不同吸氧方式对新生鼠视网膜血管发育的影响

目的：吸氧是早产儿视网膜病的高危因素之一,目前吸入氧浓度、吸氧方式等与早产儿视网膜病的关系仍有争议。该实验通过研究不同吸氧方式对新生鼠视网膜血管发育的影响,为早产儿临床合理用氧提供实验依据。方法：选择7日龄C57BL/6 J新生小鼠144只,随机分为6组,每组24只。实验组1:吸入氧浓度(F iO2)由30%逐渐升高至75%后突然中断吸氧;实验组2:F iO2由75%逐渐降低直至停氧;实验组3:吸75%高氧5天后骤然停氧;实验组4:吸75%高氧5天后逐渐降低F iO2直至停氧;实验组5:第1天吸75%高氧,第2天吸空气氧,交替进行,连续6 d;对照组:置于同实验条件下的空气中。实验组1,2,3,5和对照组分别于P12(生后第12天),P14,P17视网膜铺片(ADP酶染色法),实验组4于P14,P17,P22视网膜铺片,各组均在P17行视网膜切片(苏木素-伊红染色法)观察视网膜血管的增生和发育情况。结果：①视网膜铺片显示:对照组:P12见少量无灌注区,周边血管结构清晰,P14无灌注区消失,血管形态基本正常,P17血管形态全部正常。实验组1,3,5:P12视网膜中央部有大片无灌注区,血管收缩、闭塞,P14新生血管开始形成,P17大量新生血管形成。实验组4:P14视网膜中央部大片无灌注区,有少量新生血管形成,P17无灌注区缩小,血管走行基本正常,深层血管有阻塞,P22血管发育基本正常。实验组2:铺片显示视网膜血管形态与对照组相似。②视网膜切片显示:实验组1,2,3,4,5小鼠突破视网膜内界膜的新生血管内皮细胞核的数目分别为49.50±1.36,5.17±0.67,47.68±4.70,5.74±2.37,29.15±2.48个,对照组为1.22±0.20个。实验组1,3,5与对照组相比差异均有显著性(P<0.05),实验组2,4与对照组相比差异无显著性(P>0.05)。结论：不同吸氧方式对视网膜血管发育产生不同的影响,吸入氧浓度波动较大、吸入高浓度氧后突然停氧可严重影响新生鼠视网膜血管的发育,产生类似早产儿视网膜病的病变。因此临床上应尽早稳定早产儿的生命体征,减少氧疗,严密监测用氧情况,采取逐渐降低氧浓度的吸氧方式,并尽量避免氧浓度波动过大。     

血管内皮生长因子mRNA在高氧诱导新生鼠视网膜异常新生血管化模型中的表达

目的：分析血管内皮生长因子（VEGF）在高氧诱导视网膜异常新生血管化大鼠模型中的表达变化，探讨VEGF在高氧诱导视网膜新生血管化进程中所起的作用。方法：150只SD新生大鼠随机分为氧诱导模型组和正常对照组，各75只。氧诱导模型组大鼠吸入浓度（80±2）% 7 d，随后在正常空气环境。视网膜铺片ADP酶染色了解视网膜血管形态改变；常规苏木精-伊红染色定量反映视网膜血管增生情况，判断建模成功。半定量逆转录 聚合酶链反应（RT-PCR)定量反映视网膜VEGF mRNA转录水平的变化。结果：氧诱导模型组7日龄时视网膜血管明显收缩、阻塞，出现大片无灌注区；14日龄见新生血管形成；苏木精-伊红染色见模型组14日龄大鼠视网膜出现较多新生血管内皮细胞核；RT-PCR结果显示，氧诱导模型组7 d时VEGF mRNA转录水平明显低于对照组，停氧后逐渐增强。VEGF mRNA的表达在新生血管发生前升高，随新生血管退行逐渐下降。结论：未成熟视网膜VEGF mRNA的转录水平与组织氧状态呈密切负性相关关系；停氧后视网膜的相对缺氧导致VEGF mRNA转录上调，促使视网膜血管病理性增生。VEGF的异常表达在ROP的新生血管化进程中起重要作用。［中国当代儿科杂志，2007，9（4）：371-374］     

携带血管生成素1基因的骨髓间充质干细胞对早产儿视网膜病模型小鼠的干预研究

目的探讨携带血管生成素1(Ang-1)基因的骨髓间充质干细胞(BMSCs)对氧诱导视网膜病模型小鼠视网膜新生血管的作用。方法将出生7天的昆明小鼠随机分成空气对照组和高氧模型组(其中包括注射Ang-1+BMSCs组、单纯BMSCs组及高氧PBS组),每个亚组12只。除空气对照组之外,其余组均放入氧分压65%±5%的氧箱内饲养5天后取出。将携带Ang-1的BMSCs和不携带Ang-1的BMSCs各2 ml(内含细胞总数为1×105)在鼠龄第7、12、17日分别腹腔注入高氧模型组中的Ang-1+BMSCs组和单纯BMSCs组小鼠体内,空气对照组和高氧PBS组注入相同剂量的PBS缓冲液。于鼠龄17天时取小鼠眼球做标本固定,分别用免疫组织化学法检测Ang-1蛋白、qRT-PCR法检测Ang-1蛋白mRNA、计数突破视网膜内界膜的血管内皮细胞数及明胶墨汁灌注眼底视网膜血管,比较小鼠视网膜新生血管情况。结果高氧模型各组每只眼球均可见突出内界膜的新生血管内皮细胞。其中Ang-1+BMSCs组、单纯BMSCs组与高氧PBS组相比较,突破视网膜内界膜的血管内皮细胞核明显减少,差异有统计学意义(P<0.05);与高氧PBS组比较,Ang-1+BMSCs组及单纯BMSCs组血管走形较直,Ang-1蛋白表达量增加,免疫组织化学染色被黄染的胞浆较丰富;Ang-1+BMSCs组与单纯BMSCs组相比,前者血管走行较直,周边新生血管覆盖率降低,突破内界膜新生血管细胞数目减少,Ang-1蛋白的表达量增多。结论高氧能诱导新生鼠视网膜新生血管生成;Ang-1基因与BMSCs结合与单纯应用BMSCs相比,前者能更有效地改善视网膜新生血管的增生状况。     

血管内皮生长因子及其受体在早产儿视网膜病大鼠模型中的表达和作用

目的　探讨血管内皮生长因子 (VEGF)及受体 (flt 1和flk 1)的表达规律与早产儿视网膜病 (ROP)视网膜血管变化的关系。方法　 86例新生未成熟SD大鼠随机分为高氧组和对照组 ,各组再随机分为 1、3、7及 14天 4个组。高氧组吸入 75 %的氧 ( 7天后置入空气中饲养 )建立ROP大鼠模型 ,对照组则在空气中饲养。取视网膜组织制作标本 ,HE染色及CD34标记血管内皮细胞观察视网膜血管改变 ,采用免疫组织化学方法测定VEGF、flt 1及flk 1在视网膜的表达。结果　①随着天数增加对照组毛细血管密度指数 (RCDI)呈逐渐上升趋势 (F =2 1 5 89,P <0 0 1) ,7天时高氧组RCDI最低 ,停氧 7天 (即 14天 )时增加 ,(F =6 7 885 ,P <0 0 1) ;② 7天时VEGF及flk 1在对照组视网膜中表达最强 ,与第 1天和第 14天比较 ,表达强度差异均有显著意义 (P <0 0 5 ) ;③高氧组 7天时与对照组比较 ,VEGF及flk 1的表达明显减弱 ,统计学处理差异有显著意义 (P <0 0 5 ) ;而高氧组 14天VEGF及flk 1的表达增强 ,与对照组比较 ,差异有显著意义 (P <0 0 5 ) ;④flt 1随着血管的改变 ,其表达部位有所变化 ,但高氧组和对照组总体表达强度变化不明显 ,P >0 0 5。结论　当未成熟的视网膜处于高氧状态时 ,VEGF及flk 1表达减弱 ,视网膜血管减少 ;当视网     

新生大鼠高氧肺损伤血管内皮生长因子蛋白及其mRNA表达变化研究

目的：血管内皮生长因子（VEGF）参与肺的发育和损伤修复,VEGF具有促进肺泡和肺血管增殖以及预防新生儿支气管肺发育不良（BPD）的作用。该研究的目的是探讨新生大鼠高氧肺损伤后肺组织VEGF蛋白及VEGF mRNA表达的变化。方法：新生Sprague-Dawley大鼠48只随机分为高氧实验组和空气对照组,高氧实验组吸入95%以上高氧建立高氧肺损伤模型。分别采用免疫组化法和逆转录多聚酶链式反应（RT-PCR）检测新生大鼠3 d,7 d,14 d肺组织VEGF蛋白及VEGF mRNA表达变化。结果：空气对照组新生大鼠生后随着肺发育,肺组织中VEGF蛋白及VEGF mRNA表达逐渐增加。高氧实验组新生鼠吸入高氧3 d,肺VEGF蛋白表达出现降低,在7 d,14 d明显降低与对照组比较差异有显著性（VEGF 蛋白:12.67±3.82 vs 7.79±5.23; 15.10±8.91 vs 5.85±3.37, 均P<0.01）;高氧实验组VEGF mRNA表达在3 d,7 d,14 d均明显低于对照组（VEGF mRNA: 1.19±0.63 vs 0.78±0.22, 1.52±0.47 vs 0.53±0.18, 1.89±0.81 vs 0.48±0.12, 均P<0.01）。结论：VEGF能促进新生大鼠肺发育,VEGF蛋白及VEGF mRNA表达与新生大鼠肺发育有密切关系。高氧可抑制VEGF蛋白及VEGF mRNA在新生大鼠肺内的表达,VEGF在新生鼠肺发育和高氧肺损伤发病机制中起重要作用。     

高浓度氧对新生大鼠肺血管内皮生长因子及其受体表达的影响

目的:研究持续吸入75%氧对新生大鼠肺血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）及其受体（VEGFR1和VEGFR2）表达的影响,探讨较高浓度吸氧对肺血管发育的影响及与支气管肺发育不良（bronchopulmonary dysplasia,BPD）的关系。方法:新生足月Sprague-Dawley大鼠48只,随机分为对照组和实验组。实验组生后12 h开始持续吸入75%氧气。分别于实验开始后的7 d、14 d和21 d处死留取肺组织标本,苏木精-伊红染色观察病理改变,免疫组化检测VEGF及其受体蛋白表达,RT-PCR检测其mRNA表达。结果实验组大鼠肺组织结构发生类似“新型”BPD的病理改变。75％氧暴露21 d时,VEGF（10.9±2.7 vs 30.8±6.4）、VEGFR1（5.4±1.4 vs 15.6±3.4）和VEGFR2（11.3±2.6 vs 21.7±4.5）的蛋白表达均较对照组减少（P<0.05）;VEGF（1.6 vs 3.3）、VEGFR1（0.4 vs 6.6）及VEGFR2（0.5 vs 4.9）的mRNA表达均较对照组减少（P<0.05）。结论:在新生大鼠中,长时间吸入较高浓度氧可能通过抑制肺血管发育导致BPD的发生。［中国当代儿科杂志,2009,11（11）：927-930］     

高氧对新生大鼠肺血管发育及肺组织血管生成素1表达的影响

目的 观察持续吸入85％氧气对新生大鼠肺血管发育和肺组织血管生成素1(Ang-1)表达的影响,探讨高氧肺损伤新生大鼠的肺血管发育情况及可能的发生机制.方法 将96只新生SD大鼠在生后6h内,随机分为高氧组和空气组,高氧组将大鼠置于自制密闭氧箱,FiO2=0.85.在实验3、7、14d每组各随机取16只处死,采集标本.采用HE染色进行肺组织形态学分析,放射状肺泡计数评价肺泡化程度,肺动脉钡剂造影及肺动脉密度检测评价肺血管的发育,免疫组织化学法检测肺组织Ang-1的表达,荧光定量PCR和Western blot技术检测肺组织Ang-1的mRNA和蛋白表达水平.结果 (1)新生大鼠高氧暴露14 d,肺组织的病理表现与早产儿支气管肺发育不良(BPD)的病理表现相似.(2)高氧组7 d RAC值显著低于空气组[(10.55±0.13):(11.74 ±0.19),P＜0.05],在14d时差异更显著[(12.47±0.05):( 15.03±0.16),P＜0.01].(3)肺动脉钡剂造影显示,高氧组14 d大鼠肺动脉主干变细,肺小动脉显影减少,肺动脉密度显著低于空气组[(3.55±0.09):(6.03±0.16),P＜0.05].(4)免疫组化染色显示,高氧组7d和14 d,肺组织Ang-1的表达均显著低于同时间点空气组[ (4.27±0.34):(3.10 ±0.29),P＜0.05,(5.65±0.49)∶(3.21±0.28),P＜0.01].(5)荧光定量PCR及Western blot结果显示,高氧组7d和14 d,Ang-1的mRNA水平显著低于空气组[(0.85±0.14)∶(0.44±0.21),P＜0.05,(0.87±0.24)∶(0.24±0.05),P＜0.01],Ang-1的蛋白水平也显著低于空气组[(0.88±0.31)∶(0.41 ±0.12),P＜0.05,(0.90 ±0.29):(0.21 ±0.06),P＜0.01].结论 持续吸入高浓度氧导致新生大鼠的肺血管发育障碍,Ang-1的表达下调可能参与了早产儿BPD血管发育受阻的发生机制.     

银杏叶提取物对氧诱导视网膜病新生鼠视网膜血管形态和密度的影响

目的探讨银杏叶提取物(金纳多)对氧诱导早产儿视网膜病变(ROP)新生鼠视网膜血管形态和密度的影响。方法将48只SD新生鼠随机分为对照组、模型组、治疗组各16只,模型组与治疗组建立波动氧诱导的新生鼠ROP模型,治疗组于造模第7天开始予以金纳多50mg/(kg·d)腹腔注射7天。各组分别于第14天和第19天随机抽取8只新生鼠,一侧眼球采用视网膜铺片ADP酶染色,观察视网膜血管形态改变,另一侧眼球行组织切片HE染色,观察并计数突破视网膜内界膜的血管内皮细胞核数目。结果视网膜铺片ADP酶染色显示,第14天和第19天时,模型组较对照组血管主干变细、形态异常,而治疗组血管形态和密度较模型组明显好转。HE染色显示模型组第14天和第19天视网膜各层细胞排列紊乱;第19天突破内界膜的细胞核数对照组、模型组、治疗组分别为(5.0±2.1)、(34.6±5.3)、(12.6±3.4),模型组高于对照组和治疗组,差异均有统计学意义(P<0.001)。结论高幅度氧浓度波动可成功构建ROP动物模型。金纳多在氧诱导视网膜病变新生鼠模型中对视网膜发挥保护作用。     

不同日龄新生小鼠视网膜血管对氧疗的敏感性

目的观察不同日龄新生小鼠对氧疗的敏感性,研究视网膜血管的发育程度与新生血管形成的关系。方法选择4、7、9、11日龄C57BL/6J新生小鼠各48只,分为高氧组和空气组,通过视网膜铺片(ADP酶染色)和视网膜切片(HE染色),定性和定量观察视网膜血管的增生情况。结果与各空气组相比,4、7、9日龄高氧组小鼠吸高氧5d,返回空气第5天时,大量新生血管形成。而11日龄高氧组小鼠在返回空气第5天未见新生血管形成。4、7、9、11日龄高氧组小鼠出氧箱第5天突破视网膜内界膜的血管内皮细胞核数目分别为25.0±3.7、47.7±5.0、18.7±2.0、2.6±1.4个,4、7、9、11日龄空气组分别为0.7±1.1、1.2±1.2、0.8±1.0、1.6±1.0个,4、7、9日龄高氧组细胞核数目明显增多,与相应的空气组比较,差异有显著性(P<0.001);11日龄高氧组细胞核数无明显增多,与11日龄空气组比较,差异无显著性。结论视网膜血管的发育程度与新生血管形成有关,视网膜血管发育越不成熟越易发生视网膜病变,而发育成熟的视网膜则不会发生视网膜病变。     

持续高氧暴露降低新生大鼠肺组织血管内皮生长因子的表达

目的：高氧肺损伤是导致支气管肺发育不良(BPD)的最常见原因。血管内皮生长因子(VEGF)在新生肺中具有促进内皮细胞增殖、分化、诱导血管发生的作用。本研究动态观察高氧暴露对新生鼠肺组织VEGF表达的影响,探讨BPD的发生机制。方法：新生Wistar大鼠出生后随机分为空气组和高氧组(均n=30)。高氧组在生后12h内开始,予以持续吸入95%氧气。分别于生后1、2、3、7、14、21d各处死5只大鼠,留取肺组织标本。苏木精-伊红染色观察病理改变,免疫组化检测VEGF蛋白表达,原位杂交方法检测VEGFmRNA表达。结果以切片视野灰度值表示,值越高说明蛋白或mRNA表达越少。结果：新生鼠高氧暴露7d后肺泡间隔减少,肺微血管发育异常,间质纤维化,且病变随高氧暴露时间延长而加重。高氧组大鼠第3,7天时肺组织VEGF蛋白表达明显低于相应空气对照组(81.9±0.8vs80.8±1.0,82.8±1.2vs79.2±1.6,均P<0.01)。VEGFmRNA表达亦显著减少(89.5±1.1vs88.0±1.0,91.1±1.5vs87.7±1.7,均P<0.001)。随着暴露时间的延长,VEGF蛋白和mRNA进行性降低,在高氧暴露14、21d时几乎检测不到VEGF蛋白和mRNA的表达。结论：高氧暴露抑制新生鼠肺VEGF的表达,这可能与高氧诱导BPD的发生有关。     

血氧浓度波动致新生大鼠增生性视网膜病变的机制研究

目的制备血氧浓度波动所致新生大鼠增生性视网膜病变的模型,进一步探讨早产儿视网膜病（ROP）的发病机制。方法208只新生SD大鼠,随机分为氧气组和对照组,采用免疫组织化学方法以及RT-PCR技术,观察生后14、18、25d视网膜组织中血管内皮生长因子（VEGF）及Flk-1（VEGFR-2）蛋白和mRNA表达水平。并且在氧气暴露后4d,取幼鼠眼球进行视网膜铺片以及组织石蜡切片HE染色,观察视网膜血管的改变情况。结果（1）氧气组18d幼鼠视网膜无血管面积明显大于空气组（P〈0．05）,且突破内界膜的内皮细胞核数目明显多于空气组（P〈0．05）,表明模型建立成功。（2）氧气组视网膜VEGF及Flk-1在14、18d时表达均明显强于对照组（P〈0．05）,在25d时阳性表达明显减弱,与对照组比较,差异无统计学意义（P〉0．05）。且VEGF及Flk-1在18d时表达最强,与14及25d比较,表达强度差异均有统计学意义（P〈0．05）。（3）氧气组视网膜组织VEGF mRNA及Flk-1 mRNA表达水平在14d、18d均明显高于对照组（P〈0．05）。25d时氧气组VEGF mRNA及Flk-1 mRNA表达水平均下降,与对照组比较,差异无统计学意义（P〉0．05）。结论反复血氧浓度的波动可导致新生大鼠视网膜血管增生性病变,血管增生性视网膜组织中VEGF及Flk-1表达明显增强。本研究还提出,ROP视网膜血管增生过程中存在一种正反馈机制即VEGF与Flk-1的上调协同作用,共同促进视网膜新生血管的形成。     

高氧致肺纤维化新生大鼠肺组织肾素-血管紧张素系统与Ⅰ型胶原及细胞间黏附分子-1的动态变化

目的 观察高氧致肺纤维化新生大鼠肺组织血管紧张素转换酶(ACE)、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、Ⅰ型胶原及细胞间黏附分子-1(ICAM-1)的动态变化.方法 足月新生Wistar大鼠120只,随机分为实验组和对照组,各60只.实验组将足月新生Wistar大鼠(连同母鼠)生后即置于有机玻璃氧舱内持续吸入高浓度氧(FiO2∶0.9)21 d造成高氧肺损伤模型,对照组吸入空气.每组分别于实验后1、3、7、14、21 d随机选取6只麻醉后处死.肺组织采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定Co Ⅰ及ICAM-1蛋白含量,用生化分析仪测定ACE的活性,用放射免疫法测定AngⅡ蛋白含量.用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测肺组织ACE、AngⅡ及Co Ⅰ mRNA的动态变化并同时观察肺组织形态学变化.结果 实验组肺组织各项测量指标在第14天均有明显升高.ACE活性及AngⅡ、Ⅰ型胶原、ICAM-1的蛋白含量分别达到(241.00±31.84)、(707.21±282.90)、(397.97±88.76)和(691.76±90.36)μg/g,除了ACE,其他与对照组比较,差异均有显著性(P＜0.05);而ACE、AngⅡ及Ⅰ型胶原mRNA表达在第14天较对照组均有明显升高,差异均有显著性(P＜0.05);实验组肺组织各项测量指标在第21天达到高峰,ACE活性及AngⅡ、Ⅰ型胶原、ICAM.1的蛋白含量分别达到(249.20±20.19)、(838.22±197.75)、(539.85±81.03)、(577.06±61.17)μg/g,与对照组比较差异均有显著性(P＜0.05);ACE、AngⅡ及Ⅰ型胶原mRNA表达在第21天分别达到2.67±0.52、2.50±0.84及3.0±0.05,与对照组比较差异均有显著性(P<0.05).肺组织形态学改变:实验组第14天肺间质细胞增多,肺组织出现纤维化改变;第21天正常肺泡结构消失,残留肺泡直径明显缩小.结论 高氧致肺纤维化新生大鼠肺组织ACE、Ang Ⅱ、Ⅰ型胶原、ICAM-1蛋白含量及mRNA表达在高氧后14 d、21 d明显高于对照组,同时肺组织出现纤维化改变;肾素-血管紧张索系统参与了高氧肺损伤、肺纤维化.     

高浓度氧致新生鼠肝组织总抗氧化能力与丙二醛含量变化的动态研究

目的 研究新生鼠吸入高浓度氧后,不同时间内肝组织总抗氧化能力(total antioxidative capaciry,TAOC)及丙二醛(malonidi-aldehyde,MDA)含量的变化,探讨吸入高浓度氧是否能导致新生鼠肝脏损伤.方法 生后12h内的64只足月新生鼠作为研究对象,随机分为高氧组(FiO2=0.85,n=32)和对照组(空气,n=32).每组分别于1d、3d、7d、14d随机处死8只新生鼠分离肝组织,采用化学比色法检测肝组织匀浆中TAOC、硫代巴比妥酸法检测肝组织匀浆中MDA含量.结果 高浓度氧暴露1d时,新生鼠肝组织TAOC升高[(3.60±0.28)U/mg prot vs (3.39±0.19)U/mg prot,P<0.05];高浓度氧暴露3d,肝组织TAOC逐渐降低;14d时仍较对照组显著降低[(3.10±0.15)U/mg prot vs(3.56±0.14)U/mg prot],差异有统计学意义(P<0.01).MDA含量于高浓度氧暴露3d时开始升高[(3.58±0.11)nmol/mg prot (2.82±0.135)nmol/mg prot,P<0.01];7d时显著高于对照组[(3.58±0.11)nmol/mg prot vs(2.82±0.135)nmol/mg prot,P<0.01];暴露14d时MDA含量虽有所下降,但仍显著高于对照组[(2.92±0.19)nmol/mg prot vs(2.77±0.09)nmol/mg prot,P<0.01].结论 新生鼠吸入高浓度氧后肝组织TAOC的降低及过量的MDA生成可导致肝脏损伤.随着吸入高浓度氧时间的延长,肝脏损伤的程度加重.

Abstract：

Objective To determine the levels of total antioxidative capacity(TAOC) and malondialdehyde(MDA) in liver exposed to hyperoxia,and to explore whether oxygen inhalation could cause liver injury in newborn rats.Methods Sixty-four newborn rats which were less than 12-hour-old were enrolled in this study.The rats were randomly divided into hyperoxia group(FiO2=0.85,n=32) and control group(air,n=32).Eight rats in each group were randomly sacrificed to obtain liver tissues at 1d,3d,7d and 14d.The TAOC of liver homogenates was detected by chemical colorimetry,and the MDA level of liver homogenates was measured by thiobarbituric acid test.Results In the hyperoxia group,TAOC in liver increased on the 1st day[(3.60±0.28)U/mg prot vs(3.39±0.19)U/mg prot,P<0.05];TAOC began to decreased on the 3rd day,and significantly lower than that of control group on the 14th day [(3.10±0.15)U/mg prot vs (3.56±0.14)U/mg prot,P<0.01].In the hyperoxia group,the MDA level increased on the 3rd day[(3.58±0.11)nmol/mg prot vs(2.82±0.14)nmol/mg prot,P<0.01],and reached a peak on the 7th day[(3.58 ±0.11)nmol/mg prot vs(2.82±0.14)nmol/mg prot,P<0.01],then decreased but still remained higher than control group on the 14th day [(2.92±0.18)nmol/mg prot vs(2.77 ±0.09)nmol/mg prot,P<0.01].Conclusion Too more MDA in liver and TAOC decrease may cause liver injury in newborn rats exposed to hyperoxia.With the oxygen inhalation time prolonging,the liver injury aggravation.     

重组人促红细胞生成素对新生大鼠高体积分数氧肺损伤细胞炎症的影响

目的探讨人重组促红细胞生成素(rhEPO)对新生大鼠高体积分数氧(高氧)肺损伤炎症的影响。方法将72只新生SD大鼠按随机数字表法分为4组:对照组、支气管肺发育不良(BPD)组、高氧+低剂量促红细胞生成素[EPO(L)]组、高氧+高剂量促红细胞生成素[EPO(H)]组。BPD组、高氧+EPO(L)组和高氧+EPO(H)组新生大鼠暴露于850 mL/L氧气中,高氧+EPO(L)组和高氧+EPO(H)组分别于高氧暴露后1、3、7 d给予800 IU/kg、2000 IU/kg rhEPO皮下注射,对照组和BPD组注射等量9 g/L盐水。实验开始后3、7、14 d记录各组体质量。HE染色,光镜下观察其肺组织形态结构的改变,检测肺组织放射状肺泡计数(RAC)。免疫荧光染色法检测核因子-κB(NF-κB)的表达,Western blot技术检测肺组织磷酸化NF-κB(pNF-κB)、抑制蛋白(IκB)及Caspase-3的表达,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测支气管肺泡灌洗液中白细胞介素-1β(IL-1β)的表达。结果1.BPD组新生大鼠14 d时体质量明显低于对照组[(18.97±3.21)g比(27.97±2.30)g],差异有统计学意义(P<0.05);14 d时,高氧+EPO(L)组和高氧+EPO(H)组新生大鼠体质量[(24.16±2.15)g、(26.04±1.97)g]均显著高于BPD组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。2.HE染色观察肺组织形态学结构显示,与对照组比较,BPD组3 d肺泡间隔有少量炎性细胞渗出,7 d更为明显,肺泡腔有渗出,14 d出现肺泡数量减少,肺大疱形成,间隔增厚,RAC明显减少(5.50±1.29比14.33±2.80),差异均有统计学意义(P<0.01);高氧+EPO(L)组和高氧+EPO(H)组新生大鼠肺组织病理改变减轻,炎性细胞浸润减少,RAC值在14 d均明显高于BPD组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。3.免疫荧光结果显示,BPD组NF-κB p65阳性细胞数目明显增多,荧光强度增强,给予EPO处理后可减少NF-κB p65阳性细胞数目,荧光强度减弱。4.Western blot结果显示,与对照组比较,BPD组pNF-κB p65及Cleaved Caspase-3显著增高,差异均有统计学意义(均P<0.05);IκB明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);与BPD组比较,高氧+EPO(L)组和高氧+EPO(H)组pNF-κB p65及Cleaved Caspase-3显著降低,差异均有统计学意义(均P<0.05),IκB均明显升高,差异均有统计学意义(均P<0.05)。5.ELISA结果显示,与对照组比较,BPD组IL-1β表达明显增加,差异有统计学意义(P<0.05);高氧+EPO(L)组和高氧+EPO(H)组IL-1β表达则显著低于BPD组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论EPO能通过NF-κB途径抑制细胞炎性反应,减轻高氧诱导的肺组织凋亡,对新生大鼠高氧肺损伤起保护作用。     

卡托普利对高氧致新生大鼠肺纤维化的保护作用

目的 观察卡托普利对高氧致新生大鼠肺组织纤维化的保护作用.方法 足月新生Wistar大鼠240只,随机分为模型组、空气对照组、治疗组和盐水对照组,每组各60只.模型组、盐水对照组和治疗组将足月新生Wistar大鼠(连同母鼠)生后即置于氧舱内持续吸入高浓度氧(FiO2:0.9)21 d造成高氧肺损伤模型,空气对照组吸入空气;治疗组于生后7 d每天经胃管灌服卡托普利30 mg/(kg·d)(用生理盐水配成5.4 mg/ml混悬液),盐水对照组每天经胃管灌服等量生理盐水.每组分别于实验开始后的第1、3、7、14、21夭随机选取6只麻醉后处死.肺组织采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定Ⅲ型胶原的含量,用放射免疫法测定血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)的含量.用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测肺组织AngⅡ、Ⅲ型胶原mRNA表达的动态变化,同时观察肺组织形态学变化.结果 模型组及盐水对照组肺组织AngⅡ、Ⅲ型胶原含量及mRNA表达第14天明显升高,除盐水对照组的AngⅡmRNA表达升高不明显外,与空气对照组比较差异均有显著性(P<0.05);两组各项指标在第21天达到高峰,模型组肺组织AngⅡ、Ⅲ型胶原含量分别为(838.22±197.75)、(104.21±43.37)ng/mg,与空气对照组比较差异有显著性(P均<0.01);盐水对照组肺组织AngⅡ、Ⅲ型胶原含量分别为(759.97±60.81)、(128.69±54.74)ng/mg,与空气对照组比较差异有显著性(P均<0.05).治疗组第21天AngⅡ、Ⅲ型胶原含量分别为(554.52±59.32)、(39.90±13.45)ng/mg.其mRNA表达分别为1.50±0.84、1.13±0.55,均明显低于模型组及盐水对照组(P均<0.05),但仍高于空气对照组(P均<0.05).肺组织形态学改变:空气对照组为正常肺组织.模型组、盐水对照组第1天同空气对照组,第3～7天肺泡壁毛细血管扩张,肺间隔水肿,肺间隔及肺泡腔内有中性粒细胞浸润,第14天部分肺泡腔变狭长,肺间隔增宽,肺间质细胞增多,出现肺组织纤维化改变.第21天正常肺泡结构消失,残留肺泡直径明显缩小,肺组织出现严重的纤维化.治疗组肺组织纤维化病变明显减轻.结论 卡托普利对高氧所致肺损伤具有一定的保护作用.     

波动氧诱导的新生大鼠视网膜病变模型

目的制备80%至10%的波动氧所致SD新生大鼠视网膜病变的模型。方法新生SD大鼠随机分成两组,模型组(n=12)置于氧箱中,80%至10%的波动氧24 h交替,持续7天后转入空气中饲养5天。对照组(n=12)置于空气中。应用腺苷二磷酸酶染色组织化学法进行视网膜铺片观察视网膜血管改变,眼球切片HE染色观察突破视网膜内界膜的内皮细胞核,免疫组织化学法检测视网膜血管内皮生长因子(VEGF)表达。对两组进行比较,判断波动氧诱导模型的可靠性。结果与对照组相比,模型组新生大鼠视网膜周边血管走形迂曲,神经节细胞排列紊乱,细胞数目减少。模型组视网膜内皮细胞核数目较对照组明显升高,差异有统计学意义[(31.2±6.2)比(1.5±1.0),P<0.01]。模型组VEGF在视网膜神经节层、内核层、外丛状层及色素细胞层均有强表达,对照组仅在神经节细胞层、内核层有较弱表达。结论吸入高幅波动氧可导致新生大鼠视网膜血管增生性病变,血管增生性视网膜组织中VEGF表达明显增强,证实80%至10%的波动氧诱导SD新生大鼠视网膜病变模型可靠。     

高氧致慢性肺疾病新生大鼠肺组织尿激酶型纤溶酶原激活因子和纤溶酶原激活物抑制因子1表达的动态改变及意义

目的 慢性肺疾病(Chronic lung disease,CLD)的特征性病理改变是肺发育受阻和肺问质纤维化,因此胶原等细胞外基质(extracellular matrix,ECM)重塑在肺纤维化形成中的作用已成为当今的研究热点.纤溶系统也是调节ECM降解和基质金属蛋白酶(MMPs)活性的重要因素.这里我们制备了吸入高浓度氧(高氧)致新生大鼠CLD的模型,探讨尿激酶型纤溶酶原激活因子(urokinase-plasminogen activator,u-PA)和纤溶酶原激活物抑制因子(plasminogen activator inhibitor-1.PAI-1)在新生大鼠CLD中的动态变化和意义.方法 足月新牛大鼠生后12h内,分别于0.90～0.95氧和卒气中持续暴露,于1、3、7,14、21 d光镜下观察不同时间点的病理改变,应用Western Blotting和RT-PCR的方法分别检测肺组织u-PA、PAI-1蛋白及mRNA表达的动态改变.结果 (1)病理改变:3d时高氧组可见炎件反应;7d时肺发育障碍,间隔增宽,胶原纤维沉积.(2)u-PA表达:高氧暴露3d时,蛋白表达较对照组明显升高(115.52±7.10 vs 96.51±6.33),P<0.01;高氧组在7～21 d(97.66±7.98,99.91±7.60,103.23±6.24)与对照组比较(112.43±6.01,123.25±8.35,103.23±6.24)降低,P值分别为<0.05,<0.01,<0.01.mRNA表达在高氧暴露3d时较对照组明显升高(1.18±0.07 vs 0.99±0.05),P<0.01,7 d至21 d(1.01±0.06,1.10±0.12,1.27±0.06)与对照组比较(1.15±0.08,1.51±0.32,1.60±0.24)降低,P均<0.01.(3)PAI-1表达:高氧暴露后7～21 d,蛋白表达(147.83±12.27,149.07±11.17,161.42±13.08)明显高于同期对照组(116.18±10.67,113.73±15.58,126.60±8.59),P值分别<0.01,<0.05,<0.O1;mRNA表达在7～21 d(1.49±0.28,1.46±0.31,1.51±0.33)也高于同期对照组(0.94±0.01,0.94±0.03,0.98±0.03),P<0.05,<0.01和<0.05.结论 新生大鼠高氧暴露早期,肺组织u-PA/PAI-lmRNA及蛋白表达增强,纤溶和降解活性增强;高氧暴露中晚期,u-PA/PAI-lmRNA及蛋白表达降低,纤溶和降解活性降低,与肺纤维沉积平行,提示u-PA/PAI-1失衡参与了高氧致CLD的纤维化形成过程.     

血管内皮生长因子在新生大鼠高氧肺损伤模型中的表达及意义

目的探讨高浓度氧暴露致新生大鼠急性肺损伤时血管内皮生长因子（VEGF）的表达及其对肺发育的影响,为临床防治支气管肺发育不良提供理论依据。方法生后2—3日龄新生Sprague—Dawley（SD）大鼠48只随机分为空气组和高氧组各24只,分别置于空气及常压氧气（I〉95％）喂养,采用荧光定量PCR和Western Blot方法检测第1、3、7天时各组大鼠肺组织VEGF mRNA和蛋白表达水平,HE染色动态观察新生大鼠肺组织形态结构变化。结果两组大鼠肺组织第1、3、7天VEGF mRNA和蛋白表达水平均逐渐降低,高氧组明显低于空气组,第1天差异无统计学意义（P〉0．05）,第3、7天差异有统计学意义（P〈0．05）[VEGF mRNA：1天（0．86±0．35）比（1．00±0．28）,3天（0．54±0．26）比（0．92±0．34）,7天（0．32±0．20）比（0．61±0．12）;VEGF蛋白：1天（0．78±0．33）比（1．00±0．16）,3天（0．60±0．08）比（0．85±0．27）,7天（0．34±0．12）比（0．56±0．18）]。与空气组相比,高氧组肺组织显著发育不良,肺泡结构简单,肺泡数目减少,肺微血管发育受阻。结论VEGF对肺发育起重要作用,其确切作用机制有待进一步研究。