肢体反复短暂缺血再灌注后脑组织一氧化氮的动态变化

目的:观察大鼠短暂肢体缺血再灌注后脑组织一氧化氮含量动态变化,探讨一氧化氮在肢体缺血预处理脑保护中的作用。方法:实验于2003-08/2004-09在新乡医学院生理教研室和河北医科大学病理生理研究室完成。选择健康雄性Wistar大鼠72只,随机分成假手术组、短暂肢体缺血再灌注(limbischemiareperfusion,LIR)组和NG-硝基-L-精氨酸甲酯(L-NAME)+LIR组,观察LIR后不同时间点血清和海马CA1区脑组织中一氧化氮含量和一氧化氮合酶(nitricoxidesynthase,NOS)活性的变化。结果:LIR后即刻血清一氧化氮生成明显增加,达到高峰,与假手术组比较升高显著(P<0.01)。6h降低,48h又有一定程度的回升。而LIR后即刻海马CA1区组织一氧化氮生成开始升高,6h达到高峰,24h降至接近假手术组水平,48h又有明显的升高。LIR后血清和海马CA1区NOS活性的变化规律与一氧化氮生成相似。结论:肢体反复短暂缺血再灌注后脑组织一氧化氮这种动态变化可能发挥对脑的保护作用。     

前脑缺血再灌注海马CA1区神经元死亡与一氧化氮的关系

目的：深入研究一氧化氮在迟发性神经元死亡的发生中的作用。方法：四血管闭塞复制大鼠前脑缺血／再灌注模型，观察不同类型一氧化氮合酶(nitrie-oxide synthase，NOS)抑制剂治疗组及对照组海马CA1区一氧化氮浓度及CA1区锥体细胞密度的变化。结果：缺血／再灌注后6h海马CA1区一氧化氮浓度[(3．83&;#177;0．90)μmol／L]即开始升高[缺血前为（0．93&;#177;0．08)μmol／L]，至3d达到高峰[(8．99&;#177;0．90)μmol／L]；左旋硝基精氨酸甲脂(L-NAME)能降低各时相点的一氧化氮水平，氨基胍能降低再灌注后6—24h的一氧化氮水平；但两种NOS抑制剂均不能防止再灌注后3d发生的迟发性神经元死亡，其中L-NAME加重了神经元的损害，而氨基胍可明显地减轻神经元损害，有神经保护作用。结论：前脑缺血海马CA1区的迟发性神经元死亡与缺血／再灌注后的一氧化氮水平增高有关，特别是选择性诱导性NOS的作用可能更为重要。     

前脑缺血再灌注海马CA1区神经元死亡与一氧化氮的关系

目的:深入研究一氧化氮在迟发性神经元死亡的发生中的作用。方法:四血管闭塞复制大鼠前脑缺血/再灌注模型,观察不同类型一氧化氮合酶(nitric-oxidesynthase,NOS)抑制剂治疗组及对照组海马CA1区一氧化氮浓度及CA1区锥体细胞密度的变化。结果:缺血/再灌注后6h海马CA1区一氧化氮浓度犤(3.83±0.90)μmol/L犦即开始升高犤缺血前为(0.93±0.08)μmol/L犦,至3d达到高峰犤(8.99±0.90)μmol/L〗;左旋硝基精氨酸甲脂(L-NAME)能降低各时相点的一氧化氮水平,氨基胍能降低再灌注后6～24h的一氧化氮水平;但两种NOS抑制剂均不能防止再灌注后3d发生的迟发性神经元死亡,其中L-NAME加重了神经元的损害,而氨基胍可明显地减轻神经元损害,有神经保护作用。结论:前脑缺血海马CA1区的迟发性神经元死亡与缺血/再灌注后的一氧化氮水平增高有关,特别是选择性诱导性NOS的作用可能更为重要。     

一氧化氮参与脑缺血耐受过程中Ⅱ组代谢型谷氨酸受体的作用

目的：探讨一氧化氮在Ⅱ组代谢型谷氨酸受体(metabotropic glutamate receptors，mGluRs)参与海马脑缺血预处理(cerebral ischemic preconditioning，CIP)保护机制中的作用，从整体水平探讨mGluRs对一氧化氮参与脑缺血耐受的影响。方法：实验于2003-03／04在河北医科大学病理生理学研究室进行。51只永久凝闭椎动脉的SD大鼠随机分为假手术组、CIP组、MTPG+CIP组、损伤性缺血组、MTPG+CIP+损伤性缺血组5组。后4组大鼠均在末次缺血再灌后即刻，6，24，72h取材，观察脑室应用Ⅱ组mGluRs阻断剂α-甲基-(4-四唑基-苯)甘氨酸(MTPG)对CIP后一氧化氮合酶(nitrie oxide synthase,NOS)活性和一氧化氮生成的影响。结果：NOS的活性于3min的CIP后再灌注6h时开始升高，为(155．0&;#177;33．5)nkat／g，24h达高峰，为(202．0&;#177;37．2)nkat／g，72h降至假手术组水平，为(123．8&;#177;27．5)nkat／g。应用MTFPG后可见，NOS的活性受到明显抑制，较单纯CIP组明显减低(P&;lt;0．05)；NOS的活性于8min的全脑缺血后再灌注6h开始升高，24h达高峰，72h降至起始水平，明显高于CIP组相应时点。MTTG+CIP+损伤性缺血组中NOS的活性较MFPG+CIP组明显升高，与单纯8min的损伤性缺血组比较无明显差别。结论：MTPG能阻断CIP引起的NOS的表达增加，同时又能阻断CIP抗后续损伤性缺血的作用，提示一氧化氮途径参与BIT诱导过程中mGluR2／3的作用。     

经颈动脉直接注入外源性降钙素基因相关肽对局灶性脑缺血再灌注大鼠海马区Fas蛋白表达的影响

目的：探讨经颈动脉直接注入外源性降钙素基因相关肽对局灶性脑缺血再灌注大鼠海马细胞表面死亡受体Fas蛋白表达的影响。方法：实验于2004-01／12在中国医科大学基础医学院神经生物实验室进行，取雄性SD大鼠90只，随机分为3组，每组30只：①假手术组：分离血管，不插线栓。②缺血再灌注组：用线栓法制备大鼠大脑中动脉阻塞模型，在脑缺血2h后拔出栓线再灌注，再灌注即刻经颈动脉注入生理盐水1mL。③降钙素基因相关肽组：同前造模，再灌注即刻经颈动脉注入降钙素基因相关肽0.5mL。后两组动物再灌注后6，12，24，48，72h麻醉后断头处死。假手术组同时处死，每个时间点各6只。应用免疫组化和显微图像分析方法检测局灶性脑缺血再灌注大鼠海马Fas蛋白的表达。结果：经补充后90只动物进入结果分析。假手术组大鼠海马未见Fas阳性细胞表达，24h平均吸光度值为0．1910&;#177;0．0142；缺血再灌注组于再灌注6h后在海马区可见Fas阳性细胞，随着再灌注时间的延长，大鼠脑皮质及海马Fas表达进一步增加，于再灌注24h时达高峰，平均吸光度值为0．3607&;#177;0．0388，以后开始逐渐下降；降钙素基因相关肽组：各相应时间点大鼠脑皮质及海马区Fas阳性细胞平均吸光度值明显低于缺血再灌注组，其再灌注24h平均吸光度值为0．3030&;#177;0．0011。结论：经颈动脉直接注入外源性降钙素基因相关肽可下调缺血神经元Fas蛋白的表达，对缺血神经元有保护作用。经颈动脉直接注药，保持了脑组织较高的药物浓度，且减少了药物通过静脉、腹腔内给药经体循环而造成的损失。     

谷氨酸受体拮抗剂MK801对肢体缺血再灌注致脑损伤大鼠脑组织中一氧化氮的影响

目的：观察肢体缺血再灌注所致脑损伤大鼠脑组织中一氧化氮的变化，分析一氧化氮在损伤中的作用及MK801对其的影响。 方法：实验于2003—09／2004-12在华北煤炭医学院解剖教研室和实验中心完成。（1）40只Wistar大鼠随机分成5组，每组8只：对照组、再灌4h组（缺血4h再灌4h）、再灌12h组（缺血4h再灌12h）、再灌24h组（缺血4h再灌24h）。MK801干预组（缺血4h再灌24h＋MK801）。②复制大鼠肢体缺血再灌损伤模型，MK801干预组在再灌注前5min立刻皮下注射MK801（0．5ms／ks）。③分别测定各组大鼠脑组织中一氧化氮、丙二醛含量、免疫组化观察各组脑组织诱导型一氧化氮合酶表达变化、并用Western—blot检测诱导型一氧化氮合酶蛋白表达。 结果：40只大鼠均进入结果分析。①MK801干预组与再灌24h组比较，丙二醛含量降低了45．8％，一氧化氮含量降低了12．8％。②免疫组化结果显示随再灌时间的延长，大鼠脑组织诱导型一氧化氮合酶表达呈逐渐上升趋势，再灌24h达高峰。阳性信号主要分布海马区，中脑红核区等部位的神经元细胞，对照组仅见少量表达，而MK801干预后诱导型一氧化氮合酶表达明显降低，同时减轻脑组织水肿及神经元受损。与Western-blot检测诱导型一氧化氮合酶蛋白表达结果一致。 结论：MK801减少脑组织一氧化氮、丙二醛含量，降低诱导型一氧化氮合酶表达，说明MK801可减轻肢体缺血再灌注所致脑损伤，可能与一氧化氮含量及诱导型一氧化氮合酶表达在肢体缺血再灌注所致脑损伤中降低有关。     

丹参酮ⅡA对鼠脑缺血再灌注损伤一氧化氮及一氧化氮合酶的影响

目的 探讨丹参酮ⅡA(Tan ⅡA)对脑缺血再灌注损伤大鼠脑组织及血清中一氧化氮(NO)含量、一氧化氮合酶(NOS)及诱导型一氧化氮合酶(iNOS)活性的影响.方法 40只Wistar大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组、Tan Ⅱ A低剂量治疗组和TanⅡA高剂量治疗组,线栓法建立局灶性脑缺血再灌注模型.Tan Ⅱ A高、低剂量治疗组于术前连续灌胃给予高、低剂量Tan Ⅱ A 3 d,每天1次.各组于脑缺血90 min再灌注24 h进行HE染色观察病理形态学变化,检测脑组织和血清中NO含量和NOS、iNOS活性.结果 Tan Ⅱ A高、低剂量治疗组脑组织缺血损伤病理学改变轻于缺血再灌注组,Tan ⅡA高剂量治疗组缺血改变轻于低剂量治疗组.与假手术组比较,缺血再灌注组脑组织和血清中NO含量和NOS、iNOS活性明显升高;与缺血再灌注组比较,Tan Ⅱ A高、低剂量治疗组脑组织和血清中NO含量和NOS、iNOS活性均降低,高、低剂量组之间有显著性差异(P《0.05).结论 Tan Ⅱ A可减轻神经元损伤程度,对缺血再灌注脑损伤具有保护作用,其机制可能与可降低NOS、iNOS活性,减少NO含量有关.     

大鼠脑组织缺血再灌注后促红细胞生成素对神经元的保护

目的:观察促红细胞生成素对缺血再灌注大鼠脑组织海马CA1区神经元数量、凋亡细胞数量变化、脑组织匀浆一氧化氮含量、丙二醛含量及超氧化物歧化酶活性改变的影响。方法:实验于2003-03/2004-12在解放军第三军医大学附属新桥医院中心实验室完成。选择健康Wistar大鼠66只,随机分为正常对照组6只,缺血再灌注生理盐水组30只(生理盐水对照组),缺血再灌注促红细胞生成素组30只(促红细胞生成素治疗组)。除正常对照组线栓法制备大鼠大脑中动脉阻断局灶性脑缺血模型,缺血2h后再灌注。促红细胞生成素组于再灌注开始时经腹腔按2000U/kg注入生理盐水稀释的重组人红细胞生成素(200U/mL),生理盐水对照组经腹腔注入等量的生理盐水。再灌注后观察时相点为2,6,12,24,48h,每个时间点6只。应用苏木精-伊红染色观察脑海马CA1区细胞数量情况,应用末端脱氧核苷酸转移酶缺口标记法检测海马CA1区神经元凋亡情况,应用硝酸还原酶法测定脑组织一氧化氮含量,羟胺法测定脑组织超氧化物歧化酶活性,硫代巴比妥酸法测定脑组织中丙二醛含量。结果:66只大鼠全部进入结果分析。①脑海马CA1区细胞计数:促红细胞生成素治疗组再灌注后12,24,48h比生理盐水对照组细胞数明显增加犤(286.7±33.8),(268.6±44.5)个/视野;(271.9±30.4),(240.8±22.5)     

兔脑缺血再灌注后NSE和S-100的表达及其血清水平的变化

目的：探讨兔大脑中动脉缺血再灌注（MCAO／R）后脑组织神经元特异性烯醇化酶（NSE）和S-100蛋白的表达及其血清含量的变化。方法：将制作成功的兔MCAO／R模型58只，随机分为永久性缺血组30只和缺血再灌注组28只；另取10只动物行假手术分别作为缺血组（5只）及再灌注组（5只）的对照组。免疫组化法检测脑缺血再灌注不同时间脑组织NSE和S-100蛋白的表达，ELISA法检测血清NSE和S-100的含量。结果：假手术组脑组织NSE和S-100表达微弱，血清含量较低。永久性脑缺血3h和缺血再灌注2h后，脑组织NSE和S-100表达同步升高和降低．变化趋势基本一致，但NSE和S-100表达在缺血再灌注47h组较永久性缺血48h组再次明显升高。血清NSE和S-100水平直到缺血5h和再灌注5h开始同步升高，较脑组织NES和S-100表达时间延迟3h。结论：神经细胞和胶质细胞对缺血再灌注损伤非常敏感，再灌注可加重脑组织的损伤，破坏血-脑屏障，NSE和S-100从脑脊液循环进入了血液循环．血清NSE和S-100的水平可作为评价脑损伤程度和转归的早期指标。     

一氧化氮参与脑缺血耐受过程中Ⅱ组代谢型谷氨酸受体的作用

目的:探讨一氧化氮在Ⅱ组代谢型谷氨酸受体(metabotropicglutamatereceptors,mGluRs)参与海马脑缺血预处理cerebralischemicprecondi-(tioning,CIP)保护机制中的作用,从整体水平探讨mGluRs对一氧化氮参与脑缺血耐受的影响。方法:实验于2003-03/04在河北医科大学病理生理学研究室进行。51只永久凝闭椎动脉的SD大鼠随机分为假手术组、CIP组、MTPG+CIP组、损伤性缺血组、MTPG+CIP+损伤性缺血组5组。后4组大鼠均在末次缺血再灌后即刻,6,24,72h取材,观察脑室应用Ⅱ组mGluRs阻断剂α-甲基-(4-四唑基-苯)甘氨酸(MTPG)对CIP后一氧化氮合酶(nitricoxidesynthase,NOS)活性和一氧化氮生成的影响。结果:NOS的活性于3min的CIP后再灌注6h时开始升高,为(155.0±33.5)nkat/g,24h达高峰,为(202.0±37.2)nkat/g,72h降至假手术组水平,为(123.8±27.5)nkat/g。应用MTPG后可见,NOS的活性受到明显抑制,较单纯CIP组明显减低(P<0.05);NOS的活性于8min的全脑缺血后再灌注6h开始升高,24h达高峰,72h降至起始水平,明显高于CIP组相应时点。MTPG+CIP+损伤性缺血组中NOS的活性较MTPG+CIP组明显升高,与单纯8min的损伤性缺血组比较无明显差别。结论:MTPG能阻断CIP引起的NOS的表达增加,同时又能阻断CIP抗后续损伤性缺血的作用,提示一氧化氮     

脑缺血—再灌注后BDNF和bFGF表达与神经元凋亡的关系及脑脉康的干预作用

目的:观察脑缺血-再灌注损伤后脑源性神经营养因子(BDNF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)蛋白表达与神经元凋亡的关系,探讨脑脉康的干预作用及机制.方法:建立大鼠脑缺血-再灌注损伤模型,应用脑脉康进行干预.采用免疫组化方法和凋亡原位末端标记技术(TUNEL),观察脑缺血3 h及再灌注7、24、96和168 h的BDNF、bFGF蛋白分布、表达的动态变化与凋亡细胞分布与时相关系以及脑脉康的干预作用.结果:模型组大鼠缺血3 h、再灌注7 h半暗区皮质及新纹状体区BDNF、bFGF表达即明显升高,再灌注24 h达到高峰;缺血侧海马CA1～CA3区及丘脑则于再灌注96 h达到高峰.缺血侧半暗区神经元凋亡于24～96 h达到高峰;海马CA1～CA3区及丘脑、纹状体区于再灌注168 h仍有相当数量的凋亡细胞.与对照组比较,中药组于再灌注24～168 h BDNF、bFGF表达显著升高(P<0.05或P<0.01),凋亡细胞数则明显减少(P<0.05或P<0.01).结论:脑缺血-再灌注损伤后BDNF、bFGF的表达升高,在一定程度上可抑制神经元凋亡,促进神经功能状态的恢复,对脑缺血损伤有重要的保护作用.脑脉康可能通过促进脑缺血-再灌注损伤后BDNF、bFGF表达,激活内源性神经保护机制,发挥其抗凋亡作用.     

大鼠肢体缺血再灌注后海马N-甲基-D-天冬氨酸受体2B亚单位表达的变化

目的:观察肢体缺血再灌注后海马N-甲基-D-天冬氨酸受体2B亚单位表达的变化。方法:实验于2005-04在河北医科大学解剖系中心实验室完成。选用10～12周龄健康雄性SD大鼠66只,随机数字表法分为3组:正常组(n=6)、假手术模型组、缺血-再灌注组,后2组又分为6,12,24,48及72h5个时间点,每个时间点6只。制备大鼠肢体缺血-再灌注模型,夹闭双侧股动脉根部4h,去夹再分别开放6,12,24,48,72h,假手术模型组同样手术处理,但不夹闭股动脉,不环扎橡皮筋。将正常组、不同时间点(6,12,24,48及72h)的缺血-再灌注组以及假手术模型组大鼠,常规灌注取材及制备石蜡切片,免疫组织化学染色并利用图像分析系统分析。结果:在实验过程中,实验动物无脱失值,全部进入结果分析。①肢体缺血-再灌注6,12,24,48,72h后,N-甲基-D-天冬氨酸受体2B亚单位蛋白在海马CA1区锥体层神经元表达灰度值分别为(14.64±2.71),(18.90±1.40),(24.71±2.89),(22.10±2.62)和(21.62±1.98),与正常组和假手术模型组灰度值比较,缺血-再灌注6h未见显著变化,再灌注12,24,48,72h的表达都有显著升高,差异均有显著性意义(P<0.01/0.05)。其中再灌注24h前后达到峰值,灰度值是正常组的172%。②肢体缺血-再灌注6,12,24,48,72h后,N-甲基-D-天冬氨酸受体2B亚单位蛋白在海马CA3区锥体层神经元表达灰度值分别为(10.47±2.13),(14.26±1.54),(26.32±2.83),(16.18±2.43)和(15.60±2.70),与正常组和假手术模型组灰度值比较,缺血-再灌注6h组未见显著变化,再灌注12,24,48,72h的表达都有显著升高,差异均有显著性意义(P<0.01/0.05);其中再灌注24h前后达到峰值,灰度值是正常组的261%。③假手术模型组与正常组比较,N-甲基-D-天冬氨酸受体2B亚单位蛋白在海马CA1、CA3区锥体层神经元表达灰度值未见显著性变化。结论:N-甲基-D-天冬氨酸1/2B型受体介入了肢体缺血-再灌注致海马损伤的病理过程。     

大鼠肢体缺血再灌注后海马N-甲基-D-天冬氨酸受体2B亚单位表达的变化

目的：观察肢体缺血再灌注后海马N-甲基-D-天冬氨酸受体2B亚单位表达的变化.方法：实验于2005-04在河北医科大学解剖系中心实验室完成.选用10～12周龄健康雄性SD大鼠66只,随机数字表法分为3组：正常组（n=6）、假手术模型组、缺血-再灌注组,后2组又分为6,12,24,48及72 h 5个时间点,每个时间点6只.制备大鼠肢体缺血-再灌注模型,夹闭双侧股动脉根部4 h,去夹再分别开放6,12,24,48,72 h,假手术模型组同样手术处理,但不夹闭股动脉,不环扎橡皮筋.将正常组、不同时间点（6,12,24,48及72 h）的缺血-再灌注组以及假手术模型组大鼠,常规灌注取材及制备石蜡切片,免疫组织化学染色并利用图像分析系统分析.结果：在实验过程中,实验动物无脱失值,全部进入结果分析.①肢体缺血-再灌注6,12,24,48,72 h后,N-甲基-D-天冬氨酸受体2B亚单位蛋白在海马CA1区锥体层神经元表达灰度值分别为（14.64&;#177;2.71）,（18.90&;#177;1.40）,（24.71&;#177;2.89）,（22.10&;#177;2.62）和（21.62&;#177;1.98）,与正常组和假手术模型组灰度值比较,缺血-再灌注6 h未见显著变化,再灌注12,24,48,72 h的表达都有显著升高,差异均有显著性意义（P＜0.01/0.05）.其中再灌注24 h前后达到峰值,灰度值是正常组的172%.②肢体缺血-再灌注6,12,24,48,72 h后,N-甲基-D-天冬氨酸受体2B亚单位蛋白在海马CA3区锥体层神经元表达灰度值分别为（10.47&;#177;2.13）,（14.26&;#177;1.54）,（26.32&;#177;2.83）,（16.18&;#177;2.43）和（15.60&;#177;2.70）,与正常组和假手术模型组灰度值比较,缺血-再灌注6 h组未见显著变化,再灌注12,24,48,72 h的表达都有显著升高,差异均有显著性意义（P＜0.01/0.05）;其中再灌注24 h前后达到峰值,灰度值是正常组的261%.③假手术模型组与正常组比较,N-甲基-D-天冬氨酸受体2B亚单位蛋白在海马CA1、CA3区锥体层神经元表达灰度值未见显著性变化.结论：N-甲基-D-天冬氨酸1/2B型受体介入了肢体缺血-再灌注致海马损伤的病理过程.     

髓鞘相关生长抑制因子Nogo-A及胰岛素样神经生长因子受体在局灶性脑缺血再灌注损伤后大鼠脑组织的表达特征

目的:观察髓鞘相关生长抑制因子Nogo-A及胰岛素样神经生长因子受体在脑缺血再灌注损伤大鼠脑组织区域的表达特点。方法:实验于2005-08/2006-04在青岛大学医学院附属医院脑血管病研究所进行。将80只成年健康雄性Wistar大鼠,采用双盲法随机分为正常对照组8只、假手术组8只、缺血再灌注组64只,缺血再灌注组分为2h、6h、12h、24h、48h、3d、7d、14d8个时间点,每个时间点8只,其中4只用于Nogo-A检测,另外4只用于胰岛素样神经生长因子受体的检测。应用线栓法制备大鼠大脑中动脉缺血再灌注动物模型,假手术组不插尼龙线,正常对照组不做任何处理。采用免疫组织化学方法检测脑组织Nogo-A与胰岛素样神经生长因子受体在神经细胞中的表达。结果:80只大鼠均进入结果分析。①Nogo-A蛋白表达:正常对照组及假手术组皮质、海马及纹状体区凋亡细胞呈基础表达。缺血再灌注6～12h皮质区及纹状体区Nogo-A表达达高峰,海马区表达明显增加。缺血再灌注24h均开始下降。缺血再灌注48h～3d皮质区及纹状体区均二次达高峰,海马区表达恒定。缺血再灌注7～14d均降至基础水平。缺血再灌注各组Nogo-A蛋白表达均高于正常对照组及假手术组(P<0.05)。②胰岛素样神经生长因子受体蛋白表达:正常对照组及假手术组在皮质、海马及纹状体区阳性细胞呈基础表达。缺血再灌注24h达高峰,48h恒定表达,3～14d仍维持高值表达。缺血再灌注各组胰岛素样神经生长因子受体蛋白表达均高于正常对照组及假手术组(P<0.05)。结论:脑缺血再灌注损伤后,大鼠脑海马、皮质、纹状体等区域Nogo-A与胰岛素样神经生长因子受体表达均增加。胰岛素样生长因子受体表达增加与损伤程度呈正相关,脑轻度损伤时胰岛素样生长因子受体表达仅限于大脑皮质区,重度损伤时弥漫整个海马及纹状体区。     

γ-羟基丁酸对脑缺血再灌注后海马区γ-氨基丁酸及其A型受体α1亚型的影响

目的：观察γ-羟基丁酸对局部脑缺血再灌注大鼠海马CA1区γ-氨基丁酸及氨基丁酸A型受体α1亚型的影响，探讨其脑保护作用机制。 方法：实验于2004-05～01／10-30在哈尔滨医科大学形态学实验中心完成。选用健康成年雄性Wistar大鼠60只，随机分为假手术组（n=10）、模型组（n=25）、治疗组（n=25），模型组和治疗组又各分5个时间点：即缺血1h再灌注1．5h，3h，6h，12h，24h，每个时间点5只。采用大脑中动脉拴线法，建立大鼠局部脑缺血再灌注模型，假手术组仅暴露颈内动脉，不阻断血流，24h后断头取脑。治疗组于再灌注前10min给予γ-羟基丁酸钠（GHBA）3.5mL／kg腹腔注射。模型组和治疗组分别于缺血1h再灌注1．5h，3h，6h，12h，24h，各取5只大鼠处死，断头取脑，置于40g／L多聚甲醛中固定，常规石蜡包埋，行5μm厚连续冠状切，用于苏木精-伊红染色及免疫组化检测。比较分析各组在不同时让点的γ-氨基丁酸能神经元及氨基丁酸A受体α-亚型阳性细胞数。结果：纳入动物共60只，手术过程及术后因麻醉过深、失血过多等原因，模型组死亡2只，治疗组死亡3只，进入结果分析11组共55只。①苏木精-伊红染色光镜观察结果：假手术组形态学改变不明显。模型组缺血区淡染，细胞数明显减少，但结构尚存，缺血周边细胞体积缩小，胞膜皱缩，核固缩深染，细胞间隙增大，海马区变化尤为显著。治疗组较模型组细胞数增多，细胞损害较轻。②海马CA1区γ-氨基丁酸能神经元免疫组化阳性细胞数：与假手术组比较，模型组与治疗组中缺血1h再灌注1．5h，3h，6h，12h，24h海马CA1区中氨基丁酸阳性神经元数量明显减少（P〈0．05），治疗组缺血1h再灌注6h及以后各组均显著高于相应模型组（P〈0．05）。③海马CA1区氨基丁酸A受体α1亚型免疫组化阳性细胞数：与假手术组比较，模型组、治疗组在中缺血1h再灌注12h及以后各组海马CA1区氨基丁酸A受体α1亚型免疫组化阳性细胞数明显减少（P〈0．05）；治疗组再灌注12h及以后各组均高于相应模型组（P〈0．05）。 结论：γ-羟基丁酸可能是通过增加缺血再灌注后γ-氨基丁酸阳性神经元及氨基丁酸A受体α1亚型受体的表达来发挥脑保护作用。     

黄芩素甙对脑缺血沙土鼠海马CA1区微管运动蛋白Kinesin活性的影响

背景；脑缺血-再灌注损伤与Kinesin活性密切相关，研究认为微管运动蛋白Kinesin活性下降是脑缺血后神经细胞死亡的早期标志。黄芩素甙可以防止脑缺血-再灌注诱发的蛋白激酶C的激活、减轻钙超载，且可减小缺血梗死灶的体积，从而减轻脑缺血-再灌注损伤。但是黄芩素甙脑保护作用是否与Kinesin活性有关，目前很少报道。 目的：观察黄芩素甙对脑缺血-再灌注期间海马锥体细胞微管运动蛋白Kinesin活性的变化。 设计：随机对照实验。 单位：济宁医学院附属医院麻醉科及徐州医学院附属医院江苏省麻醉学重点实验室。 材料：实验于1999-02／08在江苏省麻醉学重点实验室完成。选用雄性沙土鼠35只。 方法：将沙土鼠随机分成假手术组（5只）、缺血再灌注对照组（15只）和黄芩素甙组（15只）3组，根据再灌注时间将缺血再灌注对照组和黄芩索甙组分为3个亚组，即再灌注Ⅰ组（再灌注6h）、再灌注Ⅱ组（再灌注48h）和再灌注Ⅲ组（再灌注96h）。每亚组5只动物。缺血再灌注对照组和黄芩素甙组制备沙土鼠前脑缺血-再灌注损伤模型，脑缺血时间为10min。假手术组仅游离双侧颈总动脉但不予阻断。黄芩素甙组于缺血前15min给予灯盏花素（其有效成分为黄芩素甙）45mg／kg腹腔注射，假手术组和缺血再灌注对照组则给予等量的生理盐水灌胃。应用免疫组织化学染色方法结合计算机图象分析技术测定海马微管运动蛋白Kinesin的活性。主要观察指标：各组动物Kinesin的活性及其变化。结果：纳入实验的动物为35只，均进入结果分析，无实验动物脱失。在海马CA1区，缺血再灌注对照组缺血-再灌注6，48和96h时微管运动蛋白Kinesin活性分别降至假手术组的58％，38％和12％（P均〈0．01），而黄芩素甙组在再灌注6，48和96h后；微管运动蛋白Kinesin活性分别为假手术组的81％，61％和21％，均明显高于缺血再灌注对照组（P均〈0．05）。在海马CA2，CA3和CA4区，微管运动蛋白Kinesin的活性无明显变化。 结论：黄芩素甙可通过抑制脑缺血-再灌注期间海马CA1区微管运动蛋白Kinesin活性的下降达到脑保护作用。     

谷氨酸受体拮抗剂MK801对肢体缺血再灌注致脑损伤大鼠脑组织中一氧化氮的影响

目的:观察肢体缺血再灌注所致脑损伤大鼠脑组织中一氧化氮的变化,分析一氧化氮在损伤中的作用及MK801对其的影响。方法:实验于2003-09/2004-12在华北煤炭医学院解剖教研室和实验中心完成。①40只Wistar大鼠随机分成5组,每组8只:对照组、再灌4h组(缺血4h再灌4h)、再灌12h组(缺血4h再灌12h)、再灌24h组(缺血4h再灌24h),MK801干预组(缺血4h再灌24h MK801)。②复制大鼠肢体缺血再灌损伤模型,MK801干预组在再灌注前5min立刻皮下注射MK801(0.5mg/kg)。③分别测定各组大鼠脑组织中一氧化氮、丙二醛含量、免疫组化观察各组脑组织诱导型一氧化氮合酶表达变化、并用Western-blot检测诱导型一氧化氮合酶蛋白表达。结果:40只大鼠均进入结果分析。①MK801干预组与再灌24h组比较,丙二醛含量降低了45.8%,一氧化氮含量降低了12.8%。②免疫组化结果显示随再灌时间的延长,大鼠脑组织诱导型一氧化氮合酶表达呈逐渐上升趋势,再灌24h达高峰。阳性信号主要分布海马区,中脑红核区等部位的神经元细胞,对照组仅见少量表达,而MK801干预后诱导型一氧化氮合酶表达明显降低,同时减轻脑组织水肿及神经元受损。与Western-blot检测诱导型一氧化氮合酶蛋白表达结果一致。结论:MK801减少脑组织一氧化氮、丙二醛含量,降低诱导型一氧化氮合酶表达,说明MK801可减轻肢体缺血再灌注所致脑损伤,可能与一氧化氮含量及诱导型一氧化氮合酶表达在肢体缺血再灌注所致脑损伤中降低有关。     

腺病毒表达谷氨酸受体羧基肽段对大鼠脑缺血再灌注后Bcl-2磷酸化及与Bax结合的影响

目的:研究大鼠脑缺血再灌注后腺病毒表达谷氨酸受体羧基肽段对海马CA1区神经元的保护和Bcl-2磷酸化及与Bax结合的影响.方法:将SD大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注对照组、表达病毒组、非表达病毒组及溶剂组.采用焦油紫染色、免疫沉淀和免疫印迹检测大鼠缺血再灌注后海马神经元损伤、脑组织Bcl-2的磷酸化及与Bax结合情况.结果:表达病毒组与缺血再灌注对照组、非表达病毒组及溶剂组相比海马CA1区神经元损伤明显减轻,脑组织中Bcl-2磷酸化明显降低,Bcl-2/Bax的结合明显升高(P<0.05).结论:腺病毒表达谷氨酸受体羧基肽段可能通过降低脑组织中Bcl-2的磷酸化从而增加Bcl-2/Bax的结合,进而对海马CA1区神经元起保护作用.     

经颈动脉直接注入外源性降钙素基因相关肽对局灶性脑缺血再灌注大鼠海马区Fas蛋白表达的影响

目的:探讨经颈动脉直接注入外源性降钙素基因相关肽对局灶性脑缺血再灌注大鼠海马细胞表面死亡受体Fas蛋白表达的影响。方法:实验于2004-01/12在中国医科大学基础医学院神经生物实验室进行,取雄性SD大鼠90只,随机分为3组,每组30只:①假手术组:分离血管,不插线栓。②缺血再灌注组:用线栓法制备大鼠大脑中动脉阻塞模型,在脑缺血2h后拔出栓线再灌注,再灌注即刻经颈动脉注入生理盐水1mL。③降钙素基因相关肽组:同前造模,再灌注即刻经颈动脉注入降钙素基因相关肽0.5mL。后两组动物再灌注后6,12,24,48,72h麻醉后断头处死,假手术组同时处死,每个时间点各6只。应用免疫组化和显微图像分析方法检测局灶性脑缺血再灌注大鼠海马Fas蛋白的表达。结果:经补充后90只动物进入结果分析。假手术组大鼠海马未见Fas阳性细胞表达,24h平均吸光度值为0.1910±0.0142;缺血再灌注组于再灌注6h后在海马区可见Fas阳性细胞,随着再灌注时间的延长,大鼠脑皮质及海马Fas表达进一步增加,于再灌注24h时达高峰,平均吸光度值为0.3607±0.0388,以后开始逐渐下降;降钙素基因相关肽组:各相应时间点大鼠脑皮质及海马区Fas阳性细胞平均吸光度值明显低于缺血再灌注组,其再灌注24h平均吸光度值为0.3030±0.0011。结论:经颈动脉直接注入外源性降钙素基因相关肽可下调缺血神经元Fas蛋白的表达,对缺血神经元有保护作用。经颈动脉直接注药,保持了脑组织较高的药物浓度,且减少了药物通过静脉、腹腔内给药经体循环而造成的损失。     

纳洛酮对大鼠脑复苏后细胞凋亡基因调控机制的实验研究

目的 观察盐酸纳洛酮对大鼠脑复苏后海马CA1区细胞凋亡及其相关调控基因蛋白表达的影响，探讨盐酸纳洛酮脑保护的分子生物学机制。方法 将大鼠随机分成假手术组、单纯脑缺血再灌注组和脑复苏盐酸纳洛酮治疗组，制作大鼠脑缺血再灌注模型，分别用TUNEL和免疫组化法检测各组动物脑复苏后海马CA1区细胞凋亡率和Bcl-2、Bax、p53、Fas的蛋白表达。结果 治疗组大鼠脑组织中凋亡细胞数低于缺血再灌注组，Bcl-2的表达明显高于缺血再灌注组，Bax、p53、Fas的表达低于对照组（P〈0．05）。结论 纳洛酮可能通过促进Bcl-2的表达和抑制Bax、p53、Fas的表达来减少脑复苏后神经细胞的凋亡而发挥其脑保护的作用。