儿童急性白血病p16基因纯合子缺失和点突变的实验研究

为探讨ｐ１６基因纯合子缺失和点突变与儿童急性白血病（ＡＬ）发生,发展及预后的关系。用聚合酶链反应（ＰＣＲ）,ＤＮＡ单链构象多态性（ＳＳＣＰ）分析和ＤＮＡ测序技术研究５３例初治和复发儿童ＡＬ及３０例对照组ｐ１６基因纯合子缺失和点突变的情况。结果：儿童ＡＬｐ１６基因纯合子缺失及点突变为２８．３０％（１５／３３例）,对照组未发现缺失及突变。ＡＬＬ组ｐ１６基因纯合子缺失为３５．００％（１４／４０例）,其中     

儿童急性白血病p16基因纯合子缺失和点突变的实验研究

为探讨p1 6基因纯合子缺失和点突变与儿童急性白血病 (AL)发生、发展及预后的关系。用聚合酶链反应 (PCR)、DNA单链构象多态性 (SSCP)分析和DNA测序技术研究 5 3例初治和复发儿童AL及 30例对照组p1 6基因纯合子缺失和点突变的情况。结果 :儿童ALp1 6基因纯合子缺失及点突变为 2 8.30 % (1 5 /33例 ) ,对照组未发现缺失及突变。ALL组p1 6基因纯合子缺失为 35 .0 0 % (1 4/4 0例 ) ,其中HR—ALL为 47.0 6 % (8/1 7例 ) ,SR—ALL8.33% (1 /1 2例 ) ,复发ALL为 45 .45 % (5 /1 1例 ) ,未见点突变 ;ANLL组未见纯合子缺失 ,点突变 1例 ,为 7.6 9% (1 /1 3例 ) ,测序分析发现其位于第 2外显子 (exon2A) 49密码子 ,发生错义突变 ,由GCC突变为ACC ,由苏氨酸取代丙氨酸。结果表明 :①p1 6基因失活与儿童AL ,尤其与儿童ALL的发生、发展关系密切。②在儿童ALL中 ,p1 6基因纯合子缺失是基因失活的主要形式 ,点突变罕见。③在儿童ANLL中 ,p1 6基因纯合子缺失、点突变均罕见。④p1 6基因失活可能成为预测儿童AL病程进展、复发、预后的指标之一。     

儿童急性白血病p16基因甲基化研究

为探讨ｐ１６基因甲基化与儿童急性白血病（ＡＬ）的发生、发展、预后的关系,采用酶切加ＰＣＲ技术研究３３例初治儿童ＡＬ,１５例复发儿童ＡＬ及３０例对照组ｐ１６基因甲基化情况,并观察ｐ１６基因甲基化与化疗结果的关系。结果３３例初治ＡＬ有３例、１５例复发ＡＬ有６例、３０例对照组中０例存在ｐ１６基因甲基化。可评价疗效的３１例初治ＡＬ中,３例甲基化患者未缓解;２８例非甲基化者中３例获完全缓解,２３例部分缓解,     

儿童急性白血病p16基因甲基化研究

为探讨p1 6基因甲基化与儿童急性白血病 (AL)的发生、发展、预后的关系 ,采用酶切加PCR技术研究 33例初治儿童AL ,1 5例复发儿童AL及 30例对照组p1 6基因甲基化情况 ,并观察p1 6基因甲基化与化疗结果的关系。结果 33例初治AL有 3例、1 5例复发AL有 6例、30例对照组中 0例存在p1 6基因甲基化。可评价疗效的 31例初治AL中 ,3例甲基化患者未缓解 ;2 8例非甲基化者中 3例获完全缓解 ,2 3例部分缓解 ,2例未缓解 (总有效率 92 .86 % )。结果表明 :(1 )在初治儿童AL中p1 6基因甲基化率低 ,可能不是儿童AL的主要发病机制 ;(2 )p1 6基因甲基化率儿童AL复发病例显著上升 ,值得重视 ,同时对指导治疗及预测病程和预后具有重要意义。     

小儿急性淋巴细胞白血病p16基因缺失及甲基化的研究

为探讨ｐ１６基因缺失及甲基化在小儿急性淋巴细胞白血病（ＡＬＬ）发病中的作用,认识ｐ１６蛋白失活的分子机制。应用差异ＰＣＲ技术检测４２例初治、１７例缓解期小儿ＡＬＬｐ１６基因的纯合缺失及甲基化。结果４２例ＡＬＬ中ｐ１６基因纯合缺失率占３８．１％,Ｔ系ＡＬＬ占８０％,显著高于Ｂ系ＡＬＬ２２．５％,Ｐ〈００１。１７例缓解期ＡＬＬ均无基因缺失。９例ｐ１６基因纯 合缺失是小儿ＡＬＬ,尤其Ｔ系ＡＬＬ最常见的基     

p16抑癌基因与急性淋巴细胞白血病

ｐ１６抑癌基因的失活与急性淋巴细胞白血病的发生发展十分密切。ｐ１６抑癌基因的纯合缺失及半合缺失在ＡＬＬ,尤其是Ｔ细胞型ＡＬＬ中占有相当比例,Ｐ１６蛋白表达缺失较基因缺失更常见。Ｐ１６基因缺失可能与ＡＬＬ的复发和死亡有关。通过转基因诱导ｐ１６表达是ＡＬＬ的治疗方向之一。     

小儿急性淋巴细胞白血病p16基因缺失及甲基化的研究

为探讨p1 6基因缺失及甲基化在小儿急性淋巴细胞白血病 (ALL)发病中的作用 ,认识p1 6蛋白失活的分子机制。应用差异PCR技术检测 42例初治、1 7例缓解期小儿ALLp1 6基因的纯合缺失及甲基化。结果 42例ALL中p1 6基因纯合缺失率占38.1 % ,T系ALL占 80 % ,显著高于B系ALL2 2 .5 % ,P <0 0 1。 1 7例缓解期ALL均无基因缺失。 9例p1 6基因完整 ,但无蛋白表达的ALL患者 ,无一例发生基因外显子 1的甲基化。结果表明 ,p1 6基因纯合缺失是小儿ALL ,尤其T系ALL最常见的基因缺陷 ,是p1 6蛋白失活的主要分子机制。基因甲基化与p1 6蛋白失活可能无关。     

p16抑癌基因与急性淋巴细胞白血病

p16抑癌基因的失活与急性淋巴细胞白血病（ALL）的发生发展十分密切。p16抑癌基因的纯合缺失及半合缺失在ALL，尤其是T细胞型ALL（T－ALL）中占有相当比例，p16蛋白表达缺失较基因缺失更常见。p16基因缺失可能与ALL的复发和死亡有关。通过转基因诱导p16表达是ALL的治疗方向之一。     

P16抑癌基因与小儿白血病

Ｐ１６基因是新近发现的一种肿瘤抑制基因,位于人类染色体９ｐ２１上,其表达产物Ｐ１６细胞周期依赖激酶４抑制剂（ＣＤＫ４１）。在小儿白血病中,尤以小儿急性淋巴细胞白血病中Ｐ１６基因的纯合子缺失常见,少见杂合人、突变和甲基化等。     

小儿急性白血病P16基因突变的分析

分析小儿急性白血病Ｐ１６基因的突变及其在疾病发生的作用。利用ＰＣＲ扩增Ｐ１５６基因的外显子１、外显子２,并进行缺失突变分析,利用均一变性凝胶电泳（ＣＤＧＥ（对外显子２进行点突变分析。结果显示：小儿急性白血病缺失突变率异常高５７例患者中有１８例发生缺失突变,只有６例发生点突变,总突变率为３１．６％、ＡＬＬ患者Ｐ１６基因的总突变率明显高于ＡＭＬ患者,为６４．７％,而ＡＭＬ患者Ｐ１６基因的总突变率只有８     

P16基因甲基化在儿童急性白血病中的临床意义

目的　探讨P16基因甲基化与儿童急性白血病 (AL)发生、发展及预后的关系。方法　用甲基化敏感性限制性内切酶SacⅡ酶切加PCR技术研究 33例初治儿童AL、15例复发儿童AL及 30例对照组儿童P16基因甲基化情况 ,并观察P16基因甲基化与化疗结果的关系。结果　 33例初治AL中有 3例、15例复发AL中有 6例P16基因甲基化 ,对照组 30例均无P16基因甲基化。P16基因甲基化率初治组与对照组比较差异无显著意义 ;复发组高于初治组及对照组。可评价疗效的 31例初治AL中 ,3例甲基化患儿均未缓解 ;2 8例非甲基化患儿中2 3例获完全缓解、3例部分缓解、2例未缓解 ;31例中 ,甲基化阳性者与甲基化阴性者在完全缓解率及总有效率上 ,差别均有显著意义。但多因素分析提示只有初诊时高白细胞计数 (≥ 2 5× 10 9/L)对化疗结果有影响。结论　在儿童AL中 ,P16基因甲基化少见。P16基因甲基化可能成为预测儿童AL复发的指标之一。P16基因甲基化在判断儿童AL化疗疗效上有一定价值 ,但不能作为独立的判断标准。     

小儿横纹肌肉瘤p16基因缺失及突变的研究

目的;探讨小儿横纹肌肉瘤P16基因缺失及突变的临床意义,方法：应用控制模板DNA量的银染PCR－SSCP技术检测18例小儿横纹肌肉瘤手术切除标本中P16基因第1外子,结果,18例中有7例发生纯合性缺失,其纯合缺失率为38．8％（7／18）,1例发生突变,缺失,突变率为44．3％,结论：P16基因的纯合性缺失是P16基因失活的主要机制,在小儿横纹肌肉瘤的发生和发展中起重要作用。     

P16抑癌基因与小儿白血病

Ｐ１６基因是新近发现的一种肿瘤抑制基因,位于人类染色体９ｐ２１上,其表达产物Ｐ１６蛋白是细胞周期依赖激酶４抑制剂（ＣＤＫ４Ｉ）。在小儿白血病中,尤以小儿急性淋巴细胞白血病中Ｐ１６基因的纯合子缺失常见,少见杂合缺失、突变和甲基化等。     

急性白血病MTS1基因缺失及点突变的研究

目的 探讨多肿瘤抑制基因（ＭＴＳ１）突变与恶性血液病间的关系,方法 应用聚合酶链反应－单链查象多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）分别和ＤＮＡ印迹（ｓｏｕｔｈｅｒｍｂｌｏｔ）方法检测３５例急性白血病患儿ＭＴＳ１基因的改变。结果 急性淋巴细胞白血病（ＡＬ）患儿的ＭＴＳ１基因缺失（包括点突变）为２６％（８／３１）,其中纯合子缺失,Ｂ－ＡＬＬ为１６％（４／２５）,Ｔ－ＡＬＬ为６例中有２例,点突变则两型各占１例。结     

急性淋巴细胞白血病p16基因及P16蛋白失活与临床相关性的研究

目的　探讨p16基因、蛋白失活在小儿急性淋巴细胞白血病 (ALL)中的临床意义。方法应用免疫细胞化学方法检测 5 2例初治小儿ALLP16蛋白的表达水平。差异PCR技术检测 42例初治小儿ALLp16基因的纯合缺失。结果　p16基因总的纯合缺失率 38% (16 /4 2 ) ,p16基因缺失与T系表型、高白细胞总数 (>2 5× 10 9/L)、高肿瘤负荷、髓外浸润等影响预后的高危临床特征显著相关。高危型ALLp16基因缺失率 (6 7% )远高于标危型ALL(10 % ) ,P <0 .0 1。在预后好者中 ,p16基因纯合缺失率为 10 % (2 /19) ;在预后差者中 ,p16基因纯合缺失率为 5 4% (6 /11) ,二组差异有显著性 ,P <0 .0 5。P16蛋白表达缺失率为 5 8% (30 /5 2 ) ,P16蛋白缺失者除多见髓外浸润外 ,与其它临床高危因素及预后无关。结论　p16基因、蛋白失活在小儿ALL的发病过程中起重要作用。p16基因缺失者预后不良 ,与ALL复发可能有关 ,可作为评估预后 ,指导治疗的指标之一。     

p73基因在儿童急性淋巴细胞白血病的表达

目的探讨p73基因在儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)的表达及其与临床特征、疗效的关系。方法采用逆转录—聚合酶链反应,对31例ALL、10例ALL缓解(CR)患儿骨髓单个核细胞进行p73 mRNA检测,并进行p73表达与临床特征的相关分析;10例非肿瘤患儿为对照组。结果31例初发ALL p73 mRNA表达阳性率为64.5%,强度为0.316;10例ALL-CR组阳性率90.0%,强度0.641;10例对照组患儿均表达p73 mRNA,强度0.685。CR组和对照组阳性表达率和相对表达强度均明显高于ALL组(P0.05),CR组和对照组的表达差异无统计学意义(P0.05)。p73阴性表达与高危年龄(≥10岁)、外周血高白细胞数(≥50×109/L)、T细胞型、高危临床分型、早期诱导缓解治疗反应差等临床特征相关(P0.05),与性别、FAB分型无关(P0.05)。结论儿童ALL患者p73 mRNA的表达率较低,p73 mRNA的阴性表达可能与儿童ALL的发生发展有关;儿童ALL p73基因阴性表达者可能预后不良;p73基因检测对儿童ALL临床治疗、估计预后有意义。     

小儿急性白血病P16基因突变的分析

分析小儿急性白血病 P1 6基因的突变及其在疾病发生的作用。利用 PCR扩增 P1 6基因的外显子 1、外显子 2 ,并进行缺失突变分析 ,利用均一变性凝胶电泳( CDGE)对外显子 2进行点突变分析。结果显示 :小儿急性白血病缺失突变率异常高 ,5 7例患者中有 1 8例发生缺失突变 ,只有 6例发生点突变 ,总突变率为 31 .6 %。ALL患者 P1 6基因的总突变率明显高于 AML患者 ,为 6 4 .7% ,而 AML患者 P1 6基因的总突变率只有 8.7%。我们认为 :P1 6基因的突变在小儿急性白血病发生中起重要作用。P1 6基因含有“CG”DNA重复顺序 ,是小儿急性白血病 P1 6基因缺失突变率高于点突变率的原因。     

儿童急性白血病相关融合基因的检测及其临床应用

儿童急性白血病（AL）是儿童时期最常见的恶性肿瘤。目前占儿童AL中约3／4的急性淋巴细胞白血病（ALL）治愈率可达80％左右，但至少仍有20％的患儿复发。进一步提高白血病儿童的生存质量，及时预测复发，是当前努力的目标。白血病相关融合基因的研究在分子水平上进一步阐明了白血病的发病机制，并可作为评价治疗效果。     

儿童急性髓系白血病M2型性染色体缺失的预后意义

目的 探讨儿童急性髓系白血病(AML)M2型性染色体缺失与预后的关系.方法 根据细胞遗传学结果将106例AML患儿分为正常核型组(A组,n=26)、不伴性染色体缺失的非正常核型组(B组,n=52)和伴性染色体缺失的非正常核型组(C组,n=28),比较各组患儿预后差异.结果 A、B、C组5年无事件生存率(EFS)分别为38.9%±11.2%、59.3%±7.3%和66.5%±10.5%,其中C组明显高于A组(P=0.035);A、B、C组5年总生存率(OS)分别为54.3%±13.5%、68.1%±7.7%和77.9%±9.8%,三组间比较差异无统计学意义(P>0.05).发生t(8;21)易位的AML患儿58例,5年EFS率为63.3%±7.3%,明显高于正常核型患儿(P=0.015);C组中28例伴性染色体缺失的AML患儿均伴有t(8;21)易位,与不伴性染色体缺失的t(8;21)易位患儿相比,5年EFS率差异无统计学意义(P>0.05).结论 儿童AML M2型中性染色体缺失是预后好的染色体核型,该类型大多同时伴有t(8;21)易位;在伴有t(8;21)易位的患儿中,性染色体缺失并没有显示出更好的预后,推测性染色体缺失的非正常核型预后好可能与伴有t(8;21)易位有关.     

儿童急性淋巴细胞白血病TEL基因微卫星和杂合性缺失检测的临床意义

目的检测12号染色体TEL基因微卫星不稳定性(MSI)和杂合性缺失(LOH),与儿童急性淋巴细胞白血病发生、发展及预后的关系。方法采用多重PCR、聚丙烯酰胺凝胶电泳及银染技术检测了12号染色体上TEL基因附近的4个微卫星位点(D12s89、D12s98、D12s269、D12s358)的MSI和LOH发生情况,并对其中的18例病人进行了初诊、缓解和复发三期MSI和LOH的检测。结果53例ALL儿童MSI和LOH总的发生率分别为3·77%(2/53)和43·40%(23/53),其中D12s89位点LOH的发生率最高为39·62%(21/53),D12S269位点LOH的发生率最低为9·43%(5/53)(χ2=5·24,P<0·01);动态检测其中的18例患儿,初诊期LOH的发生率为61·11%(11/18),缓解期为11·11%(2/18),复发期为66·67%(12/18),初诊和复发期各位点LOH的发生率明显高于缓解期(χ2=8·88,11·69,P<0·01);3例初诊未检测出LOH的患者,复发期3位点同时检测到LOH;2例患者在初诊、缓解和复发三期均检测到LOH。5例正常对照和15例良性血液病对照均未检测到LOH及MSI的发生。结论TEL基因与儿童ALL的发生、发展有关,微卫星不稳定性的检测可用于白血病的诊断及预后判断,并可作为临床上微小残留白血病的检测方法之一。