生后发育过程中睾丸神经生长因子基因的表达

为了通过观察小鼠生后发育过程中睾丸组织神经生长因子 ( NGF)基因表达的变化藉以探讨 NGF在睾丸发育、精子发生过程中的生物学作用 ,本研究采用 RT-PCR方法 ,半定量分析生后 1d、1周、2周、4周及 8周小鼠睾丸组织中 NGF m RNA的表达变化 ;以地高辛标记的βNGF c DNA为探针 ,采用原位杂交法观察 NGF m RNA在幼年及成年小鼠睾丸组织中的分布。 RT-PCR结果显示 ,小鼠生后 1d、1周、2周、4周、8周睾丸组织中均有 NGF m RNA的表达 ,以生后 1周时的表达量为最高。原位杂交结果表明 ,幼年鼠 NGF m RNA杂交信号位于睾丸的间质之中 ,而成年鼠 NGF m RNA杂交信号则主要位于睾丸生精小管管壁和管腔中。结果提示 :NGF m RNA在小鼠出生时即有表达 ,其表达量及在睾丸组织中的分布 ,随小鼠的发育而有变化     

新生小鼠睾丸组织移植到裸鼠体内不同时期移植物的组织学观察

目的 通过测量不同发育时期移植物的重量及观察其中生精小管结构和生精细胞组成情况,对去势雄性小鼠中移植的新生小鼠睾丸组织生长和发育进行系统观察.方法 将出生1～2d昆明小鼠睾丸移植到7～12周去势雄性免疫缺陷小鼠背部;在移植后不同时间段 (分为3d、1～11周和3～6月16个组)取出移植物,计算移植物的回收率,测定移植物重量,观察移植物中生精小管结构及生精细胞的组成.结果 从移植的450个新生小鼠睾丸组织,回收到405个移植物,总回收率为90.0%.重量比移植前增加约40倍.移植物中生精小管的发育及各阶段生精细胞出现时间与在正常小鼠中所见基本相同.移植时间超过8周后,生精上皮的退化现象显著增加.结论 将新生小鼠睾丸组织异位移植到受体背部后的发育进程与在体情况相同,第1次生精波结束后的时间应为获取精子细胞和精子的最佳时间,大约是移植后5～7周.     

睾丸动脉血流障碍对小鼠睾丸生精上皮和血-睾屏障的影响

目的:探讨睾丸动脉血流障碍对小鼠睾丸生精上皮和血-睾屏障的影响.方法:成熟雄性BALB/c小鼠,随机分为对照组和6个实验组,对照组仅暴露睾丸动脉而不进行结扎,实验组显微镜下行单侧睾丸动脉结扎, H-E染色观察睾丸组织的病理改变,电镜观察血-睾屏障的变化.结果:对照组睾丸生精小管无明显病理改变;1h组睾丸生精小管上皮细胞排列不均匀,细胞界限清楚,线粒体轻微肿胀,核周隙轻微增宽,睾丸生精小管的基膜完整;2h和3h组生精小管生精细胞层数减少,线粒体轻微空泡改变,线粒体嵴扩张,支持细胞内质网扩张明显,有局部液化灶,生精小管基膜轻微波纹状;睾丸间质可见炎性细胞浸润,多为分叶的中性粒细胞;4h和5h组睾丸间质血管中充血明显,血管内壁有大量的炎性细胞贴壁现象,血管壁增厚呈玻璃样变,精原细胞有核碎裂现象,细胞界限不清,基膜间隙增宽,基膜皱折,精子细胞顶体位置未见顶体,精子细胞局部有空泡,界限不清,细胞膜不完整;6h组睾丸生精小管内主要为精原细胞和初级精母细胞,精原细胞与基膜脱离,基膜有"分层"现象,支持细胞、精母细胞肿胀明显,细胞膜不完整,界限不清,生精小管内可见多核巨细胞.结论:单侧睾丸动脉结扎/再通可引起睾丸生精细胞的缺血性损伤和坏死,生精上皮细胞和血-睾屏障的病理变化随缺血时间的延长而加重.     

Smad2和Smad4蛋白在成年大鼠睾丸的表达

目的 探讨转化生长因子－β超家族肽类的细胞内信号转导分子Smad2和Smad4蛋白在成年大鼠睾丸的表达及在精子发生中的作用机理。方法 用免疫组织化学ABC法结合葡萄糖氧化酶－DAB－硫酸镍铵增强技术,检测成年大鼠睾丸Smad2和Smad4蛋白的表达和定位。结果Smad2蛋白主要表达在大鼠睾丸生精小管的精原细胞、初级精母细胞、次级精母细胞、精子细胞、支持细胞和间质细胞中,免疫反应物质主要定位于细胞质,胞核为阴性;而Smad4蛋白同主要表达于间质细胞的胞质中,支持细胞呈弱阳性染色,结论 Smad2蛋白主要表达于睾丸生精小管各级生精细胞,Smad4蛋白表达于间质细胞,为揭示TGF－β超家族在精子发生中的分子机理提供了直接证据。     

不同阶段生精小管组织学结构研究

目的探讨不同阶段人体睾丸生精小管面积、生精小管管腔面积变化和生精上皮在不同阶段的组织学特点,及其与生殖的关系。方法:应用常规组织制片技术和图像分析技术。结果①生精小管平均面积变化,从胚胎睾丸形成到青春期前,随睾丸逐渐发育增大,睾丸间质增多,但生精小管面积无明显增大;自青春期生精小管面积迅速增大,25岁左右达到峰值,45岁左右生精小管平均面积缓慢减少,55岁以后显著减少。②生精小管管腔面积变化,从胚胎睾丸形成到青春期前,生精小管几乎无管腔;青春期管腔开始出现并迅速增大,20岁左右达到峰值;于45岁左右管腔面积缓慢减少,55岁以后显著减少。③生精小管的组织学结构变化,从胚胎睾丸形成到青春期前,生精小管上皮由精原细胞和支持细胞组成,但随睾丸发育增大,睾丸间质增多,生精小管上皮和基膜间渐出现明显的间隙;青春期开始,生精小管上皮发育,生精细胞层数增加,管壁各级生精细胞典型,腔面可见精子;55岁后睾丸纤维化明显,生精小管皱缩,随年龄增长,生精上皮细胞数量渐减少,排列紊乱,基膜增厚。结论①生精细胞增殖旺盛是生精小管平均面积迅速增大的原因之一;生精细胞增殖旺盛的阶段是20～30岁,最佳时期是25岁左右。②生精小管管腔的出现与生精细胞的凋亡、基膜扩大的速率远远大于生精细胞的增殖水平有关,而生精小管管腔的出现有利于精子的生成与运输。③衰老睾丸生殖功能的下降与其组织结构的纤维化及生精小管基膜厚度增加等因素有关。     

杜仲对D-半乳糖所致衰老小鼠睾丸的形态学研究

目的 本实验以D－半乳糖所致衰老小鼠为研究对象，研究了杜仲的抗衰老作用。方法 应用光镜电镜技术观察小鼠睾丸的重量、生精小管直径、生精上皮细胞数、间质细胞数的随龄变化，同时观察了杜仲对上述指标的影响。结果 1、随增龄，睾丸重量减轻，生精小管直径缩小。衰老时生精细胞缺如，仅剩支持细胞或见散在分布，间质细胞随龄递减。2、杜仲具有一定的抗衰老作用，使生精过程活跃，生精细胞增多，间质细胞增多不明显，生精小管直径改变不显著。结论 杜仲具有一定的抗衰老作用。     

细辛对D-半乳糖所致衰老小鼠睾丸的形态学研究

本文研究了细辛对D－半乳糖所致衰老小鼠的抗衰老作用，应用光镜电镜技术测定小鼠睾丸的重量、生精小管直径、生精上皮细胞数、随龄变化的间质细胞数，同时观察了细辛对上述指标的影响。结果 1．随增龄、睾丸重量减轻，生精小管直径缩小。衰老时租精细胞缺如，仅有支持细胞或散在分布，间质细胞随龄递减。2．细辛可以使小鼠的曲细精管增粗，生精过程活跃，生精细胞增多，间质细胞增多。结论 细辛有一定抗衰老作用。     

环磷酰胺下调大鼠睾丸OCT-4和GDNF表达

目的探讨抗肿瘤药物环磷酰胺对大鼠睾丸和精原干细胞相关因子OCT-4和GDNF表达的影响。方法 12只8周龄大鼠随机分为对照组和实验组,每组6只;实验组每天腹腔注射环磷酰胺50 mg/kg,连续3 d,用药4周后PAS染色法观察大鼠睾丸组织学变化,精原细胞,生精小管直径和附睾尾部精子数量。免疫组织化学法检测精原干细胞相关分子OCT-4和GDNF表达水平。结果与对照组比较,实验组大鼠体重、睾丸和附睾重量均显著减轻,睾丸组织学无明显改变,附睾精子活动度降低,附睾精子和精原细胞数量减少。实验组GDNF表达明显减少,而OCT-4表达水平无明显变化。结论环磷酰胺短期用药可造成精子发生的损害,其中精原细胞的减少可能与损害后GDNF表达下调有关。     

人绒毛膜促性腺激素对切除颌下腺小鼠静止期精母细胞的一些影响

目的：探讨人绒毛膜促性腺激素(HCG)对切除颌下腺小鼠静止期精母细胞表皮生长因子(EGF)的表达和生精功能的影响。方法：采用组织化学和免疫组织化学技术。结果：EGF、分布在小鼠睾丸间质细胞、精原细胞、静止期精母细胞、细线期精母细胞和精子细胞。去颌下腺组EGF阳性反应静止期精母细胞数量明显减少，同时相应的生精小管的各级生精细胞也显著减少。与去颌下腺组相比，去颌下腺给药组EGF阳性反应静止期精母细胞数量明显增多，同时相应的生精小管的生精细胞也显著增多。结论：睾丸间质细胞和部分生精细胞能分泌EGF。EGF在生精小管上皮的分布与生精周期有密切关系。静止期精母细胞EGF表达减弱是切除颌下腺导致小鼠少精症的原因之一。HOG可促进静止期精母细胞表达EGF，以调节精子发生过程。     

细辛和杜仲合剂对D-半乳糖所致衰老小鼠睾丸的形态学研究

目的 本实验研究了细辛与杜仲合剂对D－半乳糖所致衰老小鼠的抗衰老作用。方法 应用光镜电镜技术测定小鼠睾丸的重量、生精小管直径、生精上皮细胞数、间质细胞数的随龄变化，同时观察了细辛、杜仲合剂对上述指标的影响。结果 1．随增龄，睾丸重量减轻，生精小管直径缩小。衰老时生精细胞缺如，仅剩支持细胞或见散在分布，间质细胞随龄递减。2．细辛与杜仲合剂具有一定的抗衰老作用，可以使小鼠的生精小管增粗，生精过程活跃，生精细胞增多，间质细胞增多。结论 细辛与杜仲合剂具有一定的抗衰老作用。     

高脂饮食诱导小鼠血糖增高损伤睾丸微血管功能

目的观察高脂饮食诱导C57BL/6雄性小鼠血糖升高对睾丸微血管功能及雄性生殖的影响。方法将小鼠随机分为对照组(control)和高脂组(HFD),各20只。HFD组高脂饮食20周,每周测血糖及体质量;腹腔注射伊文思蓝观察血睾屏障通透性;激光多普勒检测睾丸微循环血流量及微血管自律运动频率和振幅;HE染色观察睾丸组织形态;免疫组化检测睾丸微血管血小板内皮细胞黏附分子-1(CD31)及生精细胞增殖细胞核抗原PCNA表达;TUNEL染色法观察生精细胞凋亡。结果 HFD组小鼠体质量及血糖均高于对照组(P<0.01);血睾屏障完整性破坏,生精小管通透性增高;睾丸平均血流灌注水平及微血管自律运动频率和振幅均低于对照组(P<0.01);生精上皮细胞数量减少、生精上皮变薄;微血管内皮细胞CD31及生精细胞PCNA表达水平均低于对照组(P<0.01);生精细胞凋亡水平高于对照组(P<0.01)。结论高脂饮食可诱导小鼠血糖水平增高致睾丸微血管损伤破坏血睾屏障完整性使小鼠生精上皮结构受损。     

整合素α4、β1 mRNA在着床前小鼠子宫内膜及胚卵的表达

目的 观察着床前小鼠子宫内膜及胚卵整合素α4、β1mRNA的表达。方法 用原位杂交技术检测妊娠1～4d小鼠子宫内膜及胚卵整合素α4、β1mRNA的表达。结果 整合素α4、β1mRNA主要表达在子宫内膜腔上皮，腺上皮，表达强弱不等。妊娠3d基质细胞出现阳性信号，4d增强；胚卵整合素α4、β1mRNA仅在Ⅱ细胞期弱表达，在其他时期表达较强。结论 妊娠1～4d小鼠子宫内膜及胚卵持续表达整合素α4、β1mRNA，提示它们可能参与小鼠胚泡的着床过程。     

孕期非那雄胺暴露致子代雄性小鼠生殖器官发育异常

目的:探讨孕期非那雄胺暴露对子代雄性小鼠生殖器官发育的影响。方法:CD-1小鼠在受孕后0～17 d给予非那雄胺处理,通过宏观观察、解剖分析与组织形态学染色观察子代雄性小鼠生殖器官的发育情况;通过免疫荧光染色分析子代雄性小鼠精子发生情况。结果:宏观观察结果显示,孕期非那雄胺暴露可导致子代雄性小鼠外生殖器官畸形,表现为阴囊未完全融合及阴茎畸形;此外,还观察到小鼠肛门与生殖器的距离显著缩短(P<0.01)。解剖分析结果显示,孕期非那雄胺暴露可导致子代雄性小鼠睾丸不同程度的不完全下降及长度显著缩短(P<0.01)。组织形态学结果显示,各阶段阴茎长度均显著缩短(P<0.01);睾丸生精小管密度和生精小管管腔成熟精子数均显著降低(P<0.01),生精小管管腔和睾丸间质间隙均显著增大(P<0.01)。免疫荧光染色结果显示,睾丸中支持细胞、睾丸间质细胞和精原细胞的密度均显著降低(P<0.01);生精小管细胞的caspase-3荧光强度显著增加(P<0.01),Ki67与沙漠刺猬因子(desert hedgehog,Dhh)荧光强度均显著降低(P<0.01...     

整合素α_5、β_1抗体对睾丸生精细胞凋亡的影响

目的观察整合素α_5、β_1抗体体内干预试验对Wistar大鼠睾丸生精细胞凋亡的作用。方法腹腔内注射α_5、β_1抗体,采用原位末端脱氧核糖核酸转移酶标记技术,分析Wistar大鼠生精细胞凋亡情况。结果α_5、β_1试验组大鼠睾丸生精细胞明显减少(P0.001)。结论α_5、β_1抗体具有阻止Wistar大鼠生精细胞凋亡的作用。     

羊睾丸提取液对铅染毒小鼠睾丸生精细胞凋亡及超微结构的影响

目的:探讨羊睾丸提取液对铅染毒小鼠睾丸生精细胞凋亡及超微结构的影响.方法:雄性性成熟小鼠,随机分为对照组(蒸馏水灌胃),模型组(醋酸铅灌胃),给药组(醋酸铅灌胃+腹腔注射羊睾丸提取液),染毒2周.Tunel法观察睾丸生精细胞的凋亡,透射电镜观察生精细胞超微结构的变化. 结果:与对照组相比,模型组睾丸生精细胞凋亡指数明显增高,多数细胞胞质内出现空泡,核固缩,核膜结构模糊,线粒体数目减少、空泡化,溶酶体增多;与模型组相比,给药组睾丸生精细胞凋亡指数有所降低,细胞结构趋于正常,核膜结构清晰,线粒体数量增多.结论:羊睾丸提取液可抑制铅染毒小鼠睾丸生精细胞的凋亡,对精原细胞、精母细胞、精子细胞的超微结构具有显著的保护作用.     

褪黑激素对小鼠睾丸生精细胞凋亡和睾丸间质细胞nNOS表达的影响

目的：观察外源性褪黑激素(MT)对睾丸生精细胞凋亡和nNOS表达的影响,探讨MT诱导生精细胞凋亡的可能机制。方法：20d和30d小鼠,应用化学发光法检测血清睾酮浓度,TUNEL测定生精细胞凋亡,免疫组化,SABC法观察nNOS在睾丸中的表达。结果：20d和30d实验组血清中睾酮水平明显下降,TUNEL阳性生精细胞数显著增多,TUNEL阳性生精细胞数与睾酮浓度呈负相关;20d实验小鼠中睾丸间质nNOS阳性细胞数与对照组相比明显减少,且与睾酮浓度呈正相关,而与TUNEL阳性生精细胞数呈负相关。结论：MT具有促进生精细胞凋亡的作用,与睾酮分泌受抑制有关;青春期前MT引起生精细胞凋亡可能还与nNOS表达有关。     

吸入高浓度氢气增强四氯化碳损伤性大鼠生精细胞核糖体蛋白S6激酶的表达

目的探讨吸入3%氢气对四氯化碳(CCl4)损伤性大鼠生精细胞核糖体蛋白S6激酶(p70s6k)表达及其增殖功能的影响。方法将18只健康雄性SD大鼠随机分成对照组、CCl4组和氢气治疗组。对照组每周一、四背部皮下注射橄榄油(0.12ml/100g),CCl4组和氢气组每周一、周四皮下注射体积分数60%的CCl4-橄榄油(0.3ml/100g),连续4周。氢气组自实验的第22天吸入3%氢气,1h/d,连续7d。取右侧睾丸和附睾,行石蜡包埋切片,苏木素伊红染色和免疫组织化学染色。取左侧睾丸组织,行Western blotting检测。结果对照组睾丸生精小管内可见多层生精细胞,排列有续,结构完整。CCl4组睾丸生精小管细胞层数减少,结构紊乱,附睾管柱状上皮变薄;氢气组生精细胞数量和附睾管高柱状上皮细胞明显改善。CCl4组大鼠附睾精子密度较对照组降低,氢气组的精子密度明显高于CCl4组(t=4.91,P0.05)。免疫组织化学染色显示,氢气组生精细胞质中p70s6k(t=7.63,P0.05)和PCNA(t=20.08,P0.05)的表达明显强于CCl4组。Western blotting检测显示,氢气组睾丸组织中p70s6k的表达与CCl4组相比明显增强(t=3.64,P0.05)。结论吸入高浓度氢气能明显增强CCl4损伤性大鼠睾丸生精细胞p70s6k的表达,改善CCl4损伤引起的的生精细胞的增殖功能。     

转化生长因子β及其受体在小鼠精子发生过程中的表达

目的观察转化生长因子β（TGFβs）及其受体（TGFβ-R）在小鼠睾丸中的表达,证实TGFβs及其受体在小鼠精子发生过程中的定位和作用机理.方法免疫组织化学染色结合显微图像定量分析和免疫荧光双重染色.结果免疫组织化学显示：TGFβ1和TGFβ2主要表达于生精小管内Ⅵ-Ⅷ期圆形精子细胞以及长形精子细胞和变态精子细胞的胞质,位于睾丸间质中的Leydig细胞胞质呈弱表达;TGFβ3仅表达于Leydig细胞,各级生精细胞未见表达.晚期精母细胞（Ⅷ期）至第Ⅹ期长形精子细胞均表达TGFβ-RⅠ;TGFβ-RⅡ仅表达于第Ⅺ期后的变态精子细胞期;而TGFβ-RⅢ则主要表达于Ⅶ-Ⅷ期圆形精子细胞和变态精子细胞胞质.免疫荧光双重染色显示：TGFβ1和TGFβ2与TGFβ-RⅢ在生精上皮最早共表达于晚期圆形精子细胞顶体极.结论 TGFβs及其受体在小鼠精子发生过程中的表达具有细胞和周期特异性,提示其在精子发生中具有重要意义.     

三七复方合剂对甲醛熏染大鼠睾丸组织雄激素受体和c-kit表达的影响

目的 通过检测三七复方合剂对甲醛熏染大鼠睾丸生精小管的形态学变化和睾丸组织雄激素受体(AR)和酪氨酸蛋白激酶受体c-kit的表达,验证三七复方合剂对慢性甲醛熏染的疗效。 方法 将18 只SD 雄性大鼠随机均分为对照组、甲醛组和治疗组,其中甲醛组和治疗组在甲醛熏染箱内熏染8周（8h/d）,治疗组自第5周起每天给予三七复方合剂灌胃治疗,持续4周。实验结束时,所有大鼠称量体重和睾丸重量,组织切片行HE染色和免疫组织化学检测,观察睾丸生精小管的形态学变化及睾丸组织AR和c-kit的表达。 结果 甲醛组鼠重和睾丸重量明显下降;经三七复方合剂治疗后,鼠重和睾丸重量较甲醛组明显增加（P<0.05）。甲醛组大鼠的睾丸生精小管萎缩,小管上皮层细胞排列紊乱,精子明显减少;三七复方治疗4周后基本恢复正常,管腔内可见大量精子。甲醛组睾丸组织ＡＲ和酪氨酸蛋白激酶受体c-kit表达明显减弱,治疗组生精上皮细胞的雄激素受体和酪氨酸蛋白激酶受体c-kit表达明显增强（P<0.05）,达到正常水平。 结论 较长时间甲醛熏染可使大鼠的体重和睾丸重量下降,生精小管损伤,睾丸组织中多种细胞AR和酪氨酸蛋白激酶受体c-kit的表达下降,三七复方合剂的应用有较明显治疗效果。     

己烯雌酚对幼年香猪睾丸与附睾雌激素受体和一氧化氮合酶表达和分布的影响

目的 探讨己烯雌酚（DES）对幼年香猪睾丸和附睾中雌激素受体（ERs）和内皮型一氧化氮合酶（eNOS）表达的影响,及DES对诱导雄性动物生精异常的作用机制。 方法 将20只20～25日龄幼年雄性香猪分成４组,对照组只注射生理盐水,实验组经腹腔每天注射DES(实验1组：0.03mg/kg;实验2组：0.3mg/kg;实验3组：3mg/kg),连续注射9d。最后１次注射24h后手术取出左侧睾丸和附睾组织经中性多聚甲醛固定,石蜡包埋,常规制备5μm石蜡切片,采用免疫组织化学SP法检测睾丸和附睾组织中ERα、ERβ和eNOS的表达。 结果 ERα只在输出小管上皮细胞胞核中表达;ERβ在输出小管上皮细胞、间质细胞及附睾管上皮细胞胞核中均有表达,在睾丸生精小管细胞胞质中也有少量表达。DES能够使ERα在输出小管中的表达率显著下降（P<0.05）。随着DES用量的增多,ERβ在输出小管和附睾管中的表达率显著升高（P<0.05）,当DES用量为3mg/kg时ERβ在输出小管和附睾管中的表达率明显高于用量0.03mg/kg和0.3mg/kg（P<0.05）。但0.03mg/kg用量的DES却使睾丸生精小管中ERβ的表达率显著性下降（P<0.05）,并在0.3mg/kg和3mg/kg用量时在睾丸生精小管中未能检测到ERβ受体的表达。eNOS在睾丸生精小管细胞和输出小管上皮细胞中都有表达,DES能促进eNOS在睾丸生精小管细胞中表达（P<0.05）而降低其在输出小管细胞中表达（P<0.05）。结论 DES明显影响ERs和eNOS在睾丸和附睾中的表达。