萝卜硫素对阿霉素所致体外培养心肌细胞凋亡的影响

目的观察萝卜硫素对阿霉素所致心肌细胞凋亡的保护作用。方法 2012年3月—2013年3月选择出生1~3 d的SD大鼠30只,进行心肌细胞培养。培养4 d后心肌细胞随机分为5组:正常对照组、阿霉素损伤组、萝卜硫素低剂量组、萝卜硫素中剂量组、萝卜硫素高剂量组各6只。作用48 h后行心肌细胞活力测定、超氧化物歧化酶活性和丙二醛含量、心肌细胞凋亡率测定。两组间比较采用t检验,多组间比较采用单因素方差分析,P0.05为差异有统计学意义。结果阿霉素损伤组心肌细胞活力、SOD活性[0.296±0.011、(2.296±0.011)U/L]低于正常对照组(P0.05),高、中、低剂量萝卜硫素组心肌细胞活力(0.491±0.014、0.411±0.012、0.341±0.052)、SOD活性[(4.452±0.014)、(3.981±0.012)、(3.341±0.052)U/L]高于阿霉素损伤组(P0.05);阿霉素损伤组MDA含量、心肌细胞凋亡率[(3.247±0.241)μmol/L、(50.8±2.2)%]高于正常对照组(P0.05),高、中、低剂量萝卜硫素组MDA含量、心肌细胞凋亡率低于阿霉素损伤组(P0.05)。结论萝卜硫素可通过其抗氧化及抑制心肌细胞凋亡作用对阿霉素所致心肌损伤起到保护作用。     

体外培养成人心肌细胞凋亡模型的建立

目的　建立缺氧诱导体外培养的成人心肌细胞凋亡情况。方法　用胰蛋白酶和胶原酶进行消化 ,用差速黏附贴壁法、Brdu加入和人为破坏成纤维细胞法纯化心肌细胞 ,用IMDM培养基培养 ,4～ 6d后将体外培养的成人心肌细胞置于 3 %氧气、92 %氮气及 5 %二氧化碳孵箱中 ,6、12、2 4、48h缺氧后再恢复正常条件培养 4h ,造成缺氧损伤所致细胞凋亡模型 ,分别用倒置显微镜、电镜、TUNEL法技术检测凋亡发生的情况。结果　心肌细胞经历缺氧损伤后 ,倒置显微镜、电镜、TUNEL染色均观察到凋亡阳性细胞。TUNEL法定量检测 ,心肌细胞缺氧培养 6、12、2 4、48h后 ,其凋亡率分别为 :( 3 3± 0 9) %、( 8 3± 1 8) %、( 16 1± 2 6) %和( 19 4± 2 3 ) %。结论　心肌细胞凋亡率随着缺氧时间的延长而增高 ,认为缺氧一定时间可以诱导体外培养的成人心肌细胞凋亡     

牛磺酸对60Co γ射线损伤作用的影响

[目的]探讨牛磺酸抗电离辐射损伤机制。[方法]将ICR小鼠随机分为5组,其中3个实验组分别经口给予牛磺酸50,100,300mg/kg,共30d,辐照对照和正常对照组给予去离子水。第31天,除正常对照组外各组小鼠分别接受5GYCoγ射线一次性全身照射,观察牛磺酸对损害的保护效应及对抗氧化及免疫功能的影响。[结果]60辐照小鼠骨髓细胞微核率为26.6‰,显著高于正常对照微核率1.2‰,外周血白细胞数照射后3d下降为1.95×109/L,14d为3.80×109/L,明显低于辐照前7.60×109/L(P<0.05),骨髓细胞DNA含量也显著下降(P<0.05)。50mg/kg牛磺酸组,血清SOD活力为110.4U/ml,显著高于辐照对照组84.3U/ml(P<0.05);100mg/kg牛磺酸组,SOD活力、MDA含量、溶血素抗体积数明显优于辐照对照组;300mg/kg牛磺酸组SOD为137.8U/ml,MDA含量为5.8nmol/ml,溶血素抗体积数为83.8,脾淋巴细胞增殖试验光密度差值为0.154,外周血白细胞总数及骨髓细胞DNA含量上升,微核率下降,30d存活率明显提高,与辐照对照组差异有统计学意义。[结论]牛磺酸能够改善Coγ辐射对小鼠60损伤的生物学效应,这与其提高抗氧化能力及增强免疫功能有关。     

X射线对体外培养乳鼠心肌细胞损伤的实验研究

目的 研究X射线对体外培养的心肌细胞活性及凋亡的影响。方法 体外培养新生大鼠心肌细胞,分为对照组和放射组,放射组分别用X射线10Gy、20Gy、30Gy、40Gy单剂量照射心肌细胞,采用MTT法观察X射线对乳鼠心肌细胞活性的影响;血生化自动分析仪定量测定X射线作用后心肌细胞乳酸脱氢酶(LDH)的改变;吖啶橙/碘化丙啶(AO/PI)双染色法在激光扫描共聚焦显微镜下观察心肌细胞凋亡的形态学改变;流式细胞仪定量检测心肌细胞的凋亡率。结果 ①X射线剂量在10~40Gy均能抑制心肌细胞活性并成剂量依赖性;②细胞心肌酶谱检测到LDH释放量与X射线剂量相关;③流式细胞仪发现心肌细胞凋亡率与X射线照射剂量有相关性。结论 本研究结果显示X射线对心肌细胞有毒性作用,可致心肌细胞损伤,表现为心肌细胞坏死和凋亡发生率增加。     

还原型谷胱甘肽对60Co γ射线激活核转录因子-кB影响研究

目的 探讨还原型谷胱甘肽(GSH)对<'60>Co γ射线引起的人肺腺癌A549细胞中p65蛋白表达情况的影响.方法 按处理方法不同将人肺腺癌A549细胞分为假照组、单纯照射组、GSH组、GSH+照射组.免疫印迹法检测各组细胞质和细胞核中p65蛋白的表达情况;免疫荧光法检测各组细胞中p65在细胞质和细胞核中的定位变化.结果 <'60>Co γ射线照射后,p65蛋白在细胞核中的表达量随着吸收剂量的增加逐渐增多;GSH+照射组与单纯照射组相比,细胞核中p65的表达明显减少;但p65在细胞总蛋白中的表达没有明显变化.免疫荧光法检测到单纯照射组与假照组比较,细胞核内p65的表达量增多;GSH+照射组细胞核内p65的表达量相对单纯照射组明显减少.结论 γ射线照射后人肺腺癌A549细胞核内p65的表达量增多,但GSH可以减少p65在细胞核内的表达,抑制p65的入核.     

60Co γ-射线体外诱导人外周血淋巴细胞XPC基因表达的实验研究

目的研究核苷酸切除修复(NER)XPC基因在60Coγ-射线照射致人外周血淋巴细胞损伤中的表达变化规律,探讨XPC作为新的电离辐射生物剂量计的可行性。方法不同剂量(0~8 Gy)60Coγ-射线照射后,采用实时定量荧光PCR法,检测不同剂量及5 Gy60Coγ-射线照射后不同时间外周血淋巴细胞XPC基因表达水平。结果随着照射剂量的增加,外周血淋巴细胞中XPC表达明显增高;照射后4 h XPC表达即开始增高,24 h达峰值,以后逐渐下降,照射后72 h仍高于0 h组。结论60Coγ-射线可诱导人外周血淋巴细胞XPC的表达增强,并具有剂量-效应关系及时间规律,有望成为新的辐射生物剂量计。 更多还原     

X射线对体外培养乳鼠心肌细胞损伤的初步实验研究

目的：初步探讨一定剂量的X射线对体外培养乳鼠心肌细胞的损伤。方法：全自动生化分析仪定量测定不同剂量X射线照射后第24小时心肌细胞培养基乳酸脱氢酶（1actate dehydrogenase,LDH）的含量;激光扫描共聚焦显微镜观察心肌细胞经40GyX射线照射后第24h的形态学改变。结果：心肌细胞有较高的辐射抗性,在0Gy～30Gy的放射剂量下心肌细胞培养基乳酸脱氢酶的含量变化不是很明显（P〉0．05）;当放射剂量≥40Gy时培养基乳酸脱氢酶的含量显著升高（P〈0．05）;激光扫描共聚焦显微镜观察到经40GyX射线照射后第24h的典型的心肌细胞形态学改变。结论：一定剂量的X射线对心肌细胞有直接损伤作用。     

60 Co γ射线照射离体人血建立染色体畸变的剂量-效应曲线

目的建立^60Coγ射线照射离体人血诱发染色体畸变的剂量一效应曲线。方法采集健康成人外周静脉血，^60Coγ射线照射，照射吸收剂量为0～5．0Gy，剂量率为0．38Gy／min。采用开始加入秋水仙碱法进行细胞培养48h。制片后观察淋巴细胞中染色体型非稳定性畸变，包括双着丝粒体、着丝粒环、无着丝粒断片等。用双着丝粒体加着丝粒环对剂量进行曲线拟合。结果离体外周血经^60Coγ射线照射后，在0～5.0Gy范围内“双 环”率与剂量在不同剂量范围建立的回归方程为：0～0．5Gy，y=0.00217 0.08283D^2；0～1．0Gy，y=0.00146 0．09310D^2；0～5，0Gy，y=0．04851D^2.18601；0.5-5．0Gy，y=0.04848D^2.18645。结论成功建立了^60Coγ射线照射离体人外周血诱发染色体畸变剂量效应曲线。     

150例60Co γ射线工作者辐射效应分析研究

目的了解60Co γ射线工作者的辐射效应,为卫生防护监督管理部门搞好健康管理提供科学依据.方法用全自动血球计数分析仪分析全血细胞.用微量全血培养法观察分析染色体畸变和淋巴细胞微核细胞率.用APAAP桥联酶标技术测T淋巴细胞亚群.结果射线组白细胞总数明显低于正常对照组(P＜0.05).遗传学指标染色体畸变率为0.40%,单体型畸变率为0.50%,总畸变率为1.10%.微核细胞率为2.98‰,阳性检出率(≥4‰)为26%,是对照组(13%)的2倍.T淋巴细胞亚群主要是CD4/CD8比值明显低于正常对照组(P＜0.05).结论射线工作者机体已出现不同程度的辐射损伤效应.提示有关行政管理部门应加大力度搞好防护,避免不必要的照射.     

细菌防护液对~(60)Coγ射线照射小鼠骨髓细胞生物学效应的影响

探讨细菌防护液 (BPL)与受 6 0 Coγ射线照射小鼠骨髓细胞生物学效应的关系。应用流式细胞仪(FCM)检测细胞的凋亡指数和免疫参数 (CD4 、CD8 、NK)。结果显示 BPL能够降低细胞凋亡率 ,同时提高细胞的增殖率 (P<0 .0 1)。其作用机制可能与提高 NK细胞活性和 CD4 、CD8 数量有关。进一步证实 ,BPL对辐射损伤细胞有一定的保护作用。     

砷染毒大鼠生精细胞凋亡及端粒酶活力的变化

目的观察不同剂量的染砷(As2O3)大鼠生精细胞凋亡及端粒酶活力表达的变化。方法将40只健康雄性清洁级SD大鼠随机分成4组,分别为低、中、高剂量(0.375、0.75、1.5 mg/kg)砷染毒组和对照组,以灌胃法连续染毒16周后计算各组大鼠精子头计数,并计算睾丸脏器系数、每日精子生成量(DSP)。采用TUNEL原位细胞杂交方法检测大鼠生精细胞凋亡,免疫组化法检测大鼠生精细胞端粒酶活力的表达。结果与对照组比较,中剂量组(0.75 mg/kg)和高剂量组(1.5 mg/kg)睾丸精子头计数和DSP均显著降低(P<0.01),生精细胞凋亡指数(AI)显著升高(P<0.01),生精细胞端粒酶活力表达明显降低(P<0.01);每日精子生成量与生精细胞凋亡呈负相关(r=-0.563,P<0.01);生精细胞凋亡与端粒酶活力呈负相关(r=-0.896,P<0.01)。结论一定剂量的As2O3可通过抑制生精细胞端粒酶活力,促进生精细胞凋亡而导致精子生成量减少,产生雄性生殖毒性。     

壬基酚对体外培养大鼠睾丸支持细胞凋亡影响的研究

目的探讨壬基酚对大鼠睾丸支持细胞的影响及其作用机制.方法建立体外培养大鼠睾丸支持细胞以及混合培养支持细胞和生精细胞体系,以不同浓度的壬基酚(分别为0.2μg/L、1.0 μg/L、3.0 μg/L、5.0 μg/L)作用于支持细胞和混合培养的支持细胞和生精细胞,采用MTT法测定支持细胞的活性,流式细胞仪测定支持细胞的凋亡率,RT-PCR法测定混合培养的支持细胞和生精细胞中Fas和FasL mRNA表达量的变化.结果随着壬基酚作用剂量的增大和作用时间的延长支持细胞的活性下降,且支持细胞的凋亡率随着壬基酚浓度的增大而提高;混合培养的支持细胞和生精细胞中Fas和FasL mRNA表达量均明显提高.结论壬基酚可引起支持细胞凋亡,进而通过Fas/FasL系统启动生精细胞凋亡.     

苦参碱对血小板衍生生长因子介导的大鼠肝星状细胞迁移、增殖和凋亡的影响

目的研究苦参碱对体外培养的肝星状细胞（HSC）迁移、增殖与凋亡的影响,探讨苦参碱抗肝纤维化的作用机制。方法用0.25、0.5mg/ml的苦参碱分别处理肝星状细胞-BB型（HSC-T6）和由血小板衍生生长因子-BB（PDGF-BB）干预的HSC-T6,观察HSC的生长情况,采用Transwell小室检测细胞迁移,用MTT法测定细胞增殖,TUNEL法检测细胞凋亡。结果苦参碱0.25mg/ml组和0.5mg/ml组细胞迁移数、吸光度值均低于空白对照组,细胞凋亡率则明显增高;在有PDGF-BB参与的3组中,苦参碱0.25mg/ml组和0.5mg/ml组的细胞迁移率和吸光度值降低,但是细胞凋亡率在3组之间差别无统计学意义。结论苦参碱对单纯激活状态下的HSC迁移、增殖均有较强的抑制作用,并能促进HSC凋亡的发生;苦参碱对PDGF作用下HSC的迁移、增殖有一定的抑制作用,但对此状态下的HSC的凋亡则无明显促进作用。     

过氧亚硝基在机械性创伤致心肌细胞凋亡中的作用

目的通过制备小鼠机械性创伤模型，观察过氧亚硝基（ONOO-）在机械性创伤致心肌细胞凋亡中的作用和机制。方法利用Noble-Collip创伤仪制作非致死性小鼠创伤模型，通过比色法测定心肌组织caspase3活性，TUNEL染色观察心肌细胞凋亡指数，化学发光法检测总一氧化氮（NOx）含量，EIJSA方法检测心肌组织中过氧亚硝基标志物硝基酪氨酸（Nitrotyrosine，NT）含量。结果机械创伤小鼠心肌组织中发生明显的细胞凋亡，同时心肌组织中一氧化氮含量和硝基酪氨酸含量均增高。结论过氧亚硝基造成的心肌组织蛋白质硝基化是机械创伤致心肌细胞凋亡的重要机制，减少过氧亚硝基的生成有助于减轻机械创伤后心肌损伤。     

防龋剂氟化物对牙髓细胞增殖及碱性磷酸酶活性的影响

用四氮唑溴盐（ＭＴＴ）染色法和以对硝基苯磷酸脂（ＰＮＰＰ）为底物检测不同浓度ＮａＦ对大鼠牙髓细胞的影响。实验结果显示１０ｐｐｍＦ－开始对牙髓细胞增殖产生抑制（Ｐ＜０．０１）；５０ｐｐｍ影响最大，细胞形态发生改变，圆缩死亡细胞明显增多。Ｆ－抑制细胞碱性磷酸酶（ＡＬＰ）活性，浓度增高，抑制增强。提示一定浓度Ｆ－对牙髓细胞某些功能活动具有抑制作用，且随浓度增高而增强     

平肝熄风汤对脑出血大鼠海马细胞色素C氧化酶活性和细胞凋亡影响同步研究

目的 从神经元线粒体能量代谢和细胞凋亡的角度探讨中药复方的平肝熄风汤对脑出血神经元损伤的保护作用机制。方法 采用Ⅶ型胶原酶诱导大鼠脑出血模型，以组织化学方法结合灰度值半定量测定细胞色素C氧化酶(cytochromc c oxidase，CCO)活性，采用Tunel法检测细胞凋亡结果造模12h，脑出血大鼠海马CA1区CCO活性较假手术组明显降低(P＜0.01)，凋亡细胞较假手术组明显增多(P＜0．01)随后均呈进行性加重。用平肝熄风汤治疗后町维持其CCO活性，减少细胞凋亡。结论 脑出血神经元损伤与神经元CCO活性降低及细胞凋亡有关平肝熄风汤能维持线粒体关键酶CCO活性，改善细胞有氧代谢，减少细胞凋亡，此可能为本方对脑出血继发性神经元损伤保护机制之一。     

低氧条件下γ射线对Hep-2细胞周期、凋亡的影响

目的体外建立不同氧供状态下的细胞模型,探讨不同剂量~(60)Coγ射线对喉鳞癌Hep-2细胞周期及凋亡的影响。方法将体外培养的人喉鳞癌Hep-2细胞分为两组:A组(常氧组)、B组(低氧组),两组细胞分别接受1、3、5、10、20、40(Gy)不同剂量~(60)Coγ射线照射,两组分别设0Gy对照组。流式细胞仪检测HIF-1α蛋白表达、细胞凋亡及细胞周期变化;免疫细胞化学检测各组细胞HIF-1α蛋白表达。结果A组Hep-2细胞在接受1～5Gyγ射线照射后,主要发生了G0/G1期阻滞,在接受10～40Gyγ射线照射后,发生了G2/M期阻滞;B组细胞主要发生了G2/M期阻滞。B组0Gy对照组发生了明显的G0/G1期阻滞;A组Hep-2细胞凋亡曲线成抛物线状,凋亡率呈现明显的剂量依赖性,在5Gy处出现最大值41.56±2.25。B组细胞凋亡率同A组相比总体上呈现明显的下调趋势,但不同剂量的γ射线没有对Hep-2细胞的凋亡率产生明显的影响。结论不同剂量~(60)Coγ射线照射会导致常氧条件下Hep-2细胞发生不同周期阻滞,而不同的周期阻滞会对Hep-2细胞的凋亡产生明显的影响。低氧条件下γ射线照射未能导致Hep-2细胞发生明显的凋亡,可能同Hep-2细胞G2/M期阻滞有关,而HIF-1a蛋白的表达上调可能是Hep-2细胞G2/M期阻滞的原因之一。     

非电离辐射对大鼠心肌细胞的损伤及其机制

目的探讨非电离辐射对大鼠心肌细胞损伤效应及机制。方法采用9GHz950mW/cm2微波脉冲和0～100MHz6×104V/m电磁脉冲分别辐照原代培养心肌细胞72h,用原子力显微镜、激光扫描共聚焦显微镜、流式细胞仪和全自动生化检测仪等多种实验手段检测受辐照细胞的细胞膜形态、结构和功能的变化。结果微波脉冲和电磁脉冲辐照后,心肌细胞搏动减慢,形态异常,活力下降,凋亡和坏死率明显增加。细胞膜出现数量不等、大小不一的电穿孔。细胞培养液中Na+、K+、Ca2+、Cl-、Mg2+和无机磷离子浓度显著升高(P<0.01)。结论心肌细胞是电磁辐射损伤的敏感细胞,脉冲电磁场可致心肌细胞膜电穿孔,细胞形态、结构和功能均受到严重损伤。电穿孔效应是解释电磁辐射非热效应的关键机制之一。电穿孔导致的细胞膜通透性和膜结构改变存在一定发展规律。     

氟中毒对大鼠肾脏脂质过氧化、细胞坏死、凋亡及增殖周期的影响

目的：研究氟中毒对大鼠肾脏细胞凋亡和对肾脏细胞增殖周期的作用,并研究氟中毒对肾脏氧化应激和肾脏损伤的影响。方法：给Wistar大鼠饮用含50mg/L氟化钠的高氟水,6个月后用TUNEL法和流式细胞术检测大鼠肾脏细胞凋亡和细胞增殖周期的变化。结果：氟中毒能诱导大鼠肾脏TUNEL阳性细胞,且凋亡细胞率较对照组明显增高,并使G2／M期细胞明显下降,DNA相对含量（DNARC）也显著下降。且氟中毒能引起大鼠肾脏氧化应激和组织损伤。结论：本研究提示氟中毒可诱导大鼠肾脏细胞凋亡并可使细胞增殖周期改变。     

Caspase活性测定与siRNA对宫颈癌CaSki细胞凋亡的影响

目的通过检测Caspase活性分析siRNA对宫颈癌CaSki细胞凋亡的影响，评价siRNA的生物学效应。方法应用FuGene6为转染试剂，将siRNA转染入CaSki细胞，采用Western blotting检测细胞提取物中HPV16-E6的表达；用Caspase-3，-8，-9Colorimetric Assay Kit试剂盒检测Caspase活性。结果siRNA抑制HPV16-E6表达；可活化Caspase-3，-8和-9。结论检测Caspase活性，能评价siRNA对宫颈癌CaSki细胞凋亡的影响。