多发性骨髓瘤的基因表达谱分析

目的 :研究MM患者与正常人骨髓基因的差异表达。方法 :应用cDNA芯片技术对 1 0例初诊多发性骨髓 (MM)患者和 1 0名正常骨髓的单个核细胞的mRNA进行检测。结果 :在 2 0 4 8条基因中共发现差异表达基因5 6 6条。在MM中 2 37条表达增加 ,32 9条表达降低。结论 :MM的发生发展涉及多基因的改变 ,cDNA芯片技术可高效研究多个基因的表达水平     

大鼠骨髓基质细胞分化为成骨细胞相关基因表达谱分析

目的：利用cDNA微阵列技术研究大鼠骨髓基质细胞向成骨细胞分化中基因表达谱的变化。方法：分离、培养大鼠骨髓基质细胞,以地塞米松、β-甘油磷酸钠和维生素C诱导分化,抽提细胞mRNA并逆转录成cDNA探针,用含有1176个基因片段的cDNA芯片检测相关基因的差异表达。结果：经诱导后的细胞可见有钙化结节,与正常传代的细胞相比有292个基因的差异表达超过了3倍,而参与转录、翻译、糖基化修饰和调节细胞外基质、信号分子形成及参与代谢的相关基因表达均有不同程度的上调。结论：cDNA微阵列技术可显示细胞在诱导分化中多基因的差异表达,这些差异表达基因是大鼠骨髓基质细胞在增殖和成骨分化诱导中所必需参与的基因。     

妊高征胎盘组织脂代谢相关基因的异常表达

目的：了解妊娠高血压综合征患胎盘组织有关代谢基因的表达，寻找妊高征血管内皮损伤的原因．方法：选择4例重度妊高征胎盘组织为研究对象，以混合的4例正常胎盘总RNA为对照，用cy5dUTP和cy3dUTP分别标记妊高征胎盘组织cDNA和对照cDNA．将与代谢、凋亡等有关基因的cDNA点在特殊的硅化玻片上，制成4000点的cDNA表达谱芯片，用该芯片检查相关基因的表达．结果：在4次芯片杂交过程中，共有58-131条不等的基因发生差异表达，其中出现2次以上重复一致的异常表达基因共22条：表达增高的有13条，表达降低的有9条．脂代谢相关基因脂肪分化相关蛋白(ADRP)基因在3例胎盘组织中表达增高；脂蛋白脂酶(LPL)基因在4例妊高征胎盘组织中表达均降低．结论：脂代谢相关基因表达异常可能是血管内皮损伤的原因之一．     

以基因芯片技术研究Kkay小鼠2型糖尿病相关基因

目的以基因芯片技术研究Kkay2型糖尿病小鼠的差异表达基因。方法以包含8192条小鼠的cDNA基因表达谱芯片研究Kkay2型糖尿病小鼠肝脏的基因表达谱。结果共筛选出差异表达基因154条,包括全长基因68条,表达序列标识(EST)86条;其中40条基因表达增加,114条表达降低。结论多数已知功能基因的表达异常与以往的研究结论是一致的;cDNA基因芯片技术能够高通量分析糖尿病相关基因。     

基因芯片在筛选宫颈癌相关基因中的应用研究

目的：通过研究宫颈癌组织和正常宫颈组织中差异表达的基因，筛选出与宫颈癌相关的基因群，并进一步研究其表达和初步功能。方法：以含2048条人类全长基因的cDNA基因表达谱芯片，检测3例宫颈癌标本和正常宫颈标本的基因表达谱，计算机分析比较两种组织中差异表达的基因。结果：3例宫颈癌差异表达基因分别有197条、429条和665条，共同差异表达的基因有64条。结论：宫颈癌同其他肿瘤一样，是多种基因结构和功能改变的结果，有关宫颈癌特异性相关基因及其作用有待进一步研究。     

基因微阵列技术筛选结肠癌转移相关基因的研究

目的以cDNA表达基因芯片技术筛选与原发性结肠癌转移相关的基因,对部分基因进行分析,探讨原发性结肠癌转移发生发展的分子机制。方法收集2例未发生转移及2例已发生转移的原发性结肠癌患者的新鲜冻存癌组织。杂交芯片采用含16k余个点的cDNA表达谱芯片。差异表达基因的筛选标准为该基因在50%以上样本中的荧光强度比(ratio比值)>=2或<=0.5。结果基因芯片筛选获得与细胞粘连、细胞周期、信号传导、分子结构等功能相关的差异表达基因共196条,其中上调基因112条,下调基因84条。结论运用cDNA芯片进行原发性结肠癌转移倾向相关基因的表达谱分析,有助于从分子水平全方位阐明结肠癌转移的发生机制及生物学特性。     

家族性急性髓系白血病差异表达基因的筛选与鉴定

目的分离家族性急性髓系白血病患者骨髓中差异表达的基因,在基因水平上探讨急性白血病发生发展的分子机制。方法应用Super SMART和抑制性消减杂交（SSH）技术,构建家族性急性髓系白血病cDNA消减文库;应用差异筛选技术进行差异表达片段的筛选与鉴定;测序结果进行BLAST同源性比对分析。结果成功构建了家族性急性髓系白血病cDNA消减文库;克隆、筛选并鉴定了17条基因片段,与已知基因同源,11条为未知基因片段。结论SSH技术是筛选差异表达基因的有效方法;获得多个与细胞增殖和分化相关的已知基因;获得11条新基因EST片段,并被GenBank收录。     

甲基化修饰致PCDH10基因在多发性骨髓瘤中沉默

目的研究PCDH10基因在多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)患者及细胞系KM3、RPMI-8226中的甲基化状态,分析甲基化对其沉默的影响。方法常规骨髓穿刺术获取MM患者骨髓样本,培养骨髓瘤细胞系KM3、RPMI-8226,以增生性骨髓象骨髓样本作为对照。RT-PCR检测其中PCDH10基因表达水平,甲基化特异性PCR(methylation-sensitive PCR,MSP)法检测PCDH10基因甲基化状态,通过5-氮杂-2’-脱氧胞苷和组蛋白去乙酰化酶抑制剂[5-aza-2’-deoxycytidine(Aza)and trichostatin A(TSA),A+T]处理MM细胞系,检测药物处理前后PCDH10甲基化状态及表达水平。结果 PCDH10基因在正常人群中表达,但在MM患者骨髓及细胞系中广泛低表达,且77.27%(34/44)的MM患者PCDH10呈甲基化状态。PCDH10基因可经A+T试验逆转甲基化状态并恢复表达。结论 DNA甲基化可能在多发性骨髓瘤的PCDH10基因沉默中发挥作用,从而参与骨髓瘤的发生。     

基因芯片分析釉基质蛋白对hBMSCs基因表达谱的影响

目的应用基因芯片技术分析釉基质蛋白(EMPs)对人骨髓基质细胞(hBMSCs)基因表达谱的影响。方法全骨髓法体外传代培养hBMSCs。以200μg/mLEMPs刺激hBMSCs作为实验组,以正常培养的hBMSCs作为对照组。培养5d后,选择含4096种人类基因的cDNA基因芯片进行检测和分析。运用实时PCR方法对呈差异表达基因中的4条进行扩增和检测,以验证基因芯片分析结果。结果hBMSCs经EMPs刺激后,有27条差异表达基因,其中18条基因表达上调,9条基因表达下调。经实时PCR检测的4条差异表达基因结果与基因芯片结果一致。结论应用基因表达谱芯片可筛选经EMPs诱导后hBMSCs的差异表达基因。为进一步研究EMPs促进牙周组织再生的分子学机制奠定了基础。     

用cDNA表达阵谱分析大鼠骨髓基质干细胞诱导分化软骨细胞过程中细胞外基质基因表达

目的：从基因水平了解转化生长因子-β(TGF—β)和地塞米松(DEX)在诱导大鼠骨髓基质干细胞(BMSCs)向软骨细胞分化过程中细胞外基质(ECM)作用的分子机制。方法：应用TGF—β和DEX诱导大鼠BMSCs到软骨细胞系，从分化的软骨细胞中提取、纯化mRNA，逆转录合成cDNA，荧光标记后与大鼠BioStarR-20型芯片杂交，扫描后筛选出差异表达的ECM基因。结果：在2242个基因中，共发现与ECM相关的差异表达基因15条，其中8条差异表达明显，包括前胶原XⅡα1和前胶原Ⅱα1基因各1条，蛋白多糖aggrecan 1、核心蛋白聚糖和biglycan基因各1条，粘连糖蛋白及相关基因纤维连接蛋白1、fibromodulin和Chondromodulin-1(ChM-1)各1条。结论：TGF—β和DEX可有效诱导大鼠BMSCs到软骨细胞系的分化培养，其作用机制涉及到多个ECM基因。     

骨髓瘤细胞可诱导骨髓间充质干细胞的基因表达谱发生暂时和 (或)长期性改变

目的:正常骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cell,MSC)在与骨髓瘤细胞相互作用过程中,MSC的全基因表达谱的改变目前尚未有报道,本研究就对此进行研究并进一步探索多发性骨髓瘤的发病机制。方法:正常人骨髓MSC与骨髓瘤细胞株在Transwell共培养体系培养前后,用全基因表达芯片检测MSC全基因mRNA的表达谱,比较正常MSC在与骨髓瘤细胞共培养(MC组)或共培养后去除骨髓瘤细胞后继续单独培养的MSC(MA组),和MSC单独培养的对照组(MK组)基因表达谱的变化。结果:MC组与MK组相比较,在所有分析的10 000个基因中共发现837个差异基因(837/10 000,8.37%),其中有472个基因表达上调(472/837,56.39%),365个基因表达下调(365/837,43.61%)。而MA组与MK组相比较,共发现367个差异基因,其中有218个基因表达上调(218/367,59.40%),149个基因表达下调(149/367,40.60%)。从芯片结果中筛选出MMP1、FGFR2、ANGPTL4、MFAP5、TGM2、STC1、CCL7和IL-32这8个基因,经定量PCR验证后的结果与基因芯片结果相一致。结论:骨髓瘤细胞可以诱导正常骨髓MSC多种基因表达改变,并且有些改变即使在骨髓MSC脱离骨髓瘤细胞后仍可存在;此外,初步筛选到8个差异表达基因,其中7个基因在多发性骨髓瘤发病机制中的作用既往未见报道,有待今后进一步研究。     

多发性骨髓瘤中人类疱疹病毒8型的定量分析及其相关基因的表达

目的 确定多发性骨髓瘤（MM）骨髓活检标本中是否存在人类疱疹病毒8型（HHV8）感染,病毒负荷量的差异与临床表现之间的关系。方法 实时荧光定量PCR确定骨髓活检标本中的HHV8病毒的负荷量,采用筑巢式PCR扩增患者外周血、骨髓穿刺和骨髓活检标本中HHV8 KS330233Bam片段,用逆转录－PCR方法了解HHV8病毒的致病基因病毒源白细胞介素－6（vIL-6)和病毒源干扰素调节因子－1（vIRF-1)的表达情况。结果 多数MM患者的骨髓活检标本可检出HHV8,荧光定量PCR发现阳性率为69．6％（16／23）;筑巢式PCR时的阳性率为82．6％（19／23）,骨髓穿刺和外周血标本的阳性率分别为4％（1／25）和0。临床分析表明病毒的检出可能与化疗有关。vIRF-1在骨髓活检标本中表达率很高,为83．3％（10／12）, vIL-6的表达率为0。结论 多发性骨髓瘤和HHV8感染有关,高表达的vIRF－1在多发性骨髓瘤发病的过程中可能起一定的作用。     

Bone Marrow Urokinase Plasminogen Activator Receptor Levels are Associated with the Progress of Multiple Myeloma△

Objective To determine the mRNA and protein levels of urokinase plasminogen activator receptors (uPAR) in bone marrow fluid and bone marrow tissue from multiple myeloma (MM) patients and assess association of uPAR level with prognosis of MM. Methods uPAR levels in bone marrow fluid of 22 MM patients at the stable and progressive stages and 18iron deficiency anemia patients with normal bone marrow (control) were examined by ELISA. Furthermore, uPAR expression in bone marrow tissue was investigated by RT-PCR and Western blot, respectively. The distribution of uPAR in MM cells was examined using immunofluorescence staining. The pathological changes in different stages of MM patients were studied by HE staining. Results uPAR level in bone marrow fluid of MM patients (1.52±0.32μg/ml) was found to be higher than that in the control group (0.98±0.15μg/ml). Interestingly, uPAR protein (0.686±0.075vs. 0.372±0.043, P<0.05) and mRNA (2.51±0.46vs. 4.46±1.15,P<0.05) expression levels of MM patients at the progressive stage were significantly higher than those at the stable stage. The expression of uPAR in MM bone marrow was confirmed by immunofluorescence staining.Moreover, HE staining revealed a great increased number of nucleated cells and severe impairment of hematopoietic function in the bone marrow of patients with progressive-stage myeloma. Conclusion Our study reveals that uPAR expression is positively correlated with the development and progress of MM.     

基因表达谱芯片检测肺鳞癌与正常肺组织差异表达的基因

目的：用基因芯片技术探讨肺鳞癌异常基因的表达。方法：提取肺鳞癌组织及正常肺组织的RNA,分别用Cy5-dCTP或Cy3-dCTP标记,再与4096点基因芯片杂交,筛选肺鳞癌组织和正常肺组织表达差异的基因。结果：肺鳞癌组织与正常肺组织表达差异基因225条,其中癌组织中上调基因为116条．下调基因109条;差异极显著性基因37条,表达上调24条,下调13条。结论：多基因参与肺鳞癌发病,基因芯片技术是肺癌基因筛选的有效方法。     

Bcl-1 Rearrangement and Cyclin D1 Protein Expression in Multiple Myeloma Precursor Cells

Nonrandomized chromosomal translocations of-- 1ten take place in multiple myeloma (MM) patientsand many of them involve immunoglobulin heavychain gene flgH) at 14q32. 3 and BCLI gene at11q13, leading to the rearrangement of Bcl-l/lgHgenes and the overexpression of cell cyclin DI protein[1'2]. In this study, the MM precursor cells werestudied in the respects of cyclin DI protein overexpression and BCL--l gene rearrangement to investigate the role of cyclin DI protein in the pathogenesiso…     

骨髓活检在多发性骨髓瘤诊断及鉴别诊断中的价值

目的:探讨骨髓活检在多发性骨髓瘤(MM)诊断与鉴别诊断中的价值。方法:同步观察多发性骨髓瘤38例患者骨髓涂片和活检塑料包埋切片。并与反应性浆细胞增多症20例患者作比较,以正常人20例作对照。观察骨髓增生程度、浆细胞增殖模式及浸润程度、网硬蛋白积分。结果:MM组患者骨髓造血组织在切片中的增生度明显高于涂片,两者差异有统计学意义(P<0.05);与反应性浆细胞增多症及正常对照组比较差异亦有统计学意义(P<0.05)。MM组切片中浆细胞以簇片-间质型、结节-间质型、结节型及塞实型浸润为主,以结节出现为阳性诊断敏感性36例(94.7%)明显高于涂片中浆细胞>15%的指标(71.0%);MM组网硬蛋白纤维积分为1 以上为63.2%,与反应性浆细胞增多症组及正常对照组比较差异有统计学意义(均为P<0.05)。结论:骨髓活检能准确反映骨髓组织的增生程度、浆细胞浸润情况及增殖模式、纤维增生程度,对MM的诊断及鉴别诊断有较高价值。     

Screening of aplastic anaemia-related genes in bone marrow CD4+ T cells by suppressive subtractive hybridization

Background CD4(+) T cells play a crucial role in the pathogenesis of aplastic anaemia. However, the mechanisms of over-proliferation, activation, infiltration of bone marrow and damage to haematopoietic cells of CD4(+) T cells in aplastic anaemia are unclear. Therefore, we screened differentially expressed genes of bone marrow CD4(+) T cells of aplastic anaemia patients and normal donors by suppressive subtractive hybridization to investigate the pathogenesis of aplastic anaemia. Methods The bone marrow mononuclear cells of a first visit aplastic anaemia patient and a healthy donor of the same age and sex were isolated using lymphocyte separating medium by density gradient centrifugation. With the patients as “tester” and donor as “driver”, their CD4(+ )T cells were separated with magnetic bead sorting and a cDNA library established by suppressive subtractive hybridization. Then 15 of the resulting subtracted cDNA clones were randomly selected for DNA sequencing and homological analysis. With semiquantitative RT-PCR, bone marrow samples from 20 patients with aplastic anaemia and 20 healthy donors assessed the expression levels of differentially expressed genes from SSH library.Results PCR detected 89 clones in the library containing an inserted fragment of 100 bp to 700 bp. Among 15 sequenced clones, 12 were known genes including 3 repeated genes. Compared with normal donors, there were 9/12 genes over-expressed in bone marrow CD4(+ )T cells of patients with aplastic anaemia. The effects of these genes included protein synthesis, biology oxidation, signal transduction, proliferative regulation and cell migration. Not all these genes had been reported in the mechanisms of haematopoietic damage mediated by CD4(+) T cells in aplastic anaemia. Conclusions Screening and cloning genes, which regulate functions of CD4(+) T cells, are helpful in elucidating the mechanisms of over proliferation, activation, infiltrating bone marrow and damaging haematopoietic cells of CD4(+) T cells in aplastic anaemia.     

大鼠骨髓基质细胞传代培养中相关基因的差异表达

目的:研究大鼠骨髓基质细胞(BMSCs)体外传代培养中相关基因的差异表达.方法: 取大鼠骨髓,分离、培养骨髓基质细胞并传代,抽取细胞(mRNA)并逆转录成cDNA探针,用含有1176个基因片段的cDNA芯片检测相关基因的差异表达,整理、分析实验数据.结果: 传至P3代细胞与原代细胞(P0)相比有104个基因的差异表达超过了3倍,其中有53个基因表达量明显上升,51个基因表达量明显下降,主要涉及一些细胞粘附分子及胞外基质、细胞信号与传导、细胞受体和细胞骨架等方面的相关基因.结论: 通过基因芯片技术可以显示BMSCs在体外传代培养中众多基因的差异表达,而这些基因的差异表达与细胞的增殖和分化存在一定的关系,此为今后从基因水平上评价BMSCs在传代及临床应用中的稳定性提供了理论依据.