大鼠坐骨神经施万胶质细胞条件培养液促进背根节神经元的生长

从大鼠坐骨神经分离、纯化施万胶质细胞 ,再经培养后收集施万胶质细胞的无血清条件培养液。用盖玻片培养法与快速自动比色微量分析法研究施万胶质细胞条件培养液对背根节神经元生存以及神经元活动的影响。结果发现施万胶质细胞条件培养液能够明显提高背根节神经元的体外存活率 ,以及增强其神经元的活力。表明施万胶质细胞具有很强的神经营养性作用大鼠坐骨神经施万胶质细胞条件培养液促进背根节神经元的生长@朱道立$南京师范学院生命科学与技术系!南通226007坐骨神经;;施万胶质细胞;;细胞培养;;神经营养因子;;大鼠     

miRNA-338促进施万细胞成髓鞘

目的:探讨在周围神经损伤后miR-338对大鼠施万细胞髓鞘形成的调控作用及机制.方法:采用实时荧光定量PCR检测损伤后坐骨神经中miR-338的表达变化;采用体外背根节神经元与施万细胞共培养实验,MBP染色检测miR-338模拟物对施万细胞再分化和成髓鞘的作用;芯片检测过表达miR-338对体外培养的施万细胞转录组的影...     

芍药苷干预施万细胞外泌体对背根神经元细胞凋亡的作用

目的 探讨芍药苷(paeoniflorin,PF)干预高糖环境施万细胞(Schwann cell,SCs)外泌体(exosomes,EXOs)对背根神经节神经元(dorsal root ganglion neurons, DRGn)细胞凋亡的影响。方法 取高糖环境SCs,培养24h,透射电镜观察EXOs的形态,蛋白印迹法(Western blot)鉴定EXOs特异性标志蛋白和氧化应激的蛋白表达;将SCs来源的EXOs与DRGn共培养24h,激光共聚焦显微镜观察DRGn摄取SCs来源EXOs的情况,Western blot法检测DRGn中影响细胞凋亡蛋白的表达水平。结果 EXOs形态为双层膜囊泡结构,直径在40～100nm;EXOs中标记蛋白CD63表达证实了EXOs特异性;EXOs中氧化应激蛋白表达升高,尤其是PF干预SCs来源EXOs中Nrf2、HO-1的表达升高更明显;SCs来源EXOs被DRGn摄取,分布于DRGn细胞核周围;经PF干预SCs来源EXOs影响DRGn促凋亡蛋白GADD153和Bax表达显著降低,抗凋亡蛋白Bcl-2表达明显增加。结论 PF通过SCs EXOs携带氧化应激信息,影响DRGn中促凋亡蛋白表达减少,抗凋亡蛋白表达增加,从而减轻DRGn细胞凋亡,有利于改善糖尿病周围神经病变。     

施万细胞样细胞对大鼠背根神经节细胞突起生长和神经生长因子表达的影响及其机制

探讨施万细胞样细胞（SCLCs）对大鼠背根神经节（DRG）细胞突起生长和神经生长因子（NGF）表达的影响,阐明SCLCs促进DRG细胞生长的作用及其机制。     

坐骨神经源性因子对培养中成年青蛙背根节神经元的作用

目的 探讨离断的坐骨神经分泌的可溶性因子对培养中的成年青蛙背根神经节（ｄｏｒｓａｌ ｒｏｏｔ ｇａｎｇｌｉｏｎ,ＤＲＧ）神经突起生长及形态学的影响。方法 分离成年青蛙ＤＲＧ神经元培养于含有离断的ＳＮ条件性培养基（ＳＮＣＭ）中,检测ＳＮＣＭ促进神经突起生长的量效和时效作用及对生长的神经突起形态学的影响。结果 在０．１－５ｍｇ／Ｌ蛋白质量浓度范围内,ＳＮＣＭ促进神经突起生长的作用有蛋白质量浓度依赖关系     

背根节压迫大鼠脊髓背角广动力神经元电生理学特性研究

目的探讨大鼠腰4、5背根神经节慢性压迫（chronic compression of dorsal root ganglion,CCD）损伤后,脊髓背角广动力（widedynamicrange,WDR）神经元电生理学特性的改变。方法健康SD大鼠随机分为正常组和CCD组（每组12只）,分别检测机械痛敏和热痛敏行为,并利用在体细胞外电生理学方法记录脊髓背角WDR神经元放电。结果CCD术后大鼠出现了机械痛敏和热痛敏行为。与正常组大鼠相比,CCD组大鼠脊髓背角WDR神经元兴奋性增高,表现为有自发放电的神经元比例增加、放电频率增加,对外周感受野轻刷、钳夹等刺激的反应性增强。36．36％（12／33）的CCD组大鼠WDR神经元对Aβ纤维刺激出现后放电现象。结论大鼠腰4、5背根节慢性压迫后引起WDR神经元的兴奋性增加,其可能参与神经病理性疼痛的发生。     

人神经干细胞源施万样细胞微囊泡促进大鼠神经元轴突生长

目的: 探究人神经干细胞源施万样细胞微囊泡对大鼠神经元轴突生长的影响。方法: 选取出生4~5 d的SD大鼠乳鼠,摘取背根神经节(dorsal root ganglion, DRG),获得DRG神经元;用施万样细胞微囊泡刺激DRG神经元,行βⅢ 微管蛋白免疫荧光染色,观察轴突生长情况;分别用0、5、20、40 mg/L施万细胞微囊泡刺激神经元样N2a细胞19 h,用荧光定量PCR检测N2a细胞生长相关蛋白43(growth associated protein 43, GAP43) mRNA表达;分别用0、20、40 mg/L施万细胞微囊泡刺激N2a细胞48 h,行过碘酸雪夫染色,检测细胞内糖原生成情况。结果： 施万样细胞微囊泡组的DRG神经元轴突长度明显长于PBS组(P<0.05)。施万样细胞微囊泡可被N2a细胞吞噬。与0 mg/L组相比,5 mg/L组GAP43 mRNA表达差异无统计学意义(P>0.05);20、40 mg/L组GAP43 mRNA表达量、突起增长率及碘酸雪夫染色细胞阳性率均明显高于0 mg/L组(P均<0.05)。结论： 施万细胞微囊泡在体外能够促进大鼠神经元轴突生长。     

大鼠背根节内两类兴奋性神经元的放电特征

目的:观察大鼠背根节(DRG)神经元兴奋性分类的放电特征.方法:在新鲜分散的中、小型大鼠背根节神经元运用全细胞膜片钳技术,观察给予胞内去极化,超极化电流刺激引起细胞放电的特征.结果:根据大鼠背根节神经元的放电特征可将它们区分为两类兴奋性.1类:神经元兴奋性与刺激强度相关,逐渐增强的去极化刺激可引发频率由低到高的动作电位.一般于超极化刺激后不产生反跳动作电位.动作电位的幅值一致,符合"全或无"定律.2类:神经元的兴奋性与去极化刺激强度关系不明显,神经元放电频率比较稳定,不随刺激强度的增强而增加,放电前后有规律的膜电位振荡.于较弱的超极化刺激后可产生反跳动作电位.动作电位的幅值不一致.结论:大鼠DRG两类兴奋性神经元各具不同的放电特征.     

用苏木精染色法识别存活与死亡的培养鸡胚背根节神经元

背根节(dorsal root ganglia，DRG)是脊椎动物脊髓初级传人神经元胞体的聚集体，位于椎骨之间的椎间孔内．体外培养的DRG，一般取材于胚胎或新生动物．其中，鸡胚是最方便获得且最容易控制胚龄的理想动物．苏木精碱性染料是目前常用的对细胞核染色的方法．本实验采用悬滴培养法在体外培养鸡胚背根节，直接用苏木精染色，以观察苏木精染色对于区分培养鸡胚背根节神经元存活的效果．     

大鼠原代背根神经元和雪旺细胞在随机及有序排列聚甲基丙烯酸甲酯电纺纳米纤维上共培养的形态学

目的: 探讨聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA)电纺纳米纤维支架的拓扑线索对于大鼠原代背根神经元(DRGn)培养及其与雪旺细胞(SCs)共培养的影响。 方法: 构建具有随机分布和轴向有序排列拓扑结构的PMMA电纺纳米纤维,分别为随机和有序PMMA电纺纳米纤维组,以PMMA薄膜作为对照组;分离纯化大鼠原代DRGn和SCs,与上述各组PMMA电纺纳米纤维共培养;利用慢病毒技术转染荧光蛋白基因作为显色方法,观察PMMA电纺纳米纤维的拓扑线索对于DRGn神经突生长的影响,在共培养实验通过荧光图像的快速傅立叶转换(FFT)及半高全宽值(FWHM)的计算,定量分析电纺纤维对DRGn神经突和SCs细胞突起的接触引导作用。 结果: 大鼠原代DRGn和SCs均能够顺利在PMMA材料上贴壁并生长;与PMMA薄膜组比较,随机和有序PMMA电纺纳米纤维组DRGn平均神经突数量及神经突长度差异无统计学意义(P>0.05);共培养实验中,电纺纤维的拓扑线索对于 DRGn神经突和SCs细胞突起的生长均具有明显的接触引导作用,与PMMA薄膜组和随机PMMA电纺纳米纤维组比较,有序PMMA电纺纳米纤维组DRGn和SCs的FWHM值均明显降低 (P<0.01),有序PMMA电纺纳米纤维能够在空间上促成DRGn神经突和SCs细胞突起建立共定位。 结论: 有序PMMA电纺纳米纤维具有作为脊髓损伤(SCI)后植入性支架材料的潜力,其拓扑线索有可能加速SCs的轴突髓鞘化过程。     

乙酰胆碱对大鼠慢性压迫背根节神经元放电的影响

目的研究乙酰胆碱(ACh)对大鼠慢性压迫背根节(DRG)神经元放电的影响。方法采用单纤维记录神经元自发放电的方法,在DRG慢性压迫模型上观察ACh对受损DRG神经元自发放电的影响。结果受损DRG神经元有丰富的自发放电,77.9%有自发放电的受损DRG神经元对ACh有反应,其中反应类型有单纯兴奋和先兴奋后抑制两种形式,而且反应的幅度随ACh浓度的延长而逐渐增大。结论在慢性压迫DRG神经元有大量的自发放电,ACh可明显影响受损DRG神经元的自发放电。     

CXCR4对大鼠背根神经节中交感芽生形成的干预作用

 目的 研究CXCR4在大鼠脊神经结扎(spinal nerve ligation, SNL)后对背根神经节(dorsal root ganglion, DRG)交感芽生形成的干预作用。方法 将大鼠随机分为AMD3100(CXCR4特异抑制剂)实验组(n=16)、AMD3100对照组(n=8)、对照组(n=16)和空白对照组(n=16),对AMD3100实验组和对照组的大鼠行SNL术,术后7天内对AMD3100实验组大鼠每天给予AMD3100,术后3、5、7、10、14天(d3、d5、d7、d14)检测机械痛阈(mechanical withdrawal threshold, MWT),分别用实时PCR和Western blot检测神经生长因子(nerve growth factor, NGF)的RNA和蛋白质水平,d7和d14行免疫荧光检测DRG中交感芽生。结果 与对照组相比,AMD3100实验组大鼠在d5、d7和d14的MWT均显著缓解,抑制CXCR4后,AMD3100实验组大鼠DRG中交感芽生在d7较对照组显著减少,但在d14减少不明显,且NGF的RNA和蛋白质水平均较对照组显著降低。结论 抑制CXCR4能改善大鼠SNL术后d5～d14的疼痛行为,并能减少d7的蓝状结构数量。     

福尔马林足底炎性疼痛大鼠模型的建立及其背根神经节辣椒素受体表达水平

目的 评价福尔马林足底炎性疼痛大鼠模型的疼痛行为学表现,并对该模型大鼠背根神经节辣椒素受体表达水平进行分析.方法 SD大鼠24只,随机分为2组,即对照组（n=12）及福尔马林模型组（n=12）.对照组不予处理,福尔马林模型组于左后足底注射5％福尔马林0.1 mL,观察造模后大鼠疼痛行为学反应,并以Dubuisson评分方法进行记录比较;2组大鼠在指定时间点取出L3-6节段背根神经节,运用RT-PCR、蛋白质印迹（Western blot）检测辣椒素受体在大鼠背根神经节中的表达水平.结果 福尔马林模型组大鼠呈典型的双相伤害性行为反应,大鼠疼痛反应120 min内积分在5～1,对照组无疼痛反应.福尔马林模型组大鼠背根神经节辣椒素受体表达水平显著增加,与对照组比较有显著性差异（P＜0.05）.结论 福尔马林足底炎性疼痛大鼠模型可以产生持续的、可信的痛觉过敏,并诱导大鼠背根神经节辣椒素受体表达水平增加,是研究组织损伤诱发炎性疼痛机制的较佳模型选择.     

地昔帕明对大鼠背根神经节神经元钠电流的影响

目的:研究地昔帕明(desipramine,DMI)对大鼠背根神经节神经元电压依赖性钠电流的影响。方法:分离单个大鼠背根神经节,应用全细胞膜片钳技术观察地昔帕明对内向钠电流(INa)的影响。结果:地昔帕明浓度依赖性地抑制INa,即分别加入10,50,100μmol/L的DMI可使钠电流的抑制率达(5.56±0.62)%,(54.67±13.39)%和(86.63±16.08)%,并且,50μmol/L的DMI可使INa稳态失活曲线左移,V1/2分别由对照组的-(43.71±0.79)mV降低至-(47.91±1.14)mV,k值无明显变化。结论:DMI浓度依赖性地抑制背根神经节神经元Na+通道,并改变通道的失活,这可能是其影响痛觉传导通路,产生镇痛作用的机制之一。     

人参皂苷Rb1对胎鼠背根神经节损伤的保护作用

目的观察不同浓度人参皂苷Rb1对损伤胎鼠背根神经节（DRG）神经元形态学改变的影响,探讨人参皂苷Rb1对谷氨酸引起的兴奋性神经毒损伤的保护作用,为Rb1的进一步研究和临床应用提供理论依据。方法选择胎龄为15 d的SD大鼠,获取DRG神经元并进行体外分散培养48 h后,随机分为对照组、谷氨酸损伤组、谷氨酸损伤＋低浓度Rb1（10μg/ml）保护组和谷氨酸损伤＋高浓度Rb1（100μg/ml）保护组,继续培养12 h。终止培养后,倒置相差显微镜观察各组神经元的生长状态,MTT检测不同浓度人参皂苷Rb1孵育的背根神经节神经元的凋亡增殖情况。结果对照组DRG神经元细胞贴壁呈单层散在分布,少部分出现细胞聚集现象,突起较长且互相交织形成网状;谷氨酸损伤组DRG神经元细胞聚集现象明显,神经元突起变短、断裂甚至消失;谷氨酸损伤＋Rb1保护组DRG神经元细胞部分呈簇状聚集,部分呈单个散在分布,突起仍然相互交织。MTT结果显示谷氨酸损伤＋Rb1保护组细胞存活率均高于谷氨酸损伤组,但高浓度Rb1保护组与低浓度Rb1保护组之间差异无统计学意义。结论人参皂苷Rb1可以影响损伤胎鼠DRG神经元的形态学改变和凋亡增殖情况,对胎鼠背根神经节神经元具有一定的保护作用。     

乌头碱对受损背根节神经元自发放电的作用

目的：研究钠通道失活门抑制剂乌头碱(aconitine)对受损背根节(DRG)神经元不同模式的背景放电的作用．方法：在大鼠DRG慢性压迫模型上记录A类单纤维自发放电,观察和分析乌头碱作用下动作电位峰峰间期序列(isi)的变化及特征．结果：在大鼠L5DRG浸浴乌头碱(10～200μmol／L)后,80％簇放电(bursting)和70％不规则放电(irregular)逐渐转化为持续的周期放电;91％周期放电(period)只表现为放电频率的不断增加,并没有发生放电模式的转化．对于静息的神经元,乌头碱则不能引发放电．结论：在阻断钠通道失活门之后,受损DRG神经元的自发放电可以发生模式转化,并且乌头碱对DRG神经元的作用具有活动依赖性．     

Effects of olfactory ensheathing cells on hydrogen peroxide- induced apoptosis in cultured dorsal root ganglion neurons

Background Olfactory ensheathing cells （OECs） can promote many kinds of neuron growth and axonal extension. The aim of the study was to investigate the effects of co-culturing with OECs on neuron apoptosis in vitro. Methods Apoptosis was induced by treatment of cultured dorsal root ganglion neurons with 1 mmol/L hydrogen peroxide （H2O2）. Cells were randomly arranged into the following treatment groups. In group 1, OECs at different density （10^4/ml to 8×10^5/ml） were added immediately after H2O2 treatment and cells were co-cultured for 24 hours. In group 2, OECs were added at different time points （0, 4, 8, 12 and 24 hours） after H2O2 treatment. Apoptotic cell death was determined by Hoechst 33258 staining and flow cytometry （FCM）. Cell viability was determined by using methyl thiazoleterazolium （MTT） assays. Results The results showed in the Hoechest 33258 staining, FCM and MTT that OECs have both the density-dependent protection and time-dependent protection on neuron apoptosis. The apoptosis decreased and the dorsal root ganglion neuron viability increased, when the density of OECs was increased in co-culture groups. But further increasing OEC density above 2×10^5/ml （i.e. 8×10^5/ml） failed to exert additional protection. As the interval between adding H2O2 and adding OECs was increased, the amounts of apoptosis cells were also increased. When OECs were added 24 hours after H2O2, no significant protection was observed. Conclusion These results indicated that OECs could protect dorsal root ganglion neurons from apoptosis induced by H2O2 in a density- and time-dependent manner.     

Noradrenaline depolarization and hyperpolarization mediated by alpha-adrenergic receptors in the soma of dorsal root ganglion neurons

Summary Intracellular recordings were made on perfused preparation isolated from toad dorsal root ganglion (DRG). Of the 51 neurones examined, 46 were of type A, and the remaining 5 of type C cell. The resting membrane potential of these two types of cells was ™60.06±1.30 mV ( ±SE). When the preparations were superfused with noradrenaline (NA; 10⁻⁴ ™ 10⁻³M), the changes of Rp were as follows: 1) hyperpolarization, with amplitude of 8.38 ± 1.42mV ( ±SE; 20/48); 2) depolarization, with amplitude of 9.39±1.24mv ( ±SE; 23/48); 3) no effect (5/48). The alteration in membrane potential mentioned above could be neither mimicked by application of isoproterenol, nor blocked by propranolol. Therefore, the possibility of the effect being mediated by β-adrenoceptor could be excluded. Application of phenylephrine and clonidine induced depolarization and hyperpolarization of membrane potential respectively, while application of prazosin eand yohimbine blocked depolarization and hyperpolarization response induced by NA, respectively. From the results mentioned above, it may be concluded that depolarization and hyperpolarization induced by NA are mediated by α₁- and α₂-adrenoceptors on the soma of DRG neurones respectively.