ERK1/2在曲普瑞林逆转卵巢癌OVCAR-3细胞顺铂耐药中的作用

目的:研究曲普瑞林在抑制卵巢癌OVCAR3细胞增殖的同时可否逆转顺铂耐药,并探讨MAP-ERK1/2在其中的变化及调节机制。方法:筛选建立耐顺铂的亚细胞系OVCAR3-DDP;采用MTT、流式细胞术及Western blot比较不同浓度下顺铂、曲普瑞林及两药联合对耐药卵巢癌OVCAR3-DDP细胞生长的影响,测定ERK1/2蛋白的表达。结果:卵巢癌OVCAR3-DDP细胞耐药指数为3.87;顺铂与曲普瑞林联合化疗增敏倍数为2.23;ERK1/2蛋白活性在顺铂处理组升高,在曲普瑞林处理组、顺铂与曲普瑞林联合处理组降低。结论:曲普瑞林增加了卵巢癌OVCAR3-DDP细胞对顺铂的敏感性,此作用可能与细胞内ERK1/2信号转导通路有关。     

β-连环素对卵巢癌细胞顺铂耐药性的影响

目的:探讨信号分子β连环素(β-catenin)在多个卵巢癌耐药细胞系中的表达及其对顺铂耐药性的影响。方法:首先在2个卵巢癌耐药细胞系(C13K,SKOV-3),2个卵巢癌敏感细胞系(OV2008,A2780),A2780顺铂敏感株、A2780-cis顺铂耐药株,COC10顺铂敏感株、COC1-cis顺铂耐药株中检测β-catenin蛋白的水平。通过小干扰RNA(si RNA)介导的RNA干扰技术靶向沉默细胞中β-catenin的表达,实时荧光定量聚合酶链反应(real-time PCR)和蛋白质印迹法(Western blotting)验证β-catenin基因沉默效果。台盼蓝染色方法分析β-catenin基因沉默对细胞化疗药物顺铂敏感性的影响,流式细胞术检测顺铂处理后β-catenin基因沉默细胞的凋亡率。Western blotting筛选多个凋亡相关信号分子的改变。结果:β-catenin在2个卵巢癌耐药细胞系C13K,SKOV-3中蛋白水平较敏感细胞系明显上调。与亲本A2780和COC10细胞相比,在耐药株A2780-cis和COC1-cis中表达水平也明显增高。β-catenin si RNA能显著抑制细胞中β-catenin蛋白的水平。β-catenin基因沉默后,卵巢癌耐药细胞C13K,SKOV-3对顺铂敏感性显著增高;流式细胞术进一步分析发现β-catenin基因沉默可以促进顺铂介导的卵巢癌耐药细胞的细胞凋亡。Western blotting发现β-catenin基因沉默后,顺铂处理可以显著上调促凋亡分子p53和caspase-3蛋白水平。结论:β-catenin在卵巢癌耐药细胞系表达明显增高,β-catenin沉默可以促进卵巢癌耐药细胞对顺铂的敏感性,并同时促进了顺铂介导的细胞凋亡。     

ERK1/2在曲普瑞林逆转卵巢癌OVCAR-3细胞顺铂耐药中的作用

目的：研究曲普瑞林在抑制卵巢癌OVCAR3细胞增殖的同时可否逆转顺铂耐药，并探讨MAP-ERKl／2在其中的变化及调节机制。方法：筛选建立耐顺铂的亚细胞系OVCAR3-DDP；采用M1Tr、流式细胞术及Westernblot比较不同浓度下顺铂、曲普瑞林及两药联合对耐药卵巢癌OVCAR3-DDP细胞生长的影响，测定ERKl／2蛋白的表达。结果：卵巢癌OVCAR3-DDP细胞耐药指数为3．87；顺铂与曲普瑞林联合化疗增敏倍数为2．23；ERKl／2蛋白活性在顺铂处理组升高，在曲普瑞林处理组、顺铂与曲普瑞林联合处理组降低。结论：曲普瑞林增加了卵巢癌OVCAR3-DDP细胞对顺铂的敏感性，此作用可能与细胞内ERKl／2信号转导通路有关。     

微小RNA-16逆转上皮性卵巢癌顺铂耐药的研究

目的:研究微小RNA-16(miR-16)在人上皮性卵巢癌顺铂耐药细胞中的表达及其与顺铂耐药的关系。方法:脂质体lipofectamine2000介导miR-16成熟体模拟物(mimics)及阴性对照片段(NC)分别转染人卵巢癌顺铂耐药细胞株SKOV3/DDP。实时荧光定量PCR检测各组细胞中miR-16的表达;蛋白印迹法检测细胞中Bcl-2蛋白、c-myc蛋白的表达;四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测细胞的顺铂半数抑制浓度(IC50);caspase-3活性检测试剂盒检测细胞内caspase-3酶的活性;流式细胞仪检测细胞的凋亡率。结果:(1)SKOV3/DDP细胞顺铂耐药指数(RI)为5.33;(2)SKOV3/DDP细胞中miR-16表达水平明显低于SKOV3细胞,约为后者的1/10(P=0.000),转染miR-16 mimics后SKOV3/DDP细胞中miR-16水平升高约660倍(P=0.001);(3)SKOV3/DDP细胞Bcl-2、c-myc蛋白的相对表达量较SKOV3细胞明显升高,转染miR-16 mimics后SKOV3/DDP细胞Bcl-2、c-myc蛋白的相对表达量明显降低(P<0.01);(4)SKOV3/DDP细胞转染miR-16 mim-ics后,顺铂IC50(14.19±0.06)较转染NC组(22.52±0.60)明显降低(P=0.002),且顺铂作用后caspase-3的酶活力单位也明显升高(P=0.000);(5)顺铂(20μg/ml)作用24h、48h后,SKOV3组凋亡率明显高于SKOV3/DDP组,转染miR-16 mimics的SKOV3/DDP细胞凋亡率约为转染NC细胞的1.5倍(P<0.01)。结论:miR-16可能通过靶向下调上皮性卵巢癌细胞Bcl-2蛋白,并协同调节c-myc蛋白的表达,增强卵巢癌顺铂耐药细胞对顺铂诱导凋亡的敏感性,发挥逆转耐药的作用。     

槲皮素以及槲皮素联合顺铂对子宫颈癌细胞黏附、迁移和侵袭的影响

目的 探讨槲皮素以及槲皮素联合顺铂对宫颈癌细胞黏附、迁移和侵袭的影响.方法 以不同浓度(20、40、80 μmol/L)槲皮素以及槲皮素联合顺铂(10 μmol/L)处理宫颈癌细胞株HeLa细胞,采用细胞黏附实验、划痕实验和穿膜小室侵袭实验分别检测处理前后HeLa细胞黏附率、迁移速度以及侵袭力(以穿膜细胞数表示)的变化.结果 不同浓度的槲皮素处理后,随着槲皮素浓度从20 μmol/L增加至80 μmol/L,细胞黏附率由(82.2±1.5)%降至(48.4±1.1)%;细胞迁移速度由(7.26±0.20)μm/h降至(3.78±0.64)μm/h;穿膜细胞数由(124.3±1.5)个降至(90.7±2.1)个,分别比较,差异均有统计学意义(P<0.05).顺铂联合槲皮素处理后,随着槲皮素浓度从20 μmol/L增加至80 μmol/L,细胞黏附率由(42.6±1.2)%降至(27.5±1.7)%;细胞迁移速度由(2.20±0.33) μm/h降至(0.72±0.19) μm/h;穿膜细胞数由(78.7±2.5)个降至(44.0±4.0)个,分别比较,差异均有统计学意义(P<0.05).槲皮素联合顺铂处理后对HeLa细胞黏附、迁移和侵袭的抑制作用明显强于单纯槲皮素处理者(P<0.05).结论 槲皮素以及槲皮素联合顺铂能抑制HeLa细胞黏附、迁移及侵袭,槲皮素能增强顺铂对HeLa细胞黏附、迁移及侵袭的抑制作用.     

卵巢癌细胞对顺铂耐药及其逆转的实验研究

目的：探明卵巢癌对顺铂耐药的发生机理，并筛选出逆转其耐药性的有效调节剂。方法：建立对顺铂耐药的人卵巢癌细胞系ＳＫＯＶ３／ｃｐ，采用微囊包裹肿瘤细胞技术建立人类卵巢癌小鼠异种移植耐药模型。比较耐药细胞和非耐药细胞生化特征的差异，采用相应的耐药调节剂来进行耐药逆转实验。结果：在ＳＫＯＶ３细胞内，铂（Ｐｔ）累积浓度、Ｐｔ－ＤＮＡ加合物、ＤＮＡ链间交联指数（ＩＳＣ）分别是ＳＫＯＶ３／ｃｐ细胞的５．１、２．４和４．８倍（Ｐ＜０．０１，Ｐ＜０．０５，Ｐ＜０．０１）；二性霉素Ｂ（ＡｍＢ）和新生霉素（ＮＶＢ）能提高ＳＫＯＶ３／ｃｐ细胞内铂浓度或Ｐｔ－ＤＮＡ加合物浓度，从而完全或部分逆转ＳＫＯＶ３／ｃｐ对顺铂的耐药性。结论：导致ＳＫＯＶ３／ｃｐ对顺铂耐药的主要原因是细胞内药物浓度下降和对Ｐｔ－ＤＮＡ清除能力增强。ＡｍＢ和ＮＶＢ能够逆转ＳＫＯＶ３／ｃｐ对顺铂的耐药性。     

子宫内膜癌顺铂耐药细胞株的建立和鉴定及耐药机制研究

目的 建立子宫内膜癌顺铂耐药细胞株ISH/DDP,鉴定其生物学特性,并探讨其顺铂耐药的机制.方法 采用顺铂浓度逐步递增联合大剂量顺铂冲击方法,在体外连续诱导、培养子宫内膜癌细胞株Ishikawa细胞,建立子宫内膜癌顺铂耐药细胞株ISH/DDP.非放射性细胞增殖法(MTS法)测定ISH/DDP细胞对顺铂的耐药指数;绘制细胞生长曲线,计算细胞群体倍增时间;流式细胞术检测ISH/DDP细胞的细胞周期比例;免疫细胞化学法检测ISH/DDP细胞中耐药蛋白--乳腺癌耐药蛋白(BCRP)、P糖蛋白(P-gp)以及谷胱甘肽S转移酶π(GST-π)蛋白的表达水平,以综合积分表示.结果 Ishikawa细胞在体外采用顺铂浓度逐步递增联合大剂量顺铂冲击方法 连续诱导、培养,历时10个月,成功建立了子宫内膜癌顺铂耐药细胞株ISH/DDP,其耐药指数为3.77.Ishikawa细胞和ISH/DDP细胞的群体倍增时间分别为34.1 h和40.4 b,两者比较,差异有统计学意义(P<0.05).与Ishikawa细胞相比,ISH/DDP细胞的S期细胞比例[分别为(44.2±6.1)%和(55.3±8.4)%]增加,G2/M期细胞比例[分别为(11.9±0.7)%和(5.7±2.4)%]减少,差异均有统计学意义(P<0.05);G0/G1期细胞比例[分别为(44.3±5.7)%和(39.0±10.7)%]减少,但差异无统计学意义(P>0.05).ISH/DDP细胞中BCRP蛋白的表达水平为(16.3±2.0)分,高于Ishikawa细胞的(13.4±1.5)分,差异有统计学意义(P<0.05);而Ishikawa和ISH/DDP细胞中P-gp蛋白的表达水平分别为(16.1±1.0)和(15.5±1.2)分,GST-π蛋白的表达水平分别为(14.9±1.1)和(15.2±1.9)分,分别比较,差异均无统计学意义(P>0.05).结论 ISH/DDP细胞具有耐药表型及耐药细胞的生物学特性;其耐药机制可能与细胞中BCRP蛋白的过度表达相关.

Abstract：

Objective To establish the cisplatin(DDP)-resistant cell line from human endometrial cancer cell line Ishikawa and to investigate its resistant mechanism to DDP. Methods A resistant endometrial cancer cell line ISH/DDP was established by gradually increasing dose of cisplatin and high-dose stimulation. The resistant index was estimated by 3-(4,5-dimethylthiazol-zyl)-5-(3-carboxymethoxyphenyl-2-(4-sulfophenyl)-2H-tetrazolium,inner salt (MTS) assay. Cell growth curve, doubling time and cell cycle phase distribution were measured; drug-resistant protein of breast cancer resistance protein (BCRP),P-glycoprotein (P-gp) and glutathione-S-transferase-π (GST-π) were examined by immuocytochemistry. Results The DDP-resistant cell line ISH/DDP was established with the resistant index of 3. 77. The proliferation of ISH/DDP got slow, doubling time prolonged, which were 40. 1 hours, while it was 34. 1 hours in Ishikawa (P<0.05); and the cell number of G0/G1 phase [(44. 3 ±5. 7)% and (39. 0 ± 10. 7)% ,P >0. 05] and G2/M phase [(11.9 ±0.7)% and (5. 7 ±2. 4)% ,P <0. 05] decreased, while S-phase [(44. 2 ±6.1)% and (55. 3 ± 8. 4) % , P < 0. 05] increased compared with parent cells. The comprehensive score of the expression of BCRP in ISH/DDP was 16. 3 ± 2. 0, while it was 13.4 ± 1. 5 in Ishikawa (P < 0. 05). The score of the expression of P-gp in ISH/DDP and Ishikawa were 15. 5 ± 1. 2 and 16. 1 ± 1. 0 (P > 0. 05) ,respectively. The score of the expression of GST-π in ISH/DDP and Ishikawa were 15. 2 ± 1. 9 and 14. 9 ± 1.1 (P > 0. 05) . Conclusion ISH/DDP cell line showed a typical resistant phenotype and biological characteristics, which may be accounted for high BCRP expression.     

WWOX基因干扰对卵巢上皮性癌细胞顺铂耐药的影响

目的 研究应用RNA干扰(RNAi)技术逆转卵巢上皮性癌(卵巢癌)耐药细胞中WWOX基因的表达,并探讨WWOX基因与卵巢癌细胞顺铂耐药的关系.方法 将设计合成的针对WWOX基因的特异性小分子干扰RNA(siRNA),用脂质体瞬时转染法将其转染进WWOX基因高表达的卵巢癌顺铂耐药细胞株SKOV3/SB细胞中,用RT-PCR技术和蛋白印迹法分别测定转染前后SKOV3/SB细胞中WWOX Mrna及蛋白表达的变化;采用四甲基偶氮唑蓝比色法检测转染前后SKOV3/SB细胞对顺铂的耐药指数;应用流式细胞仪检测转染前后SKOV3/SB细胞的生长周期,高效液相色谱仪测定转染前后SKOV3/SB细胞中顺铂的药物浓度.实验分为5组:(1)SKOV3组:接种SKOV3细胞;(2)SKOV3/SB组:接种SKOV3/SB细胞;(3)SKOV3/SB阴性对照转染组:接种转染阴性对照序列的SKOV3/SB细胞;(4)SKOV3/SB脂质体转染组:接种转染脂质体的SKOV3/SB细胞;(5)SKOV3/SB siRNA转染组:接种转染siRNA的SKOV3/SB细胞.结果 转染48 h后,SKOV3、SKOV3/SB、SKOV3/SB阴性对照转染、SKOV3/SB脂质体转染、SKOV3/SB siRNA转染组细胞中WWOX Mrna的表达水平分别为0.647±0.025、2.239±0.030、2.392±0.041、2.379±0.047、1.219±0.032,WWOX蛋白的表达水平分别为1.368±0.028、1.639±0.031、1.580±0.025、1.552±0.034、0.653±0.017,SKOV3/SB siRNA转染组与其他各组比较,差异均有统计学意义(P<0.05).转染siRNA前、后,SKOV3/SB细胞对顺铂的耐药指数由5.04降至3.89;细胞周期中G1期由39.2%增至45.6%,S期由50.4%降至37.5%;耐药细胞内顺铂浓度由9.43 ns/L升至23.45 w/L,分别比较,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 针对WWOX基因合成的特异性siRNA能明显抑制SKOV3/SB细胞中WWOX Mrna和蛋白的表达,并能在一定程度上恢复其对顺铂的敏感性,推测WWOX基因可能参与了卵巢癌细胞的顺铂耐药过程.     

PTEN基因逆转卵巢上皮性癌细胞耐药的机制研究

目的通过检测PTEN基因在卵巢上皮性癌（卵巢癌）顺铂敏感细胞株0V2008及0V2008配对的顺铂耐药细胞株C13K中的表达,探讨转染PTEN基因能否逆转C13K细胞对顺铂的耐药及其相关机制。方法半定量RT-PCR技术和蛋白印迹法检测0V2008和C13K细胞中PTENmRNA和蛋白的表达。将野生型PTEN基因真核表达质粒在脂质体介导下转染C13K细胞,同时以转染空载体和未转染的C13K细胞作为对照,分别应用RT-PCR技术检测各组细胞PTENmRNA表达的变化,应用蛋白印迹法检测各组细胞PTEN、蛋白激酶B（AKT）及磷酸化AKT（p-AKT）蛋白表达的变化;四甲基偶氮唑蓝（M1Tr）比色法观察转染PTEN基因后C13K细胞对顺铂敏感性的变化,流式细胞仪分析顺铂作用后的细胞凋亡情况。结果（1）PTENmRNA在0V2008和C13K细胞中的表达水平分别为1．02±0.05和0．45±0.03,而0V2008、C13K细胞中PTEN蛋白的表达水平分别为1.02±0.07、0．55±0．03,两种细胞PTENmRNA和蛋白的表达水平分别比较,差异均有统计学意义（P〈0．05）。（2）PTEN基因转染48h后,C13K细胞中PTENmRNA、蛋白的表达水平分别为2.04±0．10和0．94±0．04,分别与转染空载体和未转染的C13K细胞比较,差异均有统计学意义（P〈0．01）;p-AKT蛋白的表达水平（0.94±0．07）较转染空载体（1．66±0．10）和未转染（1．68±0．14）的C13K细胞显著降低（P〈0．05）。（3）转染PTEN基因的C13K细胞对顺铂的半数抑制浓度（IC50）为（7.2±0．3）μmol／L,明显高于转染空载体和未转染的C13K细胞[分别为（12．7±0．4）、（13．0±0．3）μmol／L,P〈0,05]。（4）顺铂作用24h后,转染PTEN基因、转染空载体和未转染的C13K细胞的凋亡率分别为（41.7±0.9）％、（18．6±0．7）％和（15,3±0．8）％,前者明显高于后两者（P〈0．01）。结论PTEN基因在0V2008细胞中的表达明显高于C13K细胞。转染野生型PTEN基因能有效提高C13K细胞内PTEN基因的表达,并通过降低C13K细胞中AKT磷酸化的水平恢复C13K细胞对顺铂的敏感性。     

大蒜油单独及与顺铂联合对人宫颈癌Hela细胞生长影响的研究

目的 :探讨大蒜油对人宫颈癌Hela细胞体外生长的抑制作用 ,以及大蒜油增加Hela细胞对顺铂的敏感性 ,以期对药物治疗宫颈癌以及其他肿瘤寻找更加完善的途径。方法 :体外培养人宫颈癌Hela细胞 ,分别用大蒜油、顺铂、大蒜油加顺铂处理 4 8小时 ,采用四甲基偶氮唑蓝 (MTT)比色法检测大蒜油和顺铂及两者联合应用对Hela细胞的生长抑制作用。结果 :大蒜油在浓度为 12 5mg/L、2 5mg/L、5 0mg/L、10 0mg/L时对Hela细胞的抑制率分别为 2 3 82 %、37 2 1%、5 2 2 5 %、6 7 6 9% ,与对照组 (加入等量培养液 )比较 ,差异有非常显著性 (P <0 0 1)。顺铂在浓度为 0 5mg/L、1 0mg/L、2 0mg/L时对Hela细胞的抑制率为 38 13%、4 6 16 %、6 0 38%。两者合用可大大提高对Hela细胞的抑制作用 ,抑制率分别为 4 2 5 0 %、5 5 38%、6 6 98%、78 31% ,与单纯应用大蒜油或顺铂比较差异有非常显著性 (P <0 0 1)。结论 :大蒜油能抑制Hela细胞的生长 ,同时能够增加Hela细胞对顺铂的敏感性。     

顺铂和紫杉醇对人卵巢浆液性囊腺癌细胞系SKOV3ip 1多细胞团簇的耐药性实验研究

目的探讨人卵巢浆液性囊腺癌细胞系SKOV3ip1细胞形成的多细胞团簇(MCA)对顺铂和紫杉醇的敏感性及其可能机理.方法用液体重叠系统获得SKOV3ip1的MCA,以单层细胞为对照.分别加入浓度为0.8、8.0、40.0、80.0μmol/L的顺铂或浓度为0.2、2.0、10.0、20.0μmol/L的紫杉醇作用后,采用台盼蓝排除实验检测MCA细胞抑制率、体外耐药的克隆形成率实验检测MCA的克隆形成率、流式细胞仪分析检测MCA的细胞周期分布和细胞凋亡率.结果不同浓度的顺铂(0.8、8.0、40.0、80.0μmol/L)或紫杉醇(0.2、2.0、10.0、20.0μmol/L)作用后,MCA细胞抑制率明显低于单层细胞,差异有显著性(P顺铂=0.045,P紫杉醇＝0.003).顺铂(40μmol/L)作用12h后的MCA和单层细胞均无细胞克隆(≥50个活细胞组成的细胞团为1个细胞克隆)形成,紫杉醇(10μmol/L)作用12h后的MCA(n=100)的克隆形成率为7%,明显高于单层细胞的0%(P＜0.05).空白对照中,MCA的G0+G1期细胞较单层细胞明显增多(P=0.003);顺铂作用后MCA和单层细胞的细胞凋亡率分别为(1.898±0.562)%和(7.930±5.541)%,两者比较,差异无显著性(P＝0.100),细胞周期分布也无明显变化;紫杉醇作用后MCA的细胞凋亡率(5.510±2.517)%,与单层细胞的(10.098±2.416)%比较,差异有显著性(P＝0.012),紫杉醇在单层细胞中诱导的G2+M期细胞阻滞在MCA中出现缺失.结论SKOV3ipl的MCA对顺铂和紫杉醇化学治疗(化疗)呈现出不同程度的耐药性,尤其对紫杉醇耐药性更为明显.细胞周期分布的变化、G2+M期细胞阻滞的缺失及MCA的细胞凋亡率的降低,可能是引起MCA对紫杉醇化疗耐药的原因.     

应用双向凝胶电泳分析顺铂对人宫颈癌细胞系HCE_1蛋白质表达谱的影响

目的 :分析顺铂对人宫颈癌细胞系HCE1蛋白表达谱的影响。方法 :MTT比色分析确立顺铂处理HCE1细胞的浓度。利用固相pH梯度双向凝胶电泳分离顺铂处理前后人宫颈癌HCE1细胞的总蛋白质 ,凝胶银染显色 ,用Imagemaster软件行图像分析。结果 :顺铂处理HCE1细胞 30h的IC5 0值为 1.2 μg/ml。获得分辨率和重复性均较好的顺铂处理前后人宫颈癌细胞系HCE1双向凝胶电泳图谱 ,处理组和未处理组各 3块凝胶的平均蛋白质点数分别为 1136± 33和 96 3± 2 6 ,平均匹配率分别为 88.4 %和 87.3%。未处理组和处理组的 3块不同的胶间蛋白质点在IEF方向的偏差是 0 .6 76± 0 .15 5mm和 0 .86 5±0 .10 7mm ,在SDS PAGE方向上的偏差为 1.2 0± 0 .2 1mm和 1.38± 0 .2 36mm。制得未处理组和顺铂处理组平均胶 ,以平均胶进行匹配 ,匹配率为 81.2 %。筛选出差异蛋白质点 98个 ,其中 36个表达上调 ,37个表达下调 ,12个仅在HCE1未处理组表达 ,13个仅在顺铂处理组表达。结论 :建立了分辨率高且重复性较好的顺铂处理前后的人宫颈癌HCE1细胞系双向凝胶电泳图谱 ,识别到 98个差异蛋白质点 ,对这些差异蛋白质点进一步鉴定将为在蛋白质水平阐明顺铂的抗宫颈癌机制提供实验依据。     

RNA干扰技术沉默survivin基因逆转卵巢癌细胞株SKOV3/ADM耐药性的研究

目的检测survivin基因在卵巢上皮性癌(卵巢癌)耐药细胞株SKOV3/ADM及其亲本细胞株SKOV3中的表达水平,探讨以survivin基因为靶向的RNA干扰(RNA i)能否有效沉默survivin基因在SKOV3/ADM细胞中的表达,并能否有效逆转SKOV3/ADM细胞对化疗药物的耐药性。方法半定量RT-PCR、免疫荧光法检测survivin mRNA、蛋白在SKOV3/ADM及SKOV3细胞中的表达。以survivin基因为靶向的重组质粒pshRNA-survivin及紫杉醇作用于SKOV3/ADM细胞,将SKOV3/ADM细胞分为4组,即对照组、RNA i组、紫杉醇组、RNA i+紫杉醇组,RT-PCR技术检测各组细胞的survivinmRNA表达水平,吖啶橙/溴乙锭(AO/EB)荧光染色法及末端脱氧核苷酸转移酶介导的脱氧尿苷三磷酸标记法(TUNEL)检测各组细胞的凋亡情况。结果survivin mRNA在SKOV3/ADM、SKOV3细胞中的表达水平分别为99.1%、75.3%,SKOV3/ADM、SKOV3细胞的荧光细胞数分别为(59±5)、(42±3)个,两种细胞间比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。RNA i后SKOV3/ADM细胞中mRNA的表达水平由99.1%降低至7.9%。AO/EB荧光染色法、TUNEL法检测各组细胞凋亡数,紫杉醇组为(10.2±1.0)、(9.8±0.8)个,RNA i组为(48.5±4.9)、(49.5±4.3)个,RNA i+紫杉醇组为(71.5±6.8)、(68.3±5.7)个,RNA i+紫杉醇组与RNA i组比较,差异有统计学意义(P<0.05),RNA i+紫杉醇组与紫杉醇组比较,差异也有统计学意义(P<0.05)。结论survivin基因在SKOV3/ADM细胞中的表达显著高于SKOV3细胞。以survivin基因为靶向的RNA i可有效抑制SKOV3/ADM细胞中survivin基因的表达,有效增加了SKOV3/ADM细胞对化疗药物紫杉醇的敏感性,显著上调了SKOV3/ADM细胞的凋亡活性。     

环孢素逆转子宫颈癌细胞耐药性的研究

目的观察3′-酮基-去甲基苏氨酸1-缬氨酸2-环孢素(SDZ PSC 833,简称环孢素)逆转宫颈癌细胞对丝裂霉素(MMC)耐药性的效果.方法以人宫颈癌Hela细胞及其耐药亚系(Hela/MMC)细胞为材料,建立人类宫颈癌裸鼠异种移植瘤耐药模型,观察1或3 mg/L环孢素于体内外对Hela/MMC细胞生长抑制的情况及细胞形态学变化;并观察体内应用环孢素后荷瘤裸鼠肿瘤体积及瘤组织病理学改变.结果体外实验表明,无毒性剂量的环孢素可部分逆转Hela/MMC细胞对MMC的5倍耐药性;体内实验表明,环孢素和MMC联合应用,对Hela/MMC细胞裸鼠移植瘤的抑制率为83.18%,明显高于单纯应用MMC的抑制率35.79%.两者比较,差异有极显著性(P<0.01).结论无毒性剂量的环孢素于体内外可逆转Hela/MMC细胞对MMC的耐药性,其作为耐药修饰剂可用于宫颈癌的化学药物治疗.     

顺铂诱导卵巢癌SKOV3细胞自噬和凋亡的研究

目的:研究顺铂诱导卵巢癌SKOV3细胞自噬和凋亡的发生情况,并探讨可能的发生机制。方法:顺铂干预卵巢癌SKOV3细胞后,用MDC染色荧光显微镜观察自噬囊泡及流式细胞仪检测自噬率;AnnexinV-FITC/PI双染色流式细胞仪检测凋亡率及TUNEL法检测凋亡指数;Western blot检测自噬蛋白Beclin1,LC3-Ⅱ和凋亡蛋白caspase9,caspase3的表达。结果:顺铂干预SKOV3细胞后,MDC阳性细胞数明显增多;自噬率提高(P<0.05);凋亡率提高(P<0.05);凋亡指数提高(P<0.05);自噬蛋白Beclin1,LC3-Ⅱ和凋亡蛋白caspase9,caspase3表达均增强(P<0.05)。结论:顺铂不仅可诱导卵巢癌SK-OV3细胞凋亡,而且可诱导卵巢癌SKOV3细胞自噬性死亡。     

Clinical effects of irinotecan hydrochloride in combination with cisplatin as neoadjuvant chemotherapy in locally advanced cervical cancer

Objective

To evaluate the toxicity and efficacy of irinotecan plus cisplatin neoadjuvant chemotherapy (NACT) for cervical cancer.

Methods

A total of 120 cases with cervical cancer were divided into 2 groups and retrospectively reviewed: Sixty FIGO IB2-IIB patients in NACT group were treated with 2 cycles of irinotecan 60 mg/m² on days 1 and 8 plus cisplatin 60 mg/m² on day 1 followed by surgery. Sixty FIGO IB2-IIB patients in control group were treated directly with surgery.

Results

The 60 patients in NACT group received a total of 120 cycles. Grades III and IV neutropenia and diarrhea were seen in 15.8% and 11.7%, respectively, of all chemotherapy cycles. Six (10.0%) patients achieved complete remission, 33 (55.0%) achieved partial remission, 21 (35.0%) remained stable, and none had disease progression. Postoperatively the deep cervical stromal invasion and positivity of surgical margins were significantly fewer in the NACT group. The pelvic lymph node metastasis rate of responders to NACT was significantly lower than that of non-responders (12.8% vs 38.1%). With a median follow-up of 29 and 30 months, the intra-pelvic recurrence rate of the NACT group was significantly lower than that of the control group (3/60 vs 11/60, p = 0.023), the 2-year recurrence-free survival and the 2-year overall survival was 82.3% and 86.1% in the NACT group, and 86.3%, 87.9% in the control group with no significant difference. Multivariate analysis showed that response to NACT was the only factor associated with survival (p = 0.036).

Conclusion

Irinotecan plus cisplatin NACT for cervical cancer has high efficacy and tolerable toxicity, and can significantly reduce the rates of deep cervical stromal invasion and positive surgical margins. Pelvic lymph node metastasis decreases significantly in responders compared with non-responders. The response to NACT can be considered as an independent prognostic factor.     

阿司匹林联用PT化疗抑制人宫颈癌细胞株HeLa增殖的研究

目的:研究阿司匹林(ASA)联用PT方案[奥沙利铂(OXA)+多西紫杉醇(DOC)]抑制人宫颈癌细胞株HeLa增殖的作用。方法:倒置相差显微镜观察细胞形态学变化,MTT法检测并计算各组药物的细胞抑制率,流式细胞仪(FCM)检测细胞周期变化及细胞凋亡率。结果:ASA可抑制HeLa细胞生长,作用24h时将肿瘤细胞聚集在G0/G1期并可诱导细胞凋亡。ASA与PT联用可显著抑制HeLa细胞增殖(P<0.05),不同时间PT增敏比依次为1.33、1.32、1.56,且联合用药诱导细胞凋亡作用显著增强。结论:ASA与PT方案协同可抑制人宫颈癌HeLa细胞株增殖,ASA有望用于宫颈癌的内科治疗。