生技霉素小组分的研究I．分离纯化和4″—异丁酰螺旋霉素II（生技霉素B2β）的结构鉴定

生技霉素是一组以4″－异戊酰螺旋霉素为主的基因工程杂合抗生素，除了主要组分4″－异戊酰螺旋霉素III、II、I（生技霉素A1、B1、E1）和小组分4″－丁酰／异丁酰螺旋霉素III（生技霉素A2α/A2β）以外，还含有其它4″－酰化螺旋霉素II和少量杂质。采用连续逆流分配法，碱性硅胶柱层析，制备薄层层析和中压柱层析等分离方法，并以薄层层析和HPLC作为检测手段，从生技霉素混合物中分离得到了四个小组分A0、B2、B3和C2，其含量分别为0．5％、3．3％、6．2％和2．6％，其中B2为B2α和B2β两个异构体的混合物。经过UV、IR、SI－MS、GC－MS、^1H-NMR、^13C-NMR、^1H-^1H COSY6等光谱分析，并与生技霉素A1、B1、A2α、A2β等的光谱数据进行比较,确定了生技霉素B2α为4″－丁酰螺旋霉素II，B2β为4″－异丁酰螺旋霉素II，其中4″－异丁酰螺旋霉素II变一个新的基因工程杂合抗生素。     

生技霉素小组分的研究 Ⅰ.分离纯化和4″-异丁酰螺旋霉素Ⅱ(生技霉素B_(2β))的结构鉴定

生技霉素是一组以4"-异成酰螺旋霉素为主的基因工程杂合抗生素，除了主要组分4"-异戊酚螺旋霉素Ⅲ、Ⅱ、Ⅰ（生技霉素A1、B1、E1）和小组分4"-了酰／异丁酞螺旋霉素Ⅲ（生技霉素A2a／A2β）以外，还含有其它4"-酸化螺旋霉素和少量杂质。采用连续逆流分配法，碱性硅胶柱层析，制备薄层层析和中压柱层析等分离方法，并以薄层层析和HPLC作为检测手段，从生技霉素混合物中分离得到了四个小组分A0、B2、B3和C2，其含量分别为0．5％、3．3％、6．2％和2．6％，其中B2为B2a和B2β两个异构体的混合物。经过UV、IR、SI－MS、GC－MS、1H－NMR、13C－NMR、1H－1H COSY等光谱分析，并与生技霉素 A1、B1、A2a、A2β等的光谱数据进行比较，确定了生技霉素B2a为4"-丁酰螺旋霉素Ⅱ，B2β为4"-异丁酰螺旋霉素Ⅱ，其中4"-异丁酰螺旋霉素Ⅱ为一个新的基因工程杂合抗生素。     

生技霉素小组分的研究I.分离纯化和4"-异丁酰螺旋霉素Ⅱ(生技霉素B2β)的结构鉴定

生技霉素是一组以4"-异戊酰螺旋霉素为主的基因工程杂合抗生素,除了主要组分4"-异戊酰螺旋霉素Ⅲ、Ⅱ、Ⅰ(生技霉素A1、B1、E1)和小组分4"-丁酰/异丁酰螺旋霉素Ⅲ(生技霉素A2α/A2β)以外,还含有其它4"-酰化螺旋霉素和少量杂质.采用连续逆流分配法,碱性硅胶柱层析,制备薄层层析和中压柱层析等分离方法,并以薄层层析和HPLC作为检测手段,从生技霉素混合物中分离得到了四个小组分A0、B2、B3和C2,其含量分别为0.5%、3.3%、6.2%和2.6%,其中B2为B2α和B2β两个异构体的混合物.经过UV、IR、SI-MS、GC-MS、1H-NMR、13C-NMR、1H-1H COSY等光谱分析,并与生技霉素A1、B1、A2α、A2β等的光谱数据进行比较,确定了生技霉素B2α为4"-丁酰螺旋霉素II,B2β为4"-异丁酰螺旋霉素Ⅱ,其中4"-异丁酰螺旋霉素II为一个新的基因工程杂合抗生素.     

生技霉素小组分的研究 Ⅲ.新螺旋霉素类抗生素生技霉素B0的分离和结构鉴定

生技霉素是一个多组分的基因工程杂合抗生素，含有主要成分4”-O-异戊酰螺旋霉素Ⅲ、Ⅱ、I(生技霉素A1、B1、E1)和其它4”-O-酰化螺旋霉素及少量杂质。采用逆流分配层析、碱性硅胶柱层析和中压柱层析等分离方法，从生技霉素混合物中又分离得到一个新的小组分——生技霉素B0。经Uv、IR、FAB—MS、^1H—NMR、^13C-NMR和^1H-^1H COSY等光谱分析表明，生技霉素B0的结构为4”-O-(3-甲基-2-丁烯酰)螺旋霉素Ⅱ，是一个新的4”-O-酰化螺旋霉素类抗生素。     

生技霉素的组分研究

利用对流分配、硅胶柱层析、薄层层析、中压液相层析等分离技术 ,从基因工程菌 WSJ- 1的活性产物生技霉素中分离了 16个化合物。其中除主要产物生技霉素 A1 、B1 、E1 (4″- O-异戊酰螺旋霉素 、 、 )外 ,还包括生技霉素 A2α,A2β,生技霉素 B3,C1 (4″- O-丁酰 ,异丁酰 ,丙酰 ,乙酰螺旋霉素 )及生技霉素 B2α,B2β,C2 ,D1 (4″- O-丁酰 ,异丁酰 ,丙酰 ,乙酰螺旋霉素 ) ,以及新的 4″-酰化螺旋霉素生技霉素 B0 [4″- O- (3-甲基 - 2 -丁烯酰基 ) -螺旋霉素 ]。还有可能是 4″- O-酰化螺旋霉素生物合成中间体的生技霉素 A0 (普拉特霉素 A1 ) ,生技霉素 P1 、P2 (螺旋霉素 , )和生技霉素 P3(新螺旋霉素 )。文中报道了这些化合物的分离 ,性质及结构。并总结报道了具有重要鉴别意义的这些化合物中 C- 3,C- 4″酰基侧链的 1 H及 1 3C- NMR数据。     

天然来源的新化合物4~"-异丁酰螺旋霉素Ⅲ(生技霉素A_(2β))

生技霉素是一组４＂－酰化螺旋霉素，继从生技霉素产生菌发酵液中分离到主要组分生技霉素Ａ和Ｂ之后，利用两相分配及柱层析的分离方法，又分离到分子量为９６８的化合物生技霉素Ａ２。根据其ＵＶ、ＩＲ、ＦＡＢ－ＭＳ、１Ｈ－ＮＭＲ、１３Ｃ－ＮＭＲ、ＤＥＰＴ谱、１Ｈ－１ＨＣＯＳＹ的分析及与４＂－异戊酰螺旋霉素Ⅲ（即生技霉素Ａ）光谱数据的比较表明生技霉素Ａ２含分子式皆为Ｃ５０Ｈ８４Ｎ２Ｏ１６的４＂－异丁酰螺旋霉素Ⅲ（生技霉素Ａ２β）和４＂－丁酰螺旋霉素Ⅲ（生技霉素Ａ２α）。生技霉素Ａ２碱水解产物中游离脂肪酸的气相色谱及ＧＣ－ＭＳ分析支持了以上结论。     

生技霉素小组分的研究 Ⅲ.新螺旋霉素类抗生素生技霉素B0的分离和结构鉴定

生技霉素是一个多组分的基因工程杂合抗生素,含有主要成分4"-O-异戊酰螺旋霉素Ⅲ、Ⅱ、Ⅰ(生技霉素A1、B1、E1)和其它4"-O-酰化螺旋霉素及少量杂质.采用逆流分配层析、碱性硅胶柱层析和中压柱层析等分离方法,从生技霉素混合物中又分离得到一个新的小组分--生技霉素B0.经UV、IR、FAB-MS、1H-NMR、13C-NMR和1H-1H COSY等光谱分析表明,生技霉素B0的结构为4"-O-(3-甲基-2-丁烯酰)螺旋霉素Ⅱ,是一个新的4"-O-酰化螺旋霉素类抗生素.     

天然来源的新化合物4″—异丁酰螺旋霉素Ⅲ（生技霉素A2β）

生技霉素是一组４″－酰化螺旋霉素，继从生技霉素产生菌发酵中分离到主要组分生技霉素Ａ和Ｂ之后，利用两相分配及柱层析的分离方法，又分离到分子量为９６８的化合物生技霉素Ａ２。根据其ＵＶ、ＩＲ、ＦＡＢ－ＭＳ、＾１Ｈ－ＮＭＲ、＾１３Ｃ－ＮＭＲ、ＤＥＰＴ谱、＾１Ｈ－＾１ＨＣＯＳＹ的分析及与４″－异戊酰螺旋霉系Ⅲ（即生技霉素Ａ）光谱数据的比较表明生技霉素Ａ２含分子式皆为Ｃ５０Ｈ８４Ｎ２Ｏ１６的４″－异丁酰螺旋霉     

生技霉素E(4"-异戊酰螺旋霉素Ⅰ)的分离和结构鉴定

为获得高产的4"异戊酰螺旋霉素,将4"异戊酰基转移酶基因整合入螺旋霉素产生菌S.spiramyceticusF21染色体,构建成功了一株稳定的生物工程菌WSJ1,继从该菌株代谢产物中分离获得生技霉素A1(4"异戊酰螺旋霉素)、生技霉素B1(4"异戊酰螺旋霉素),又分离获得一主要组分生技霉素E。经UV、FTIR、HRSIMS、1HNMR、13CNMR、1H1HCOSY等光谱分析和与生技霉素A1及相关文献的光谱数据比较,确定生技霉素E为本菌株目标化合物之一——4"异戊酰螺旋霉素,高效液相分析表明,该生物工程菌代谢产物中4"异戊酰螺旋霉素含量超过55%。     

生技霉素A及B的分离及结构鉴定

从含有４＂－酰化酶基因的螺旋霉素产生菌－基因工程菌的培养物中分离到一组４＂酰化螺旋霉素，命名为生技霉素。其在体内对小鼠实验感染的治疗作用比乙酰螺旋霉素强。生技霉素主要组份为生技霉素Ａ和Ｂ。通过溶媒提取，真空层析，制备薄层层析等方法得到了生技霉素Ａ、Ｂ的纯品。生技霉素Ａ的紫外最大吸收在２３０．８ｎｍ。具有与螺旋霉素、麦迪霉素、吉他霉素类似的红外吸收光谱，分子量为９８２（ＦＡＢＭＳ：Ｍ＋Ｈ，９８３）。分子式Ｃ５１Ｈ８６Ｎ２Ｏ１６。通过对ＦＡＢＭＳ，１Ｈ－ＮＭＲ，１３Ｃ－ＮＭＲ，ＤＥＰＴ，ＣＯＳＹ及ＨＥＴＣＯＲ谱分析，鉴定生技霉素Ａ的结构为４＂－异戊酰螺旋霉素Ⅲ，并对４＂－异戊酰螺旋霉素Ⅲ的８４个连碳氢的１Ｈ－ＮＭＲ信号作出了明确归属。生技霉素Ｂ与生技霉素Ａ具有类似的紫外及红外吸收光谱。分子量为９６８（ＦＡＢＭＳ：Ｍ＋Ｈ，９６９），比Ａ小１４个质量单位。主要根据１Ｈ－ＮＭＲ及１３Ｃ－ＮＭＲ谱的分析及与生技霉素Ａ的１Ｈ－ＮＭＲ及１３Ｃ－ＮＭＲ谱的比较，鉴定生技霉素Ｂ的结构为４＂－异戊酰螺旋霉素Ⅱ。     

生技霉素E（4″—异戊酰螺旋霉素Ⅰ）的分离和结构鉴定

为获得高产的４″－异戊酰螺旋霉素,将４″－异戊酰基转移基因整合入螺旋霉素产生菌Ｓｓｐｉｒａｍｙｃｅｌｉｃｕｓ Ｆ２１染色体,构建成功卫株稳定的生物工程菌ＷＳＪ－１,继从该菌株代谢产物中分离获得生技霉素Ａ１（４″－异戊酰螺旋霉素Ⅲ）,生技霉素Ｂ１（４″－异戊酰螺旋霉素Ⅱ）,又分离获得一主要组分生技霉素Ｅ。     

生技霉素药代动力学性能研究

目的　研究生技霉素药代动力学过程。方法　测定狗口服生技霉素 10mg·kg-1,2 0mg·kg-1,30mg·kg-1血药浓度并与乙酰螺旋霉素比较 ;测定大鼠灌胃生技霉素 40mg·kg-1,80mg·kg-1,12 0mg·kg-1血药浓度及大鼠灌胃生技霉素 40mg·kg-1后尿、胆汁活性产物回收率。血药浓度及尿、胆汁药物浓度以微生物法测定。 3P87程序拟合计算药物动力学参数。结果　狗口服 3组剂量生技霉素 ,结果表明药物吸收较快 ,lag time为 10～ 30min ;Tmax1 43～ 2 44h ;Cmax1 0 2～ 2 94g·L-1;T1/ 2α0 48～ 1 81h ;T1/ 2 β8 40～10 5 2h ;3组剂量AUC值分别为 15 2 5 ,2 3 70 ,31 40mg·L-1·h-1,表明药物在此剂量范围内呈线形药代动力学特征 ;MRT值分别为 8 11,8 38,8 71h ,不随剂量增减而改变。大鼠口服 3组剂量生技霉素 ,Tmax1 5 7～ 2 45h ;Cmax0 39～ 3 14mg·L-1;T1/ 2α 1 36～ 1 77h ;T1/ 2 β15 6 3～2 0 6 4h ;MRT值约为 13 0h。AUC值分别为 8 44、16 5 4、37 5 8mg·L-1·h-1,同样呈线形药代动力学特征。在相同的实验条件下 ,进行狗口服 3组剂量乙酰螺旋霉素药物动力学对比实验 ,测得ASPM药物动力学参数为 :lag time为0 37～ 0 44h ;Tmax1 49～ 2 2 6h ;Cmax 0 87～ 3 34mg2 0 0 0 0 3 0 5收稿 ,2 0 0     

可利霉素片在比格犬体内的药代动力学

目的建立同时测定比格犬血浆中可利霉素的3种主要成分异戊酰螺旋霉素Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ及3种主要代谢物螺旋霉素Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ浓度的UPLC-MS/MS分析方法,并用于药代动力学研究。方法选用Kinelex XB-C_(18)柱,以乙腈-5 mol·L~(-1)乙酸铵-甲酸(体积比为88∶12∶0.2)为流动相,流速为0.2 mL·min~(-1),采用电喷雾离子源,以多反应监测(multiple reaction monitoring, MRM)方式进行正离子扫描。结果该方法在1～250μg·L~(-1)内螺旋霉素I、异戊酰螺旋霉素Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ线性关系良好,1～1 000μg·L~(-1)内螺旋霉素Ⅱ、Ⅲ线性关系良好,回收率90.58～96.73%,基质效应96.78～114.98%,日间和日内的精密度和准确度值均小于15%。结论该方法可用于可利霉素片在比格犬体内的血浆浓度测定,且血浆中代谢物SPM的浓度远高于主要组份Iso-SPM。     

螺旋霉素和丙酰螺旋霉素的某些萃取性质的比较研究

研究了溶剂萃取和反萃取丙酰螺旋霉素的有关性质，并与螺旋霉素作了比较。根据螺旋霉素及丙酰螺旋霉素的表观分配常数与ｐＨ的模型式，用高斯牛顿法回归理论分配系数分别为３３．６２和１９．０１，并通过回归首次得到丙酰螺旋霉素的解离常数为７．７６和５．２。通过在磷酸盐缓冲液体系中的反萃取实验得到反萃取的经验模型为Ｋ＋ａ＝ｂ＋ｃ＊ｐＨ，通过计算可知当ｐＨ为３．１５和３．２４时，丙酰螺旋霉素和ＳＰＭ反萃取率达到最大，分别为４８和１０２。另外还研究了温度对萃取和反萃取的影响。根据所得公式可以得到丙酰螺旋霉素的计算诺模图。     

丙酰螺旋霉素I的分离与鉴别

用大孔吸附树脂等方法分离丙酰螺旋霉素（ＰｒｏＳＰＭ），除得到以前分离的丙酰螺旋霉素ＩＩＩ（ＰｒｏＳＰＭＩＩ）外，又得到一个新成分。根据其理化性质和波谱［ＵＶ，ＨＲＭＳ，１ＨＮＭＲ，１３ＣＮＭＲ（含ＤＥＰＴ）和１Ｈ１３ＣＣＯＳＹ］数据，并与ＰｒｏＳＰＭＩＩ比较，ＰｒｏＳＰＭＩＩ仅Ｃ３酰基不同，命名为丙酰螺旋霉素ＩＩ（ＰｒｏＳＰＭＩＩ）。     

丙酸盐对利福霉素生物合成的调控

外源添加１０ｍｍｏｌ／Ｌ的丙酸盐能促进地中海拟无枝酸杆菌Ｕ３２合成利福霉素ＳＶ３０％。研究发现丙酸盐由两条酶学途径，即酰基ＣｏＡ合成酶系统、脂肪酸激酶偶联酰基磷酸转移酶系统激活形成丙酰ＣｏＡ，进而由丙酰ＣｏＡ羧化酶催化形成利福霉素合成前体（２Ｓ）－甲基丙二酰ＣｏＡ，因而促进了利福霉素的合成。在两个丙酸盐激活酶系统中，丙酰ＣｏＡ合成酶为组成型表达，而丙酸激酶／丙酰磷酸转移酶可由丙酸盐所诱导。过量的氨     

用双水相萃取丙酰螺旋霉素的研究

用双水相萃取（ＡＴＰＥ）丙酰螺旋霉素（ＰＲＯ－ＳＰＭ），分别用ＰＲＯ－ＳＰＭ溶液和发酵液，对聚乙二醇（ＰＥＧ）和磷酸盐成相系统进行了研究，选出了合适的成相系统。在研究中发现ＰＲＯ－ＳＰＭ对成相有一定的影响。根据数据提出在ＰＲＯ－ＳＰＭ的双水相萃取过程中疏水作用是影响萃取的主要因素，与蛋白质以静电效应为主不同。用发酵液进行放大试验并与溶媒法进行比较，ＡＴＰＥ法萃取收率提高了３２％，而纯度有所下降。初步探讨了聚合物的重复使用。     

基因工程产物生技霉素对小鼠致畸作用的研究

利用基因重且技术获得的生技霉素素对胚胎影响研究结果表明，生技霉素经口服给药的三个剂量组和阳性对照环磷酰胺组小鼠孕鼠体重均未受明显影响，但环磷酰胺吸收胎率和死胎率明显增加，活胎率减少，环磷酰胺对胎鼠有明显致畸作用（Ｐ〈０．００１）。生技霉素大剂量对胚胎有一定毒性，所致吸收胎比阴性对照有所增加，但对胎鼠未见致畸作用。     

全发酵液萃取丙酰螺霉素的研究

利用双水相技术，并与有机溶剂萃取技术于ＰＨ８．０－８．５采用１４％聚乙二醇２０００１８％Ｎａ２ＨＰＯ４系统，建立了丙酰螺的全发酵液萃取新工艺。     

全发酵液萃取丙酰螺旋霉素的研究

利用双水相技术，并与有机溶剂萃取技术结合，于ｐＨ８．０～８．５，采用１４％聚乙二醇２０００－１８％Ｎａ２ＨＰＯ４系统，建立了丙酰螺旋霉素的全发酵液萃取新工艺。小试收率达到６９．２％，对照的乙酸丁酯萃取工艺的收率为５３．４％。