抗单链DNA抗体的制备及其在细胞损伤检测中的应用

利用经烷化制修饰过的小牛胸腺ＤＮＡ制备的抗单链ＤＮＡ（ｓｓＤＮＡ）单克隆抗体，可用于检测烷化剂所致的细胞ＤＮＡ的不稳定性，评价细胞大化疗药物的敏感性，如对检测条件（细胞ＤＮＡ热变性时间，温度和离子浓度）进行适当改进ｓｓＤＮＡ单抗可以特异地识别细胞凋亡，其灵敏性和特异性优于现有的一些细胞凋亡检测方法，本文介绍了ｓｓＤＮＡ单抗的制备方法和特性，以及在细胞损伤检测中的应用情况，并简要讨论了其应用前景。     

抗人Fas单克隆抗体的制备及鉴定

Ｆａｓ／Ａｐｏ１／ＣＤ９５抗原的发现,始于对两株单克隆抗体（ｍＡｂ）的功能观察,即抗Ａｐｏ１ｍＡｂ和抗ＦａｓｍＡｂ〔１,２〕。由于二者都能识别细胞膜上ＣＤ９５蛋白抗原,且能诱导敏感细胞凋亡,才导致今天对Ｆａｓ抗原的生物医学研究。制备抗ＦａｓｍＡｂ对于Ｆａｓ抗原的深入研究,尤其是对Ｆａｓ抗原信号传导机制的阐明,以及生物医学应用都有重要的意义。本文利用Ｆａｓ＋的细胞作为免疫原,制备了１株鼠抗人ＦａｓｍＡｂ２Ａ１。１材料和方法１．１材料１．１．１细胞系Ｓｐ２／０小鼠骨髓瘤细胞、Ｊｕｒｋａｔ人Ｔ淋巴…     

大鼠抗小鼠CD80/CD86单克隆抗体的制备与鉴定

众所周知 ,在Ｔ细胞活化时 ,以单克隆抗体 (ｍＡｂ )阻断协同共刺激分子ＣＤ80 (Ｂ7 1) /ＣＤ86 (Ｂ7 2 )刺激信号 ,可诱导相应Ｔ细胞产生抗原特异性的免疫无反应 (ａｎｅｒｇｙ)或免疫耐受[1] 。对协同刺激信号的干预为移植免疫学、肿瘤和自身免疫性疾病的免疫治疗开辟了新途径。本文介绍制备与鉴定抗ＣＤ80ｍＡｂ和抗ＣＤ86ｍＡｂ的方法 ,以利于协同刺激分子的基础及应用研究。1　材料和方法1 1　材料　细胞系Ｐ815、转染小鼠ＣＤ80ｃＤＮＡ的ＣＤ80 Ｐ815、转染小鼠ＣＤ86ｃＤＮＡ的ＣＤ86 Ｐ815 ,及分别产生大鼠抗小鼠ＣＤ80ｍＡｂ (…     

CD4单克隆抗体在体内诱导小鼠胸腺细胞凋亡

为研究抗ＣＤ４ ＭｃＡｂ引起胸腺细胞减少的机理，本课题探讨了ＣＤ４ ＭｃＡｂ诱导胸腺细胞发生凋亡的可能性。小鼠注射抗ＣＤ４ ＭｃＡｂ后，皮质胸腺细胞体积缩小，染色质凝聚；ＰＩ染色后经流式细胞计测定，显示大量的亚二倍体细胞（凋亡细胞，Ａｐｏｐｔｏｔｉｃ ｃｅｌｌｓ），与正常小鼠相比Ｐ〈０．００１；片断化ＤＮＡ的百分比也明显高于正常小鼠，Ｐ〈０．０１。片断化ＤＮＡ在凝胶电泳上呈现典型的阶梯现象。细胞内     

反义bcl-2 DNA促进裸鼠荷人鼻咽癌细胞株CNE2-baxα凋亡

目的：在裸鼠活体水平上观察ｂｃｌ－２反义寡聚核苷酸（ａｎｔｉｓｅｎｓｅ ｉｏｌｉｇｏｄｅｏｘｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ,ＡＳＯＮ）对鼻咽癌细胞株ＣＮＥ２－ｂａｘα凋亡的影响。方法;ＤＮＡ合成仪合成２２ｎｔ ＡＳＯＮ片段,ＲＴ－ＰＣＲ检测ｂｃｌ－２表达,电镜观察细胞凋亡。结果;反义ｂｃｌ－２ ＤＮＡ片段局部注射ＣＮＥ２－ｂａｘα致瘤组织,ＲＴ－ＰＣＲ检测肿瘤组织中ｂｃｌ－２表达被封闭,电镜观察视野下可见     

抗角蛋白mAb AK37轻重链可变区基因的克隆及序列分析

一些表皮过度增殖性皮肤病（银屑病和基底细胞癌等）［１ ,２］ ,常发生角蛋白组分的异常变化。本室以往的研究表明 ,抗角蛋白自身抗体 (ＡＫａｕｔｏＡｂ)及抗角蛋白的单克隆抗体 (ｍＡｂ)对这些疾病具有良好的疗效。但由于鼠源性ｍＡｂ用于人体时能诱导人体产生抗鼠抗体（ＨＡＭＡ）［８］,且易引起过敏反应 ,因而限制了其临床应用 ,有必要对其进行人源化改造。为此 ,我们采用反转录ＰＣＲ(ＲＴ ＰＣＲ)方法 ,从分泌抗角蛋白ｍＡｂ的鼠源性杂交瘤细胞中 ,克隆了该ｍＡｂ的轻、重链可变区基因 ,并做了序列分析 ,为进一步研制基因工程抗体奠…     

抗肿瘤相关糖抗原sTn单克隆抗体的制备及鉴定

细胞发生转化时,经常伴随着细胞膜表面糖脂或糖蛋白糖链的改变〔１〕。在肿瘤细胞,特别是腺癌细胞,其表面粘蛋白分子的糖链经常由于合成不全而缩短,形成肿瘤相关的简单粘蛋白糖抗原,ｓＴｎ即为其中的一种〔２〕。ｓＴｎ（ＮｅｕＡｃα２→６ＧａｌＮＡｃα１→ＯＳｅｒ／Ｔｈｒ）是一种二糖结构,可表达于各种腺癌组织,而在正常组织中则很少或不表达。血清、细胞或组织中ｓＴｎ的检测,主要依赖抗ｓＴｎ的单克隆抗体（ｍＡｂ）。我们应用富含ｓＴｎ侧链的绵羊颌下腺粘蛋白（ＯＳＭ）免疫制备了抗ｓＴｎ的ｍＡｂ〔３〕,目的在于为建立检测ｓＴ…     

可溶性HLA-Ⅰ的检测及中国人正常值

目的：ｓＨＬＡⅠ可预测器官移植排斥反应及监控某些疾病。为了介绍ｓＨＬＡⅠ类抗原定量检测技术及中国人ｓＨＬＡⅠ正常值。方法：采用ＥＬＩＳＡ双抗夹心法,以Ｗ６／３２ｍＡｂ包被酶标板,加被检血清,再加β２ｍＨＲＰ及底物显色。以不同浓度ｓＨＬＡⅠ标准品的结果绘出标准曲线并测定１１３例正常人ｓＨＬＡⅠ含量。结果：ＥＬＩＳＡ法可以准确定量测定血清中ｓＨＬＡⅠ,中国人ｓＨＬＡⅠ正常值为７８９２７±５０６３２ｎｇ／ｍｌ。结论：ＥＬＩＳＡ法检测ｓＨＬＡⅠ具有特异、敏感及重复性。     

细胞凋亡信号转导与心血管疾病

细 胞死亡分为细胞坏死和细胞凋亡。细胞凋亡 (ａｐｏｐｔｏ ｓｉｓ)是指细胞在自身基因调控下 ,启动其内部机制 ,主要是内源性ＤＮＡ内切酶的激活而发生的一种主动性死亡的过程 ,细胞凋亡亢进或受抑在一些疾病发生、发展中居重要地位。由细胞凋亡异常所致的疾病称凋亡失调性疾病 (ｄｉｓｅａｓｅｏｆｄｅｓｒｅｇｕｌａｔｅｄａｐｏｐｔｏｓｉｓ ,ＤＤＡ)。ＤＤＡ和细胞凋亡信号转导有密切关系[1] 。1　细胞凋亡的信号转导研究表明 ,众多的调控基因正逐渐地被组装成一条条信号转导通道 ,并以瀑布式反应相继被激活 ,导致细胞凋亡 ;许多不同…     

抗bFGF单克隆抗体的鉴定及其意义

用重组牛ｂＦＧＦ免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠，通过细胞融合，以反向间接血凝和间接ＥＬＩＳＡ筛选，以及有限稀释法克隆化，建立了９株稳定分泌抗ｂＦＧＦ单克隆抗体（ｍＡｂ）杂交瘤细胞。对其中３株用Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ和生物活性抗体中和实验进行了鉴定。结果显示，ｍＡｂ可结合重组牛或人ｂＦＧＦ，并能抑制ｂＦＧＦ刺激Ｂａｌｂ／ｃ３Ｔ３细胞的生长；腹水的ＥＬＩＳＡ滴度为１∶３０００；用其中２株ｍＡｂ建立的双抗体夹心ＥＬＩＳＡ法灵敏度可达５０ｐｇ／孔。本文还讨论了抗ｂＦＧＦｍＡｂ的应用价值。     

bcl—2癌基因反义硫代磷酸寡脱氧核苷酸诱导HL60细胞凋亡

目的 不同浓度ｂｃｌ－２癌基因反义硫代磷酸寡脱氧核苷酸９ＡＳ－ＰＳ－ＯＤＮ,ＡＳＰＯ）对ＨＬ６０细胞凋亡的诱导作用。方法 ＡＳＰＯ与ＨＬ６０细胞共培养后,用吖啶橙（ＡＯ）染色法,流式细胞仪ＤＮＡ倍体分析,电镜观察、ＤＮＡ片段电沪等方法进行观察。结果 ＡＳＰＯ组与正义组比较能特异诱导ＨＬ６０细胞的凋亡,且于培养２４５小时即可出现,此时ＡＳＰＯ５、１０、２０μｍｏｌ／Ｌ浓度各组的凋亡率分别为：（９．７     

抗人白细胞单克隆抗体的特异性及其特性鉴定

目的制备抗人白细胞单克隆抗体（ｍＡｂ），并对其识别抗原及组织的特异性进行鉴定。方法采用分离的人全白细胞悬液免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠，取脾细胞与Ｓｐ２／０细胞常规融合，用间接ＥＬＩＳＡ筛选ｍＡｂ，流式细胞仪及免疫组化染色ＳＰ法鉴定其组织特异性。　结果成功地制备１株抗人白细胞　ｍＡｂ，命名为ＳＺ－１０５。ＥＬＩＳＡ法测定其腹水效价为１×１０－５。琼脂糖双扩散鉴定为ＩｇＧ１类。流式细胞仪间接免疫荧光技术及免疫组化ＳＰ法测定表明，ｍＡｂ　ＳＺ－１０５可选择性地与外周血液的粒细胞、单核细胞和淋巴细胞呈强阳性反应，而与红细胞及血小板不出现反应。该ｍＡｂ还可与正常人骨髓的白细胞前体起反应。另外，在肝、肺、脾、胸腺及淋巴结正常组织中的巨噬细胞表面，也有ＳＺ－１０５抗原表达。ＳＺ－１０５抗原经亲和层析纯化，再经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ　和Ｗｅｓｔｅｒｎ　ｂｌｏｔ证实，ｍＡｂ　ＳＺ－１０５识别的抗原是相对分子质量（Ｍｒ）为７５　０００左右的单链蛋白多肽。结论　获得１株具有高度免疫学活性和组织特异性的抗人白细胞ｍＡｂ　ＳＺ－１０５，其对研究白细胞的分化、免疫功能，以及隐匿性急、慢性炎症疾病的放免显像诊断都具有一定的临床意义。     

活化淋巴细胞及其染色质诱导抗核抗体生成

系统性红斑狼疮 (ＳＬＥ)是自身免疫病的原型 ,其最重要特征是血清中出现以抗双链ＤＮＡ(ｄｓＤＡＮ)、抗Ｓｍ等为主的致病性抗核抗体 (ＡＮＡ)。阐明抗ｄｓＤＮＡ和抗Ｓｍ抗体生成的机制 ,对了解ＳＬＥ发病机制有重要意义。虽然多种假说来解释ＡＮＡ生成的机理 ,但许多证据提示是抗原驱动ＡＮＡ生成。令人困惑不解的是哺乳类动物ｄｓＤＮＡ、组蛋白、核小体等核成分并不具有免疫原性 ,因此启动生成的激发原迄今不明。一、活化的淋巴细胞同系免疫诱导抗核抗体生成1 细菌活化的淋巴细胞 :1 996年 ,我们首次发现经空肠弯曲菌 (ＣＪ- 1 0 1 )…     

反义治疗与白血病靶基因研究进展

反义技术是根据碱基互补原理 ,利用与目标靶ＤＮＡ或ＲＮＡ互补的短链片断封闭基因表达。反义技术用于抗白血病的理论基础 ,是用反义核酸中止原癌基因或癌基因的表达 ,使白血病细胞分化或凋亡 ,达到治疗的目的。其特点是 ,特异性强 ,对正常细胞无明显影响。反义核酸能在核酸水平上抗白血病 ,优于在蛋白水平的作用。基本内容包括 :反义ＲＮＡ、反义ＤＮＡ、核酶 (ｒｉｂｏｚｙｍｅ)和三股螺旋ＤＮＡ(ＤＮＡ -Ｔｒｉｐｌｅｘ)。主要通过下列作用之一或联合作用抑制靶基因表达 :1 与双链ＤＮＡ形成三链结构 ,使ＤＮＡ转录受阻。 2 结合靶ｍＲ…     

三株肝癌单克隆抗体的Western免疫印迹实验

Ａ１０、Ｅ５和Ｆ１１是３株抗人肝细胞癌的单克隆抗体（ｍＡｂ）。经ＡＢＣ免疫组化染色法证实，这些ｍＡｂ针对的抗原在８例肝癌组织中呈高表达，Ａ１０、Ｅ５和Ｆ１１分别为６／８，５／８和６／８；而在肝炎中呈低表达，分别为２／１１、０／１１和１／１１［１］。故这几株ｍＡｂ所针对的相应抗原可能是肝癌相关抗原。作为筛选肝癌细胞表达文库的候选抗体，通过Ｗｅｓｔｅｒｎ免疫印迹反应可了解其相应抗原的一些性质及确定ｍＡｂ对变性抗原的识别能力。１　材料和方法１－１　细胞株和ｍＡｂ　肝癌细胞株ＳＭＭＣ７７２１与ＨＨＣＣ…     

p53和细胞周期G_1停滞及细胞凋亡

本文综述了有关ｐ５３介导细胞周期Ｃ１停滞和ｐ５３介导细胞凋亡研究的最新进展。作为细胞转录调节因子，细胞ＤＮＡ受损甚至未受报时，ｐ５３或者主要通过影响其调控基因ｐ２１／Ｗａｌｆｌ／Ｃｉｐｌ、ｍｄｍ－２、ＣＡＤＤ４５等的表达介导细胞Ｃ１停滞，以利于受损ＤＮＡ的修复。或者主要通过影响其调控基因ｂｃｌ－２、ｂａｘ等的表达，以及Ｆａｓ／ＡＰＯ－１的表达，甚至通过ｐ５３自身的作用，介导细胞凋亡，除去ＤＮＡ受损或碱基受损细胞，以防癌变和遗传性状改变。     

环孢素A体外诱导HL—60细胞凋亡的研究

目的：观察环孢素Ａ是否有诱导白血病细胞凋亡的作用。方法：应用细胞形态学检查、二苯胺法ＤＮＡ片段化定量，ＤＮＡ凝胶电泳及流式细胞术等方法观察细胞凋亡。结果：ＣｓＡ５０ｍｇ／Ｌ作用ＨＬ－６０细胞４ｈ，ＤＮＡ片段率显著增高，达（２８．２±５．８）％，而对照组仅为（１２．５±１．７）％（Ｐ＜０．０１，ｎ＝１０）。光镜及电镜检查见细胞核固缩，碎裂，有凋亡小体形成。ＤＮＡ电泳显示典型的ＤＮＡｌａｄｄｅｒ。流式细胞术检测发现ＣｓＡ５０ｍｇ／Ｌ作用ＨＬ－６０细胞６ｈ凋亡细胞率为４９．７％，而空白组仅为９．１％。ＣｓＡ诱导ＨＬ－６０细胞ＤＮＡ片段化呈剂量和时间依赖性。结论：ＣｓＡ在体外能诱导ＨＬ－６０细胞凋亡。     

应用DNA疫苗制备猪温病毒单克隆抗体的研究

猪瘟病毒（ｃｌａｓｓｉｃａｌ ｓｗｉｎｅ ｆｅｖｅｒ ｖｉｒｕｓ, ＣＳＦＶ）是影响畜牧业最重要的病原体之一。单克隆抗体（ｍＡｂ）以其高度的特异性和敏感性而在ＣＳＦＶ的生物学特性研究与诊断中起着重要的作用。由于不易获得高质量的ＣＳＦＶ抗原,我国开展这项工作较晚,所建立的抗ＣＳＦＶ ｍＡｂ细胞株较少。这对于研究ＣＳＦＶ的生物学特性及流行病学调查来说,在数量上还很不够,仍需继续研制抗ＣＳＦＶ ｍＡｂ。 ＤＮＡ疫苗是９０年代出现的一种新型疫苗［１］。其特点是：基因免疫后,蛋白质抗原在宿主细胞内表达,其加工处…     

自身免疫病患者抗精浆免疫抑制物抗体的测定

用ＥＬＩＳＡ法测定血清中抗精浆免疫抑制物抗体（ＳＰＩＭ－Ａｂ），发现系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎、混合性结缔组织病、重症肌无力和甲状腺疾病患者血清ＳＰＩＭ－Ａｂ水平与检出率均显著高于对照组（Ｐ＜０．０１）；抗核抗体、抗ｄｓ－ＤＮＡ抗体、抗Ｓｍ、抗ＲＮＰ抗体和类风湿因子与ＳＰＩＭ－Ａｂ无相关性，而抗甲状腺球蛋白抗体（Ａ－ＴＧ）和抗甲状腺微粒体抗体（Ａ－ＴＭ）阳性患者ＳＰＩＭ－Ａｂ水平均显著高于Ａ－ＴＧ、Ａ－ＴＭ阴性者（Ｐ＜０．０１）。     

鼠抗人Fas单克隆抗体的制备及鉴定

采用Ｊｕｒｋａｔ细胞Ｂａｌｂ／ｃ小鼠制备１株抗人ＦａｓｍＡｂ２Ａ１,它能特异性识别Ｊｕｒｋａｔ,Ｒａｊｉ,ＴＨＰ－１细胞膜表面５０ＫＤ左右的蛋白,并能与ＳｒＦａｓ标准蛋白反应,其识别的细胞膜蛋白与单抗特异性抗人Ｆａｓ ＰｃＡｂＮ－１８相一致。ｌｅｑ