子宫内膜癌组织中HOXD10甲基化状态及临床意义

目的 探究同源异形盒(HOX)D10在子宫内膜癌(EC)组织中的表达和基因甲基化状态，分析其与临床病理特征及生存预后的关系。方法 采用基因表达谱动态分析(GEPIA)工具分析美国公共癌症基因数据库(TCGA)中HOXD10 mRNA在EC组织和正常组织中的表达差异及预后信息。选取2016年5至2018年4月在我院治疗的EC患者148例，另选同期30例子宫内膜增生症患者作为良性病变组，收集患者临床资料及新鲜组织标本。采用实时荧光定量PCR(qPCR)、甲基化定量PCR、免疫组织化学染色法检测组织HOXD10 mRNA、基因启动子甲基化状态、蛋白表达。结果 TCGA数据集中，174例EC组织中HOXD10 mRNA表达量显著低于91例正常子宫内膜组织中的表达量(P<0.05),但未得出HOXD10 mRNA表达与患者中位总生存期(OS)和无进展生存时间(PFS)之间的关系(P>0.05)。临床研究中，EC组织中的HOXD10 mRNA表达均显著低于良性病变组织(0.229±0.237 vs. 1.018±0.265),但HOXD10 mRNA启动子甲基化水平(0.166±0.2...     

乳腺癌组织中NOEY2基因的mRNA表达及其与临床病理的关系

目的：观察乳腺癌组织中NOEY2基因的mRNA表达情况,并探讨其与临床病理及其他分子指标的关系。方法：以RT－PCR法和反义RNA探针原位杂交法,检测乳腺良恶性病变组织中NOEY2基因的mRNA表达,以免疫组化法检测乳腺癌石蜡标本中的雌激素受体（ER)状态,Ki67标记指数以及p27和p21WAF1的表达。结果：RT－PCR法检测显示,24例冻存乳腺组织中,6例良性病变NOEY2均为阳性;18例乳腺癌中,13例（72．2％）NOEY2为阳性,原位杂交法检测显示,10例乳腺良性病变NOEY2均为阳性;而60例乳腺侵袭性癌中,仅有31例NOEY2为阳性,占51．7％,良恶性病变NOEY2阳性率差异有显著性（P＜0．025）,NOEY2的阳性率有随组织学分级升高而递减的趋势。淋巴结阴性者阳性率为76．7％,而阳性者仅为26．7％,两者差异有显著性（P＜0．001）,NOEY2基因mRNA表达与其他临床病理指标以及免疫组化指标均无显著相关性。结论：NOEY2基因可能在一定程度上参与乳腺癌的发生和发展。该基因的失表达可能与乳腺癌的转移机制有关。     

TIP30蛋白在乳腺癌中的表达及与bax蛋白相关性研究

目的研究肿瘤转移抑制基因TIP30和促凋亡基因bax在乳腺癌中的表达，探讨它们之间的关系及其临床意义。方法应用免疫组织化学S-P法，检测88例乳腺癌病人TIP30蛋白和bax蛋白的表达，并与32例乳腺良性病变组织进行对照。结果①乳腺癌中TIP30蛋白的表达阳性率42％，明显低于在乳腺良性病变中的表达率75％（P〈0．05），在Ⅲ级癌组织中TIP30蛋白的表达率比Ⅰ、Ⅱ级低（P〈0．05），而与病人年龄、组织学分型、腋淋巴结转移无关。②bax蛋白在乳腺癌中的表达明显低于乳腺良性病变（P〈0．05），Ⅲ级癌组织中bax蛋白的表达率比Ⅰ、Ⅱ级低（P〈0．05），与乳腺癌腋淋巴结转移有关（P〈0．05），而与病人年龄、组织学分型无关。结论TIP30蛋白的缺失表达与乳腺癌的发生发展有关，TIP30蛋白与bax蛋白成正相关，TIP30基因可能通过上调bax基因的表达促进细胞的凋亡。     

BRCA1基因甲基化及甲硫氨酸合成酶与乳腺癌发病的关系

背景与目的:启动子异常甲基化是肿瘤发生的早期事件,肿瘤组织中存在的DNA甲基化异常可以概括为广泛低甲基化伴局部高甲基化.甲硫氨酸合成酶(methionine synthase,MS)是参与甲基供体生成的关键酶,为DNA的甲基化提供甲基.本研究探讨抑癌基因BRCA1 mRNA在乳腺癌组织中的表达及启动子区甲基化状态,及MS基因mRNA表达与BRCA1基因甲基化的关系.方法:应用RT-PCR及甲基化特异性PCR(methylationspecific PCR,MSP)技术检测乳腺癌组织、相应癌旁组织(距癌>3 cm)和乳腺良性病变组织中BRCA1 mRNA的表达及其启动子甲基化状态,并检测MS mRNA的表达水平.结果:乳腺癌组织、癌旁组织及良性病变组织BRCA1mRNA表达差异有统计学意义(P<0.05);乳腺癌组织中BRCA1基因启动子区甲基化检出率明显高于癌旁组织和良性病变组织(χ2=7.631,P<0.05),BRCA1基因启动子区甲基化与散发性乳腺癌组织学分级、雌激素受体(estrogen receptor,ER)相关(P<0.05).乳腺癌组织MS基因表达量明显低于乳腺良性病变及乳腺癌旁组织(P<0.05).MS mRNA的表达与BRCA1基因甲基化的发生有相关性(r=0.419,P<0.05).结论:BRCA1甲基化能够增加乳腺癌的患病风险,MS基因可能通过影响部分肿瘤相关基因发生甲基化而调控其表达.     

连接蛋白43在乳腺癌组织及癌前病变组织中的表达意义

目的 观察连接蛋白43(Cx43)在乳腺癌组织及癌前病变组织中的表达,探讨Cx43在乳腺癌发生过程中的作用机理.方法 应用S-P免疫组织化学方法,检测Cx43在20例乳腺癌组织、20例乳腺导管上皮内瘤变组织、10例良性乳腺病变组织和10例癌旁正常乳腺组织中的表达.应用RT-PCR和Western blot法,检测Cx43 mRNA及Cx43蛋白在四组乳腺组织中的表达.结果 乳腺癌组织与乳腺导管上皮内瘤变组织中Cx43蛋白表达减少,且Cx43蛋白在乳腺癌组织中的表达明显低于乳腺导管上皮内瘤变组织中的表达(P<0.01).RT-PCR显示乳腺导管上皮内瘤变组织中Cx43 mRNA的表达量减少,而乳腺癌组织中Cx43 mRNA的表达量明显减少(P<0.01).结论 Cx43蛋白低表达及其构成的缝隙连接细胞间通讯异常,与基因转录受到抑制有关,从而可能导致乳腺上皮细胞分化异常和过度增生,促进了乳腺癌的发生.     

乳腺肿瘤组织中同源异型盒基因BP1mRNA表达的定量检测

目的:探讨乳腺肿瘤组织中同源异型盒基因BP- 1 -mRNA的表达水平及其临床病理意义。方法:采用实时荧光定量RT PCR技术检测82例乳腺肿瘤组织中BP- 1- mRNA的拷贝数,并进行相关统计分析。结果:82 例乳腺肿瘤标本中,有56例呈BP1阳性表达,阳性率为68 29%。不同病理组织分级的乳腺癌标本中BP 1 基因的初始拷贝数分别为(1. 84±0 .08)×105、(1. 31±0. 78)×105 和(5 .41±0 .90)×104 拷贝/μg RNA,随着组织学分级的升高,BP 1 基因mRNA表达量呈下降趋势,P= 0. 0037。结论: BP- 1 基因在一定程度上参与了乳腺癌的发生和发展,并可能成为乳腺癌早期诊断及治疗的新分子标志物和重要的研究靶点。     

SLC30A9基因在乳腺癌组织中的差异表达及临床意义

目的检测SLC30A9（solutecarrierfamily30member9）基因在乳腺癌组织中的mRNA表达情况,了解SLC30A9表达与乳腺癌的关系。方法收集30例手术切除的乳腺癌及其相应的癌旁组织、10例正常乳腺组织及20例乳腺良性病变组织作为研究对象。分别采用半定量逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）检测SLC30A9mRNA的表达并分析临床意义。结果在90例乳腺组织标本中,SLC30A9mRNA均有表达,4种组织平均光密度比值分别为0．443±0．247、0．427±0．253、0．405±0．209、0．547±0．190,分别两两比较差异均无统计学意义（P〉0．05）。其中5例患者存在差异性表达,占16．7％（5／30）。5例患者中3例乳腺癌组织SLC30A9的表达比相应的正常乳腺组织低,2例患者在乳腺癌组织中表达上调。乳腺癌组织中SLC30A9mRNA的平均光密度比值在不同年龄、临床分期、淋巴结转移、远处转移和病理类型的组问比较,差异均无统计学意义（P〉0．05）。结论SLC30A9基因在各种乳腺组织中均有表达,但仅在16．7％的病例中出现差异表达,提示该基因可能不是乳腺癌的主导基因,其差异表达原因有待进一步研究。     

尿激酶型纤溶酶原uPA和P27蛋白在乳腺癌中的表达及其意义

目的　探讨正常乳腺组织、良性病变乳腺组织、乳腺癌中uPA和P2 7蛋白的表达水平及其意义。方法　应用免疫组织化学方法对 8例正常乳腺组织、2 4例良性病变乳腺组织及 66例乳腺癌中uPA、P2 7蛋白的表达进行测定。结果　uPA和P2 7蛋白在 66例乳腺癌中的高表达率分别为 5 7.6%、5 3 .0 % ,uPA在乳腺癌中的表达水平明显高于正常和良性病变乳腺组织 (P <0 .0 5 ) ;而P2 7蛋白在乳腺癌的表达水平明显低于正常和良性病变乳腺组织 (P <0 .0 5 )。uPA和P2 7蛋白在乳腺癌中的表达有显著相关性 ,它们与乳腺癌的病理学特征显著相关。结论　P2 7蛋白和uPA的表达水平可能与乳腺癌的发生、发展和预后有关 ,而且对于指导乳腺癌的治疗有一定的临床意义。     

乳腺癌标本整合素α5β1基因的表达水平及其临床意义

目的近年来的研究发现整合素对肿瘤的增殖、分化、转移起重要作用。整合素α5β1作为其一亚型证实该基因的低表达和黑素瘤，肠癌等肿瘤的恶性程度，肿瘤转移有关。本研究探讨其在乳腺癌中的作用及临床意义。方法应用Northern杂交和图象分析技术，定量检测了5例乳腺良性病变和17例乳腺癌组织中整合素α5β1基因mRNA的表达水平，结合肿瘤大小，TNM分期和腋下淋巴结转移情况等临床和病理指标进行比较分析。结果（1）乳腺良性病变组整合素α5β1基因mRNA的表达要高于乳腺癌组（P相似文献   

Pokemon mRNA在乳腺癌组织中的表达及意义

目的探讨乳腺癌组织中Pokemon mRNA的表达及其意义。方法采用原位杂交法,检测45例乳腺癌、20例癌旁乳腺组织、20例正常乳腺组织中Pokemon mRNA的表达,并对其与乳腺癌临床病理特征的关系进行分析。结果 Pokemon mRNA主要表达于乳腺癌细胞质。乳腺癌组织中Pokemon mRNA表达率为71.11%（32/45）,显著高于癌旁乳腺组织30.00%（6/20）和正常乳腺组织20.00%（4/20）,P〈0.05。有腋窝淋巴结转移组Pokemon mRNA表达率（90.00%）显著高于无腋窝淋巴结转移组（56.00%）,P〈0.05。组织学分级Ⅲ级组织Pokemon mRNA表达率（100.00%）显著高于Ⅰ级组织（53.33%）,P〈0.05。结论 Pokemon mRNA过度表达可能在乳腺癌发生中起重要作用,且与腋窝淋巴结转移及其组织学分级相关。     

多种肿瘤抑制基因在视网膜母细胞瘤中存在状态的研究

目的 深入研究视网膜母细胞瘤（ＲＢ）内多种肿瘤抑制基因的存在状态。方法 综合利用ＳＳＣＰ分析、ＤＮＡ序列测定以及多重ＰＣＲ等技术,检测分析ＲＢ肿瘤内Ｒｂ、ｐ５３,ｐ１６,ｐ１５及ｐ１２等肿瘤抑制基因是存在缺失与点突变。结果 约７４％的ＲＢ肿瘤有Ｒｂ基因点突变,１６％显示,ｐ１６基因缺失,但ｐ５３及ｐ２１基因除多态性外未检测到真正的点突变。结论 ＲＢ的发病和病变的进展主要是由于以Ｒｂ基因为核心的代谢     

亚硒酸钠抗氧化作用与抑瘤效应的实验观察

人ｐ１６基因是最近发现的一种肿瘤抑制基因。ｐ１６蛋白作为一种细胞增殖的负调控因子，在恶性肿瘤发生发展中起重要作用。为了进一步探讨ｐ１６基因的抗肿瘤特性，我们通过运用分子克隆技术构建重组人ｐ１６基因表达载体（ｐｃＤＮＡ３－ｐ１６），并通过电穿孔方法将ｐ１６基因导入到人肺腺癌ＮＣＩ－Ｈ４６０细胞中，经Ｃ４１８筛选获得可稳定表达ｐ１６的人肺腺癌细胞，观察ｐ１６基因对人肺腺癌细胞周期的影响和细胞增殖的作用     

探讨HBV X、TGF-alpha,c-myc及beta-catenin基因与高发区肝癌的相关性

目的　研究HBVX基因、TGF alhpa、c myc、beta catenin等癌变相关基因及 2 49密码子突变的p5 3蛋白在高发区肝细胞癌癌变发生及其恶性表型维持所发挥的作用。方法　以肝癌高发区启东的肝癌细胞株 770 1和 770 3标本作为研究对象 ,以PCR及DNA测序分析方法确定HBVX基因在细胞DNA水平的整合。以RT PCR及Western blot检测HBVX基因的转录与表达。用PCR RFLP方法确定 p5 3基因 2 49密码子的错义突变。应用免疫组织化学法分析TGF alhpa ,c myc ,beta catenin的表达。结果　 2株细胞在DNA水平都存在HBVX基因片断的整合 ,但未见完整的转录和蛋白水平表达。序列分析显示 2株细胞的HBVX基因的序列各有特异性 ,并存在 13 0、13 1密码子的热点突变。PCR RFLP分析说明 2个细胞株中p5 3基因 2 49密码子均属野生型。免疫组化显示 2株细胞中TGF alpha ,c myc和beta catenin蛋白均有显著的积累。 结论　本实验的结果显示HBVX基因对这 2株细胞恶性表型的维持并不存在必然的关联 ,而是 1种HBV感染的遗传标志。未见HBVX基因蛋白表达 ,可能由于X基因 3′端缺失变异所致。免疫组化的结果显示TGF alpha ,c myc和beta catenin蛋白的显著积累 ,说明多种癌基因的相互协同 ,可能与肝癌的发生、发展及恶性表型的维持相关联     

Mechanisms by which eucaryotic genes evolve

Summary This paper reviews our current efforts to understand the evolutionary origin of the ovomucoid gene. Sequence analyses have suggested that introns were present in the primordial ovomucoid gene before birds and mammals diverged, about three hundred million years ago. Our work suggests that the present ovomucoid gene has evolved from a primordial ovomucoid gene by two separate intragenic duplications followed by the addition of a final segment which codes for a secretory signal sequence. The three domains of the secreted peptide and also the signal sequence, are constructed by an apparent assembly of exons which code for individual peptide segments. The exact position of introns within the ovomucoid gene has been defined and the results support the theory that introns separate gene segments that code for functional domains of proteins and provide insight into the manner by which eucaryotic genes were constructed during the process of evolution.     

含小鼠糖皮质激素受体第二外显子基因片段的克隆和结构分析

克隆适于构建可调控基因打靶载体的小鼠糖皮质激素受体（ＧＲ）基因片段,为建立糖皮质激素受体基因缺陷型小鼠模型奠定基础。和ＰＣＲ扩增小鼠ＧＲ基因第二外显子上５６２ｂｐ的核酸片段作为探针,筛选小鼠基因组文库,共获得６个阳性克隆。对Ｃ１０克隆进行详细的测序和酶切图谱和Ｓｏｕｔｈｅｍ杂交分析事一６．５ｋｂ的基因片段。该片段含完整的ＧＲ基因第二外显子,基或分别有３．９ｋｂ和１．４ｋｂ的ＤＮＡ片段可作为下一步构     

RFP标记的 YCD 基因在 HeLa 细胞中的表达及其介导的细胞毒性

背景与目的 :探讨红色荧光蛋白标记的酿酒酵母菌胞嘧啶脱氨酶(YCD)基因在人宫颈癌细胞(HeLa细胞)中的表达及其功能。材料与方法 :采用基因重组技术构建含有CMV启动子和RFP、YCD基因开放阅读框(ORF)的真核表达载体pIRES_YCD ,脂质体法转染HeLa细胞。荧光显微镜下观察转染细胞中红色荧光蛋白的表达 ,流式细胞术分析转染效率及荧光强度并筛选荧光阳性细胞 ,命名为HeLa_Y。以不同浓度的前药5_FC处理HeLa_Y细胞 ,MTT法检测细胞存活率。 结果 :荧光显微镜下可见红色荧光蛋白在HeLa_Y细胞中表达 ,流式细胞术成功筛选出HeLa_Y细胞。前药5_FC能明显杀伤HeLa_Y细胞 ,5_FC浓度与HeLa_Y之间存在对数曲线关系。结论 :RFP可作为报告基因快速筛选YCD表达载体转染的细胞 ,YCD/5_FC自杀基因系统可以进一步用于肿瘤的基因治疗研究     

肿瘤基因治疗阳离子载体应用中的问题与策略

采用阳离子载体将肿瘤治疗基因送入靶细胞中表达 ,须经历体内传递、穿过细胞膜、细胞内传递、细胞内表达等多个步骤。当前研究表明 ,阳离子载体在此过程中面临一系列独特的问题 ,对这些问题的研究与解决大大推动了对阳离子载体的认识与应用。     

MTX耐药基因在骨髓干细胞中的高效表达

以脂质体为载体，把突变的抗ＭＴＸ的耐药基因转染到小鼠的造血干细胞中，用不同浓度的ＭＴＸ对细胞进行筛选。结果发现同一浓度下已转染基因组的细胞接种率大于未转染基因组的细胞接种率，未转染组对ＭＴＸ耐受性差，克隆形成率低。行卡方检验，同一浓度下的组间差异显著（Ｐ〈０．００１）。ＰＣＲ分析证实抗ＭＴＸ的耐药基因在造血干细胞中有效表达，该实验为进一步研究ＭＴＸ治疗的肿瘤患者减少骨髓毒性，提供了有参考价值的资料     

bcl-2、bax和mdrl基因表达与急性白血病的治疗及预后

目的 :研究探讨 bcl- 2基因、bax基因和 m drl基因表达与急性白血病的治疗及预后的关系。方法 :用链亲和素—胶体金原位杂交检测了 5 6例 AL 患者的 bcl- 2、bax和 mdrl基因表达。结果 :bcl- 2和 mdrl基因低表达及 bax基因高表达患者的完全缓解率 (CR)高 ,bcl- 2 /bax比值 <0 .6患者的 CR率更明显高于 >1.2者 (P<0 .0 0 1)。结论 :bcl- 2、m dr1及 bax基因表达是 AL 相对预后不良因素 ,bcl/bax比值更是决定 AL 预后好坏的关键指标。     

Stathmin 基因在非小细胞肺癌中的表达

目的：检测 Stathmin 基因在非小细胞肺癌组织中的表达,探讨其与临床病理因素的关系。方法：用免疫组织化学 SP 法检测135例非小细胞肺癌及20例癌旁肺组织中 Stathmin 蛋白的表达,分析其与患者年龄、性别、肿瘤分化程度等临床病理特征之间的相关性。结果：小细胞肺癌组织中 Stathmin 基因蛋白的表达水平明显高于癌旁肺组织（P ＜0．05）,Stathmin 的表达与淋巴结转移有关（P ＜0．05）。结论：Stathmin 基因在非小细胞肺癌组织中的表达显著上调;Stathmin 基因的表达与淋巴结转移有关,而与年龄、性别、肿瘤大小、TNM分期、组织类型无关。