光度明显下降（P＜0.05）且凋亡率显著增加（P＜0.05）;而转染miR-34a抑制剂组细胞的存活率高于NC组（P＜0.05）且凋亡率明显降低（P＜0.05）。（3）miR-34a过表达能够使抗凋亡基因Bcl-2蛋白表达水平显著下降,促凋亡基因Bax的蛋白表达水平明显增加（P＜0.05）。（1）过表达miR-34a能抑制食管癌细胞的增殖,促进其凋亡。（2）抑制miR-34a能促进食管癌的增殖,抑制其凋亡。（3）miR-34a在食管癌中可能发挥着抑癌基因的作用。     

miR-1915-3p在胃癌细胞中的表达水平及其对胃癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 检测miR-1915-3p在胃癌细胞中的表达水平,探讨其对胃癌细胞增殖和凋亡的影响。方法 实时定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测胃癌细胞MGC-803、SGC-7901、MKN-45和永生化胃上皮细胞GES-1中miR-1915-3p的相对表达水平;转染实验将miR-1915-3p质粒和对照质粒（miR-NC）转染至MGC-803和SGC-7901中,分别设置MGC-803细胞miR-1915-3p组和miR-NC组及SGC-7901细胞miR-1915-3p组和miR-NC组;细胞增殖实验和凋亡实验分别检测miR-1915-3p组和miR-NC组细胞的光密度（OD）值和凋亡率;蛋白免疫印迹（Western blot）实验检测miR-1915-3p组和miR-NC组细胞的Bcl-2蛋白表达情况。结果 MGC-803、SGC-7901、MKN-45细胞中miR-1915-3p的相对表达水平分别为（0.46±0.06）、（0.42±0.05）、（0.33±0.04）,均低于GES-1细胞中miR-1915-3p的相对表达水平（P<0.05）。MGC-803细胞中,miR-1915-3p组与miR-NC组相比,OD值降低、细胞凋亡率增加、Bcl-2蛋白表达减弱（P均<0.05）;SGC-7901细胞中,miR-1915-3p组与miR-NC组相比,OD值降低、细胞凋亡率增加、Bcl-2蛋白表达减弱（P均<0.05）。结论 miR-1915-3p在胃癌细胞系中表达降低,上调miR-1915-3p的表达可抑制胃癌细胞增殖,减弱Bcl-2蛋白表达以促进细胞凋亡。     

lncRNA EGFR-AS1靶向miR-577对卵巢癌细胞增殖和凋亡的影响

摘要：目的:研究长链非编码RNA（lncRNA） EGFR-AS1对微小RNA-577（miR-577）的靶向关系及对卵巢癌细胞增殖和凋亡的影响。方法:实时荧光定量PCR（q PCR）检测卵巢癌组织中lncRNA EGFR-AS1和miR-577表达。Lnc Base Predicted v.2预测和双荧光素酶报告实验分析lncRNA EGFR-AS1与miR-577的靶向关系。卵巢癌细胞SKOV3中转染si-EGFR-AS1或miR-577,噻唑蓝（MTT）和流式细胞术分别检测细胞增殖与凋亡,蛋白质印迹法（Western blot）检测细胞周期蛋白D1（Cyclin D1）、p21、B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）表达。si-EGFR-AS1和anti-miR-577共转染,观察抑制miR-577表达在干扰lncRNA EGFR-AS1表达诱导的SKOV3细胞增殖和凋亡中的作用。结果:卵巢癌组织中lncRNA EGFR-AS1表达量显著高于癌旁组织,miR-577表达量显著低于癌旁组织（P<0.01）。lncRNA EGFR-AS1与miR-577具有靶向结合位点,转染miR-577的WT-EGFR-AS1细胞荧光素酶相对活性显著低于转染miR-NC组（P<0.01）。干扰lncRNA EGFR-AS1表达明显降低SKOV3细胞24,48,72 h的吸光度（A）值及Cyclin D1、Bcl-2蛋白表达量,显著增加细胞凋亡率及p21、Bax蛋白水平（P<0.05或P<0.01）。miR-577过表达显著降低SKOV3细胞48和72 h的A值及Cyclin D1、Bcl-2蛋白水平,显著提高细胞调亡率及p21、Bax蛋白表达量（P<0.05）。与si-EGFR-AS1和anti-miR-NC共转染比较,si-EGFR-AS1和anti-miR-577共转染显著减少SKOV3的细胞凋亡率及p21、Bax蛋白表达量,显著提高24,48,72 h的A值及Cyclin D1、Bcl-2蛋白水平（P<0.05）。结论:lncRNA EGFR-AS1在卵巢癌中表达上调,干扰lncRNA EGFR-AS1表达可抑制卵巢癌细胞增殖,并诱导凋亡,其作用机制与靶向调控miR-577表达有关。     

Dual-modified cationic liposomes loaded with paclitaxel and survivin siRNA for targeted imaging and therapy of cancer stem cells in brain glioma

Development of safe, efficient nanocomplex for targeted imaging and therapy of cancer stem cells in brain glioma has become a great challenge. Herein, a low-density lipoprotein receptor-related protein and a RNA aptamer bound CD133 were used as dual-targeting ligands to prepare dual-modified cationic liposomes (DP-CLPs) loaded with survivin siRNA and paclitaxel (DP-CLPs–PTX–siRNA) for actively targeting imaging and treating CD133⁺ glioma stem cells after passing through the blood–brain barrier. After being administrated with DP-CLPs–PTX–siRNA nanocomplex, DP-CLPs showed a persistent target ability to bind glioma cells and brain microvascular endothelial cells (BCECs) and to deliver drugs (PTX/siRNA) to CD133⁺ glioma stem cells. Prepared DP-CLPs–PTX–siRNA nanocomplex showed very low cytotoxicity to BCECs, but induced selectively apoptosis of CD133⁺ glioma stem cells, and improved CD133⁺ glioma stem cells' differentiation into non-stem-cell lineages, also markedly inhibited tumorigenesis, induced CD133⁺ glioma cell apoptosis in intracranial glioma tumor-bearing nude mice and improved survival rates. In conclusion, prepared DP-CLPs–PTX–siRNA nanocomplex selectively induced CD133⁺ glioma stem cell apoptosis in vitro and in vivo exhibits great potential for targeted imaging and therapy of brain glioma stem cells.     

MiR-19反义核酸与CD133+HT29细胞亚群对多柔比星敏感性关系的研究

目的 探讨miR-19反义核酸与CD133⁺HT29细胞亚群对多柔比星敏感性的关系并研究其机制。方法 用RT-qPCR方法检测miR-19在结直肠癌细胞中的表达水平。流式细胞术检测miR-19反义核酸和多柔比星对HT29细胞系的CD133⁺细胞亚群种群比例的影响。MTT法检测miR-19反义核酸对多柔比星杀伤CD133⁺HT29细胞亚群能力的影响。利用生物信息学及Western blot法验证miR-19是否调节CD133⁺HT29细胞亚群中PTEN的表达。运用Western blot、免疫共沉淀、流式细胞术研究miR-19反义核酸影响多柔比星疗效的信号通路。结果 结直肠癌细胞系的miR-19表达水平显著高于正常结直肠上皮细胞系,并且CD133⁺细胞中的miR-19表达水平显著高于常规结直肠癌细胞。多柔比星体外单独治疗能提高HT29细胞系中CD133⁺细胞亚群的比例,然而联用miR-19反义核酸后CD133⁺HT29细胞亚群的种群比例显著下降。MTT结果表明miR-19反义核酸可显著增强多柔比星对CD133⁺HT29细胞亚群的杀伤活性。Western blot实验表明miR-19的靶基因可能为PTEN。MiR-19反义核酸可显著抑制CD133⁺HT29细胞亚群PI3K、AKT和Bad的磷酸化,增强Bad与Bcl-2和Bcl-xl的结合,从而提高CD133⁺HT29细胞亚群对多柔比星依赖的凋亡信号的敏感性,促进caspase-9和caspase-3的活化。结论 MiR-19反义核酸通过PTEN/PI3K/AKT/Bad途径提高CD133⁺HT29细胞亚群对多柔比星的敏感性。     

长链非编码RNA ATB调控miR-144对胶质瘤迁移和侵袭的影响

目的 探讨长链非编码RNA ATB （lncRNA ATB）调控miR-144对胶质瘤迁移和侵袭的影响。方法 采用qPCR检测lncRNA ATB在胶质瘤组织和癌旁正常组织中的表达差异以及慢病毒si-ATB对胶质瘤细胞的转染效率情况;通过双荧光素酶报告基因进行检测lncRNA ATB和miR-144之间的关系;通过平板克隆实验检测lncRNA ATB对胶质瘤细胞株U87和U251增殖能力的影响;流式细胞术检测lncRNA ATB对胶质瘤细胞株凋亡行为的影响;Transwell实验检测lncRNA ATB对细胞株侵袭能力的影响;裸鼠体内实验检测lncRNA ATB对裸鼠移植瘤的体积和质量的影响情况。结果 胶质瘤lncRNA ATB的表达水平高于癌旁正常组织（P<0.05）,高水平lncRNA ATB患者的生存率低于低水平lncRNA ATB患者;使用si-ATB1和si-ATB2分别转染胶质瘤U87和U251细胞后,lncRNA ATB的表达水平降低;过表达miR-144后,野生型lncRNA ATB的荧光素酶活性受到抑制,对突变型lncRNA ATB的荧光素酶活性影响不明显。转染si-ATB 24、48和72小时后,U87[（186.4±12.4）个比（73.6±8.6）个比（62.6±5.6）个,P<0.05]和U251细胞[（192.2±15.3）个比（63.6±6.3）个比（68.3±7.6）个,P<0.05]和U251细胞的增殖能力低于对照组;lncRNA ATB的下调提高了U87和U251凋亡百分比（P<0.05）;抑制lncRNA ATB后,U87细胞和U251细胞的细胞侵袭能力降低;与对照组相比,si-ATB组肿瘤体积和肿瘤重量均小于或低于对照组（P<0.05）。结论 lncRNA ATB通过调控miR-144的表达促进胶质瘤细胞的生物学行为。     

TRAIL基因修饰间充质干细胞对神经胶质瘤细胞杀伤作用研究

目的 研究肿瘤坏死因子相关的凋亡配体（TRAIL）基因修饰间充质干细胞（TRAIL-MSCs）对神经胶质瘤细胞的杀伤作用。方法 复苏冻存的脐带间充质干细胞（UC-MSCs）种子库细胞,通过慢病毒转染的方法制备TRAIL-MSCs。ELISA法检测UC-MSCs、TRAIL-MSCs细胞上清中TRAIL的含量;采用CCK-8试剂盒法检测重组TRAIL蛋白（rTRAIL,0、25、50、100、200、400 ng/mL）对U87MG、U251细胞的增殖抑制情况;实时荧光定量PCR（qRT-PCR）法检测U87MG、U251细胞中死亡受体DR4、DR5 mRNA表达水平,比较2种细胞对TRAIL的敏感性;将U87MG、U251细胞分别分为对照组、UC-MSCs培养上清（阴性对照）组、TRAIL-MSCs培养上清（含TRAIL约100 ng/mL）组和rTRAIL（100 ng/mL）组,CCK-8法检测细胞增殖抑制率;Annexin V-FITC/PI法检测细胞凋亡率;qRT-PCR法检测DR4、DR5 mRNA表达水平。结果 TRAIL-MSCs培养上清中TRAIL表达量显著高于UC-MSCs（P<0.01）;rTRAIL对U87MG细胞的半数抑制浓度（IC₅₀）为162 ng/mL,而对U251细胞的IC₅₀大于800 ng/mL,U87MG对TRAIL的敏感性更高,差异显著（P<0.01）;U87MG细胞DR4、DR5 mRNA相对表达量均显著高于U251细胞（P<0.01）;与对照组比较,TRAIL-MSCs培养上清、rTRAIL对U87MG、U251细胞均有显著增殖抑制及促进凋亡的作用（P<0.05、0.01） ,TRAIL-MSCs培养上清作用效果显著优于rTRAIL（P<0.01）;与U251相比,U87MG对TRAIL-MSCs培养上清的敏感性更强;TRAIL-MSCs培养上清处理的U87MG细胞DR4、DR5 mRNA表达量显著降低（P<0.01）。结论 TRAIL-MSCs对神经胶质瘤细胞有显著增殖抑制和杀伤作用,其功能可能与其受体DR4及DR5有关。     

Morin inhibits proliferation and self-renewal of CD133+ melanoma cells by upregulating miR-216a

Melanoma is one of the most malignant skin tumors with high mortality rate. Morin has been reported to treat several cancers. However, whether or how Morin affects melanoma progression is still poorly understood. Either Morin treatment or miR-216a overexpression reduced cell viability, sphere formation ability and expressions of stem cell marker genes CD20, CD44, CD133 and Wnt-3A. MiR-216a was induced by Morin treatment in CD133⁺ melanoma cells. Melanoma xenograft model treated by Morin showed reduced tumor size, weight as well as expressions of stemness markers and Wnt-3A. Inhibition of the stemness marker gene expressions in CD133⁺ melanoma cells is mediated by downregulating Wnt-3A through miR-216a. MiR-216a and Wnt-3A may potentially serve as clinical biomarkers of melanoma, and Morin may contribute to the treatment of melanoma.     

肿瘤蛋白 53靶基因 1靶向微小 RNA-33a对胶质瘤细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭的影响

目的 探讨肿瘤蛋白53靶基因1(TP53TG1)对胶质瘤细胞增殖、凋亡及迁移侵袭的影响和机制.方法 本研究起止时间为2019年1—6月,人正常神经胶质细胞(HA)和神经胶质瘤细胞U251购于上海斯信生物科技有限公司.实时定量PCR(qRT-PCR)检测HA和U251细胞中TP53TG1的表达水平.构建过表达TP53TG1的U251细胞株,噻唑蓝(MTT)法用于评估细胞增殖能力,流式细胞术分析细胞凋亡,Transwell法测定迁移和侵袭数,Western blotting检测细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、细胞周期蛋白激酶抑制剂(P21)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl相关x蛋白(Bax)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、E钙黏蛋白(E-cad?herin)表达水平.双荧光素酶报告基因实验和Western blotting验证TP53TG1和微小RNA-33a(miR-33a)的靶向关系.结果 与人正常神经胶质细胞HA比较,神经胶质瘤细胞U251中TP53TG1的表达水平[(1.03±0.10)比(0.28±0.03)]显著降低.过表达TP53TG1能够显著抑制U251细胞活力,下调Cyclin D1、Bcl-2和MMP-2蛋白水平,减少细胞迁移数[(138±14.01)个比(72±7.26)个]和侵袭数[(126±12.54)个比(65±6.63)个],上调P21、Bax和E-cadherin蛋白表达,促进细胞凋亡[(8.16±0.86)％比(22.57±2.65)％].TP53TG1能够靶向负性调控miR-33a的表达.过表达miR-33a能够逆转miR-33a对U251细胞增殖、凋亡[(22.68±2.69)％比(11.36±1.20)％]、迁移[(70±7.05)个比(108±11.37)个]和侵袭[(70±7.05)个比(108±11.37)个]的影响.结论 TP53TG1通过靶向miR-33a抑制胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭,促进细胞凋亡.     

Celecoxib in combination with retinoid CD437 inhibits melanoma A375 cell in vitro

This study aimed to investigate the effects of celecoxib, synthetic retinoid 6-[3-(1-adamantyl)-4-hydroxyphenyl]-2-naphthalenecarboxylicacid (CD437) and the combination of the two on cell proliferation, apoptosis, and cycle arrest of human malignant melanoma A375 cells. 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazoliumbromide assay (MTT assay) was applied to determine the anti-proliferative effects of the drugs on human malignant melanoma A375 cells. Flow cytometry was performed to investigate the influence of the drugs on cell cycle and cell apoptosis. Both celecoxib and CD437 could inhibit the growth of human malignant melanoma A375 cells in a dose-dependent manner. Celecoxib at 80 μmol/L inhibited proliferation, induced apoptosis and G₂/M cell cycle arrest of human malignant melanoma A375 cells after treatment for 24 h [proliferation inhibiting rate: (50.2 ± 2.51)%, apoptosis rate: (35.91 ± 1.80)%]. CD437 at 10 μmol/L inhibited proliferation, induced apoptosis and G₀/G₁ cell cycle arrest of human malignant melanoma A375 cells after treatment for 24 h [proliferation inhibiting rate: (58.6 ± 2.38)%, apoptosis rate: (28.03 ± 0.77)%]. Celecoxib in combination with CD437 could significantly enhance the effects of inhibiting proliferation and inducing apoptosis of human malignant melanoma A375 cells 24 h after treatment compared with the drug alone [proliferation inhibiting rate: (68.92 ± 1.72)%, apoptosis rate: (42.09 ± 1.05)%, both P<0.05] and decrease the proportion of the S phase in the cell cycle. Celecoxib could inhibit the growth of human malignant melanoma A375 cells by inducing apoptosis and G₂/M cycle arrest. CD437 could inhibit the growth of human malignant melanoma A375 cells by inducing apoptosis and G₀/G₁ cycle arrest. Celecoxib exhibited additive effects with CD437 on retarding the growth and inducing apoptosis of human malignant melanoma A375 cells. Celecoxib in combination with CD437 may become an effective method for prevention and treatment of human melanoma.     

微小 RNA-520a-5p通过靶向调控鼠双微体基因影响胶质瘤细胞的增殖、凋亡、迁移和侵袭

目的探讨微小 RNA-520a-5p(miR-520a-5p)在胶质瘤发生发展中的作用和机制。方法选取 2016年 5月至 2018年 11月在宝鸡高新人民医院治疗的胶质瘤病人肿瘤组织作 56例为研究对象。实时荧光定量 PCR(qRT-PCR)检测 56例胶质瘤组织和 56例正常脑组织中 miR-520a-5p表达水平。体外培养胶质瘤 U251细胞,转染 miR模拟对照序列( miR-NC)、 miR-520a-5p9模拟物( miR-520a-5p mimics)至 U251细胞,分别采用四甲基噻唑蓝染色法( MTT)、流式细胞仪、 Transwell和蛋白质印迹法检测过表达 miR-520a-5p对 U251细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭及细胞中鼠双微体基因( MDM2)、细胞周期蛋白 D1(cyclin D1)、 P21、B淋巴细胞瘤 -2相关蛋白( Bax)、 B淋巴细胞瘤 -2(Bcl-2)、基质金属蛋白酶 2(MMP-2)和 E-钙黏蛋白( E-cadherin)蛋白表达的影响。双萤光素酶报告基因实验验证 miR-520a-5p与 MDM2靶向关系,蛋白质印迹法检测转染 miR-520a-5p mimics、miR-520a-5p抑制剂( anti-miR-520a-5p)对 U251细胞中 MDM2蛋白表达的影响。共转染 miR-520a-5p mimics和 MDM2过表达载体( pcD. NA3.1-MDM2)至 U251细胞,上述相同方法观察过表达 MDM2能否逆转过表达 miR-520a-5p对 U251细胞增殖、迁移和侵袭及相关蛋白表达的影响。结果与正常脑组织相比,胶质瘤组织中 miR-520a-5p表达降低( P<0.05)。与转染 miR-NC的 U251细胞比较,转染 miR-520a-5p mimics的 U251细胞 24 h、48 h和 72 h的 OD值［(0.36±0.04)比( 0.50±0.05)、(0.49±0.05)比( 0.95±0.09)、(0.71±0.07)比( 1.36±0.13)］、迁移细胞数［(67±6.26)比( 144±13.38)］、侵袭细胞数［(59±5.47)比( 135±13.12)］均降低( P<0.05),凋亡率［( 21.17±2.06)%比( 7.82±0.77)%］升高( P<0.05)细胞中 cyclin D1、Bcl-2和 MMP-2的蛋白表达水平均降低( P<0.05)而 P21、Bax和 E-cadherin的蛋白表达水平均升高( P<0.05miR-520a-5p可与 MDM2的 3’UTR靶向结合,mimics的 U251细胞中 MDM2蛋白水平显著低于转染 miR-NC的细胞,而转染 anti-miR-520a-5p的 U251细胞中 MDM2的蛋白水平显著高于转染 anti-miR-NC的细胞。与共转染 miR-520a-5p mimics与 pcDNA3.1的 U251细胞比较,共转染 miR-520a-5p mim. ics与 pcDNA3.1-MDM2的 U251细胞 24 h、48 h和 72 h的 OD值、迁移细胞数、侵袭细胞数均升高( P<0.05)凋亡率降低( P< 0.05)。,同时转染miR-520a-5p,细胞中 cyclin D1、Bcl-2和 MMP-2的蛋白表达水平均升高( P<0.05),而 P21、Bax和 E-cadherin的蛋白表达水平均降低( P<0.05)。结论 miR-520a-5p在胶质瘤组织中表达降低,过表达 miR-520a-5p可能通过靶向负调控 MDM2抑制胶质瘤 U251细胞增殖、迁移和侵袭,并诱导其凋亡。     

Antitumor activity of cytokine-induced killer cells in nude mouse xenograft model

Malignant glioma is the most common primary brain tumor in adults and the median survival for patients is less than a year. Despite aggressive treatments including surgical resection, radiotherapy, and chemotherapy, only modest improvement has been achieved in the survival of patients with glioma. In this study, the antitumor activity of cytokine-induced killer (CIK) cells against human glioma cancer was evaluated in vitro and in vivo. Human peripheral blood mononuclear cells were cultured with IL-2-containing medium in anti-CD3 antibody-coated flasks for 5 days, followed by incubation in IL-2-containing medium for 9 days. The number of cells increased more than 200-fold and the viability was >90%. The resulting populations were consisted of 96% CD3⁺, 2% CD3⁻CD56⁺, 68% CD3⁺CD56⁺, 2% CD4⁺, <1% CD4⁺CD56⁺, 80% CD8⁺, and 49% CD8⁺CD56⁺. This heterogeneous cell population was called as CIK cells. At an effector-target cell ratio of 30:1, CIK cells destroyed 43% of U-87 MG human glioma cells, as measured by the ⁵¹Cr-release assay. In addition, CIK cells at doses of 0.3, 1, and 3 million cells per mouse inhibited 23%, 40%, and 50% of U-87 MG tumor growth in nude mouse xenograft assays, respectively. This study suggests that CIK cells may be used as an adoptive immunotherapy for glioma cancer patients. These authors contributed equally to this work.     

YAP-c-Myc信号通路抑制涉及冬凌草甲素抗神经胶质瘤作用

目的探讨冬凌草甲素对神经胶质瘤U87细胞增殖、迁移和凋亡影响及其作用机制是否涉及抑制YAP-c-Myc信号通路。方法采用MTT法检测冬凌草甲素对U87细胞活力的影响;划痕试验检测细胞迁移能力;流式细胞术检测细胞凋亡率;实时荧光定量PCR检测caspase-3、Bcl-2、Bax、YAP、c-Myc mRNA的表达;Western blot检测caspase-3、Bcl-2、Bax、YAP、p-YAP(Ser127)、c-Myc蛋白的表达。结果冬凌草甲素呈剂量依赖性抑制神经胶质瘤U87细胞增殖(P<0.05)及迁移(P<0.01);流式细胞术分析细胞凋亡率明显增加(P<0.01);caspase-3 mRNA和蛋白表达均增高(P<0.05),Bcl-2/Bax mRNA和蛋白表达均明显降低(P<0.05),YAP、c-Myc的mRNA和蛋白表达均明显降低(P<0.05),p-YAP的蛋白表达增高(P<0.05)。结论冬凌草甲素可促进神经胶质瘤U87细胞增殖、迁移并促进胶质瘤细胞凋亡,其机制可能与抑制YAP信号通路相关。