金银花和山银花的鉴别与归属研究

目的 利用多种方法对金银花和山银花进行鉴别,其中山银花以灰毡毛忍冬为基源,寻找差异性状,以及对2种药材的归属问题进行探讨。方法 采用生物学性状比较、扫描电镜观察花表皮结构、标识成分（绿原酸、木犀草苷、灰毡毛忍冬皂苷乙、川续断皂苷乙）差异对金银花（忍冬）和山银花（灰毡毛忍冬）进行鉴别,结合历史使用情况及市场现状对2种药材基于《中国药典》收载的归属进行分析讨论。结果 忍冬花基部含有大形的叶状苞片,花外表皮具有较多的头部倒圆锥形腺毛,未检测到灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙成分;而灰毡毛忍冬花基部无明显苞片,花外表面几乎未发现腺毛,含有灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙特征成分。结论 花基部叶状苞片、花外表皮腺毛、灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙2个特征成分可以作为区分忍冬和灰毡毛忍冬的鉴别依据。     

口炎清颗粒质量标准的改进

目的改进口炎清颗粒(天冬、玄参、山银花等)的质量标准。方法 TLC法对天冬、玄参、山银花和甘草进行定性鉴别。HPLC法定量测定山银花中绿原酸、灰毡毛忍冬皂苷、川续断皂苷乙含有量。结果 TLC斑点清晰,专属性强。绿原酸、灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙均呈良好的线性关系(r0.999 9),平均加样回收率(n=6)95%~102%。结论增加对山银花指标性成分灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙含有量的测定,可完善口炎清颗粒的质量标准。     

UPLC-PDA-ELSD测定贵州山银花中绿原酸、灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙的含量

目的:建立超高效液相色谱-紫外检测器-蒸发光检测器联用(UPLC-PDA-ELSD)同时测定山银花中绿原酸、灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙含量的方法,并考察贵州地区山银花的质量。方法:采用ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱(2.1mm×100 mm,1.7μm),流动相乙腈(A)-0.4%乙酸水(B),梯度洗脱(0~2 min,7%A;2~2.3 min,7%~28%A;2.3~10 min,28%A;10~10.5 min,28%~7%A),梯度流速(0~2 min,0.35 m L·min-1;2~2.3 min,0.35~0.25 m L·min-1;2.3~2.6 min,0.25~0.15 m L·min-1;2.6~2.8 min,0.15~0.1 m L·min-1;2.8~4 min,0.1~0.2 m L·min-1;4~4.3 min,0.2~0.3 m L·min-1;4.3~4.5 min,0.3~0.35 m L·min-1;4.5~10.5 min,0.35 m L·min-1),PDA(紫外检测器)检测绿原酸(330 nm);ELSD(蒸发光散射检测器)检测灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙,漂移管温度60℃,喷雾器温度48℃,气体压力20 psi,色谱柱温度50℃。结果:绿原酸、灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙3种成分分别在0.304 5~1.522 5(R2=0.999 4),0.449~1.436 8(R2=0.999 3),0.044 6~0.223μg(R2=0.999 4)呈良好的线性关系。结论:该方法能方便准确的测定贵州山银花中绿原酸、灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙的含量,并能有效缩短测量时间和节省试剂。此方法适用于测定考察贵州地区山银花的质量。     

HPLC含量测定和DNA分子标记技术对不同产地金银花的鉴定

目的:通过指标成分含量测定及DNA分子标记技术对不同产地金银花样品进行鉴定,探讨DNA分子鉴定技术在中草药鉴别领域的应用前景。方法:以绿原酸、木犀草苷、灰毡毛忍冬皂苷乙为指标成分,利用HPLC测定指标成分含量。提取金银花、山银花对照药材及河北和山东产地金银花样品DNA,检测DNA浓度和纯度,采用基于聚合酶链式反应(PCR)方法的DNA分子标记技术鉴别样品。结果:河北和山东产地金银花中绿原酸质量分数3.1%~3.3%,河北、山东产地金银花中木犀草苷质量分数分别为0.049%~0.050%,0.069%~0.078%,2个产地样品中均未检出灰毡毛忍冬皂苷乙成分。采用基于PCR方法鉴定出河北和山东产地各3批样品均为金银花。结论:DNA分子鉴定技术作为含量测定常规方法的补充,具有准确可靠、重复性高等优点,可用于金银花药材的鉴定。     

蚜虫危害对灰毡毛忍冬药材产量和质量的影响

目的:探讨蚜虫危害对灰毡毛忍冬药材产量和质量的影响。方法:测定同一植株上蚜虫不同危害等级的花枝鲜花和干花的产量,采用HPLC-ELSD法,分别测定蚜虫不同危害等级的花蕾中绿原酸、咖啡酸、木犀草苷、3,5-二咖啡酰奎宁酸、川续断皂苷乙和灰毡毛忍冬皂苷乙6种有效成分的含量。结果:蚜虫危害显著影响灰毡毛忍冬的产量,极显著影响木犀草苷、灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙的含量(P0.01),显著影响绿原酸的含量(P0.05),对咖啡酸和3,5-二咖啡酰奎宁酸含量无显著影响。结论:灰毡毛忍冬GAP生产中应规范蚜虫的防治。     

基于特征图谱的金银花与山银花(灰毡毛忍冬)质量表征比较研究

目的阐明金银花与山银花药学质量表征的共性与特性。方法采用HPLC-DAD法,Waters XBridge C18分析柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈-0.4%磷酸水溶液为流动相梯度洗脱,流速1.0 mL/min,检测波长为211 nm,柱温30℃,建立金银花和山银花特征图谱质量表征方法;基于特征图谱中的特征峰的所属化学类型及代表性成分的峰面积和含量对15批金银花和10批山银花饮片进行药学质量表征,并对二者的药学质量特点进行比较分析。结果(1)建立的金银花和山银花的特征图谱及质量表征方法表征了二者质量表征特征值:特征峰、相对保留时间、相对峰面积、代表性成分含量及其相对含量。(2)金银花和山银花均具有特征峰30个,其药学架构涵盖4种化学类型,其中金银花/山银花各类型特征峰数目分别为:环烯醚萜类16/6,酚酸类8/11,黄酮类4/5,三萜皂苷类2/8个。(3)二者具有共有特征峰15个,其中环烯醚萜类6个、酚酸类6个、黄酮类2个、三萜皂苷类1个。(4)在金银花/山银花特征峰中指认了11个代表性成分:环烯醚萜类3/2、酚酸类6/6、黄酮类1/1、三萜皂苷类1/2;其代表性成分含量(mg/g)分别为:断氧化马钱子苷(21.756~29.826)/(6.936~14.643)、獐芽菜苦苷(12.204~30.139)/(26.109~31.608)、当药苷(13.806~23.27/(-),绿原酸(24.686~36.595)/(36.796~42.979)、异绿原酸A(14.010~20.452)/(50.544~58.013)、异绿原酸C(2.896~4.681)/(6.986~7.960)、异绿原酸B(0.935~1.260)/(1.389~1.738)、新绿原酸(0.888~1.560)/(2.025~2.635)、隐绿原酸(0.565~0.852)/(0.947~1.122),木犀草苷(0.579~0.690)/(0.527~0.642),灰毡毛忍冬皂苷乙(14.471~20.243)/(35.487~54.576)、川续断皂苷乙(-)/(31.191~35.731)。结论建立的特征图谱质量表征方法可准确地表征金银花与山银花的药学质量,二者质量表征共性为:具有相同的药学架构及部分共有特征成分;又具有明显的特性:金银花环烯醚萜类特征峰较多,当药苷为其特有环烯醚萜类成分,断氧化马钱子苷和木犀草苷的含量高于山银花;而山银花酚酸类和三萜皂苷类特征峰较多,川续断皂苷乙为其特有三萜皂苷类成分,异绿原酸A、灰毡毛忍冬皂苷乙、绿原酸、獐芽菜苦苷、异绿原酸C、新绿原酸、异绿原酸B和隐绿原酸的含量均高于金银花。研究结果可为金银花与山银花的质量控制及合理应用提供科学依据。     

HPLC-UV-ELSD同时测定灰毡毛忍冬中9种成分的含量

目的:建立HPLC-UV-ELSD同时测定灰毡毛忍冬中9种成分(新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、木犀草苷、3,4-二咖啡酰奎宁酸、3,5-二咖啡酰奎宁酸、4,5-二咖啡酰奎宁酸、灰毡毛忍冬皂苷乙、川续断皂苷乙)的含量。方法:采用Shiseido C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以0.2%甲酸-乙腈为流动相进行梯度洗脱,体积流量为1.0m L/min,柱温为35℃,检测波长为326、350 nm。ELSD漂移管温度为100℃,载气(氮气)流速为3 L/min。结果:上述成分在考察范围内,进样量与各自峰面积之间线性关系良好(r0.9983),精密度RSD2.5%,重复性RSD3.8%,平均加样回收率在96.3%~100.7%。结论:该方法准确、快速、重复性好,可用于灰毡毛忍冬中9种成分的测定。     

UPLC-QTRAP-MS/MS法同时测定连花清瘟胶囊(颗粒)中18种成分及山银花中灰毡毛忍冬皂苷乙

目的 建立UPLC-QTRAP-MS/MS法同时测定连花清瘟胶囊(颗粒)中连翘苷、连翘酯苷A、绿原酸、3,5-O-二咖啡酰奎宁酸、4,5-O-二咖啡酰奎宁酸、木犀草苷、盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱、苦杏仁苷、(R,S)-告依春、芦荟大黄素、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚、大黄酸、红景天苷、甘草苷、甘草酸铵，以及山银花中灰毡毛忍冬皂苷乙的含量。方法 该药物40%甲醇提取液的分析采用Waters ACQUITY UPLC HSS T3色谱柱(2.1 mm×100 mm, 1.8μm);流动相(5 mmol/L乙酸铵+0.1%甲酸)-甲醇，梯度洗脱；体积流量0.3 mL/min;柱温35℃;电喷雾离子源；正负离子模式扫描；多反应监测模式。结果 19种成分在各自范围内线性关系良好(r>0.999 0),平均加样回收率89.37%～102.19%,RSD 2.03%～3.75%。各批样品均未检出灰毡毛忍冬皂苷乙。结论 该方法简便、准确、高效，可用于连花清瘟胶囊(颗粒)的质量控制及山银花的掺伪鉴别。     

小儿咳喘灵颗粒中金银花的质量分析

目的对26个厂家生产的小儿咳喘灵颗粒(麻黄、金银花、苦杏仁等)中的金银花质量进行系统的研究。方法采用薄层色谱法对样品中的金银花进行定性鉴别;采用HPLC法测定样品中金银花的绿原酸含有量;采用HPLCELSD法测定样品中灰毡毛忍冬皂苷乙的含有量。结果 26批样品中有12批检出灰毡毛忍冬皂苷乙,表明存在原料中掺有山银花的现象。结论测定小儿咳喘灵颗粒中的绿原酸和灰毡毛忍冬皂苷乙,可有助于监控其质量。     

水银花中灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙含量测定方法

目的 建立水银花中灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙的含量测定方法.方法 对高效液相色谱法(HPLC)的色谱条件进行摸索,并采用正交设计法考察供试品溶液的制备条件.结果 HPLC色谱条件为:Diamonsil C18柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),流动相为乙腈(A)-0.4%醋酸(B)梯度洗脱,流速1.0 mL/min.样品供试液制备条件为:药材破碎度过四号筛,药材称样量为0.4 g,甲醇浓度为50%,提取时间为40 min.结论 建立的HPLC含量测定方法 准确可靠,可作为水银花中灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙总量的测定方法.     

金银花与山银花体外印迹等效性的研究

目的运用超分子印迹模板作用规律对金银花和山银花体外印迹等效性进行研究,旨在为金银花和山银花两花纷争提供新的解决方法。方法以金银花药渣、山银花药渣、菊花药渣为主体分子,以金银花、山银花、双黄连(金银花)、双黄连(山银花)、银翘散(金银花)、银翘散(山银花)水提液为客体分子,3种主体分子和6种客体分子进行选择性吸附。采用HPLC法对吸附前后的客体分子水溶液指纹图谱进行测定。运用总量统计矩法计算总量一阶矩及其差值,并对差值进行t检验。结果 6种客体分子分别被金银花与山银花主体分子组、金银花与菊花主体分子组、山银花与菊花主体分子组吸附后,其总量一阶矩差值经t检验,P1=0.940.05、P2=0.020.05、P3=0.040.05。所有客体分子分别被金、山银花主体分子吸附后,其总量一阶矩差值无显著性差异。而被菊花主体分子吸附后,与被金银花和山银花主体分子吸附后相比均存在显著性差异。结论金银花和山银花之间印迹模板具有相似性,而金银花和山银花与菊花之间印迹模板存在差异。说明金银花和山银花二者存在印迹等效性,这也与临床用药相符合。     

基于指纹图谱对金银花与山银花的区分及各品种金银花质量评价

目的 建立金银花和山银花指纹图谱,对河南封丘金银花与湖南不同基原山银花进行区别比较,并对封丘不同品种金银花进行质量评价。方法 利用HPLC法构建金银花和山银花药材的指纹图谱;利用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统（2012版）”进行相似度评价、以“SIMCA13.0”软件进行主成分分析（principal component analysis,PCA）分析;通过HPLC法测定河南封丘不同品种金银花成分含量。结果 河南封丘产金银花相似度均在0.95以上,湖南各基原山银花相似度在0.97以上,金银花和山银花相似度在0.57～0.79,豫金二号与金银花及山银花药材相似度均在0.6以下,共有多成分PCA分析也能显著区分金银花和山银花。金银花各品种中北花1号酚酸类以绿原酸、异绿原酸A和异绿原酸C之和为5.1%,比其他品种高约15%;木犀草苷豫金1号含0.062%、北花1号0.064%,比四季花高约25%、比羊角花高约50%。结论 该化学指纹图谱方法能显著区分金银花和山银花,二者间的化学成分差异亦能为金银花指标性成分的选择提供参考。金银花不同栽培品种成分含量差异明显,豫金1号和北花1号药材质量较优,是具有进一步开发利用的潜在优质种质资源。     

金银花和山银花的研究现状及质量控制的关键问题

金银花和山银花在《中国药典》2015年版中的性味与归经、功能与主治、用法与用量上无差异,自《中国药典》2005年版将金银花和山银花分列,纷争不断。通过查阅国内外文献,从金银花和山银花的用药沿革、鉴别、化学成分、药理作用及质量控制等方面入手,探讨金银花和山银花的异同及质量控制的关键问题;为解决金银花和山银花的分合问题,促进中药材产业的发展奠定基础。     

金银花化学成分研究进展

金银花为忍冬科植物忍冬Lonicera japonica的干燥花蕾或初开的花,为常用中药.金银花的化学成分按结构主要包括黄酮类、环烯醚萜类、三萜及三萜皂苷类、有机酸类、挥发油等多种类型.对近20年来国内外金银花化学成分的研究进行总结,为其深入研究提供参考.     

四倍体金银花水提物抗炎作用和急性毒性实验研究

目的对四倍体金银花水提物的抗炎作用以及急性毒性进行评价。方法以二倍体金银花为对照,分别采用角叉菜胶诱导大鼠足肿胀实验、大鼠棉球肉芽肿实验对四倍体金银花水提物进行抗炎活性评价;采用Bliss法测定小鼠的半数致死量(LD50)对其进行急性毒性评价。结果四倍体金银花水提物具有明显的抗急性炎症作用,与亲本二倍体金银花之间抗炎作用差异不具有统计学意义,2个种质均不具有明显的抗亚急性炎症作用。四倍体和二倍体金银花水提物ig给药对小鼠的LD50值分别为72.12、69.92 g/kg,急性毒性差异不明显,分别相当于人体(体质量60 kg)安全用量的412和400倍。结论四倍体金银花水提物具有明显的抗急性炎症作用,在一定剂量范围内使用较为安全。     

HPLC法测定金银花中新绿原酸等8种成分的量

目的 建立测定金银花药材中新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、异绿原酸A、异绿原酸B、异绿原酸C、断氧化马钱子苷8种成分的HPLC方法。方法 采用RP-HPLC法,色谱柱为Luna 5 μm C₁₈柱（250 mm×4.6 mm,5 μm）;流动相为甲醇（A）-0.1%磷酸水（B）溶液,梯度洗脱：0～20 min,12%～30% A;20～60 min,30%～50% A,体积流量1.0 mL/min;检测波长237、324 nm,柱温30 ℃。结果 8种成分均达到基线分离,各成分均有较宽的线性范围和良好的线性关系（r＞0.999 9）;回收率在98.72%～102.50%。结论 建立的测定方法准确灵敏、重复性好,能较全面地评价金银花药材的质量。     

金银花中1个新的环烯醚萜苷类化合物

目的 研究金银花Lonicerae Flos的化学成分。方法 采用HP-20大孔吸附树脂柱色谱、ODS柱色谱、HW-40柱色谱和高效液相色谱等多种色谱分离手段进行分离纯化,利用波谱学方法鉴定化合物的结构。结果 从金银花60%乙醇提取物中分离得到了6个化合物,分别鉴定为demethylsecologanol-7-O-arabinoside（1）、8-表番木鳖酸（2）、断马钱子苷半缩醛内酯（3）、sweroside（4）、secologanoside（5）、secoxyloganin（6）。结论 化合物1为一个新的环烯醚萜苷类化合物,命名为裂环马钱子苷A。     

信息熵理论在热毒宁口服制剂中金银花与栀子提取工艺优选中的应用

目的应用信息熵理论优选热毒宁口服制剂中金银花与栀子的提取工艺。方法以绿原酸、栀子苷、木犀草苷提取率及浸膏得率为综合评价指标,选取提取时间、加水量及提取次数为影响因素,采用信息熵赋权法确定各指标的客观权重,实现对提取工艺的正交试验优选。结果最佳提取工艺为12倍量水提取3次,每次1 h。结论信息熵理论可用于热毒宁口服制剂中金银花与栀子提取工艺的优选。     

金银花HQT基因在真核植物细胞中对绿原酸生物合成的调控

目的通过构建羟基桂皮酰辅酶A羟基桂皮酰转移酶(hydroxycinnamoyl CoA quinate hydrocycinnamoyl transferase,HQT)基因真核表达载体以及建立金银花的遗传转化系统,阐明金银花HQT基因在真核生物细胞中对绿原酸量的调控机制。方法应用通路克隆系统技术构建HQT基因真核表达载体,利用根癌农杆菌介导法,构建含金银花HQT基因的工程菌,对转染成功的外植体进行愈伤诱导,进而进行半定量RT-PCR检测转基因愈伤组织中HQT基因的相对表达量以及利用HPLC检测其绿原酸的量,并对二者相关性进行分析。结果金银花愈伤组织中绿原酸的量随HQT基因表达量的升高而升高。结论金银花HQT基因在真核生物细胞内对绿原酸的生物合成具备调控作用。