Beclin 1、LC3-Ⅱ及P62蛋白在上皮性卵巢癌中的表达及意义

目的 探讨上皮性卵巢癌中Beclin 1、LC3-Ⅱ及P62蛋白的表达及临床意义。方法 选取2011年6月—2013年3月我院手术切除并经病理学检查确诊的上皮性卵巢癌标本50例为实验组,同期手术切除正常卵巢组织20例作为对照,通过免疫组织化学SP法,检测标本中Beclin 1、LC3-Ⅱ及P62蛋白的表达情况,并结合临床病理资料进行分析。结果 在上皮性卵巢癌组织中,Beclin 1、LC3-Ⅱ蛋白的阳性表达率分别为46.00%(23/50)和42.00%(21/50),低于正常卵巢组织的95.00%(19/20)和85.00%(17/20);而P62蛋白的阳性表达率为72.00%(36/50),高于正常卵巢组织的10.00%(2/20),差异均具有统计学意义(P值均＜0.05)。在上皮性卵巢癌组织中,Beclin 1、LC3-Ⅱ蛋白的表达与FIGO分期、病理分级具有相关性(P＜0.05),而P62蛋白的表达与FIGO分期具有相关性(P＜0.05)。Beclin 1蛋白和LC3-Ⅱ蛋白在上皮性卵巢癌组织中的表达呈正相关(P＜0.01),P62蛋白的表达与Beclin 1、LC3-Ⅱ蛋白均呈负相关(P＜0.01)。 结论 在上皮性卵巢癌组织中,Beclin 1、LC3-Ⅱ和P62蛋白的异常表达,可导致自噬体形成减少和自噬功能减弱;可能与卵巢癌的发生、发展和预后不良有关。     

卵巢上皮性肿瘤中Skp2、p27kipl、E-cad的表达

目的检测Skp2、p27kipl和E-cad在卵巢上皮性肿瘤中的表达情况及其相互关系。方法采用免疫组化SP法，检测99例卵巢上皮性肿瘤组织中Skp2、p27kipl及E-cad的表达。结果p27kipl在卵巢良性肿瘤、交界性肿瘤的表达率分别为76．5％、70．6％高于卵巢癌29．2％（P〈0．05），在早期癌中的表达高于晚期癌（P〈0．05）。Skp2在卵巢良性肿瘤、交界性肿瘤的表达率分别为0、23．5％，均低于卵巢癌50．8％（P〈0．05），在早期癌的表达低于晚期癌（P〈0．05）。卵巢癌中skp2表达与组织分化有关，在低分化癌的阳性表达率高于高分化癌（P〈0．05），在组织学类型方面，浆液性癌中skp2的阳性表达率高于非浆液性癌（P〈0．05）。E—cad在良性肿瘤、交界性肿瘤和卵巢癌表达率分别为88．2％、82．4％、55．4％，恶性组低于良性组（P〈0．05）。E—cad在早期癌的表达率高于晚期癌（P〈0．05）。Skp2表达与p27kipl表达呈负相关（P〈0．05），E-cad表达与p27kipl表达呈正相关（P〈0．05），而E-cad表达与Skp2表达则呈负相关（P〈0．05）。结论skp2过度表达与p27kipl表达减少可能与卵巢上皮性肿瘤的发生发展密切相关，而E-cad在晚期卵巢癌中表达降低可能反映了卵巢癌分化程度的降低。     

CDH1基因启动子甲基化在上皮性卵巢癌转移方面的研究

目的探讨CDH1基因启动子甲基化对上皮性卵巢癌转移的影响。方法采用免疫组织化学方法检测38例正常卵巢上皮和80例上皮性卵巢癌组织中E-钙黏附素（E-cadherin）表达;应用甲基化特异的PCR（MSP）检测上述组织中CDH1基因启动子区甲基化;应用5-氮-2＇-脱氧胞苷（5-aza-CdR）使SKOV3细胞去甲基化,观察SKOV3细胞体外侵袭性的改变,并通过RT-PCR检测CDH1基因的改变。结果E-cadherin在正常卵巢组织中表达明显高于上皮性卵巢癌（P〈0．05）。34例CDH1基因启动子区甲基化全部出现在卵巢癌组织中,有淋巴结转移组织中甲基化明显高于无淋巴结转移者（P〈0．05）,而CDH1基因启动子区有甲基化的卵巢癌组织中E-cadherin表达明显降低（P〈0．05）。经5-Aza-CdR处理后的SKOV3细胞体外侵袭性降低（P〈0．01）,CDH1基因的表达明显上调（P〈0．01）。结论E-cadherin表达降低与上皮性卵巢癌转移关系密切,CDH1基因启动子区甲基化可能是导致E-cadherin蛋白表达减低的重要原因之一,因此启动子区甲基化与上皮性卵巢癌转移有关。     

转录因子Elf-1在上皮性卵巢癌中的表达及其意义

目的探讨转录因子Elf-1在上皮性卵巢癌中的表达及其临床意义,并探讨Elf-1与卵巢癌细胞增殖的相关性。方法收集31例上皮性卵巢肿瘤组织及3例正常卵巢组织标本,采用免疫组化S-P法测定Elf-1在上皮性卵巢癌中的表达并对其表达情况进行分析。结果在23例上皮性卵巢癌组织中Elf-1阳性表达15例（65．22％）。Elf-1的表达与组织学类型有关（χ2=6．54,P〈0．05）,与患者的年龄、FIGO临床分期差异无统计学意义（χ2=0．25和0．08,P〉0．05）。Elf-1在上皮性卵巢癌中的表达与c-Fos在上皮性卵巢癌中的表达呈正相关（Kappar=0．39,P〉0．05）。结论Elf-1在上皮性卵巢癌组织中呈高水平表达,且与原癌基因c-Fos的表达呈正相关,提示Elf-1可能通过影响上皮性卵巢癌细胞的增殖而参与其发生和发展。     

H3K9Ac在卵巢上皮性肿瘤中的表达及其临床意义

目的 研究组蛋白H3赖氨酸残基9位乙酰化（H3KgAc）在卵巢上皮性肿瘤中的表达及其与卵巢癌组织学分级、临床分期之间的关系。方法 采用免疫组织化学ABC法检测20例良性、16例交界性、40例恶性卵巢上皮性肿瘤中H3K9Ac的表达情况，并分析其与临床病理指标间的关系。结果 ①H3K9Ac在良性、交界性、恶性卵巢上皮性肿瘤中的表达逐渐降低，差异有显著统计学意义（P〈0．01）；②与粘液性囊腺癌相比，H3KgAc在浆液性囊腺癌中表达较低，差异有统计学意义（P〈0．05）；③H3KgAc的表达与卵巢上皮性癌的组织分化程度及临床分期有关，在Ⅲ、Ⅳ期卵巢癌中H3KgAc的表达明显低于Ⅰ、Ⅱ期卵巢癌（P〈0．01）；随着组织分化程度降低，H3KgAc表达也逐渐降低，两两比较差异有统计学意义（P〈0．05）。结论 H3KgAc在良性、交界性、恶性卵巢上皮性肿瘤中的表达差异显著，且随着卵巢上皮性癌恶性程度的增高，表达逐渐降低，H3K9Ac可能为卵巢上皮性肿瘤的良恶性及其预后判断提供一个新的生物学指标。     

HER-2/neu在卵巢上皮性肿瘤中的表达及意义

目的 研究HER－2／neu（c-erbB-2)在卵巢上皮性肿瘤中的表达及意义。方法 收集106例卵巢上皮性肿瘤（恶性54例,交界性33例,良怀19例）及临床资料。按国际妇产科联合会（FIGO）标准进行分期,卵巢癌中Ⅰ,Ⅱ期中19例（19／54,35．2％）,Ⅲ,Ⅳ期共35例（35／54,64．8％）,交界性肿瘤均为Ⅰ期。采用标记链霉素卵白素生物素（LSAB）法用HER－2／neu多克隆抗体（DAKO,A0485）行免疫组织化学染色。结果 该蛋白表达的阳性率在良性肿瘤为47．4％（9／19）,过表达（3＋）为0;交界性肿瘤为84．8％（28／33）,过表达率为9．15（3／33）,恶性肿瘤为85．2％（46／54）,过表达率为25．9％（14／54）。良性与交界性以及良性与恶性之间的HER－2／neu蛋白表达率的差异有显著性（P＜0．02,P＜0．01）;该蛋白的过表达率在有转移和无转移的病例之间差异有显著性意义（P＜0．001）。结论 HER－2／neu的过表达与卵巢癌的侵袭性生物学行为相关。     

PTEN蛋白和FHIT蛋白在上皮性卵巢癌中的表达及临床病理意义

目的检测抑癌基因蛋白PTEN、FHIT表达在卵巢癌发展中的作用及相关病理机制。方法采用免疫组化法检测45例卵巢癌组织、10例卵巢交界性肿瘤、10例卵巢良性肿瘤、5例正常卵巢组织中PTEN和FHIT蛋白表达，并比较这两种蛋白表达与临床病理特征的关系。结果卵巢癌和交界性卵巢肿瘤组织中PTEN蛋白和FHIT蛋白表达显著低于卵巢囊肿和正常卵巢（P〈0．05），在上皮性卵巢癌中这两种蛋白表达与组织分化程度正相关（P〈0．05），它们表达降低或失活与卵巢癌淋巴结转移相关（P〈0．005），但与组织学类型无显著相关性。PTEN蛋白表达与恶性肿瘤临床分期负相关．FHIT蛋白表达与临床分期无显著相关性。这两种蛋白在上皮性卵巢癌中表达的相关性有统计学意义（P=0．0343）。结论在卵巢癌发生过程中PTEN蛋白表达降低起到重要作用，预示着卵巢癌的不良预后；FHIT蛋白缺失是恶性上皮性卵巢肿瘤的特征，其表达缺失在卵巢肿瘤的发生发展中起一定作用，可能与上皮性卵巢癌的恶性进展及转移有关．这两种蛋白可能协同促进卵巢癌的发生、发展、浸润及转移。     

TopoⅡα和抑癌基因PTEN在卵巢上皮性癌中的表达及其意义

目的探讨拓扑异构酶Ⅱα（TopoⅡα）和PTEN蛋白在卵巢上皮性癌组织中的表达及与临床病理特征的关系。方法应用免疫组化法检测56例卵巢上皮性癌组织,30例良性卵巢肿瘤及15例正常卵巢组织中TopoⅡα和PTEN蛋白的表达。结果 （1）TopoⅡα在良性卵巢肿瘤组织及正常卵巢组织中的阳性表达率为16.7%、13.3%,显著低卵巢癌组织的53.6%,差异有显著性（P〈0.05）;TopoⅡα表达与卵巢癌临床分期、淋巴结转移有关,而与年龄、病理类型、组织学分级无关。（2）PTEN蛋白在卵巢癌组织中的阳性表达率为33.9%,低于正常卵巢和良性上皮肿瘤组织的93.3%,100%（P〈0.05）;PTEN蛋白表达与卵巢癌临床分期、组织学分级、淋巴结转移有关,而与年龄、病理类型无关。（3）卵巢癌组织中TopoⅡα和PTEN蛋白间的表达呈负相关（r=-0.507,P〈0.05）。结论 TopoⅡα和PTEN蛋白的异常表达可能与上皮性卵巢癌的发生、发展、侵袭性和预后相关,通过对它们的检测可以对卵巢癌的预后及化疗提供理论依据。     

上皮性卵巢癌中Cyclin D1和p27的表达及其临床意义

目的探讨Cyclin D1和p27蛋白在上皮性卵巢癌中的表达及其与临床病理间的关系。方法利用免疫组化S-P法测定Cyclin D1和p27蛋白在62例上皮性卵巢癌中的表达,比较Cyclin D1、p27蛋白与卵巢癌的各项临床病理指标间的关系及两者间的关系。结果在上皮性卵巢癌中,Cyclin D1蛋白的表达在FIGO分期Ⅰ-Ⅱ期低于Ⅲ-Ⅳ期,组织学G1-G2组低于G3组,术后残留癌组织≤2cm组低于〉2cm组,淋巴无转移组低于有转移组;而p27蛋白在FIGO分期Ⅰ-Ⅱ期高于Ⅲ-Ⅳ期,组织学G1-G2组高于G3组,淋巴无转移组高于有转移组,以上各组间均有统计学差异（P〈0.05）;在上皮性卵巢癌中Cyclin Dl、p27蛋白的表达呈负相关（rs=-0.255,P〈0.05）。结论CyclinDl、p27蛋白的异常表达可能与上皮性卵巢癌的发展及恶性程度有关,可作为评估上皮性卵巢癌恶性程度和预后的指标。     

HIF-1α和VEGF在宫颈癌中的表达及相关性研究

目的：探讨缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）及血管内皮生长因子（VEGF）在宫颈癌发生发展过程中蛋白表达情况及两者的相关性。方法：应用免疫组织化学S-P方法检测10例正常宫颈（NCE）、18例宫颈上皮内瘤变（CIN）、77例宫颈癌（ICC）组织中HIF-1α和VEGF蛋白的表达情况。结果：在正常宫颈上皮、宫颈上皮内瘤变组织、宫颈癌（Ⅰ—ⅡA期）组织中，HIF．1d蛋白的阳性表达率分别是0．00％、33．33％、70．13％（P〈0．05），VEGF蛋白的阳性表达率分别为10．00％、44．44％、74．00％（P〈0．05）；且随HIF—1α表达增强，VEGF阳性表达率递增，两者呈正相关（P〈0．05）。结论：HIF-1α及VEGF的表达与宫颈癌的发生发展密切相关且两者呈正相关，HIF-1α蛋白可能以转录激活的形式上调VEGF基因的表达，诱导血管生成，促进了宫颈癌的发生发展。     

CD117和Nestin在卵巢上皮性癌组织中的表达及临床意义

目的检测CD117及Nestin在卵巢上皮癌（EOC）中的表达水平,并探讨其临床意义。方法选择河北省邯郸市中心医院病理存档的石蜡标本80份,其中20份为正常卵巢标本,60份为卵巢上皮癌标本,采用免疫组化法（SP法）检测其CD117及Nestin的表达水平,并分析其与临床病理因素之间的关系。结果 CD117及Nestin在正常卵巢组织和卵巢上皮癌中的阳性表达率分别为10.0%、65.0%和5.0%、38.3%,差异有统计学意义（P〈0.05）。CD117及Nestin在EOC组中的表达水平与其FIGO分期及病理分级有关,在Ⅲ-Ⅳ期、低分化组（G3）比Ⅰ-Ⅱ期、高中分化（G1、G2）组表达率高（P〈0.05）。通过Kaplan-Meier生存曲线了解CD117和Nestin在预测卵巢癌预后中的价值。结论CD117与Nestin在卵巢上皮性癌中高表达,CD117及Nestin可能促进了卵巢上皮癌的发生、发展,并可能作为卵巢癌干细胞标志物用于判断卵巢上皮性癌的预后。     

免疫相关GTP酶Irgm1对小鼠暂时性大脑中动脉缺血再灌注模型脑神经元自噬发生的影响

目的 探讨免疫相关GTP酶1(Irgm1)在小鼠暂时性大脑中动脉缺血再灌注模型(tMCAO)中的表达及其对tMCAO小鼠大脑神经元内自噬发生的影响.方法 采用western blotting和免疫荧光染色,检测Irgm1和自噬相关基因LC3I/Ⅱ及P62在Irgm1+/+小鼠tMCAO脑组织内的表达水平及细胞定位;进一步比较Irgm1+/+及Irgm1-/-小鼠tMCAO大脑神经元内自噬发生的差异.结果 相比于假手术(sham)组,Irgm1在Irgrm1+/+小鼠tMCAO脑组织中表达明显增高,且主要分布于损伤侧皮层神经元内;同时我们也证实在小鼠tMCAO脑组织中LC3-Ⅱ表达增加(t=-16.448,P＜0.01),面P62表达明显减低(t=3.975,P＜0.05).我们进一步实验发现Irgm1-/-小鼠tMCAO脑组织内LC3-Ⅱ表达量低于Irgm1+/+小鼠tMCAO(t=4.073,P＜0.05),而P62表达量高于Irgm1+/+小鼠tMCAO(t=-3.383,P＜0.05).结论 在小鼠tMCAO模型中,Irgm1参与调节大脑神经元的自噬活动.     

RACK1与小鼠空间学习记忆的相关性研究及自噬相关因子测定

目的:研究RAKC1与小鼠空间学习记忆的相关性,同时通过自噬相关因子的检测探索自噬在该相关性中所起作用。方法:通过侧脑室注射Aβ25-35(10μL,1mg·mL-1)诱导小鼠学习记忆障碍,通过Morris水迷宫评价小鼠的空间学习记忆能力,采用HE染色法观察小鼠海马神经元损伤情况,同时以Realtime RT-PCR及Western blotting法分别测定小鼠海马组织中RACK1的mRNA及蛋白水平并将二者分别与小鼠空间学习记忆能力进行相关性分析。进一步采用Realtime RT-PCR法检测Beclin1的mRNA水平,采用Western blotting法检测BECLIN1及LC3II/LC3I的蛋白水平,并将两种蛋白水平分别与RACK1蛋白水平进行相关性分析。结果:侧脑室注射Aβ25-35明显导致小鼠空间学习记忆障碍(P=0.021)及海马神经元的广泛损伤(P=0.003),同时小鼠海马RACK1mRNA和蛋白水平也显著降低(P=0.00,P=0.05),且二者分别与小鼠的空间学习记忆能力正相关(P=0.05,P=0.011)。进一步研究发现,Aβ25-35导致小鼠海马BECLIN1、LC3II/LC3I蛋白水平增高(P=0.00,P=0.01)同时这两种蛋白水平分别与RACK1蛋白水平呈负相关(P=0.021,P=0.005)。结论:小鼠RACK1蛋白水平与空间学习记忆过程正相关,可能通过负性调节自噬过程介导。     

CyclinD1和PCNA在子宫内膜癌中表达及临床意义

目的探讨CycliD1和PCNA在子宫内膜癌中的表达及临床意义。方法应用免疫组化法检测50例子宫内膜癌,22例子宫内膜不典型增生和8例正常子宫内膜中CyclinD1,PCNA的表达。结果 CyclinD1和PCNA在子宫内膜癌中的阳性表达率分别为54%(27/50)和68%(34/50),明显高于正常子宫内膜组(P0.05)。子宫内膜癌中,CyclinD1的表达与FIGO分期和淋巴结转移密切相关(P0.05),PCNA的表达与病理分级和淋巴结转移密切相关(P0.05)。相关性分析显示,CyclinD1和PCNA在子宫内膜癌中的表达呈正相关(r=0.742,P0.05)。二者协同异常表达者生物学行为较好。结论 CyclinD1和PCNA可能在子宫内膜癌发生发展中起重要作用,可作为评估预后的指标。     

Dact1基因在结直肠癌组织中的表达及其相关性研究

目的：观测Dact1基因在结直肠癌组织的表达及其启动子甲基化状态,并探讨它们之间的关系及在结直肠癌发生中的作用.方法：采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测结直肠癌组织、癌旁组织各50例及正常对照组织20例Dact1基因mRNA的表达情况,甲基化特异性PCR（MSP）检测Dact1基因启动子甲基化状态.结果：结直肠癌组中,9例Dact1基因mRNA失表达（18%）,20例表达低于正常对照组（40%）;癌旁组织组中,1例Dact1基因mRNA失表达（2%）,3例表达低于正常对照组（6%）;正常对照组中,1例Dact1基因mRNA低表达（5%）.Dact1基因在癌组织、癌旁组织、正常对照组织中的甲基化阳性率分别为46%、12%、5%,癌组织组与癌旁组织组及正常对照组阳性率比较,差异均有统计学意义（P＜0.01）,而癌旁组织组和正常对照组阳性率比较,差异无统计学意义（P＞0.05）.Dact1基因mRNA的失表达（低表达）与其启动子甲基化状态的相关性分析有统计学意义（P＜0.05）.结论：Dact1基因mRNA的失表达（低表达）可能参与了结直肠癌的发生发展,其失表达可能与Dact1启动子区甲基化相关.     

MMP-3和 MMP-7在上皮性卵巢癌中的表达及临床病理意义

目的：探讨基质金属蛋白酶-3（MMP-3）与基质金属蛋白酶-7（MMP-7）在上皮性卵巢癌中的表达及与卵巢癌临床病理特征之间的关系。方法采用免疫组化法对50例上皮性卵巢癌组织、10例正常卵巢组织标本中 MMP-3和 MMP-7的表达情况进行检测。结果MMP-3与 MMP-7在上皮性卵巢癌组织中的表达率明显比正常卵巢组织高,差异有统计学意义（χ^2＝17.29,P ＜0.05;χ^2＝11.26,P ＜0.05）。 MMP-3、MMP-7的阳性表达与卵巢癌的临床分期（χ^2＝11.59,P ＜0.05;χ^2＝4.56,P ＜0.05）、病理分级（χ^2＝16.62,P ＜0.05;χ^2＝4.43, P ＜0.05）显著正相关;有淋巴结转移者 MMP-3和 MMP-7的表达高于无淋巴结转移者,差异有统计学意义（χ^2＝4.9,P ＜0.05;χ^2＝5.4,P ＜0.05）;但二者的表达与组织类型无关。结论 MMP-3与 MMP-7在卵巢癌中表达增高,且与临床分期、病理分级和淋巴结转移有关。 MMP-3、MMP-7高表达在上皮性卵巢癌的发生、发展过程中起重要的作用。     

维生素D受体基因启动子Fok I多态性与尿钙浓度的关系

目的 研究维生素D受体（VDR）基冈启动子Fok Ⅰ多态性与尿钙浓度之间的关系.方法 应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）对50例泌尿系结石（结石组）及50例非泌尿系结石患者（对照组）的外周血进行Fok I多态性检测,分析两组间基因型和等位基因的频率分布,并用常规尿生化分析仪比较两组的24 h尿钙浓度.结果 结石组基因型分布：FF 28%（14/50）,Ff 52%（26/50）,ff 20%（10/50）;对照组：FF 34%（17/50）,Ff 56%（28/50）,ff10%（5/50）,其中FF和ff基因型分布在两组中差异有统计学意义（P〈0.05）.结石组与对照组等位基因F分布频率分别为54%（54/100）和62%（62/100）（P〉O.05）;f分别为46%（461100）和38%（381100）（P〈0.05）.结石组FF、Ff、ff基因型的24 h尿钙浓度分别为（0.030±0.008）mmol/kg、（0.037±0.009）mmol/kg和（0.081±0.013）mmol/kg,对照组分别为（0.028±0.006）mmol/kg、（0.036±0.002）mmol/kg和（0.043＋0.003）mmol/kg,FF和Ff基因型在两组中尿钙浓度之间差异没有统计学意义（P〉0.05）,而ff基因型差异有统计学意义（P〈0.05）.结论 VDR基因起始密码子中Fok I多态性与泌尿系结石患者尿钙浓度升高有关系.