上、下坡跑台运动对去卵巢小鼠破骨细胞分化NF-κB信号通路的影响

目的:通过去卵巢手术制备小鼠骨质疏松模型,对比研究上、下坡跑台运动对去卵巢小鼠破骨细胞分化的影响,以及NF-κB信号通路在介导运动对破骨细胞分化影响过程中的作用。方法:32只8周龄C57 BL/6雌性小鼠被随机分为4组:假手术安静组(S组)、去卵巢安静组(O组)、去卵巢上坡跑组(U组)和去卵巢下坡跑组(D组)。U组和D组小鼠于摘除卵巢一周后分别进行为期8周的上坡跑和下坡跑训练,每周训练5次,每次训练40 min,跑台坡度分别为±9°,跑速均为0.8 km/h。S组和O组在笼中正常饲养,不进行任何训练。8周后对股骨组织进行抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resistant acid phosphatase,TRAP)染色检测,并对其骨髓进行破骨细胞原代培养,检测破骨细胞分化过程中NF-κB信号通路相关蛋白的表达。结果:各组小鼠股骨TRAP阳性染色区域的平均光密度值和平均阳性染色面积百分比存在显著差异,表现为O组显著高于S组,两运动组显著低于O组,且D组显著低于U组。各组小鼠破骨细胞前体IκBα和p65蛋白相对表达量无显著性差异;而p-IκBα和p-p65蛋白相对表达量组间差异显著,表现为O组显著高于S组,两运动组显著低于O组,且D组显著低于U组。结论:小鼠去卵巢后骨组织破骨细胞特异性酶TRAP大量生成,显示去卵巢手术可引起小鼠骨组织破骨细胞的大量分化和活化,而跑台运动可通过抑制破骨细胞分化过程中p65和IκBα蛋白的磷酸化而有效抑制破骨细胞分化NF-κB信号通路,从而有效抑制骨吸收,且下坡跑效果优于上坡跑。     

电离辐射诱导NF-κB-HIF-1α通路在人淋巴瘤细胞中的活化

目的 观察电离辐射对恶性淋巴瘤细胞中NF-κB-HIF-1α通路的活化状态的影响,探讨恶性淋巴瘤放射抗拒的可能机制.方法 采用Western blot免疫印迹分析方法,检测5 Gy X射线照射1、4、10和20 h后,Namalwa、Ramos和Raji 3种恶性淋巴瘤细胞系中NF-κB、HIF-1α及其相关蛋白IKK的表达水平,观察1、10和50 nmol/L NF-κB抑制剂QNZ对HIF-1α等蛋白表达的影响.结果 照射4 h后,3种淋巴瘤细胞中IKK蛋白表达增加(t=8.01、5.14和5.42,P＜0.01).10 h后,3种淋巴瘤细胞核p-P65蛋白表达增加(t=11.25、17.43和22.09,P＜0.01),至20 h时表达开始下降.10～20 h时,3种淋巴瘤细胞HIF-1α蛋白表达增加,与0 h相比,差异均有统计学意义(t=19.05、12.44和12.88,P＜0.01).与单纯照射组相比,采用NF-κB抑制剂预处理3种肿瘤细胞24 h后,HIF-1α蛋白表达下降,且随药物浓度的增加而下降(t=18.69、19.35和12.26,P＜0.01).结论 电离辐射能够活化恶性淋巴瘤细胞中的NF-κB-HIF-1α通路,可能是肿瘤放射抗拒的机制之一.

Abstract：

Objective To observe the effect of X-ray radiation on NF-κB-HIF-1α pathway activation in three malignant lymphoma and to explore the mechanism of radioresistance mediated by this pathway.Methods Expression levels of p-P65,IKK and HIF-1α in Namalwa,Ramos and Raji cells were determined by Western blot 1,4,10 and 20 h after 5 Gy X-ray irradiation.The effect of QNZ on HIF-1α expression was also observed.Results Expression level of IKK protein was up-regulated 4 h after irradiation in the 3 lymphoma cell strains( t = 8.01,5.14,5.42,P ＜ 0.01 ),followed by up-regulation of p-P65 protein expression level at 10 h and HIF-1α at 10-20 h after X-ray irradiation (t = 11.25,17.43,22.09,P ＜ 0.01 ).Pretreatment of QNZ 24 h before X-ray irradiation significantly reduced the upregulation of HIF-1α protein expression induced by simple ion radiation ( t = 18.69,19.35,12.26,P ＜0.01 ).Conclusion NF-κB - HIF-1α pathway was activated in human lymphoma cells after ion radiation and may be involved in the mechanism of radioresistance.     

电离辐射对NF－κB的影响

在简单介绍转录因子NF-κB的结构及功能的基础上,概述了电离辐射对NF-kB的影响及其机制,以期阐述辐射效应的分子机制。     

低剂量电离辐射诱导转录因子NF-κB活化及其信号通路的实验研究

目的 研究低剂量电离辐射对转录因子NF—κB DNA结合活性的影响，探讨NF—κB结合活性信号传导通路的机理。方法 采用凝胶电泳移动变化分析及免疫组织化学的方法检测了X射线照射后FL-4细胞NF—κB DNA结合活性的时程变化及p65核转位、IκBα水平的变化，同时用脂质体介导的瞬时转染法将空质粒和NF-κB-荧光素酶表达质粒转染到NIH3T3细胞内，并用PKC信号通路阻断剂Calphostin C处理，检测受照后其荧光素酶的表达变化。结果 0．075Gy X射线照射可诱导NF—κB、p50／p65和p50／p50活性增强，而前者活性增强更明显。这种转录激活能力的增强，涉及到辐射诱导的p65核转位和IκBα水平的变化，表现为受照后p65亚基核阳性率明显升高，而IκBα水平的变化正相反，在照后4h分别达到峰值和低谷。而且PCK信号通路阻断剂Calphostinc可降低0．075Gy照射对NF—κB的活化效应。结论 低水平照射诱导NF-κB的迅速活化，而且可能通过PKC通路，进而调节细胞因子等特异基因的表达，促使免疫功能增强，这可能是低剂量辐射兴奋效应的机理之一。     

电离辐射对细胞应激反应相关信号转导的影响

电离辐射作为一种特殊的外界损伤刺激因素,与其他因素诱导细胞应激反应相比,既有其共性,也有其特殊性,其特殊性在于诱发应激反应的分子机制可能有区别,尤其是对于信号转导途径的影响。电离辐射使细胞内的水分子辐解产生活性氧和自由基等或直接损伤DNA等靶分子,并以此为信号,通过启动相关的信号转导系统如MAPK通路、p53通路等而诱发细胞应激反应。     

电离辐射对小鼠造血干/祖细胞线粒体功能的影响

目的:研究不同剂量电离辐射对小鼠造血干/祖细胞(hematopoietic stem and progenitor cells, HSPCs)内线粒体功能的影响。方法:将48只C57BL/6小鼠按随机数表法分为对照组(0 Gy组)、全身 60Co单次照射1.0 Gy组和4.5 Gy组,每组16只,照射后12...     

HMGB1-RAGE/TLRs-NF-κB信号通路中关键蛋白的表达与糖尿病肾病的关系

目的探究高迁移率族蛋白1（HMGB1）-晚期糖基化终产物受体（RAGE）/Toll样受体（TLRs）-核转录因子-κB（NF-κB）信号通路中关键蛋白的表达与糖尿病肾病的关系。方法C57BL/6雄性小鼠注射链脲菌素（STZ）建立糖尿病肾病（DN）模型列为DN组,生理盐水替代列为对照组,在DN组基础上给予胰岛素治疗列为治疗组,对比3组小鼠体质量、血糖、尿白蛋白定量和HMGB1-RAGE/TLRs-NF-κB信号通路中关键蛋白水平差异。另外给予DN组小鼠HMGB1拮抗剂A Box注射,观察注射前后小鼠尿白蛋白和肾组织切片变化。结果与对照组相比,DN组和治疗组小鼠体质量、血糖和尿白蛋白定量均明显增加（P<0.01）;与DN组相比,治疗组上述各指标均明显下降（P<0.05）。建模完成后各时间段,DN组HMGB1、RAGE、TLR4,NF-κB蛋白水平均较对照组明显升高（P<0.05）,治疗组小鼠HMGB1、RAGE、TLR2、TLR4和NF-κB蛋白水平均较对照组明显升高（P<0.05）。DN组和治疗组HMGB1、RAGE、TLR2、TLR4和NF-κB mRNA水平均明显高于对照组（P<0.01）。与DN组小鼠相比,治疗组小鼠各时间段上述几种蛋白和mRNA水平均明显偏低（P<0.05）。给予A Box后,生理盐水处理小鼠组织学染色无明显变化（P=0.933）,DN模型小鼠肾小管间质胶原蛋白沉淀明显减少（P=0.013）。结论HMGB1-RAGE/TLRs-NF-κB信号通路关键蛋白HMGB1、RAGE、TLR2、TLR4和NF-κB在糖尿病肾病小鼠中表达增高,阻断HMGB1和RAGE、TLRs结合能够阻止糖尿病肾病发展。     

车叶草苷对小鼠Lewis肺癌的抑瘤、抗炎作用及其机制

 目的 探讨车叶草苷对小鼠Lewis肺癌种植瘤的抑瘤和抗炎作用。方法 SPF级小鼠36只,制备荷瘤小鼠模型,然后将成瘤小鼠随机分为模型对照组、车叶草苷组、顺铂对照组。分别施加经口灌服车叶草苷或腹腔注射顺铂等干预因素,1次/d,连续3周。末次给药后,测量小鼠体质量、瘤体质量,检测血清中IL-1β、TNF-α含量;检测瘤组织中TLR4、MYD88、NF-κB的表达水平;检测瘤组织中p-NF-κB的表达定位及水平。结果 与模型对照组比较,车叶草苷组和顺铂对照组小鼠血清IL-1β、TNF-α含量显著降低,差异有统计学意义(P<0.01);车叶草苷组和顺铂对照组比较无统计学差异。与模型对照组比较,车叶草苷组和顺铂对照组小鼠瘤组织中TLR4、MYD88、NF-κB表达水平显著降低,差异有统计学意义(P<0.01);车叶草苷组和顺铂对照组比较无统计学差异。与模型对照组(0.261±0.026)比较,车叶草苷组(0.171±0.026)和顺铂对照组(0.207±0.020)小鼠瘤组织中p-NF-κB表达水平显著降低,差异有统计学意义(P<0.01);车叶草苷组和顺铂对照组比较无统计学差异。结论 车叶草苷对Lewis荷瘤鼠具有明显的抑瘤作用,能够降低荷瘤小鼠整体的炎性反应状态。     

PI3K/AKT信号通路对骨骼肌再生的影响研究进展

磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)信号通路作为细胞重要的转导通路,能够促进细胞增殖分化,促进蛋白合成。研究表明,PI3K/AKT信号通路通过活化PI3K,使AKT磷酸化,作用于下游相关因子,提高基因转录水平,可以促进肌卫星细胞增殖分化,抑制其凋亡,从而对骨骼肌再生修复有一定影响作用。     

电离辐射对小鼠脾细胞中调节性T细胞及其相关分子表达的影响

Objective To observe the changes in expressions of spleen regulatory T cells (Tregs)and the related factor forkhead box protein-3 (Foxp3) after irradiation with different doses of X-ray in mice at different times,and to elaborate the effects of X-rays on regulatory T cells and Foxp3.Methods 112male ICR mice were randomly divided into 2 groups and irradiated by X-rays at the doses of 0.075 and 2 Gy,respectively.The mice were killed at 0,4,8,16,24,48,and 72 h post-irradiation and the spleens removed.Flow cytometry was used to detect the percentage of CD4 + CD25 + Treg and protein expression of (Foxp3),and RT-PCR was used to exmiamine the mRNA expression of Fox3.Results Compared with those before irradiation,the CD4 + CD25 + Treg positive rates began to increase and peaked at 8 h post-irradiation with 0.075 Gy at 8,16,24,72 h(t = 8.73,10.55,4.21,4.65 ,P ＜ 0.05) and 2 Gy at 8,16,48,72 h(t = 4.65,4.28,3.71,2.88,P ＜ 0.05),and then slightly decreased,but still remained at high levels.The mRNA protein levels of Fox3 did not change significantly after exposure to the dose of 0.075 Gy,but began to significantly increase at 8 h after exposure to the dose of 2 Gy.However,the Foxp3 protein level began to increase 4 h post-irradiation,peaked at 16 h,and then slightly decreased,but still ramained at high levels (t =2.59,3.37,3.70,3.20,P＜0.05).Conclusions The changes in expressions of Tregs and Foxp3 after high- and low-dose X-ray irradiation may be used to explain the differences in immune effects induced by ionizing radiation at different doses.     

电离辐射对小鼠脾细胞中调节性T细胞及其相关分子表达的影响

目的 观察不同剂量X射线照射后不同时间小鼠脾细胞中调节性T细胞和叉头状转录因子(Foxp3)的表达变化,探讨X射线对调节性T细胞以及相关因子Foxp3的影响。方法 112只雄性ICR小鼠,随机平均分为低剂量(0.075 Gy)组和高剂量(2 Gy)组,用X射线深部治疗机分别进行0.075和2 Gy全身照射,于照射后0、4、8、16、24、48和72 h处死,取脾脏,分别应用流式细胞术和RT-PCR法检测调节性T细胞和Foxp3的表达水平。结果 0.075和2 GyX射线全身照射后,小鼠脾细胞CD4+CD25+Treg 细胞百分比均在照射后8 h达高峰,随后一直保持较高水平,高于照射前水平(2 Gy,在8、16、48、72h时,t=4.65、4.28、3.71、2.88,P<0.05; 0.075 Gy,在8、16、24、72h时,t=8.73、10.55、4.21、4.65,P<0.05)。Foxp3在mRNA水平,0.075 Gy照射后变化不明显,而2 Gy照射后于24 h形成峰值。Foxp3在蛋白质水平,0.075 Gy照射后并未有显著变化;而2 Gy照射后于16 h形成峰值,随后略有下降,但仍保持较高水平。结论 调节性T细胞及相关分子Foxp3的不同变化可能成为高、低剂量X射线诱导不同免疫效应的原因之一。     

低剂量辐射对小鼠种植肿瘤及其放疗的影响

本文作者用低剂量辐射（Ｄ１）诱导的兴奋效应，探讨对小鼠种植肿瘤及其放疗的影响，结果证明：Ｄ１可降低种植肿瘤细胞的成瘤率（Ｐ＜０．０５），并抑制其生长速度（Ｐ＜０．０５）；荷瘤鼠局部放疗预先给予Ｄ１，可提高放疗效果；并进一步证明：上述改变可能与Ｄ１提高了淋巴细胞自发增殖能力，降低电离辐射诱发自由基，提高抗氧化酶活性和增加ＤＮＡ修复能力有关。     

60Coγ照射和环磷酰胺对小鼠造血及免疫功能影响的研究

目的 比较⁶⁰Co γ射线照射及环磷酰胺对小鼠造血和免疫功能损伤的规律,为急性放射综合征(ARS)患者临床救治提供实验依据.方法 48只雌性BABL/c小鼠随机数字表法分为照射组、化疗组,每个剂量组6只.照射组接受⁶⁰Co γ射线照射,吸收剂量为2、4、6和8 Gy;化疗组注射环磷酰胺,剂量为100、150、200和250 mg/kg.处理后采尾静脉血,进行血常规检测.选择白细胞(WBC)差异无统计学意义的2 Gy和200 mg/kg组,处理后流式细胞术检测T、B、NK及调节T细胞.结果 各组外周血WBC计数均先下降,4 d后降至最低值.化疗组和2 Gy照射组WBC迅速回升,10~12 d基本恢复;而4 Gy照射组恢复较慢,6和8 Gy组不能自行恢复.2 Gy照射组与200 mg/kg化疗组差异无统计学意义,其余照射组与200 mg/kg化疗组的差异有统计学意义(t=2.531, 2.343, 2.074, P<0.05).2 Gy照射组CD8+T细胞数较200 mg/kg化疗组明显下降(F=5.026,P<0.05),2 Gy照射组调节T细胞在照射后升高,与200 mg/kg化疗组比较差异有统计学意义(F=4.848,P<0.05),但CD4+T、B和NK细胞数两组之间差异无统计学意义.结论 电离辐射较化疗对造血、免疫功能的损伤较大,恢复较慢.因此,在ARS患者中可针对性延长造血刺激因子和集落刺激因子的使用,以起到预防感染、出血及败血症、帮助造血及免疫系统重建的作用.     

低剂量辐射对LAK/TIL培养扩增及抗肿瘤作用的实验研究

目的　为了解低剂量电离辐射对LAK/TIL细胞培养扩增及抗肿瘤作用的影响。方法　从荷瘤小鼠的脾脏制得LAK细胞 ,从荷Lewis肺癌小鼠瘤组织中分离得TIL细胞 ,给予不同剂量的X射线照射后培养。结果　低剂量电离辐射可增加LAK/TIL细胞的扩增量 ,降低细胞扩增过程死亡率 ,并增加细胞毒性。结论　低剂量电离辐射对生物活性细胞不仅有诱导扩增作用 ,同时亦降低扩增过程细胞死亡率。     

电离辐射诱导小鼠胸腺细胞G1期阻滞的分子调控初探

目的研究电离辐射诱导小鼠胸腺细胞Ｇ１期阻滞的分子通路。方法ＰＩ染色,流式细胞术检测细胞周期。单克隆抗体免疫荧光标记,流式细胞术检测蛋白表达。结果０５、１．０及２．０ＧｙＸ射线全身照射后１２小时及２．０Ｇｙ照射后２４小时小鼠胸腺细胞Ｇ１期细胞数明显增高。２．０Ｇｙ照射后ｐ５３蛋白表达在照射后１～８小时明显增高;ｐ２１蛋白表达在照射后４～４８小时明显增高;ＭＤＭ２蛋白表达在照射后４小时及８小时明显增高;而ＧＡＤＤ４５蛋白表达未见明显变化。结论０５～２．０ＧｙＸ射线全身照射可诱导小鼠胸腺细胞Ｇ１期阻滞。其分子通路主要是ｐ５３－ｐ２１通路。