胃癌组织中SGTA的表达及临床意义

目的：研究小谷氨酰胺三角四肽重复区蛋白α（small glutamine-rich tetratricopeptide repeat-containing,SGTA）在胃癌组织中的表达及其与患者临床病理特征的关系。方法：应用免疫组织化学方法检测152例胃癌组织中SGTA的表达,并分析其与患者临床病理特征的关系。结果 ：免疫组织化学结果表明,SGTA在胃癌癌旁组织中阴性表达,而在胃癌组织中阳性表达。胃癌中SGTA的表达强度与胃癌患者组织学分级、临床分期、浸润深度、淋巴结转移有关,差异有统计学意义（均P〈0.05）,而与患者的年龄、性别、肿瘤大小及组织学分型无关,差异无统计学意义（均P〉0.05）。结论：SGTA表达异常可能与胃癌的发生与进展关系密切,可作为治疗的潜在靶点。     

瘦素通过调控细胞周期蛋白促进人肝癌细胞增殖

目的：观察瘦素对人肝癌细胞株Huh 7增殖活性的影响,并初步探讨其可能的机制。方法：在培养液中加入不同浓度的瘦素后,采用四甲基偶氮唑盐法（MTT）检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期,实时荧光定量PCR和免疫细胞化学法检测细胞周期调控蛋白Cyclin D1和P21^waf1的表达。结果：MTT检测显示,瘦素可促进Huh 7细胞的增殖,有一定的时间和剂量依赖性;流式细胞仪检测结果显示,瘦素能明显降低G0/G1期细胞比例并提高S期细胞比例;瘦素（100 ng/ml）处理24 h后,实时荧光定量PCR检测发现Cyclin D1 mRNA表达量增高至对照组的3.15倍,P21^waf1mRNA表达量则为对照组的55%,两者均有显著性差异（P〈0.01）。免疫细胞化学染色结合图像分析系统分析也发现100 ng/ml的瘦素处理24 h后,与对照组相比,Cyclin D1蛋白的表达明显增高（P〈0.01）,P21^waf1蛋白的表达明显降低（P〈0.01）。结论：瘦素可通过促进Cyclin D1表达、抑制P21^waf1表达,使人肝癌细胞Huh7由G0/G1期向S期转换,从而促进其增殖。     

微小RNA-4530通过靶向TRIB1抑制肝癌细胞增殖

目的 探讨微小RNA(miRNA)-4530在肝癌中的表达及其对肝癌细胞增殖的影响.方法 利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-4530在人正常肝细胞(LO2)和肝癌细胞系(SMMC-7721、HepG2、Hep3B和Huh-7)的表达;转染miR-4530的模拟物,构建miR-4530过表达的Hep3B...     

凋亡抑制因子Survivin在肝细胞肝癌中的意义

虽然对于肿瘤的研究已经步入复杂的癌基因蛋白网络时代,但这些基因的功能最终都会与细胞增殖失控和调亡受阻密切相关。survivin是一种凋亡抑制蛋白,它具有抑制肿瘤细胞凋亡和促进其增殖的作用,其与肝细胞性肝癌的发生、发展紧密相关。本文对近年survivin在肝细胞性肝癌发生、发展中怎样调节肿瘤细胞凋亡及增殖的关系研究情况作一综述。     

肝细胞核因子4α抑制大鼠肝癌细胞增殖、侵袭能力和新生血管生成相关基因表达

目的 :研究肝细胞核因子4α(hepatocyte nuclear factor 4α,HNF4α)在体内、体外实验中与大鼠肝癌新生血管生成相关基因表达之间的相互关系。方法:将过表达HNF4α腺病毒转染CBRH-7919细胞,采用CCK-8法检测细胞增殖效应,Transwell法检测细胞侵袭能力,RT-PCR和Western blot检测血管生成素2(angiopoietin-2,Ang-2)、血管内皮生长因子(vascular endothelial grouth factor,VEGF)的表达情况。体内试验建立肝大部切除模型(70%),分别在残肝上注入CBRH-7919细胞(空白组)或转染空载体腺病毒CBRH-7919细胞(阴性对照组)或转染过表达HNF4α腺病毒的CBRH-7919细胞(实验组)。4周后处死大鼠,通过免疫组化来观察肝标本Ang-2、VEGF的表达情况。结果:转染过表达HNF4α腺病毒的CBRH-7919细胞增殖能力和侵袭能力较空白、阴性对照组均明显抑制(P<0.05);实验组Ang-2、VEGF在基因、蛋白水平表达较空白、阴性对照组均明显抑制(P<0.05)。体内实验大鼠肝脏组织免疫组织化学切片显示实验组Ang-2、VEGF蛋白表达水平较空白、阴性对照组均明显抑制(P<0.05)。结论 :HNF4a可以抑制大鼠肝癌7919的增殖、侵袭能力,并且抑制肝癌新生血管生成相关基因Ang-2、VEGF的表达。     

PCBP4对肝癌细胞增殖的影响及机制

目的:探讨多聚(rC)结合蛋白4(PCBP4)的表达对肝细胞肝癌(HCC)发生发展及其预后的影响。方法:基于生物信息学分析TCGA数据库中HCC癌组织和癌旁组织中PCBP4基因的表达差异并分析其预后情况;使用小分子干扰RNA抑制人肝癌细胞株HepG2和Hep3B细胞中PCBP4基因的表达;CCK-8法和Edu增殖实验检测细胞增殖能力;Western blot实验检测细胞周期相关关键蛋白。结果:HCC癌组织中PCBP4基因的表达水平高于癌旁组织(P<0.05);PCBP4基因高表达的患者与低表达的患者相比总体生存期和无病生存期较差(P<0.05);PCBP4基因的下调抑制了肝癌细胞的增殖能力(P<0.05);PCBP4基因表达下调导致CDK1、CDK2和cyclinB1表达水平均下降(P<0.05)。结论:在HCC中,PCBP4基因的表达与不良预后相关;抑制PCBP4基因的表达可能通过下调cyclinB1的表达来抑制肝癌细胞的增殖能力。     

氯喹对体外培养人肝癌细胞增殖及细胞周期的影响

目的：探讨氯喹对体外培养人肝癌细胞HepG2增殖和细胞周期的影响,为氯喹作为肝癌治疗药物的研究提供依据。方法： 对数生长期人肝癌HepG2细胞分为对照组、氯喹 (8.00、16.00、32.00、64.00和128.00 mmol•L^-1 )处理组,用MTT法检测不同培养时间（24、48和72 h）细胞增殖活性,用流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡率。结果：与对照组比较,32.00~128.00 mmol•L^-1氯喹处理HepG2细胞24 h和8.00~128.00　 mmol•L^-1氯喹处理HepG2细胞48 h~72 h,细胞增殖活性随着剂量和时间增加而逐渐下降( P< 0.01),以72 h、128.00 mmol•L^-1氯喹抑制作用最强( P< 0.01);与对照组比较,氯喹处理组（32.00~128.00 mmol•L^-1）G₂/M期细胞比率及细胞凋亡率随着剂量增加而上升( P< 0.01),以128.00 mmol•L^-1组最为明显。结论：氯喹具有抑制人肝癌HepG2细胞增殖作用,可诱导人肝癌HepG2细胞的凋亡,并可使人肝癌HepG2细胞周期阻滞在G₂/M期而抑制细胞活性,可能作为肝细胞癌的治疗药物。     

猪重组NK-lysin抑制肝细胞性肝癌的转移:基于下调FKBP3表达、抑制氧化磷酸化和糖酵解

目的 应用生物信息学方法探究猪重组NK-lysin(prNK-lysin)抑制肝癌细胞转移潜在的作用靶点和通路。方法 将肝癌细胞设置为空白对照组,PBS处理组和prNK-lysin处理组,37℃作用6 h后,应用高效液相色谱串联质谱对肽段进行鉴定,按照Foldchange=1.2倍且P<0.05筛选出差异表达蛋白。基于GO、KEGG等数据库对差异表达蛋白进行GO功能分析和KEGG通路分析。运用RT-qPCR验证细胞中多肽-N-乙酰半乳糖胺基转移酶13(GALNT13)、跨膜蛋白51(TMEM51)和FKBP脯酰异构酶3(FKBP3)的mRNA相对表达量。Western blot验证FKBP3的蛋白表达量。结果 蛋白组学表明,与空白对照组相比,prNK-lysin处理组中有1989个差异表达蛋白;与PBS处理组相比,prNK-lysin处理组中有2753个差异表达蛋白;PBS处理组和空白对照组相比,有15个差异表达蛋白。相对于PBS处理组和空白对照组,prNK-lysin处理组中共有1909个差异表达蛋白。GO和KEGG分析表明差异表达蛋白主要参与Viral process、tra...     

白藜芦醇通过下调microRNA-151表达抑制肝癌细胞株HepG2细胞活性的研究

目的 研究白藜芦醇（Res）对肝癌细胞株HepG2宿主基因黏着斑激酶（FAK）和内含子miR-151表达的影响,探讨其抗肿瘤的可能作用机制.方法 分别以50、100、150、200 μmol/L Res作用于体外培养的HepG2细胞24、48和72 h.CCK-8法检测细胞增殖;Real-Time PCR检测细胞FAK mRNA和miR-151表达.利用miR-151模拟物转染获得miR-15过表达HepG细胞株（miR-151过表达组）,流式细胞仪和Hoechst 33342染色观察过表达miR-151对HepG2细胞周期及凋亡的影响.以转染模拟物突变体细胞作为阴性对照,未转染细胞作为空白对照.结果 Res对体外培养HepG2细胞的增殖活性及FAK mRNA和miR-151表达具有显著抑制作用,并在一定范围内呈现浓度和时间依赖性.miR-151过表达组HepG细胞miR-151表达明显高于阴性对照组和空白对照组（P＜0.001）;流式细胞仪检测和Hoechst 33342染色观察结果显示,miR-15过表达使HepG细胞G0/G1期缩短,细胞周期进程加快,并能抑制细胞凋亡.结论 Res可能通过下调miR-151表达,抑制肝癌细胞HepG2增殖并诱导凋亡.     

乙酰辅酶A羧化酶2通过调控细胞周期促进肝癌细胞增殖

目的 研究乙酰辅酶A羧化酶2（acetyl-co carboxylase 2,ACC2）对肝癌细胞增殖、迁移能力的影响以及其潜在的作用机制。方法 通过TCGA、GEO、CPTAC数据库对ACC2在肝癌（hepatocellular carcinoma,HCC）患者肝脏组织中的表达和预后价值进行分析。采用CRISPR-Cas9系统构建了ACC2敲低肝癌细胞系,观察肝癌细胞增殖、迁移能力以及细胞周期的变化,Western blot实验检测细胞周期相关蛋白的表达。结果 ACC2在肝癌组织中低表达（P<0.05）且与预后不良相关（P<0.05）。体外细胞功能学实验表明降低ACC2表达显著促进肝癌细胞增殖、迁移能力（P<0.05）。细胞周期流式分析显示敲低ACC2促进肝癌细胞周期G1/S期的转变（P<0.05）,细胞周期相关蛋白中CyclinE2和p21的表达降低,而CyclinA2和p-RB的表达升高。结论 ACC2可以促进肝癌细胞增殖和迁移的能力,对细胞增殖的促进作用是通过加速肝癌细胞周期G1向S期的转化实现的。     

抗甲胎蛋白单链抗体与阿霉素联合对人肝癌细胞Huh7增殖的抑制作用

探讨抗人甲胎蛋白(AFP)单链抗体和阿霉素(DOX)单用或联用对人肝癌细胞Huh7细胞增殖的抑制作用。采用MTT法检测抗AFP单链抗体、阿霉素单用及联合作用对Huh7细胞增殖的影响;采用Annexin V/PI荧光双染法检测抗AFP单链抗体、阿霉素单用及联合作用对Huh7细胞凋亡的影响;采用PI单染法检测抗AFP单链抗体、阿霉素单用及联合作用对Huh7细胞周期分布的影响。结果表明,抗AFP单链抗体、阿霉素单药组与联用组均能有效抑制Huh7细胞增殖,呈剂量依赖性,且两药联用具有协同效应;抗AFP单链抗体、阿霉素单用及联用均可诱导细胞凋亡且抗AFP单链抗体(40 μg/mL)与阿霉素(0.25 μg/mL)联合组凋亡率明显高于单独给药组,具有统计学意义(P<0.05);抗AFP单链抗体(40 μg/mL)单独作用后,Huh7的细胞周期阻滞于G₀/G₁期,阿霉素(0.25 μg/mL)单独作用Huh7的细胞周期阻滞于S期,而当两种药物联用时,Huh7的细胞周期被阻滞于G₂/M期,抑制细胞增殖。     

MicroRNA-33b通过靶向调控SALL4的表达抑制肝细胞癌细胞增殖

目的：探索微小RNA-33b(micro RNA-33b,miR-33b)在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中的表达及调控HCC细胞增殖的相关分子机制。方法：收集配对的HCC及癌旁组织32对,分别采用实时荧光定量 PCR和Western印迹法检测人类婆罗双树样基因4(Sal-like 4,SALL4)RNA和蛋白表达, MTT实验检测HCC细胞增殖,萤光素酶报告基因检测验证miR-33b与SALL4基因的靶点关系。结果：MiR-33b在HCC组织中的表达显著低于癌旁组织(P<0.001)。过表达miR-33b能显著降低HCC LH86细胞的增殖。SALL4是miR-33b的靶基因,其蛋白表达被miR-33b负调控。过表达SALL4能逆转miR-33b对LH86细胞增殖的抑制作用。SALL4在HCC组织中的表达显著高于癌旁组织(P<0.001)。结论：MiR-33b对HCC细胞增殖的抑制作用是通过负调控SALL4的表达而实现。     

RECQL基因沉默对HCC细胞株体外增殖的抑制作用

目的观察RECQL基因沉默表达对人肝细胞癌(humanhepatocelullarcarcinoma,HCC)细胞株体外增殖的影响,探讨RECQL作为肝癌治疗潜在靶向基因的可能性。方法以BEL7404、SK-HEP-1、Hep3B、SNU-761HCC细胞为研究对象,采用Westernblot和免疫组化法观察解旋酶RECQL蛋白的表达情况,通过RNA干扰技术抑制RECQL表达,测定HCC细胞和正常肝细胞（THLE-2细胞）的存活率和死亡率,并采用Westernblot法分析凋亡相关蛋白的变化,FACS法检测细胞周期分布。结果RECQL蛋白在BEL7404、SK-HEP-1、Hep3B中为阳性表达,SNU-761中为阴性表达。RECQL-siRNA在阳性表达组中抑制HCC细胞的增殖,引起细胞存活率降低和死亡率增加（均P＜0.01）,但对阴性表达组和THLE-2细胞存活率和死亡率无影响（均P＞0.05）。RECQL-siRNA处理的SK-HEP-1细胞中,剪切型凋亡相关蛋白cleavedcaspase-3和cleavedPARP的表达变化不大,而G2/M期细胞的比例明显增加（P＜0.05或0.01）。结论RECQL基因沉默表达可以抑制HCC细胞的增殖,且这种抑制作用依赖于RECQL的高表达,并对正常肝细胞无影响,其可能机制是阻滞细胞G2/M期,可以作为治疗肝癌的潜在靶向基因。     

过表达CLEC5A基因抑制肝细胞癌增殖和转移并逆转上皮-间质转化

目的 研究C型凝集素结构域家族5成员A（CLEC5A）对肝细胞癌（HCC）增殖、迁移和侵袭能力以及上皮-间质转化（EMT）特性的影响,探索CLEC5A在HCC发生发展过程中的作用及机制。方法 采用免疫组化实验检测CLEC5A在50例HCC组织和癌旁组织中的表达特点,并分析其与HCC肝癌临床病理参数的相关性;通过慢病毒转染构建CLEC5A过表达HCC细胞,分别采用细胞增殖实验（CCK-8法、EdU法）、细胞迁移和侵袭实验（Transwell法）和Western blot实验检测CLEC5A对HCC细胞增殖、迁移及侵袭能力以及EMT标志物表达水平的影响。结果 CLEC5A蛋白在HCC癌组织中的表达低于癌旁组织,其表达水平与患者的肿瘤大小（P=0.008）、肿瘤数量（P=0.010）、肿瘤分化程度（P=0.016）、BCLC分期（P=0.040）和微血管侵犯（P=0.024）等相关;过表达CLEC5A能够抑制HCC细胞的增殖、迁移及侵袭能力,并逆转HCC细胞的EMT特性。结论 CLEC5A是HCC潜在的抑癌基因,有望成为该疾病新的治疗靶点。     

白藜芦醇通过下调microRNA-151表达抑制肝癌细胞株HepG2细胞活性的研究

目的 研究白藜芦醇(Res)对肝癌细胞株HepG2宿主基因黏着斑激酶(FAK)和内含子miR-151表达的影响,探讨其抗肿瘤的可能作用机制.方法 分别以50、100、150、200 μmol/L Res作用于体外培养的HepG2细胞24、48和72 h.CCK-8法检测细胞增殖;Real-Time PCR检测细胞FAK mRNA和miR-151表达.利用miR-151模拟物转染获得miR-15过表达HepG细胞株(miR-151过表达组),流式细胞仪和Hoechst 33342染色观察过表达miR-151对HepG2细胞周期及凋亡的影响.以转染模拟物突变体细胞作为阴性对照,未转染细胞作为空白对照.结果 Res对体外培养HepG2细胞的增殖活性及FAK mRNA和miR-151表达具有显著抑制作用,并在一定范围内呈现浓度和时间依赖性.miR-151过表达组HepG细胞miR-151表达明显高于阴性对照组和空白对照组(P＜0.001);流式细胞仪检测和Hoechst 33342染色观察结果显示,miR-15过表达使HepG细胞G0/G1期缩短,细胞周期进程加快,并能抑制细胞凋亡.结论 Res可能通过下调miR-151表达,抑制肝癌细胞HepG2增殖并诱导凋亡.     

沉默干扰素诱导跨膜蛋白3可抑制肝癌细胞HepG2增殖和侵袭

目的研究干扰素诱导跨膜蛋白3（IFITM3）在原发性肝癌中的异常表达,探讨沉默IFITM3表达对肝癌细胞系HepG2生
物学特征的影响。方法通过Western blot和免疫组织化学染色法检测60例肝癌组织及对应癌旁组织中IFITM3的表达情况及
相关性;构建IFITM3小干扰RNA片段（IFITM3 si-RNA）,采用脂质体介导转染肝癌细胞（HepG2细胞系）,同时设置无义序列组
和空白对照组,实时荧光定量PCR检测转染后IFITM3 mRNA的表达;CCK8（cell counting kit 8）检测转染后细胞增殖能力;
Western blot检测IFITM3在蛋白水平的表达;Transwell实验和划痕实验检测细胞侵袭和迁移能力的变化。结果和癌旁组织相
比,IFITM3在肝癌组织中的明显高表达。与无义序列组和空白对照组比较,IFITM3 si-RNA转染组细胞IFITM3表达和细胞增
值率降低,穿膜细胞数也明显减少,差异均有统计学意义（P<0.05）。划痕实验也表明迁移能力降低。结论IFITM3在原发性肝
癌中高表达;IFITM3在肝癌细胞增殖和侵袭过程中发挥重要作用,有望成为原发性肝癌基因治疗的侯选靶点。
     

选择性ＣＯＸ-２抑制剂ｃｅｌｅｃｏｘｉｂ对肝细胞癌细胞周期的影响

目的:探讨选择性COX-2抑制剂celecoxib对培养的人肝细胞癌细胞的细胞周期的阻滞作用.方法:采用3种常规培养的人肝细胞癌细胞株HUH-7、Hep3B和HepG2,分别给予不同浓度的celecoxib(0、10、25、50 μmol/L),作用不同的时间(0、12、24、48 h),用WST-8法检测细胞的活性,用流式细胞仪检测肝癌细胞的细胞周期变化.结果:WST-8检测发现,随着celecoxib的作用浓度的增加和作用时间的延长,3种肝癌细胞的细胞活性明显下降.流式细胞仪检测发现,3种肝癌细胞在celecoxib 25μmol/L作用24 h后出现Go/G1期阻滞,HUH-7细胞也出现较弱G2/M期阻滞的现象,48 h时更为明显.结论:选择性COX-2抑制剂celecoxib可以通过明显的细胞周期阻滞作用降低肝细胞癌细胞活性,阻滞的时期主要位于Go/G1期和G2/M期.