支气管肺泡灌洗液端粒酶与P53基因检测在肺癌诊断中的应用

目的研究支气管肺泡灌洗液（BALF）中端粒酶活性、P53基因变异对肺癌的诊断价值。方法收集86例肺癌患者与82例肺良性疾病患者的BALF,采用端粒酶重复序列扩增法（TRAP）和PCR—SSCP法进行端粒酶和P53基因检测,同时经纤维支气管镜（纤支镜）进行活检和刷检。结果①实验组患者BALF端粒酶活性、P53基因突变率分别为82．56％和32．56％,均高于对照组的4．48％和0（P〈0．01）;②不同组织学类型肺癌患者BALF端粒酶活性阳性表达率和P53基因突变率之间差异均无统计学意义（P〉0．05）;③中央型肺癌患者BALF端粒酶活性和P53基因变异联合检测阳性率为94．34％,常规纤支镜检查阳性率为86．79％,两者差异无统计学意义（P〉0．05）。周围型肺癌患者BALF端粒酶活性和P53基因变异联合检测阳性率75．76％,高于常规纤支镜检查阳性率45．45％（P〈0．05）。结论①肺癌患者BALF端粒酶活性与P53基因变异均高于肺良性疾病患者;②端粒酶活性阳性表达率、P53基因突变率与肺癌的病理类型无关;③BALF端粒酶活性和P53基因变异联合检测对周围型肺癌的诊断有一定的实用价值。     

136例老年咯血患者的胸部X线检查与纤维支气管镜检查对照分析

目的探讨胸片和纤支镜检查对咯血病因的诊断价值。方法分析了136例老年咯血患者的胸部X线检查与纤支镜检查的结果。结果老年咯血患者经胸片检查异常所见127例（93．4％），纤支镜检查异常所见114例（83．8％）：炎症60例（44．1％），支气管肺癌53例（39．0％），炎性息肉1例（0．7％）。结论纤支镜检查在胸部X线检查基础上对咯血病因诊断有重要的临床实用价值。     

可疑肺癌病人纤支镜检查脱落细胞标本的p53基因突变检测

目的 探讨通过检测纤支镜检查脱落细胞标本的ｐ５３基因突变用于肺癌早期诊断的可行性。方法 采用聚合酶联反应－单链构象多态性分析（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ），对３５例怀疑为肺癌病人的６９份纤支镜检查（支气管灌洗、刷检、纤支镜后痰）标本，行ｐ５３基因５～８号外显子突变检测。结果 ９例病人有ｐ５３突变（２５．７％），其中以６ 外显子突变率最高（１７．１％）．在６９份标本中，ｐ５３突变率明显高于相应细胞学阳性率（ｔ     

寡核苷酸芯片检测肺癌患者痰标本中p53点突变

目的：用寡核苷酸基因芯片方法检测肺癌患者痰标本中p53基因的热点突变,为肺癌的诊断探索快速、准确的基因检测途径。方法：收集肺癌患者痰标本并提取基因组DNA,用荧光标记的引物对DNA进行p53基因Exon5、Exon7PCR扩增,然后用PCR扩增产物与基因芯片进行杂交,通过对杂交信号的检测,判断是否发生点突变,并用测序方法对部分阳性结果进行验证。结果：在27例肺癌患者痰标本中,p53基因突变的检出率为25．92％,其中小细胞肺癌的突变率为40％（2／5）、肺鳞癌的突变率为26．6％（4／15）、肺腺癌的突变率为14．28％（1／7）,检测到的突变位点有175（2）、248（1）、249（2）,对2例阳性标本的测序证实了基因芯片的结果。结论：寡核苷酸基因芯片法可以快速、准确检测出肺癌患者痰标本中p53基因的点突变,今后可用该法对肺癌患者和高危人群的痰标本进行大规模筛选,提高肺癌的早期诊断率。     

脱落细胞癌基因检测在肺癌诊断中的意义

目的 用分子生物学检测手段寻求敏感的肺癌诊断新方法。方法 应用多聚合酶链反应（PCR）及聚合酶链式反应－单链构型多态（PCR－SSCP）银染技术，检测56例肺癌和36例肺部良性疾病患肺泡灌洗液和（或）胸水细胞的p53、p16及K-ras基因的突变情况，将检测结果与组织学、脱落细胞形态学诊断结果进行对比分析。结果 肺癌患肺泡灌洗液和（或）胸水脱落细胞形态学检测敏感性为57％，阴性预计值（NPV）为60％；p53阳性表达的敏感性为68％，NPV为61％；p16阳性表达的敏感性为46％；NPV为52％，K-ras阳性表达的敏感性为36％，NPV为83％；p53,p16及K-ras阳性表达的敏感性为82％，NPV为74％；p53，p16及K－ras分子生物学和脱落细胞形态学联合检测：敏感性提高至93％（P＜0．05），NPV为87％（P＜0．05）。24例脱落细胞形态学假阴性标本中经分子生物学检测阳性16例（67％）。在56例肺癌中，其中有22例同时收取肺泡灌洗液细胞的胸水细胞，结果为细胞病理学检测敏感性由57％提高到68％，细胞病理学检测加分子生物学检测敏感性由93％提高到95％。结论 脱落细胞癌基因的分子生物学检测可增加脱落细胞形态学检测的敏感性，提高脱落细胞形态学的诊断价值。     

非小细胞肺癌 BALF 中 RAR-β基因甲基化与p53突变检测及相关性研究?

目的：探讨非小细胞肺癌患者支气管肺泡灌洗液(BALF)中 RAR-β基因甲基化与 p53基因突变检测的临床意义及二者的相关性。方法收集非小细胞肺癌患者(肺癌组)85例及良性疾病患者(良性疾病组)70例的 BALF 标本,采用甲基化特异性 PCR(MSP)方法检测 BALF 中的 RAR-β基因甲基化,PCR 结合 DNA 测序法检测 p53基因突变。结果肺癌组 BALF 中RAR-β基因甲基化率及 p53基因突变率分别为49.4%、36.5%,均显著高于良性疾病组(P <0.01);(Ⅰ+Ⅱ)期 RAR-β基因甲基化率(32.5%)高于同期 p53基因突变率(12.5%)(P <0.05);(Ⅲ+Ⅳ)期 RAR-β基因甲基化率及 p53基因突变率均显著高于(Ⅰ+Ⅱ)期(P <0.01);发生 RAR-β基因甲基化的肺癌患者 p53基因突变率更高(P <0.01);发生 p53基因突变的肺癌患者RAR-β基因甲基化率更高(P <0.01)。结论检测非小细胞肺癌患者 BALF 中 RAR-β基因甲基化与 p53基因突变有助于肺癌的诊断。     

支气管镜术与痰细胞学检查对肺癌的诊断价值

目的：探讨纤维支气管镜（纤支镜）检查术及其术后咳痰找脱落细胞（术后痰）检查对肺癌的诊断价值。方法：９８例经纤支镜检查术及后痰检查确诊为肺癌,对两种检查阳性率进行比较分析。结果：９８例中经纤支镜诊断阳性率８３．６７％,术后痰诊断阳性率５３．０６％。其中有１６例（１６．３３％）纤支镜未检出,而术后痰检出癌细胞确诊。结论：术后痰检查为纤支镜检查术的补充,两者联合检查,优势互补,可提高对肺癌的诊断率。     

纤维支气管镜、支气管肺泡灌洗液及外周血肿瘤标记物诊断109例肺癌的体会

对109例肺癌患者行纤支镜、支气管肺泡灌洗液(BALF)及外周血肿瘤标记物检测,结果:肺癌患者BALF及外周血中肿瘤标记物CEA、SIgA、SF和β_2—MG检测结果显示,BALF及外周血中SF和β_2—MG对肺癌诊断价值不大(P>0.05),而外周血CEA、病侧BALF中及患侧与健侧BALF中的CEA和SIgA的差值则有助于肺癌的诊断。病侧BALF中的CEA和SIgA联合检测能提高肺癌的诊断率。本文单纯纤支镜活检合并刷检诊断肺癌的阳性率为76.2%,结合病侧BALF中CEA和SIgA检测,诊断肺癌阳性率提高到98.1%。     

检测胰液和粪便中K-ras和p53基因突变对胰腺癌早期诊断的价值

目的 通过检测胰液、粪便癌基因K－ras和抑癌基因p53的突变,探索早期诊断胰腺癌的手段。方法 1994年至2000年5月住院和门诊患者共201例,正常对照60例,通过聚合酶链反应－限制片段长度多态性（PCR－RFLP）方法检测胰液、粪便K－ras突变,PCR－SSCP方法检测p53突变。结果 胰腺癌患者胰液K－ras突变率为87．8％（36／41）,胰腺良性病变为23．5％（4／17）。粪便K－ras扩增成功率为90．0％（235／261）。胰腺癌患者粪便K－ras突变率为88．0％（66／75）,胰腺良性病变为51．1％（24／47）,正常人粪便K－ras突变率为19．6％（9／46）。胰腺癌胰液细胞p53突变率47．4％（18／38）,胰腺良性疾病为12．5％（2／16）。胰腺癌粪便p53突变率为37．1％（23／62）,慢性胰腺炎为19．1％（4／21）。结论 胰腺癌患者胰液K－ras突变的敏感性、特异性高,可以作为胰腺癌诊断的辅助手段。粪便K－ras结合p53检测可以提高敏感性,在胰腺癌筛选中有潜在的价值,联合血清CA19－9等肿瘤标记物检测有助于提高胰腺癌早期诊断率。     

变性梯度凝胶电泳和单链构象多态性分析检测皮肤癌p53基因突变的比较

目的：检测皮肤癌p53基因5－8外显子的突变频率,比较变性和梯度凝胶电泳（DGGE）和单链构象多态性分析（SSCP）检测p53基因突变的敏感性,方法：分别采用DGGE和SSCP,对40例皮肤癌患者手术切除组织的p53基因5－8外显子进行突变检测。结果：皮肤癌p53基因5－8外显子的总突变率为35％,其中鳞状细胞癌（SCC）的突变率为36％,基底细胞癌（BCC）为33％,采用GGE和SSCP检测的突变率分别为33％和25％。结论35％的皮肤癌组织存在p53基因5－8外显子突变。GGE检测p53基因突变的敏感性高于SSCP。DGGE结合SSCP有助于提高突变检出率。     

周围型非小细胞肺癌患者支气管肺泡灌洗液p53基因突变及其临床意义

目的:DHPLC分析周围型非小细胞肺癌患者支气管肺泡灌洗液标本p53突变及其作为分子诊断标记的可行性.方法:DHPLC分析46例支气管肺泡灌洗液标本(33例肺癌,13例对照)p53基因Exon5～9突变.结果:肺癌组p53突变检出率36.36%(15/33),对照组未检出一例,两组p53突变率比较具有明显差异(P＜0.05);p53突变作为肺癌诊断分子标记,灵敏度36.36%(12/33),特异度100%(13/13).结论:DHPLC分析周围型非小细胞肺癌患者支气管肺泡灌洗液标本p53基因热点突变可以作为周围型肺癌诊断的分子标记,但在支气管肺泡灌洗液标本检测单一基因突变不能满足临床诊断的需要.     

纤维支气管镜联合p16基因甲基化检测对肺癌的诊断价值

对42例肺癌患者和25例肺部良性病变患者行纤维支气管镜检查,并利用甲基化特异性PCR方法检测外周血血浆、痰液、支气管肺泡灌洗液中p16基因甲基化状态。42例确诊肺癌患者p16基因异常,甲基化阳性数在血浆、痰液和支气管肺泡灌洗液中分别为22例（52．4％）、20例（47．6％）和25例（59．5％）,各标本的阳性率差异无统计学意义（P〉0．05）;25例良性病变者中除1例在血液中检测到异常甲基化外,均未检测到p16基因的异常甲基化。经纤维支气管镜确诊25例,敏感度、特异性和准确性分别为59．5％、100．0％和74．6％;纤维支气管镜联合p16基因甲基化检测后敏感度、特异性和准确性分别为92．9％、96．2％和94．0％。     

Detection of K-ras and p53 mutations in bronchoscopically obtained malignant and non-malignant tissue from patients with non-small cell lung cancer

Molecular screening may increase the likelihood to identify early malignant lesions in non-small cell lung cancer. However the presence of gene mutations in non-malignant bronchial tissue has remained controversial. The present study was carried out to investigate systematically the presence of mutations of the K-ras and p53 gene in bronchial biopsies taken during routine bronchoscopy of normal as well as tumour tissues from a series of 40 patients with histologically verified non-small cell lung cancer (NSCLC). K-ras mutations were analysed with specific detection oligonucleotides, p53 mutations were examined by SSCP analysis. In all biopsies the wildtype of both K-ras and p53 could be detected. The overall frequency of mutations was 14 (35%) with 2 K-ras mutations (5%) and 12 mutations of the p53 gene (30%). In 3 cases (1 ras mutation, 2 p53 mutations) the same mutation could be shown in the tumour biopsy and in the distant normal control. In another case only the normal appearing tissue had a mutation of the p53 gene. All other mutations could be detected in the tumour tissue only. Our data confirm that K-ras mutations and p53 can be detected not only in malignant but also in non-malignant bioptic samples from patients with NSCLC. The use of molecular screening for the early detection of lung cancer may be a promising new approach.     

应用PCR-SSCP方法检测胸水细胞中p53基因突变鉴别良恶性胸水

目的 探讨胸水细胞中ｐ５３基因突变的检测对鉴别良恶性胸水的价值。方法 应用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ方法对３４例肺癌患和１６例良性肺部疾病患的胸水细胞中的ｐ５３基因突变情况进行了检测,同时进行了胸水的瘤细胞学检查和部分肺癌组织的ｐ５３基因突变检测,并将结果进行了比较。结果 在４７．０％９１６／３４）的肺癌患的胸水细胞中检测到ｐ５３基因的突变,在３７．５％（６／１６０的瘤细胞学检查阴性的肺癌患的胸水细     

纤维支气管镜检查对肺癌诊断的临床价值

目的探讨纤维支气管镜检查对肺癌的诊断价值。方法对180例临床疑诊的肺癌患者,行常规纤维支气管镜检查,采用钳检、刷检及支气管肺泡灌洗技术,以确定诊断率和病理类型。结果 180例肺癌经纤维支气管镜检查后病理确诊160例,其中中央型肺癌127例,周围型肺癌33例。20例纤维支气管镜病检假阴性,其中中央型肺癌5例,周围型肺癌15例,最后通过手术、脱落细胞检查、院外活检等方式确诊。本组鳞癌占50%,腺癌占27.22%,小细胞癌占17.22%,其它类型占5.56%。结论联合采用钳检、刷检及纤维支气管镜检查对肺癌患者的诊断具有重要价值,与单一方法取材比较差异有显著性(P<0.05)。肺泡灌洗技术可提高镜检阳性率,为临床治疗提供可靠依据。     

肺鳞癌、肺腺癌Ki-ras和p53基因序列分析

目的 :研究肺鳞癌、腺癌与Ki-ras基因外显子 1,2及p5 3基因外显子 7,8突变谱并观察肺鳞癌、腺癌预后同Ki-ras和 p5 3基因突变的关系。方法 :用PCR和测序方法分析 33例肺鳞癌和 2 7例肺腺癌Ki-ras基因外显子 1,2和 p5 3基因外显子 7,8错义突变。并追踪观察突变者和非突变者的二年存活率。结果 :肺鳞癌中发现 5例 (15 .16 % )Ki-ras基因突变和 12例 (36 .37% )p5 3基因突变 ;肺腺癌中发现 2例 (7.4 1% )Ki-ras基因突变和 7例 (2 5 .93% ) p5 3基因突变 ,两型肺癌间Ki-ras和p5 3基因突变阳性率差异均无统计学意义 (P>0 .0 5 ) ;肺鳞癌、腺癌中 p5 3基因突变总阳性率为 31.6 7% ,Ki-ras基因突变总阳性率仅 11.6 7% ,p5 3基因突变率高于Ki-ras基因突变率 (P <0 .0 5 )。p5 3基因突变谱与一般报道相似。Ki-ras基因突变情况与一般报道有所不同 ,未发现一般文献报道较多的第 12位等密码子突变 ,发现有第 6位密码子纯合性突变和第 31位和第 79位密码子杂合性突变。预后追踪显示 :无突变的病例 2年生存率为 4 0 % ,存在突变的病例 2年生存率仅 12 %。结论 :肺鳞癌、腺癌的Ki-ras和 p5 3基因突变谱较广 ,肺鳞癌和腺癌的预后均与这两个基因突变有关。     

自发荧光支气管镜在肺癌诊断中应用的研究

目的:探讨自发荧光支气管镜检查在诊断肺癌中的应用价值。方法:选取103例行荧光支气管镜检查并最终经病理证实为肺癌的患者,比较行荧光支气管镜检查过程中白光状态和荧光状态的敏感度和特异度的差异,并计算荧光支气管镜检查肺癌的检出率。同时回顾分析100例行普通支气管镜检查并最终经病理证实为肺癌的患者,计算肺癌的检出率,并与荧光支气管镜检查的检出率相比较。结果:103例荧光支气管镜检查患者,白光和荧光状态的敏感度分别为83.3%、92.4%,特异度分别为75.7%、45.9%,差异有统计学意义(P<0.05)。荧光支气管镜和普通支气管镜肺癌的检出率分别为64.1%、53%,差异有统计学意义(P<0.05)。所有患者手术过程顺利,无死亡病例和严重并发症发生。结论:自发荧光支气管镜检查安全性高,肺癌诊断的敏感度高,使肺癌的检出率得到提高,在肺癌的诊断中有一定的应用价值。     

联合检测胸水细胞p53、p16和K-ras基因突变对于肺癌的诊断价值

目的:研究胸水细胞p53、p16和K-ras基因突变及三者联合检测对肺癌的诊断价值。方法:研究组为54例伴有恶性胸水的肺癌患者,对照组为28例出现胸水的结核性胸膜炎和其他胸膜炎患者。常规抽取胸水,提取胸水细胞DNA,采用PCR-SSCP方法,分别对p16基因和K-ras基因的第1、2外显子以及对p53基因第7、8外显子进行突变分析。结果:研究组p16基因突变率为33.3%,而对照组只有7.1%,明显低于肺癌患者,差异有统计学意义(P<0.05);研究组K-ras基因突变率(31.5%)也明显高于对照组(3.7%),差异有统计学意义(P<0.05);研究组p53基因突变率为40.7%,而对照组只有7.1%,明显低于肺癌患者,差异有统计学意义(P<0.05)。联合应用p53、p16和K-ras基因突变检测可将胸水细胞中肺癌阳性检出率提高至70.4%。结论:p53、p16和K-ras基因突变对良恶性胸水鉴别诊断具有重要价值,三者联合应用可提高肺癌的诊断率。     

p53基因在肺癌患者中的突变

目的　探讨肺癌组织中p5 3基因蛋白表达和肺癌患者血白细胞p5 3基因突变及其相互关系。方法　应用免疫组织化学S -P法检测肺癌组织中p5 3基因蛋白表达及聚合酶链反应 -单链构象多态性分析 (PCR -SSCP)检测其中肺癌患者血白细胞p5 3基因突变。结果　p5 3基因蛋白在 5 1例肺癌组织中的阳性表达率为 5 9% ,其中p5 3蛋白在鳞癌、腺鳞癌和腺癌的表达差异无显著性 (P >0 .0 5 ) ,但有淋巴结转移者 ( 77% )显著高于无淋巴结转移者 ( 4 5 % ,P <0 0 5 ) ,p5 3蛋白在肺癌癌旁正常肺组织及白细胞中均为阴性 ;5 1例肺癌患者中 2 8例血白细胞DNA均未见p5 3基因突变。结论　p5 3基因在肺癌患者血白细胞DNA未见突变 ,p5 3基因蛋白阳性的肺癌患者更易发生淋巴结转移