白木香枝枯病病原菌的鉴定

目的:明确白木香枝枯病的病原菌,确定其是否能够诱导白木香产生沉香.方法:通过形态特征观察、rDNA-ITS序列测定分析、柯赫氏法则验证确定病原菌及其分类地位.结果:分析结果表明,侵染白木香Aquilaria sinensis的病原菌为可可毛色二孢Lasiodiplodia theobromae,该菌可诱导沉香产生.结论:首次明确白木香枝枯病的病原菌为可可毛色二孢,为利用真菌诱导白木香结香研究提供理论基础.     

白木香内生真菌的分离鉴定及诱导结香作用研究

目的 分离、纯化经通体结香技术诱导的白木香木质部真菌,筛选能够高效促进白木香产生优质沉香的菌株。方法 采用组织块分离法分离、纯化菌株,通过形态学特征结合内转录间隔区（ITS）序列分析鉴定真菌;将真菌菌液接种到白木香树4个月后进行功能验证;依据《中华人民共和国药典》（以下简称《中国药典》）2020年版沉香项下薄层色谱、浸出物含量测定、沉香四醇含量测定及特征图谱方法分析菌株诱导效果。结果 从白木香木质部中分离出48株真菌,优势菌株为镰刀菌;经刺盘孢菌属（Colletotrichum sp.）、黑曲霉Aspergillus niger、渐进绿木霉Trichoderma paraviridescens诱导的沉香薄层色谱斑点与对照药材一致;经镰刀菌属（Fusarium sp.）、黑曲霉、渐进绿木霉诱导的沉香浸出物质量分数均大于10%,与对照组差异有统计学意义（P<0.05）;经可可毛二孢菌Lasiodiplodia theobromae、黑曲霉、渐进绿木霉等6株菌诱导的沉香特征图谱与对照药材一致,沉香四醇质量分数均大于0.1%,与对照组差异有统计学意义（P<0.05）。结论 从白木香木质部分离出的内生真菌可诱导沉香形成,其中黑曲霉和渐进绿木霉能够较快速诱导白木香结香,结香所得的树脂品质符合《中国药典》2020年版标准。     

白木香乙酰乙酰基辅酶A硫解酶基因(AsAACT)的克隆与表达分析

目的：对国产沉香的基原植物白木香Aquilaria sinensis （Lour.）Gilg乙酰辅酶A酰基转移酶（acetyl-CoA C-acetyl transferase,AACT）基因AsAACT全长进行克隆并展开生物信息学分析和表达分析,为解析沉香萜类次生代谢产物的生物合成机制奠定基础。方法：根据获得的白木香转录组数据库AACT部分转录本序列设计引物,采用RT-PCR及RACE技术,以白木香茎cDNA为模板,克隆获得AsAACT全长,进行生物信息学分析;采用荧光定量PCR,以GADPH为内参,分析白木香愈伤组织受不同伤害胁迫AsAACT的表达模式。结果：AsAACT开放阅读框（opening reading frame,ORF）为1 236 bp,编码411个氨基酸残基,酶命名为AsAACT;白木香愈伤受物理伤害（切割）后表达量没有明显变化,但受化学伤害（MeJA）后4 h表达量升高了5.5倍,说明该基因对MeJA诱导的化学伤害较敏感,且能够在早期响应伤害胁迫。结论：通过AsAACT基因的全长cDNA克隆和表达特性分析,为后续深入研究其在沉香倍半萜合成途径的功能奠定基础。     

中华苦荬菜根部化学成分研究

采用硅胶柱色谱,HPLC 等方法对中华苦荬菜根部化学成分进行分离纯化,得到 15 个化合物,依据理化性质和波谱数据分析鉴定它们的结构分别为 chinensioide G（1）,chinensioide B（2）,10α-羟基-愈创木烷-12,6-内酯-3-酮（3）,chinensioide C（4）,10α-羟基-11βH-4（5）-愈创木烯-12,6-内酯（5）,3β,10α-二羟基-4βH-11（13）-愈创木烯-12,6-内酯（6）,3β,10α-二羟基-4βH,11βH-愈创木-12,6-内酯（7）,3β,10α-二羟基-4（15）,11（13）-愈创木二烯-12,6-内酯（8）,咖啡酸（9）,对羟基苯乙酸（10）,对羟基苯乙酸甲酯（11）,对羟基苯乙酸乙酯（12）,β-谷甾醇（13）,胡萝卜苷（14）,ixerin D（15）。其中化合物 1 为新化合物,命名为chinensioide G,化合物 6,7 首次从该植物中分离得到。     

伤害诱导普通白木香与奇楠种质沉香中倍半萜类成分及早期倍半萜合酶基因表达的差异分析

目的 明确伤害诱导普通白木香和奇楠种质所结沉香中倍半萜组分及其早期倍半萜合酶基因表达模式的差异。方法 采用气相色谱-质谱法（GC-MS）分析普通沉香和奇楠沉香中倍半萜组分的差异;对3年生普通白木香和奇楠种质茎干分别进行全断干伤害,采用实时荧光定量聚合酶链式反应（qRT-PCR）分析伤害早期倍半萜合酶基因AsTPS2、AsTPS13、AsTPS14、AsTPS17、AsTPS18、AsTPS20、AsTPS23表达模式的差异。结果 奇楠沉香倍半萜组分显著不同于普通白木香所结沉香,2种沉香中分别检测到16、17个倍半萜成分,其中共有成分12个,且共有成分含量差异较大;两者的倍半萜合酶基因在伤害诱导早期表达模式也不同,伤害诱导24 h内,普通白木香中7个倍半萜合酶基因表达水平均上升,2 h达到最大值后下降,而奇楠种质中AsTPS2、AsTPS13、AsTPS14、AsTPS17和AsTPS23基因表达量在24 h内持续上升,AsTPS20基因表达量在6 h达到最大值,但AsTPS18基因表达量低,在伤害诱导0~24 h变化不明显,显著低于普通白木香种质。结论 普通白木香与奇楠种质所结沉香倍半萜类成分差异明显,且响应伤害诱导的倍半萜合酶基因在0~24 h表达模式显著不同,推测倍半萜合酶基因的差异诱导表达可能是2种种质形成的倍半萜成分差异较大的原因之一。     

橡胶灵芝化学成分研究

利用硅胶柱色谱和Sephadex LH-20凝胶柱色谱技术对橡胶灵芝Ganoderma philippii进行化学成分研究,从中分离到16个化合物,通过波谱方法分别鉴定为2,5-二羟基苯乙酮（1）,甲龙胆酸（2）,（S）-苹果酸二甲酯（3）,muurola-4,10（14）-dien-11β-ol（4）,dihydroepicubenol（5）,5-羟甲基呋喃甲醛（6）,麦角甾-7,22E-二烯-3β-醇（7）,麦角甾-7,22E-二烯-3-酮（8）,麦角甾-7,22E-二烯-2β,3α,9α-三醇（9）,6β-甲氧基麦角甾-7,22E-二烯-3β,5α-二醇（10）,麦角甾-4,6,8（14）,22E -四烯-3-酮（11）,麦角甾-4,6,8（14）,22E-四烯-3β-醇（12）,5α,8α-过氧桥麦角甾-6,22E-二烯-3β-醇（13）,7α-甲氧基-5α,6α-epoxy麦角甾-8（14）,22E-二烯-3β-醇（14）,麦角甾-8,22E-二烯-3β,5α,6β,7α-四醇（15）,麦角甾-5,23E-二烯-3β-醇,醋酸盐（16）。化合物1~16均首次从橡胶灵芝中分离得到,其中化合物4 ,5首次从灵芝属分离得到。     

茉莉酸甲酯诱导的白木香cDNA文库的构建及初步鉴定

目的 通过构建茉莉酸甲酯（MeJA）处理的白木香cDNA文库,为揭示伤害诱导沉香倍半萜合成的分子机制奠定基础。方法 以MeJA处理的白木香愈伤组织为材料,以改造的pGADT为载体,利用SMART技术构建白木香全长cDNA文库。结果 构建的文库原始滴度为8.99×10⁶ pfu/mL,阳性克隆子的比例为97%,插入片段的大小在500～3 000 bp,平均大于1 000 bp。结论 构建的文库无论从库容量、克隆效率,还是全长率方面评价,均达到了高质量文库的要求。     

白英中的倍半萜类化合物

采用硅胶柱色谱、Sephadex LH-20柱色谱及制备薄层等方法对白英中的倍半萜进行分离纯化,根据理化性质和波谱数据鉴定其化学结构,发现并鉴定了10个倍半萜,分别为1β-羟基-1,2-二氢-α-山道年（1）,boscialin（2）,布卢门醇C（3）,3β-hydroxy-5α,6α-epoxy-7-megastigmen-9-one（4）,去氢催吐萝芙木醇（5）,布卢门醇 A（6）,（1'S,2R,5S,10R）-2-（1',2'-dihydroxy-1'-methylethyl）-6,10-dimethylspiro[4,5] dec-6-en-8-one（7）,（1'R,2R,5S,10R）-2-（1',2'-dihydroxy-1'-methylethyl）-6,10-dimethylspiro [4,5] dec-6-en-8-one（8）,2-（1',2'-dihydroxy-1'-methylethyl）-6,10-dimethyl-9-hydroxyspiro [4,5] dec-6-en-8-one（9）,蚱蜢酮（10）。10个倍半萜均为首次从白英中发现。     

蔓荆的化学成分

从蔓荆茎叶中分离得到1个新的化合物——扶桑甾醇棕榈酸酯（1）,以及10个已知化合物,分别鉴定为熊果醇（2）、3-表乌苏酸（3）、2α,3β,24-三羟基-12-烯-28-齐墩果酸（4）、2α,3α,24-三羟基-12-烯-28-乌苏酸（5）、2α,3α,24-三羟基-12-烯-28-齐墩果酸（6）、2α,3α,24-三羟基-齐墩果-12-烯-28-酸-28-β-D-吡喃葡萄糖酯苷（7）、（Z）-9-十六碳烯酸（8）、二十八烷醇（9）、β-谷甾醇（10）、β-胡萝卜苷（11）。化合物结构利用核磁共振谱、高分辨质谱等现代波普技术进行鉴定。化合物1为新化合物,化合物2~7首次从蔓荆中分离得到。     

茯苓的化学成分研究

对中药茯苓的化学成分进行了研究。利用正相和反相硅胶柱,Sephadex LH-20和制备型HPLC等色谱技术从中分离得到13个化合物,分别鉴定为土莫酸（1）、去氢土莫酸（2）、3β,5α-二羟基麦角甾-7,22-二烯-6-酮（3）、3β,5α,9α-三羟基麦角甾-7,22-二烯-6-酮（4）、麦角甾-7,22-二烯-3-酮（5）、6,9-环氧麦角甾-7,22-二烯-3β-醇（6）、麦角甾-4,22-二烯-3-酮（7）、麦角甾-7,22-二烯-3β,5α,6β-三醇（8）、麦角甾-7,22-二烯-5,6-环氧-3-醇（9）、β-谷甾醇（10）、核糖醇（11）、甘露醇（12）、齐墩果酸乙酸酯（13）。并运用质谱、核磁等波谱技术对分离得到的化合物进行了结构鉴定。化合物3~13为首次从该种中药中分离得到。     

列当属、肉苁蓉属和草苁蓉属植物传统药物学调查

通过野外资源调查、整理各大标本馆标本原始记录和查阅文献记载等方法,系统整理、总结、归纳了列当属、肉苁蓉属和草苁蓉属民族药用植物种类、功效及民间使用情况,结果表明列当属6种药用植物在4个少数民族间作为7种民族药应用,草苁蓉属2种药用植物在8个少数民族间作为10种民族药应用,肉苁蓉属2种药用植物在3个少数民族间作为3种民族药应用,且同种药用植物常作不同民族药;发现3属植物的传统疗效主要集中在补肾壮阳、止血和止痛3个方面,并且该传统疗效与现代药理研究结果基本吻合。因此深入研究植物种类丰富的列当属植物资源对缓解肉苁蓉植物资源匮乏局面和扩大药源具有积极意义。     

金银花类药用植物IspE和IspH基因克隆和生物信息学分析

目的:克隆金银花类药用植物4-二磷酸胞苷-2-C-甲基赤藓糖激酶(4-diphosphocytidyl-2-C-methyl-D-erythritol kinase,IspE)和4-羟基-3-甲基-2-邻苯基二磷酸还原酶(4-hydroxy-3-methylbut-2-enyl diphosphate reductase,IspH)基因,并对其基因序列、蛋白特性和转录活性进行分析、比较.方法:从忍冬Lonicera japonica转录组测序结果中分析获得了IspE,IspH基因.分别以忍冬、红白忍冬L.japonica var.chinensis、红腺忍冬L.hypoglauca和水忍冬L.dasystyla新鲜花蕾为材料,利用RT-PCR技术克隆获得了4种金银花类药用植物IspE和IspH基因的全长cDNA.运用生物信息学分析软件,预测编码蛋白的结构和功能,并通过RT-PCR检测IspE和IspH在忍冬、红白忍冬、红腺忍冬、水忍冬花蕾中的转录情况.结果:金银花类药用植物IspE基因含有1个完整的开放阅读框,长度为1 221 bp,编码406个氨基酸;IspH含有一个完整的开放阅读框,长度为1 380 bp,编码459个氨基酸.IspE和IspH均为非分泌蛋白,均定位于叶绿体中.RT-PCR分析结果表明在忍冬、红腺忍冬和水忍冬的花蕾中IspE,IspH基因的转录水平没有显著差异,但红白忍冬花蕾中IspE,IspH基因的转录水平均显著高于忍冬.结论:克隆获得忍冬、红白忍冬、红腺忍冬和水忍冬中IspE,IspH基因,并证实了其在不同金银花类药用植物中的表达,为进一步研究IspE,IspH基因对萜类化合物生物合成和花香气以及颜色的影响奠定了基础.     

追风伞中黄酮类成分的研究

目的:对追风伞中的黄酮类成分进行分离、鉴定。方法:追风伞干燥全草用95%乙醇溶液加热回流提取,减压回收乙醇,浓缩液依次用石油醚、氯仿萃取后,水层部分利用大孔吸附树脂、硅胶柱色谱、反相Rp-18柱色谱及重结晶等方法进行分离及纯化,并通过1H-NMR,13C-NMR,EI-MS及理化常数对分离化合物进行结构鉴定。结果:从追风伞提取物中分离鉴定9个黄酮类化合物,分别为:木犀草素(1),木犀草素-4′-O-β-D-葡萄糖苷(2),刺槐素-7-O-β-D-葡萄糖苷(3),芦丁(4),刺槐素(5),槲皮素(6),槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖苷(7),山柰酚-3-O-β-D-葡萄糖苷(8),异鼠李素-3-O-β-D-葡萄糖苷(9)。结论:所得化合物均为首次从追风伞中分离鉴定。     

Screening of the topical anti-inflammatory activity of the bark of Acacia cornigera Willdenow, Byrsonima crassifolia Kunth, Sweetia panamensis Yakovlev and the leaves of Sphagneticola trilobata Hitchcock

Ethnopharmacological relevance

An investigation of topical anti-inflammatory activity was undertaken on plants used in Central America traditional medicine.

Aim of study

Four herbal drugs used in the folk medicine of Central America to treat inflammatory skin affections (Acacia cornigera bark, Byrsonima crassifolia bark, Sphagneticola trilobata leaves and Sweetia panamensis bark) were evaluated for their topical anti-inflammatory activity.

Materials and methods

Petroleum ether, chloroform and methanol extracts were obtained for herbal medicines and then extracts were tested on Croton oil-induced ear dermatitis model in mice.

Results

Almost all the extracts reduced the Croton oil-induced ear dermatitis in mice and the chloroform ones showed the highest activity, with ID₅₀ (dose giving 50% oedema inhibition) values ranging from 112 μg/cm² (Byrsonima crassifolia) to 183 μg/cm² (Sphagneticola trilobata). As reference, ID₅₀ of the non-steroidal anti-inflammatory drug indomethacin was 93 μg/cm².

Conclusions

Lipophilic extracts from these species can be regarded as potential sources of anti-inflammatory principles.     

丛枝菌根真菌与哈茨木霉菌合用对连作丹参生长及质量的影响

该文探讨田间条件下丛枝菌根真菌(AMF)与哈茨木霉菌合用对丹参生长及质量的影响。采用田间小区试验来进行研究,使用HPLC测定丹参地上部分和地下部分有效成分含量,通过形态观察并计算根部发病率,并结合方差统计学方法对各指标的测定结果进行分析。结果显示,单独接种AMF以及AMF与哈茨木霉菌合用能够有效的降低连作丹参根部病害的发生率,其中AMF与哈茨木霉菌合用效果更佳,比CK组降低了61.50%。几种处理对丹参生物量影响没有显著差异,但都能提高丹参根部各种有效成分的含量。单独接种AMF以及AMF+哈茨木霉都能显著提高丹参根中丹酚酸B的含量(P<0.05),其中AMF对丹酚酸B促进作用最明显,提高了27.97%;接种AMF能显著提高丹参根丹参酮I和丹参酮ⅡA的含量(P<0.05),其中丹参酮I约提高了70.14%;丹参酮ⅡA约提高了51.42%。另外,单独接种AMF以及AMF+哈茨木霉均能显著提高丹参根中隐丹参酮的含量,提高了约30.67%。从而得出单独接种AMF以及AMF+哈茨木霉能够有效减低连作丹参病害的发生率,同时提高连作丹参药材的质量。     

Anthelmintic activity of Arisaema franchetianum and Arisaema lobatum essential oils against Haemonchus contortus

Ethnopharmacological relevance

Arisaema franchetianum and Arisaema lobatum are two perennial plants native to China. Arisaema franchetianum is universally used to promote the subsidence of induration and swelling, quicken blood and relieve pains, and kill intestinal parasites in humans and animals. Arisaema lobatum is used to treat malaria, intestinal parasites, and snake and insect bites in humans and animals. The aim of this study was to determine the composition of the essential oils from Arisaema franchetianum and Arisaema lobatum and evaluate the anthelmintic effect against Haemonchus contortus.

Materials and methods

Two oils were investigated by GC and GC–MS. The anthelmintic bioassay tests of Arisaema franchetianum and Arisaema lobatum essential oil, linalool and carvacrol were performed using egg hatch assay (EHA), larval development assay (LDA) and larval migration inhibition assay (LMIA).

Results

Fifty six components representing 96.88% of the Arisaema franchetianum oil and 64 components representing 96.88% of the Arisaema lobatum oil were identified. Carvacrol and linalool were found to be the major constituents of two oils. In the EHA, greater than 99% inhibition were observed with Arisaema franchetianum oil at 10 mg/mL (CE₅₀ 1.63 mg/mL) and Arisaema lobatum oil at 5 and 10 mg/mL (CE₅₀ 0.48 mg/mL). In the LDA, both oils induced complete inhibition at 10 mg/mL, with the CE₅₀ being 1.10 mg/mL for Arisaema franchetianum oil and 0.73 mg/mL for Arisaema lobatum oil. In the LMIA, the Arisaema franchetianum oil and Arisaema lobatum oil at best inhibited 74.1% and 95.6% of larval migration at 10 mg/mL, respectively. Carvacrol exhibited similar activity to Arisaema lobatum essential oil and linalool did not show high activity in every assay.

Conclusions

These data show for the first time that the essential oils obtained from Arisaema franchetianum or Arisaema lobatum had promising anthelmintic activity against Haemonchus contortus. Arisaema plant may offer an alternative source for the control of gastrointestinal nematodes of sheep and goats.     

髯丝蛛毛苣苔和吊石苣苔抗菌活性成分研究

目的 研究髯丝蛛毛苣苔和吊石苣苔的抗菌活性成分.方法 以小檗碱为阳性对照,利用纸片扩散法进行抗菌活性研究,液体培养法进行活性成分筛选;采用各种色谱法对高活性部位分离,运用多种波谱技术鉴定结构.结果 从髯丝蛛毛苣苔醋酸乙酯部位分离得到5个化合物β-谷甾醇(1),E-3,4-二甲氧基肉桂酸(2),barbinervic acid (3),3β,19α-二羟基-12-烯-28-乌苏酸(4),28-O-β-D-glucopyranosyl pomolic acid(5).从吊石苣苔醋酸乙酯部位分离得到3个化合物 5,7-二羟基-6,8,4'-三甲氧基黄酮(6),5,6,4'-三羟基-7,8-二甲氧基黄酮(7),5-羟基-6,8,4'-三甲氧基黄酮-7-O-β-D-葡萄糖苷(8).化合物3,4,6对金黄色葡萄球菌(SA)、耐甲氧西林葡萄球菌(MRSA)和β-内酰胺酶阳性的金黄色葡萄球菌(ESBLs-SA)具有抑制活性.其中化合物3(IC50 0.098 g·L-1)抑制SA活性最好;化合物4(IC50 0.130 g·L-1)抑制MRSA活性最好;化合物3(IC50 0.270mg·L-1)抑制ESBLs-SA活性最好.结论 化合物1～5为首次从植物中分离得到,7,8为首次从该科植物中分离得到.     

黄芩苷对非白念珠菌生物膜抑制作用的研究

目的:研究黄芩苷对光滑念珠菌、近平滑念珠菌、克柔念珠菌、季也蒙念珠菌等非白念珠菌生物膜的影响.方法:96孔微量培养板上构建4种非白念珠菌生物膜;微量稀释法检测黄芩苷对4种非白念珠菌最低抑菌浓度(MIC);XTT减低法评价黄芩苷对4种非白念珠菌生物膜SMIC及菌细胞黏附性的影响.结果:4种非白念珠菌在96孔板中可形成成熟的生物膜;黄芩苷对4种非白念珠菌MIC分别是125,250,125,62.5 mg·L~(-1);黄芩苷对4种非白念珠菌生物膜的SMIC50分别是＞1 000,500,125,250 mg·L~(-1);SMIC80均大于或等于1 000 mg·L~(-1).黄芩苷对4种非白念珠菌的黏附有一定的抑制效应.结论:黄芩苷对近平滑念珠菌、克柔念珠菌、季也蒙念珠菌生物膜有较强的抑制作用.     

Antimalarial and safety evaluation of Pluchea lanceolata (DC.) Oliv. & Hiern: In-vitro and in-vivo study

Ethnopharmacological relevance

Many of the effective therapeutic strategies have been derived from ethnopharmacologically used natural products. Pluchea lanceolata is an herb employed in Indian folk medicine for malaria like fever but it lacks proper pharmacological intervention.

Aim of the study

To evaluate antimalarial and safety profile of Pluchea lanceolata: an in-vitro, in-vivo for its ethnopharmacological validation.

Materials and methods

Methanol, butanol, ethyl acetate, chloroform, hexane extracts and its isolate, taraxasterol acetate (TxAc) were obtained from air dried aerial part of Pluchea lanceolata. These were tested in-vitro against chloroquine-sensitive strain of Plasmodium falciparum NF54 by measuring the parasite specific lactate dehydrogenase activity. The most potent hexane extract and TxAc were further validated for in-vivo antimalarial and safety evaluation. TxAc, a pentacyclic-triterpene isolated from the most active fraction was further evaluated with special emphasis on inflammatory mediators involved in malaria pathogenesis. Murine malaria was induced by intra-peritoneal injection of Plasmodium berghei infected red blood cells to the male Swiss inbred mice. Mice were orally treated following Peters 4-Day suppression test. In-vivo antimalarial efficacy was examined by evaluating the parasitaemia, percent survival, mean survival time, blood glucose, haemoglobin and pro-inflammatory mediators involved in malaria pathogenesis.

Results

Hexane extract and TxAc showed promising antimalarial activity in-vitro and in-vivo condition. TxAc attributed in inhibition of the pro-inflammatory cytokines as well as afford to significant increase in the blood glucose and haemoglobin level when compared with vehicle treated infected mice. We have not observed the synergistic action of combinations of chloroquine and TxAc from our experimental results. In-vitro and in-vivo safety evaluation study revealed that hexane extract is non toxic at higher concentration.

Conclusion

Present study further validates the ancient Indian traditional knowledge and use of Pluchea lanceolata as an antimalarial agent. Study confirms the suitability of Pluchea lanceolata as a candidate for further studies to obtain a prototype for antimalarial medicine.     

红药根的化学成分研究

采用硅胶、Sephadex LH-20、高效制备液相等方法,对红药根的甲醇提取物进行分离纯化,通过质谱（MS）、波谱数据分析（¹H,¹³C-NMR）进行结构鉴定。从红药根的甲醇提取物中分离7个化合物,分别鉴定为plantainoside A（1）,plantainoside B（2）,calcedarioside C（3）,calcedarioside D（4）,platyphylloside（5）,hirsutanonol（6）和hirsutanonol-5-O-β-D-glucopyranoside（7）。化合物均5~7为首次从该科物中分离得到。