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重组水蛭素Ⅲ的分离纯化与鉴定 总被引:4,自引:0,他引:4
目的:从分泌型重组水蛭素Ⅲ基因工程菌发酵液中分离纯化水蛭素Ⅲ?方法:将发酵液经离心、大孔吸附树脂处理后,用DEAE-cellulose DE52离子交换层析,进而用HPLC反相层析。结果:总收率达50%以上,纯度达99.9%,比活力达9000ATU/mg。结论:分离纯化系统令人满意,回收率较高。 相似文献
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发酵液中重组水蛭素的分离纯化 总被引:6,自引:1,他引:5
目的:建立毕赤酵母(pichia)高密度表达的重组水蛭素(recombinant hirudin-2,rHV2)分离纯化工艺。方法:高密度培养重组毕赤酵母并诱导表达水蛭素至胞外,发酵液经超滤、透析、离子交换层析。分离纯化rHV2目的蛋白;采用SDS-PAGE和抗凝血酶活力分别检测目的蛋白纯度和活性。结果:纯化样品经SDS-PAGE电泳检测为单一条带,重组水蛭素比活性为6000ATU/mg,纯化收率达38.6%。结论:超滤、透析和离子交换层析可用于发酵液中大规模分离纯化重组水蛭素。 相似文献
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目的 :探讨人乳头瘤病毒 16型主要衣壳蛋白 L 1的纯化方法。方法 :分别利用亲和层析和离子交换层析对重组融合蛋白 p ET30 a- 6× His- L 1进行了纯化。结果 :以包涵体形式表达的重组蛋白在变性条件下经 Ni- NTA Agarose、Q- Sepharose FF纯化 ,透析复性后均获得较高纯度 ,回收率分别为 30 %和2 9%。结论 :亲和层析和离子交换层析都是纯化重组 L 1蛋白的适宜方法 ,二者纯化效率相当。 相似文献
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粉尘螨Der f2变应原的分离纯化及其特征 总被引:10,自引:1,他引:9
目的 用粉尘螨(Dermatophagoides farinae)代谢培养基浸液(Dff)分离纯化粉尘螨2类变应原(Der f2)。方法 Sephadex G-100层析、DEAE离子交换层析、PAGE等方法分离纯化Der f2,并对Der f2作SDS-PAGE测定和热稳定性测定。结果 从Dff分离纯化得到较纯Der f2,经SDS-PAGE测定其相对分子质量为14000,并经100℃加热15min后,仍保留50%~83.3%生物学活性。结论 从Dff中分离纯化的变应原,其物化性质符合Der f2特征。 相似文献
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目的探讨该所发明的新方法对重组人白细胞介素2-绿脓杆菌外毒素(IL2-PE664Glu)融合蛋白进行纯化与复性的效果。方法采用该所发明的新方法提纯包涵体,包涵体复性后,样品经DEAE-SepharoseFF离子交换层析,获得融合蛋白纯品。结果获得的具有生物学活性的融合蛋白纯度达到95%,复性回收率为80%。结论此包涵体分离纯化技术简便、实用,可为中试研究和规模化生产提供基础。 相似文献
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利用CMC与Sephadex G50纯化胰岛素 总被引:3,自引:0,他引:3
利用CMC离子交换层析结合Sephadex G50层析建立了(1)CMC—G50,(2)G50—CMC-G25纯化胰岛素的工艺路线。胰岛素在CMC和Sephadex G50柱上的回收率分别为88.4%和85.9%。通过此工艺,纯化倍数可达22~28倍,胰岛素电泳效价大于26u/mg。 相似文献
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目的 选择阳离子交换介质Streamline SP分离纯化anti-HBsAgFab的最适吸附条件。方法试管法分别测定平衡缓冲液在不同DH和不同离子强度下,阳离子交换介质Streamline SP对预分离纯化蛋白的吸附效果。用l mlSP预装柱及自装28 ml Streamline SP柱进行离子交换层析以验证吸附效果。结果NaAc-HAc作为平衡缓冲液在pH4.4、离子强度100-600mmlo/L可以使阳离子交换介质Streamline SP与蛋白吸附达到最佳效果。在该条件下用l ml SP预装柱及自装28ml SP柱进行离子交换层析,均验证了这一吸附效果。结论试管法选择的离子交换层析的最适吸附条件用于从大肠杆菌中初步分离纯化anti-HbsAg Fab切实可行。 相似文献
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目的 对目前流行的两种分离纯化Beta糖蛋白Ⅰ的方法进行比较。方法 分别用离子交换层析和亲和层析法对Beta糖蛋白Ⅰ进行分离提取,用N端测序鉴定氨基酸序列,再用SDS—PAGE和毛细管电泳鉴定纯度。结果 两种方法所纯化的Beta糖蛋白Ⅰ的纯度均达到99%以上。其中,离子交换层析法所纯化的Beta糖蛋白Ⅰ的回收率为63%;亲和层析法纯化的Beta糖蛋白Ⅰ的回收率为81%。结论 亲和层析法简便、省时;而离子交换层析法耗材费用低廉。两者均可做为常规的纯化方法对Beta糖蛋白Ⅰ进行分离提取并且纯度达到要求。在临床检测方面,两种方法所纯化的Beta糖蛋白Ⅰ皆可应用于抗心磷脂抗体综合征患者血清中抗Beta糖蛋白Ⅰ抗体的检测。 相似文献