诱导方法对多药耐药细胞系A549／Gem建立的影响

目的：探讨诱导方法对多药耐药细胞系A549／Gem建立的影响。方法：以A549细胞为原代细胞,采用4种方法,建立多药耐药细胞系A549／Gem-1、A549／Gem-2、A549／Gem-3和A549／Gem-4（统称A549／Gem）。比较其诱导前后耐药指数和耐药谱、形态学特征、倍增时间、细胞周期分布及,TPS、SCC、CEA、CY—FRA21—1、ERCC1和RRM1mRNA表达的变化。结果：4种细胞对吉西他滨的耐药指数分别为38．277、12．268、115．297和25．679,均获得多药耐药性,但耐药谱差别较大。其中,A549／Gem-1和A549／Gem-4细胞的G0—G1期细胞比例较A549细胞降低。A549／Gem细胞的倍增时间较A549细胞缩短,形态学变化显著,CEA、TPS、SCC和CYFRA21—1表达变化不大,RRM1和ERCC1mRNA相对表达量增多。结论：A549／Gem细胞获得多药耐药性,诱导方法对其建立影响较大。     

多药耐药细胞株A549/Gem的建立及其生物学特性研究

背景和目的多药耐药是导致非小细胞肺癌患者生存期缩短的重要因素。本研究建立了多药耐药细胞株A549/Gem;通过研究其生物学特性,初步从细胞水平分析其获得性耐药的可能机制。方法以人肺腺癌细胞株A549为亲代细胞,采用"临床血浆峰浓度冲击与逐步增加剂量相结合诱导"法,用吉西他滨进行诱导,建立多药耐药细胞株A549/Gem,把诱导过程中的细胞命名为A549/Gem'。分别在诱导前、诱导过程中和诱导成功后的三个不同时间点,应用MTT法检测其耐药指数和对其他化疗药物的敏感性,置于倒置光学显微镜下观察形态学特征,通过绘制生长曲线计算倍增时间,流式细胞术分析细胞周期分布,免疫细胞化学染色检测P53、EGFR、c-erb-B-2、PTEN、PCNA、c-myc、VEGF、MDR-1、Bcl-2、nm23、MMP-9、TIMP-1和CD44v6蛋白的表达,实时荧光定量PCR法检测RRM1 mRNA表达。结果A549/Gem~ 细胞对吉西他滨耐药指数为163.228,对长春瑞宾(耐药指数为5.587±1.210)、多西他赛(耐药指数为102.147±10.259)、氟尿嘧啶(耐药指数为38.694±9.635)、依托泊甙(耐药指数>1000)、顺铂(耐药指数为2.357±11.209)耐药,对紫杉醇(耐药指数为0.264±0.024)、奥沙利铂(耐药指数为0.596±0.128)敏感;倍增时间(146.941h)比A549细胞(186.479h)缩短,G0-G1期细胞(分别为77.07%、71.30%)增多,失去PTEN、PCNA和MDR-1表达,P53、Cerb-B-2和bcl-2表达减弱,出现EGFR( )、c-myc( )表达,nm23表达增强,而MMP-9、VEGF、CD44v6和TIMP-1表达无变化,RRM1 mRNA的相对表达量明显增多。A549/Gem细胞对吉西他滨的耐药指数为129.783,并保持长春瑞宾(耐药指数为4.969±1.203)、多西他赛(耐药指数为58.669±15.206)、依托泊甙(耐药指数>1000)、顺铂(耐药指数为92.594±0.269)耐药性和紫杉醇敏(耐药指数为0.584±0.115)感性,但均较A549/Gem'细胞有所降低,而对奥沙利铂的敏感性(耐药指数为0.259±0.195)和对氟尿嘧啶的耐药性(耐药指数为0.958±0.152)消失,倍增时间(155.749 h)比A549/Gem'细胞稍延长,G0-G1期细胞稍减少,P53、EGFR、PCNA和MDR-1表达与A549/Gem'相同,出现TIMP-1、PTEN表达,Cerb-B-2、MMP-9、c-myc和bcl-2表达增强,nm23表达消失,而VEGF和CD44v6表达始终无变化,RRMl mRNA的相对表达量较A549/Gem'明显减少。与A549细胞相比,A549/Gem细胞逐渐呈现出如下形态学特征:形态不规则、形态各异、大小不一,且透光性减弱。结论A549/Gem细胞的生物学特性较A549细胞发生较大变化,其多药耐药性的发生与多种基因表达有关。     

A549/CDDP多药耐药细胞系的建立

建立多药耐药细胞系是体外研究肿瘤多药耐药性的基础。顺铂 (cisplatin ,CDDP)是肺癌化疗的基础药物之一 ,然而 ,在临床应用中 ,多数患者经初始化疗缓解后 ,肺癌细胞对顺铂产生了耐药性 ,影响了治疗效果 ,为探讨肺癌细胞对顺铂产生耐药性的机制 ,本实验以顺铂为诱导药物 ,人肺腺癌细胞系A549为诱导对象 ,采用大剂量冲击与逐步增加剂量相结合的方法 ,诱导建立人肺腺癌多药耐药细胞系。材料和方法一　试剂　顺铂为昆明三戍贵金属药业有限公司产品 ,丝裂霉素 (mitomycin)为浙江海正药业有限股份公司产品、多柔比星 (doxorubicin)深圳万乐药业…     

吉西他滨耐药细胞系H460/Gem的建立及其生物学特性研究

目的:建立吉西他滨耐药细胞系H460/Gem,通过研究其生物学特性,初步从细胞水平分析其获得性耐药的可能机制。方法:以人肺大细胞癌细胞系NCI-H460为亲代细胞,采用"2/3临床血浆峰浓度间歇诱导"法,用吉西他滨进行诱导,建立耐吉西他滨的细胞亚系H460/Gem,把诱导过程中的细胞命名为H460/Gem。分别在诱导前、诱导过程中和诱导成功后的三个不同时间点,采用MTT法检测其耐药指数和对其他化疗药物的敏感性,使用倒置光学显微镜观察形态学特征,通过绘制生长曲线计算倍增时间,以流式细胞术分析细胞周期分布,以免疫细胞化学染色检测P53、EGFR、C-erbB-2、PTEN、PCNA、c-myc、VEGF、MDR-1、Bcl-2、nm23、MMP-9、TIMP-1和CD44v6蛋白的表达,采用实时荧光定量PCR法检测RRM1mRNA表达。结果:H460/Gem细胞对吉西他滨耐药指数为1.201时,对紫杉醇、氟尿嘧啶、依托泊甙、顺铂、奥沙利铂耐药,对长春瑞滨、多西他赛敏感;它的倍增时间(18.611小时)比NCI-H460细胞(16.731小时)稍延长,G0~G1期细胞减少(分别为51.56%和68.06%),VEGF、MMP-9表达减弱,失去CD44v6和P53表达,nm23表达增强,出现TIMP-1表达,EGFR、C-erbB-2、PTEN、PC-NA、c-myc、MDR-1、Bcl-2表达无变化,RRM1 mRNA的相对表达量有所减少(分别为0.1589和0.4510)。H460/Gem细胞对吉西他滨的耐药指数为1.644时,同时对氟尿嘧啶、顺铂和奥沙利铂耐药,而对紫杉醇、长春瑞滨、多西他赛和依托泊甙敏感,倍增时间(51.539小时)比NCI-H460细胞明显延长,G0~G1期细胞(57.23%)有所减少,MDR-1、nm23、Bcl-2表达增强,出现C-erbB-2表达,P53、MMP-9和VEGR表达减弱,PTEN、PCNA、c-myc、TIMP-1、EGFR和CD44v6表达无变化,RRM1 mRNA的相对表达量(0.3389)变化不大。与NCI-H460细胞相比,H460/Gem细胞逐渐呈现出如下形态学特征:形态不规则,大小不一,形态各异,且透光性减弱。结论:H460/Gem细胞的生物学特性较NCI-H460细胞发生了较大变化,其多药耐药性的发生与多种基因表达有关。     

人骨肉瘤耐药细胞系MG-63/PTX的建立及多药耐药机制研究

目的 建立人骨肉瘤细胞多药耐药亚系,探讨骨肉瘤细胞多药耐药的发生机制.方法 采用紫杉醇大剂量间断冲击培养法,诱导建立紫杉醇耐药骨肉瘤细胞系(MG-63/PTX),并运用MTT法检测6种药物敏感性变化及细胞生长规律变化,流式细胞仪分析亲本细胞系和耐药细胞系的细胞膜表面P-gp蛋白表达率、罗丹明123排出情况,RT-PCR检测细胞内耐药基因的变化,免疫细胞化学法检测细胞内P-gp蛋白的表达,Westernblotting法检测细胞内P-gp蛋白的表达.结果 历时12个月建成人骨肉瘤耐药细胞系MG-63/PTX,能在含PTX1μg/mL的培养基中稳定生长并传代,其对PTX的耐药指数为69.8,并与卡铂、顺铂、表柔比星、甲氨蝶呤、阿霉素等多种化疗药物存在不同程度的交叉耐药性;罗丹明123排出实验显示MG-63/PTX内罗丹明含量明显低于亲本细胞;RT-PCR结果显示在MG-63/PTX细胞系中存在MDR1、MRP1、LRP、ABCG2基因的表达,而在MG-63细胞系中无MDR1基因的表达.免疫细胞化学、流式细胞仪及Western blotting实验均显示在MG-63/PTX中存在P-gp的表达.结论 MDR1/ P-gp在多药耐药的特性上起着至关重要的作用,而且骨肉瘤多药耐药细胞亚系为进一步研究骨肉瘤耐药特征及逆转方法打下基础.     

人肺腺癌多药耐药细胞系A549/cDDP的建立及相关基因表达检测

背景与目的 现有研究表明,肺癌细胞多药耐药造成的化疗失败是影响患者生存率的主要原因.本研究旨在建立人肺癌多药耐药细胞系,研究其耐药特性和机制.方法 应用人肺腺痛细胞株A549,采用顺铂(cDDP)大剂量间歇诱导法,建立多药耐药细胞系A549/cDDP.相差显微镜观察细胞形态和结构差异,绘制两种细胞的体外生长曲线.用MTT法检测该耐药细胞株对多种化疗药物的多药耐药性,采用流式细胞术检测该耐药细胞表面多耐药基因(MDR)的表达产物P糖蛋白(P-gp)、多药耐药相关蛋白(MRP)及谷胱甘肽硫转移系统(GSH/GST)的表达情况,应用RT-PCR检测MDR、MRP基因表达水平.结果 A549/cDDP对多种抗癌药物耐药,各种抗癌药物IC50显著提高:(70.±4.9)%的A549/DDP细胞表面P-gp表达阳性,而对照细胞A549表达仅为(42.4±5.6)%;(29.4±2.9)%的A549/DDP细胞表面MRP表达阳性,而对照细胞A549表达仅为(21.4±3.5)%,二者有差异(t=11.94;t=5.56,P均<0.01);A549/cDDP和A549细胞的GSH/GST表达无明显变化(P>0.05).RT-PCR检测发现A549/cDDP中的MDR mRNA及MRP mRNA高表达.结论 建立的A549/cDDP具有明确的多药耐药性,其多药耐药基因MDR mRNA及MRP mRNA表达升高.     

多药耐药细胞株A549/Gem及其亲代细胞A549之间的区别研究

Objective: To discuss the difference between multi-drug resistant cell line A549/Gem and its parental cell A549 on the basis of establishment of human gemcitabine-resistant cell line A549/Gem so as to elaborate the possible mechanisms of gemcitabine resistance. Methods: Human gemcitabine-resistant non-small cell lung cancer cell line A549/Gem was estab-lished by the method of repeated clinical serous peak concentration plus gradually increasing concentration of gemcitabine from its parental cell human lung adenocaroinoma cell line A549 which was sensitive to gemcitabine. During the course of inducement, we had monitored their morphology, checked their resistance indexes and resistant pedigree by MTT method, gathered their growth curves and calculated their doubling time, examined their DNA contents and cell cycles by FCM; at the same time, we had measured their expressions of P53, EGFR, Cerb-B-2, PTEN, PCNA, c-myc, VEGF, MDR-1, Bcl-2, nm23, MMP-9, TIMP-1, and CD44v6 proteins via immunocytochemistry staining, RRM1 and ERCC1 mRNA by real-time fluorescent quantitative-PCR. Results: The resistance index of A549/Gem' cells (the deputy of cells in the process of inducement) to gemcitabine was 163.228, and the cell line also exhibited cross-resistance to vinorelbine, taxotere, fluorouraci, etoposide and cisplatin, but kept sensitivity to paclitaxol and oxaliplatin. The doubling time of A549/Gem' was shorter and figures in G0-G1 phases were increased than A549 cells. Compared with A549 cells, A549/Gem' cells achieved EGFR and c-myc proteins expressions, nm23 protein expression enhanced, P53, Cerb-B-2 and Bcl-2 proteins expressions reduced, PTEN ,PCNA and MDR-1 proteins expressions vanished, but those of MMP-9, VEGF, CD44v6 and TIMP-1 proteins changed trivially. Meanwhile, expressions of RRM1 and ERCC1 mRNA were augmented markedly. The resistance index of A549/Gem cells to gemcitabine was 129.783, and the cell line also held cross-resistance to vinorelbine, taxotere, etoposide, cisplatin and sensitivity to paclitaxol. But the resistance to fiuorouracil and sensitivity to oxaliplatin vanished. And the expression of RRM1 and ERCC1 mRNA decreased visibly. The doubling time of A549/Gem cells was longer and figures in G0-G1 phases were decreased than A549/Gem' cells. In A549/Gem cells, expressions of P53, EGFR, PCNA and MDR-1 proteins was same to those of A549/Gem' cells. A549/Gem cells achieved TIMP-1 and PTEN proteins expressions, Cerb-B-2, MMP-9, c-myc and Bcl-2 proteins expressions enhanced, nm23 protein expressions vanished, but the expressions of VEGF and CD44v6 proteins changed trivially. Furthermore, Compared with its parental cell A549, A549/Gem cell was mixed with giant cells of different sizes and was larger and more irregular. Conclusion: The human gemcitabine-resistant non-small cell lung cancer cell line A549/Gem had achieved multi-drug resistance and great changes of biological characters compared with its parental cells A549. And these changes possibly participated in the formation of multidrug resistance.     

X射线照射对鼻咽癌细胞多药耐药基因表达影响初步研究

目的 RT-PCR法研究累积高剂量X射线照射后多药耐药基因MDR1 mRNA表达随时间的变化趋势,并且探讨Bcl-2、MMP7与MDR1的关系.方法 选取人鼻咽鳞癌CNE1细胞系进行体外培养及X射线照射,累积剂量50 Gy.分别收集CNE1细胞和X射线照后得到的CNE1R细胞,利用MTT法检测CNE1、CNE1R细胞对顺铂的耐药性;RT-PCR技术检测MDR1 mRNA的表达.选取CNE1和MDR1 mRNA表达最高的一组CNE1R细胞检测Bcl-2、MMP7 mRNA的表达情况.结果 CNE1R细胞对顺铂产生耐药性.RT-PCR检测CNE1细胞MDR1 mRNA半定量灰度值为0.47±0.04,照射50 Gy后1、7、21、28、35、42、49 d的CNE1R细胞MDR1 mRNA半定量灰度值均高于CNE1细胞,分别为0.67±0.06(t=-5.44,P=0.003)、0.70±0.01(t=-5.90,P=0.002)、0.73±0.01(t=-6.45,P=0.001)、0.67±0.03(t=-3.97,P=0.011)、0.65±0.01(t=-4.43,P=0.007)、0.62±0.05(t=-2.64,P=0.046)、0.62±0.02(t=-3.34,P=0.021).RT-PCR法检测CNE1细胞和CNE1R细胞中Bcl-2 mRNA表达半定量灰度值不同,分别为0.55±0.02和1.05±0.04(t=-9.93,P=0.000);MMP7 mRNA表达半定量灰度值也不同,分别为0.51±0.01和0.82±0.02(t=-8.51,P=0.000).结论 X射线累积照射50 Gy后CNE1R细胞内MDR1基因表达高于照前CNE1细胞,可能与Bcl-2、MMP7基因表达的同步变化有关.     

建立一种新的多药耐药的诱导方法

目的建立裸鼠原位肝癌耐药模型。方法培养肝癌细胞系HepG2,建立裸鼠的皮下肿瘤,形成“供瘤鼠”。开腹直视下将瘤块种植于裸鼠的肝包膜下建立原位肝癌模型,通过表阿霉素间歇腹腔化疗,建立裸鼠原位肝癌耐药模型。用体检、B超、CT、剖腹探查监测肝内瘤块生长情况。用逆转录聚和酶链反应(RT-PCR)和免疫组织化学方法检测肿瘤耐药基因mdrl-mRNA和p-gp蛋白的表达。结果(1)模型建立无手术死亡(0/25),种植成瘤率为88%(22/25),补种3例全部成功,耐药诱导成功率为80%(16/20);(2)诱导组mdrl-mRNA和P-gp蛋白的表达均明显高于对照组,分别约是对照组的23倍和13倍。结论成功地建立了与临床肝癌相似的裸鼠原位肝癌耐药模型,为进一步研究肝癌多药耐药基因的诊断和逆转提供了良好的动物平台。     

多药耐药基因的临床意义与检测方法

肿瘤细胞对化疗药物的多药耐受性(MDR1)是癌症治疗的主要障碍之一.所谓多药耐药(multidrug resistance,MDR)是由一种药物诱发而同时对其它多种结构和作用机制完全不同的抗癌药物产生的交叉耐药,既对广泛的结构和功能不相同的抗肿瘤药物产生的耐药,导致某些联合化疗方案失败.     

Characterization of salvicine-resistant lung adenocarcinoma A549/SAL cell line

Salvicine is a diterpenoid quinone derived from a traditional Chinese medication that has been shown to possess potent in vitro and in vivo antitumor effects. This compound, which inhibits the activity of Topoisomerase II, was found to equipotently kill various multidrug-resistant tumor cells and their corresponding parental counterparts in vitro and to inhibit mdr1/P-gp expression in multidrug-resistant K562/A02 cells. To examine the features of tumor resistance to salvicine, we established a salvicine-resistant tumor cell subline of A549 lung adenocarcinoma cells. Compared with parental cells, A549/SAL cells displayed 8.91-fold resistance to salvicine and an average of 6.70-fold resistance to the antimetabolites. A549/SAL cells, however, were not resistant to alkylating agents, platinum compounds and other naturally-derived antineoplastics. RT-PCR analysis showed that the expression of mRNAs from the mdr-1, MRP, PCNA, topoisomerase II alpha and beta, GSTpi, p21 and GADD45 genes was not altered in the salvicine-resistant subline. In contrast, expression of p53 and bax mRNA was significantly lower, and expression of mdm2 mRNA was significantly higher, in A549/SAL cells compared to A549 cells. A549/SAL cells grew more slowly, and in a more scattered pattern, than A549 cells. In addition, the A549/SAL cells showed enhanced ability to migrate and invade in comparison to the parental cells. These results indicate that exposure to salvicine does not induce a tumor multidrug-resistant phenotype.     

吉西他滨耐药的A549和NCI-H460细胞中耐药相关基因的表达和RRMl(-)37A/C基因多态性

目的 研究吉西他滨(Gem)耐药的A549和NCI-H460细胞中胞啶脱酰氨酶(CDA)、核糖核苷酸还原酶M1亚单位(RRMl)、10q丢失的与张力蛋白同源的磷酸酶基因(PTEN)、切除修复交叉互补基因1(ERCC1)和脱氧胞苷酸酶(dCK)的表达以及RRMl(-)37A/C基因多态性.方法 采用药物临床血浆峰浓度冲击与逐步增加剂量相结合的诱导方法,成功诱导抗Gem的细胞系A549/Gem和NCI-H460/Gem.在药物诱导前、诱导过程中和诱导成功后,采用实时荧光定量PCR法检测其CDA、RRM1、PTEN、ERCC1和dCKmRNA的表达,并对其RRM1(-)37位点进行基因分型.结果 A549/Gem和NCI-H460/Gem细胞在药物诱导过程中,耐药指数(RI)随诱导时间的延长分别升至163.228和181.684.但达到一定峰值后逐渐降低,直至产生稳定的耐药性,RI分别为115.297和129.783.RRM1、PTEN、ERCC1和CDA mRNA表达量随着对Gem耐受程度的变化增高和降低,而dCK mRNA表达变化不明显.RRM1(-)37等位基因野生型引物能扩增出诱导各阶段A549/Gem和NCI-H460/Gem细胞的基因组DNA,而突变型引物则不能,说明A549/Gem和NCI-H460/Gem细胞目前的基因型与其亲代细胞一样,仍均为野生型.结论 与亲代细胞比较,A549/Gem和NCI-H460/Gem细胞的CDA、RRM1、PTEN和ERCC1表达升高,dCK表达变化不明显;RRM1(-)37位点单核苷酸无突变,其基因型与亲代细胞一样为野生型.     

非小细胞肺癌耐药细胞株A549/DDP中microRNA表达的初步研究

目的:应用miRNA芯片技术检测非小细胞肺癌(NSCLC)细胞株A549及顺铂(DDP)耐药株A549/DDP miRNAs表达的差异.方法:MTT法检测A549/DDP相对于其亲本细胞A549的耐药性和耐药倍数;分别提取2种细胞的总RNA进行质检;microRNA芯片检测NSCLC细胞株A549及对应的DDP耐药株A549/DDP中miRNA表达差异;采用real-time PCR验证结果.结果:DDP对A549和A549/DDP细胞的IC50值分别为7.47和137.32μmol/L,两者差异有统计学意义(P＜0.01),耐药倍数为18.38倍.microRNA芯片结果显示,耐药株A549/DDP与亲本细胞系A549比较有34条有差异表达的miRNA(19条上调,15条下调)差异比值＞1.5倍或＜0.67倍,P＜0.05;real-time PCR的结果进一步证实miR-21、miR-31和miR-374在A549/DDP中显著上调,而miR-378、miR-886-5p、miR-886-3p和miR-520c-3p在A549/DDP中显著下调.结论:A549/DDP与A549的miRNA的表达谱存在差异,miRNA可能参与NSCLC DDP耐药,为进一步研究miRNA在NSCLCDDP耐药机制中的作用奠定基础.     

番荔枝内酯单体squamocin诱导人肺腺癌A549细胞凋亡的实验研究

目的 观察番荔枝内酯单体squamocin对人肺腺癌A549细胞的体外增殖抑制及诱导凋亡的作用,并探讨squamocin诱导肿瘤细胞凋亡的机制。方法 MTT法检测不同浓度的squamocin对人肺腺癌A549细胞体外增殖的影响;流式细胞仪检测squamocin干预在不同时间点对人肺腺癌A549细胞凋亡率的影响;Western blotting检测squamocin干预前后细胞凋亡相关蛋白caspase-3、Bax和Bcl-2的表达情况。结果 MTT法显示,squamocin对人肺腺癌A549细胞的体外抑制作用随着squamocin浓度的增加和作用时间的延长而增强,24、48、72h半数抑制浓度（IC50）分别为16.54、9.28、6.17μg／ml;流式细胞仪检测显示,在24、48、72h实验组人肺腺癌A549细胞凋亡率之间及其与阴性对照组比较,差异均有统计学意义（P＜0.01）,其中实验组72h的细胞凋亡率最高,为（51.87±1.79）％Western blotting显示,squamocin干预后细胞凋亡相关蛋白caspase-3和Bax表达上调,Bcl-2表达明显下调。结论 squamocin可诱导人肺腺癌A549细胞凋亡,这可能与squamocin上调细胞凋亡相关蛋白caspase-3、Bax表达以及降低抑制细胞凋亡基因Bcl-2表达有关。     

发光二极管光动力作用对人肺腺癌细胞株A549的增殖抑制效应

目的：探讨以发光二极管（Light-emitting diode,LED）作为光动力学疗法（photodynamic therapy,PDT）的光源,对人肺腺癌细胞株A549体外增殖的影响及其与传统大功率半导体激光器的比较。方法：采用肺腺癌A549细胞常规培养并传代,将细胞接种于底部澄清黑色96孔板内培养,加入相同浓度的血卟啉衍生物类光敏剂photosan3,分别用LED激光器（光功率为50mW）和大功率半导体激光器（光功率为200mW）采用相同光能量密度（分为三组：5J/cm^2、10 J/cm^2、20J/cm^2）进行照射。照光后用MTT法检测不同激光器PDT作用后细胞OD492值,并计算细胞存活率。结果：在光敏剂浓度相同、能量密度为5、10、20J/cm^2的条件下进行PDT,结果表明与大功率半导体激光器相比,以LED为光源对肺腺癌A549细胞进行PDT后细胞存活率更低,各组相互比较有统计学差异（P〈0.05）。结论：在相同光敏剂浓度及能量密度下采用低功率、长时间照射的LED-PDT组较半导体激光器PDT组,细胞存活率更低,LED-PDT对肺腺癌细胞株A549具有更好的杀伤效果。     

发光二极管光动力作用对人肺腺癌细胞株A549的增殖抑制效应

目的:探讨以发光二极管(Light-emitting diode,LED)作为光动力学疗法(photodynamic therapy,PDT)的光源,对人肺腺癌细胞株A549体外增殖的影响及其与传统大功率半导体激光器的比较。方法:采用肺腺癌A549细胞常规培养并传代,将细胞接种于底部澄清黑色96孔板内培养,加入相同浓度的血卟啉衍生物类光敏剂photosan3,分别用LED激光器(光功率为50mW)和大功率半导体激光器(光功率为200mW)采用相同光能量密度(分为三组:5J/cm2、10 J/cm2、20J/cm2)进行照射。照光后用MTT法检测不同激光器PDT作用后细胞OD492值,并计算细胞存活率。结果:在光敏剂浓度相同、能量密度为5、10、20J/cm2的条件下进行PDT,结果表明与大功率半导体激光器相比,以LED为光源对肺腺癌A549细胞进行PDT后细胞存活率更低,各组相互比较有统计学差异(P<0.05)。结论:在相同光敏剂浓度及能量密度下采用低功率、长时间照射的LED-PDT组较半导体激光器PDT组,细胞存活率更低,LED-PDT对肺腺癌细胞株A549具有更好的杀伤效果。     

Circumvention of confluence-dependent resistance in a human multi-drug-resistant colon-cancer cell line

Colorectal adenocarcinomas are inherently resistant to anthracyclines and other topoisomerase-II inhibitors. Resistance to doxorubicin of colon cancer cells (Caco2) depends on 2 main mechanisms. The first is typical multi-drug resistance, characterized by the mdr1 gene and its product the P170 membrane glycoprotein. P170 effluxes anthracyclines out of cancer cells and is antagonized in vitro by verapamil. The second mechanism, which develops when cell-culture density increases, we have designated confluence-dependent resistance. Confluence-dependent resistance depends on the reduced topoisomerase II content of the G₀/G₁,-phase cells which accumulate in the confluent population. We show here that short treatments of confluent Caco2 cells with slightly toxic concentrations of DNA-damaging agents (cisplatin, melphalan or mitomycin C) produced a transient accumulation of cells in S- and G₂/M-phases of the cell cycle. Concomitantly with the increase in the S-phase population, the topoisomerase II cellular level and the sensitivity of cells to doxorubicin were greatly enhanced. Over-coming confluence-dependent resistance through S-phase accumulation and inhibition of multi-drug resistance by verapamil were fully additive, and a nearly complete reversal of confluent Caco2 cells' resistance to doxorubicin was obtained when both strategies were combined. © 1995 Wiley-Liss, Inc.