肝外胆管癌组织中的HBsAg和HCV NS5抗原检测

1　材料和方法11　材料　51例肝外胆管癌(ＥＢＤＣ)选自解放军总医院外科手术切除标本,均为不同分化程度的腺癌,经10%甲醛固定、脱水,常规石蜡包埋。其中2例血清ＨＢｓＡｇ阳性(39%),9例抗ＨＣＶ阴性,2例同时检测了血清ＨＣＶＲＮＡ和ＨＢＶＤＮＡ,均为阴性,40例无血清ＨＣＶ相关检查。鼠抗ＨＢｓＡｇ和ＨＣＶＮＳ5抗体、生物素化二抗、ＨＲＰ标记的链霉亲合素(ＳＡ/ＨＲＰ),购自北京中山生物技术有限公司。12　方法　采用酶标链霉亲合素生物素(ＳＰ)方法。切片脱蜡至水,微波炉抗原修复,血清封闭,加1抗(1∶50稀释),4℃过夜,加二抗(1∶200稀…     

内耳石蜡切片HE整块染色的改良制作

有关内耳组织切片制作方法组织学技术书上有些介绍 ,多采用火棉胶、石蜡或火棉胶石蜡双重包埋ＨＥ片染制作 ,还有采用常规石蜡包埋 ,ＨＥ块染制作 ,但效果都不够理想 ,切片容易破损 ,裱片时展不开 ,且制作时间较长等。本室通过多次实验 ,在传统块染的基础上采取了一些改良 :采用Ｂｏｕｉｎ氏固定液内固定后 ,再用一种固定兼脱钙液继续外固定和脱钙 ,同时真空抽气 ,ＨＥ整块在 3 7℃下进行深染色 ,严格控制石蜡包埋温度 ,延长组织浸蜡时间 ,用 0 .5 %的冰醋酸 (ＨＡＣ)水溶液展片 ,取得较好效果。现报告如下 :1　材料与方法1)　材料 :一般采…     

用原位 PCR 研究石蜡包埋肝组织中微量 HCV RNA

为定位分析石蜡包埋肝组织中微量ＨＣＶＲＮＡ，改良建立了原位ＰＣＲ检测技术，并对１７例丙型肝炎相关的肝细胞癌患者癌组织和癌周肝组织石蜡包埋切片进行检测。结果显示：该技术的特异性可靠，敏感性高于原位杂交法；两种组织切片ＨＣＶＲＮＡ阳性率分别为４１．２％和７０．６％，阳性信号主要呈胞浆型分布；在癌细胞中核型和核膜型分布比例较癌周肝组织明显增高，提示ＨＣＶ可能与宿主细胞基因存在着相互作用。     

胃黏膜切片制作中的包埋技术

为胃镜下取得的胃肠黏膜组织制作一张质量高的石蜡切片 ,组织的包埋也是一个关键。现就有关包埋法进行探讨。1　材料与方法　　经胃镜取得黏膜组织后 ,按切片ＨＥ标本的常规制作过程中 ,需注意以下几点。1.1　固定与标记　将组织标本放到滤纸小片上 ,立即置于 10 %甲醛混合固定液中 (40 %甲醛 10ｍｌ加蒸馏水 90ｍｌ与 95 %酒精 2 0ｍｌ)。如送检组织太小 ,为避免脱水后标本不容易看清 ,可用伊红酒精液滴 1～ 2滴作为着色标记。1.2　脱水与透明　用 95 %酒精两道 ,次日用纯酒精两道脱水 ,各 35～4 0ｍｉｎ。用二甲苯两道透明各 10ｍｉｎ。1.…     

p^16INK4、^nm23／NDPK在肺癌组织中表达的实验研究

由于抑癌基因通过负性调节细胞生长作用可阻止细胞的癌变 ,因此抑癌基因一直是肿瘤研究的热点。本实验应用免疫组化ＬＳＡＢ法检测 81例肺癌石蜡包埋组织中 ｐ16ＩＮＫ4 及ｎｍ2 3/ＮＤＰＫ的表达情况 ,以评价其在肺癌诊断分型及判断预后方面的应用价值。1　材料和方法1.1材料　研究对象为中日联谊医院 1990— 1995年肺癌住院患者术后石蜡包埋组织 81例 ,男 49例 ,女 32例 ,平均年龄5 4岁。其中鳞癌 2 6例、腺癌 30例、小细胞癌 2 5例 ,伴淋巴结转移 41例 ,无淋巴结转移 40例。上述标本均制备 5 μｍ切片。按国际ＰＴＮＭ分期 :Ⅰ期 49例、…     

用原位PCR研究石蜡包埋肝组织中微量HCV RNA

为定位分析石蜡包埋肝组织中微量ＨＣＶ ＨＮＡ，改良建立了原位ＰＣＲ检测技术，并对１７例丙型肝炎相关的肝细胞癌患者癌组织和癌周肝组织石蜡包埋切片进行检测。结果显示：该技术的特异性可靠，敏感性高于原位杂交法；两种组织切片ＨＣＶ ＲＮＡ阳性率分别为４１．２％和７０．６％，阳性信号主要呈胸浆型分布；     

癌基因检测的FISH技术在胃癌研究中的应用

荧光原位杂交技术 (Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｉｎｓｉｔｕｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ.ＦＩＳＨ ) ,是一种敏感的方法。最早用于细胞遗传学染色体的分析[1、2 ] ,近年来用于肿瘤基因分析研究[3、4] 。我们在胃癌研究中 ,通过ＦＩＳＨ技术达到准确检测石蜡包埋组织切片中 ｐ5 3和ｃ＿ｅｒｂＢ - 2基因表达的目的 ,并取得了较理想的效果 ,其方法和体会介绍如下。1　材料和方法1 .1　材料　我院 1 996～ 1 998年胃癌根治术切除的标本 5 5例 ,每例标本按肿瘤区、移行区 (距肿瘤 0 .5～ 1ｃｍ)和正常区取材 ,1 0 %甲醛固定 ,常规脱水包埋 ,切片…     

快速石蜡包埋切片法代替冰冻切片法的初步体会

近几年来我科采用提高温度的方法 ,进行快速石蜡包埋切片法 ,以替代冰冻切片法。经 10 0多例的病理检验证明 ,结果满意 ,一般 30～ 40分钟可出诊断结果 ,而反复切多块检验约需 40～ 6 0分钟。1　方法要点1 1　试剂　 (1)混合固定液 :含 40 %甲醛液 10ｍｌ,95 %酒精 85ｍｌ,冰乙酸 5ｍｌ,三种药液混合而成 ;(2 )无水乙醇 ;(3)纯丙酮 ;(4)二甲苯。1 2　方法　 (1)试剂置温箱预热温度为 80℃～ 90。℃ ;(2 )标本取材 :①快检手术标本与普通石蜡切片取材大小相似 ,煮沸固定 1分钟 (混合固定液 ) ,取出后修整 (因高温固定 ,组织块变形 )比普通石…     

组织切片加酸处理消除组织“发灰”现象

中性甲醛固定标本可保持组织内的大多数抗原 ,对免疫组织化学技术和原位杂交技术影响轻微[1 ] ,现已被国内大多数病理科采用。但在日常工作中 ,我们发现中性甲醛固定的组织常给 HE染色带来不利影响 ,可引起组织“发灰”现象。我们在染苏木素之前对组织进行酸处理加以纠正 ,镜下观察取得良好的效果。1　材料与方法1.1　材料　随机抽取子宫肌瘤组织、宫颈组织、乳腺良性组织、乳腺导管癌组织、子宫内膜组织、卵巢、输卵管等 30个蜡块。1.2　方法　所选用组织都经 10 %的中性甲醛固定 ,梯度酒精脱水 ,常规石蜡包埋 ,4 μm连续切片 2张。分成 …     

肝癌的病毒病因学研究

为了探讨了乙型肝炎病毒（ＨＢＶ），丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）感染与肝细胞肝癌（ＨＣＣ）发生的关系及原癌基因ｒａｓ和肿瘤抑制基因ｐ５３在肝癌中的变化，我们利用免疫组人技术检测了福尔马林固定，石蜡包埋理肝癌组织内乙型肝炎病毒表面抗原（ＨＢｓＡｇ），核心抗原（ＨＢｓＡｇ）的表达以及ｒａｓＰ２１，ｐ５３蛋白的过量表达，利用聚合物聚链式反应（ＰＣＲ）检测了肝癌及癌旁组织的ＨＢＶＤＮＡ和ＨＣＶＲＮＡ。在２５例外检     

鼻型NK/T细胞淋巴瘤病理诊断相关指标的意义

1 对象和方法 　　1.1 对象鼻型NK/T细胞淋巴瘤石蜡组织20例选自延安大学医学院和北京医科大学病理学系的外检档案及会诊材料,所有标本经40 g/L甲醛固定,石蜡包埋,HE染色及免疫组织化学染色,结合临床表现及组织病理形态特征,诊断为鼻型NK/T细胞淋巴瘤. 　　……     

石蜡切片的标本固定与石蜡精练对制片的影响

含有组织块的蜡块 (简称蜡块 )是ＨＥ石蜡切片和用作免疫组化标记、原位分子杂交的原材料。蜡块的质量不仅影响日常病理检验诊断工作 ,而且关系到用于科研的第一手材料是否可靠。本文通过石蜡切片制片过程中标本加强固定以及将制作蜡块的石蜡进行精练 ,从而对提高蜡块的质量进行探讨。1　材料和方法1.1　材料　收集 1999～ 2 0 0 0年我院外检组织 ,所有标本均用我院配制的固定液固定。固定液配制方法 :福尔马林原液(4 0 %甲醛 ) 12 0ｍｌ,蒸馏水 880ｍｌ,磷酸二氢钠 (ＮａＨ2 ＰＯ4 ·Ｈ2 Ｏ) 4 ｇ ,磷酸氢二钠 (Ｎａ2 ＨＰＯ4 ) 13ｇ ,使 …     

档案标本中的RNA提取及扩增技术

石蜡包埋组织和其他固定组织代表档案标本,这些组织是前瞻和回顾性分子遗传学或感染疾病研究的巨大资源。用RT-PCR方法扩增福乐马林固定、石蜡包埋组织中的RNA,为固定材料中基因表达和RNA病毒回顾性分析等流行病学问题的研究提供了最有价值、简单方便的方法。1 材 料 用10%的中性福尔马林缓冲液（BNF）固定的肺腺癌组织标本,二甲苯、乙醇、缓冲液、dNTP及逆转录酶,Taq酶。2 方 法2.1 固定材料中的RNA提取 档案材料为福尔马林固定、石蜡包埋组织。首先对材料脱蜡,所用的试剂是二甲苯。脱蜡两次后,用乙醇洗去二甲苯。取脱蜡组…     

生物素标记寡核苷酸探针改良原位杂交法检测石蜡包埋组织中…

采用生物素标记的寡核苷酸探针，应用改良的原位杂交方法，检测了鼻咽癌及淋疤结转移癌标本石蜡包埋组织中的ＥＢ病毒ｍＲＮＡ。结果显示，ＥＢ病毒阳性反应清晰，无非特异性背景。结果表明，本实验中所应用的探针及改良的原位杂交方法可以迅速准确地检测组织内ＥＢ病毒ｍＲＮＡ的存在。     

生物素标记寡核苷酸探针改良原位杂交法检测石蜡包埋组织中EB病毒mRNA

采用生物素标记的寡核苷酸探针，应用改良的原位杂交方法，检测了鼻咽癌及淋疤结转移癌标本石蜡包埋组织中的ＥＢ病毒ｍＲＮＡ。结果显示，ＥＢ病毒阳性反应清晰，无非特异性背景。结果表明，本实验中所应用的探针及改良的原位杂交方法可以迅速准确地检测组织内ＥＢ病毒ｍＲＮＡ的存在。     

眼球的HE整体染色石蜡包埋切片法

眼球切片标本的制作 ,传统方法是用火棉胶包埋切片染色法 ,石蜡包埋切片染色法也有许多报道 ,把ＨＥ块染色法[1 ] 应用于全眼球染色 ,用石蜡包埋切片 ,并进行了改进。结果 ;眼球各部结构染色层次清楚。经反复试验 ,效果良好 ,适合大量制作切片标本 ,方法如下。1　材料与方法1 .1　取材与固定处死动物 ,速取其眼球立即投入ＡＧＦＤ眼球固定液 (丙酮 1 0 0ｍＬ、冰醋酸 4ｍＬ、福尔马林 8ｍＬ、蒸馏水 6ｍＬ) ,1Ｗ后 ,将原液倒出一半 ,再加等量丙酮固定 5ｄ。1 .2　固定后处理将眼球从固定液中取出快速按视神经乳头的平行方向从上、下两侧对称…     

ki—67在胃癌细胞中的表达及其意义

ｋｉ－６７在胃癌细胞中的表达及其意义徐蕾赵凤凯李晓玲１吴东瑛王艳萍辛彦（肿瘤研究所胃癌研究室，沈阳１１０００１）关键词ｋｉ－６７；胃癌；抗体；多克隆作者应用ＤＡＫＯ公司新推出的ｋｉ－６７多克隆抗体（ＤＡＫＯ、ＡＯ４７），对甲醛固定、石蜡包埋的组织切片...     

应用PCR技术研究肝细胞性肝癌组织中的HCVRNA,HDVRNA和HG …

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测３１例石蜡包埋的肝细胞性肝癌（ＨＣＣ）组织中的ＨＣＶＲＮＡ、ＨＤＶＲＮＡ和ＨＧＶＲＮＡ。结果ＨＣＶＲＮＡ阳性４例，ＨＤＶＲＮＡ阳性１例，ＨＧＶＲＮＡ未检出，阳性率分别为１２．９％、３．３％和０，表明ＨＣＣ的发生民ＨＣＶ有一定相关性。     

HBV DNA在HBsAg阴性的原发性胆管细胞性肝癌石蜡包埋肝组织中的检出

对２４例酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）ＨＢｓＡｇ阴性的原发性胆管细胞性肝癌的石蜡包埋肝组织，应用ＰＣＲ－ＥＢ法检测了乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）ＤＮＡ，并与ＥＬＩＳＡ法检测的血清免疫学标志物（乙肝５项：ＨＢｓＡｇ、抗－ＨＢｓ、ＨＢｅＡｇ、抗－ＨＢｅ、抗－ＨＢｃ）结果进行对比。结果显示血清学乙肝５项均阴性的及ＨＢｓＡｇ阴性但其它４项中至少有１项阳性的胆管细胞性肝癌石蜡包埋肝组织中，ＨＢＶＤＮＡ阳性检出率分别为３８．９％和４５．８％，证实ＨＢｓＡｇ血清学阴性者肝组织中仍有ＨＢＶＤＮＡ存在     

石蜡切片浸银染色显示大脑皮质神经元的Golgi改良法

传统制作大脑组织镀银染色标本多选用火棉胶浸银技术[1]。也有人采用快速高尔基法固定、染色,“石蜡壳”技术包埋,用滑动切片机切片来显示Wis-tar大鼠大脑皮质锥体细胞的形态[2]。本实验选用更为常用的石蜡包埋,并省去氯化金等贵重试剂,使用普通切片机连续切片制作大脑镀银染色标本。此方法简单、方便、经济,多次实验效果稳定,有利于进行科研试验和大批量制作教学标本。1材料与方法1.1取材和固定60 d龄仔一代Wistar大鼠股动脉放血处死后迅速取大脑组织,左右大脑半球分开,中性缓冲福尔马林溶液固定24 h。1.2修块左右大脑半球每侧取后2/3,冠…