再生障碍性贫血儿童TCR Vβ亚家族T细胞克隆性增殖及其与HLA—DRB1＊15的关系

【目的】探讨再生障碍性贫血（再障）儿童TCR Vβ24个亚家族T细胞克隆性及其与HLA—DRB1＊15的关系。【方法】再障儿童17例（SAA14例，MAA3例），采用RT—PCR和基因扫描分析外周血或骨髓TCR Vβ24个亚家族基因的表达和克隆性，SSP—PCR检测HLA—DR。【结果】再障儿童外周血T细胞仅表达4—22个Vβ亚家族，而正常儿童外周血T细胞几乎表达所有Vβ亚家族。12例（包括初诊SAA4例，CR4例，复发1例和MAA3例）再障儿童存在不同程度T细胞克隆性增殖，但个体间差异较大，正常外周血和骨髓均为多克隆性T细胞。5例HLA—DRB1＊15（＋）患儿中4例（80％）有寡克隆T细胞，而12例HLA—DRB1＊15（-）患儿中仅3例（25％）见寡克隆T细胞，两组比较差异具有显著意义（P〈0．05）。伴寡克隆T细胞的6例S从儿童经免疫抑制治疗后达CR；不伴寡克隆T细胞的5例SAA儿童接受免疫抑制治疗，其中CRI例，PR2例、无效1例，死亡1例。【结论】大多数再障儿童存在T细胞克隆性增殖，寡克隆T细胞多见于SAA，尤其是HLA—DRB1＊15（＋）的SAA儿童。TCR VβT细胞克隆的检测对进一步了解再障免疫功能状态、预测免疫抑制治疗效果具有一定的参考价值。     

应用RT—PCR和基因扫描分析TCR Vβ谱系的CDR3长度了解急性单核细胞白血病病人克隆性增殖T细胞

目的：了解急性单核细胞白血病（AML-M5）病人TCR Vβ亚家族T细胞的分布及其克隆性。方法：利用RT-PCR分别扩增9例M5病人外周血单个核细胞的TCR Vβ24个亚家族基因的CDR3,了解TCR Vβ谱系的表达情况。PCR 产物进一步经基因扫描分析,确定T细胞克隆性。结果：9例AML-M5病人仅存在1-10个Vβ亚家族T细胞,而正常血标本则可检测到24个Vβ亚家族。基因扫描分析显示：8例病人的某些Vβ亚家族出现这一主峰图象（寡克隆性T细胞）。Vβ2寡克隆T细胞发现于6例病人中。结论：结果提示AML-M5病人存在克隆性增殖的T细胞,主要为Vβ2亚家族,推测这可能是对白血病细胞（M5）相关抗原的特异性免疫反应并可能具有抗白血病的活性。     

AML—M5b外周血T细胞TCR Vβ亚家族表达及克隆性增殖特点

目的研究AML—M5b患者外周血T细胞TCR Vβ亚家族表达及克隆性增殖特点，并分析分选的患者T细胞经体外诱导、活化及短期培养后其TCR Vβ亚家族的利用及克隆性增殖情况。方法运用RT—PCR-基因扫描技术分析初治AML—M5b患者外周血T细胞TCR Vβ亚家族利用和克隆性增殖，免疫磁珠分选患者T淋巴细胞，体外利用自体白血病DC细胞联合CD3单抗、CD28对T细胞进行诱导、活化，并对诱导后T细胞进行TCR Vβ亚家族表达和克隆性增殖分析。结果9例患者T细胞在体外获得增殖，TCR即分析显示患者外周血T细胞均表达部分Vβ亚家族，体外诱导前后的T细胞TCR Vβ亚家族表达和克隆性增殖特点不完全相同，有部分出现新的邯亚家族表达及克隆性增殖，有部分Vβ亚家族在诱导前后始终表现为克隆性增殖，体外杀伤性分析发现诱导后的T细胞对自体白血病细胞具有一定的识别作用。结论AML—M5患者TCR Vβ亚家族T细胞的倾斜性分布和克隆性增殖，部分Vβ亚家族T细胞在诱导前后始终保持克隆性增殖状态，可能是机体针对白血病相关抗原的特异性CTL，体外诱导活化及短期培养后患者T细胞TCR Vβ亚家族表达数量增加，并出现新的克隆性增殖Vβ亚家族T细胞，提示体外诱导活化能够产生白血病患者自体的白血病特异性CTL。     

KG1a细胞体外诱导人外周血T细胞杀伤活性和TCR VβT细胞增殖的研究

【摘　要】　目的　了解急性髓系白血病KG1a细胞体外诱导人外周血T细胞的特异性细胞毒作用和T细胞受体(TCR) Vβ谱系表达和克隆性情况。方法　分别以Jurkat和Raji细胞作为阳性和阴性对照,建立TCR Vβ谱基因扫描技术,并用其检测5例健康个体T细胞克隆表型。采用混合淋巴细胞/肿瘤细胞培养方法,以照射后的KG1a细胞作为刺激原体外诱导外周血单个核细胞增殖,应用LDH释放法检测不同效靶比时诱导前后T细胞杀伤KG1a细胞的活性,同时利用基因扫描技术分析诱导后TCR Vβ亚家族的克隆性增殖特点。结果　基因扫描显示5例健康人全部TCR Vβ谱型均呈高斯(钟型)分布,各亚家族表达频率接近,但呈现不同的多态性和长度分布。KG1a细胞可以诱导出呈单克隆、寡克隆或寡克隆趋势生长的亚家族T细胞,并具有特异性识别和杀伤KG1a细胞的功能。结论　KG1a细胞在体外可诱导T细胞呈克隆性增殖,此优势增殖的克隆性T细胞具有特异性细胞毒作用,对KG1a细胞具有选择性杀伤作用。     

CML患者外周血TCR Vγ亚家族T细胞的谱系变化研究

目的 探讨慢性粒细胞白血病（CML）慢性期（CP）和缓解期（CR）病人外周血T细胞中T细胞受体（TCR）Vγ基因谱系的分布和克隆性情况。方法 利用RT-PCR检测8例CML-CP和8例CML-CR病人外周血T细胞3个TCR Vγ亚家族的表达,了解TCR Vγ亚家族T细胞的分布和利用情况;阳性产物进一步经荧光素标记和基因扫描分析CDR3长度,从而了解其克隆性。10例健康成人外周血作为对照。 结果 8例CP期和8例CR期的CML病人外周血T细胞分别平均表达（1.88±0.64,2.13±0.83）个亚家族,两者比较尚无统计学差异,但均明显低于健康对照组（P=0.000,P=0.036）。CP和CR期病人TCR VγⅢ的表达率明显低于健康对照组（2.9±0.32）（P=0.013,P=0.043）,基因扫描显示CML-CP 和CML-CR出现克隆模式的改变主要集中在TCR VγⅡ亚家族。结论 CP期病人外周血 TCR Vγ基因谱系出现限制性利用和克隆性增殖T细胞,主要可能与病人处于细胞免疫抑制状态有关,即使CR期病人其T细胞仍处于一定程度的免疫抑制状态。     

系统性红斑狼疮自体外周血干细胞移植T细胞克隆基因谱型变化

目的 通过系统性红斑狼疮(SLE)自体外周血干细胞移植(APBSCT)前后T细胞受体B(TCRβ)CDR3基因表达谱型的变化,探讨SLE发病机理以及患者干细胞移植后T淋巴细胞克隆的免疫重建特征。方法 应用RT-PCR扩增APBSCT的SLE患者外周血的TCRβ可变区(V)25个家族的基因序列,在长泳道测序胶上电泳,形成TCRβCDR3基因表达谱型图。通过谱型图上电泳条带分析SLE移植前T细胞克隆增生的特征以及移植后T细胞克隆群的变化,做增生T细胞克隆的TCRβ基因序列分析,了解TCRβ基因与自身免疫病的相关性。结果 正常HCRβV25个家族的基因序列电泳后分别出现呈高斯分布的10余条电泳条带,组成CDR3基因表达谱型图。8例SLE患者谱型图均出现异常,4例TCRβ在β3V13．1基因家族T细胞出现寡克隆增生,3例在βV8,βV9,βVl5家族中出现寡克隆性增生。APBSCT后T细胞克隆分布趋于正常,CDR3恢复多态性,部分恢复到正常TCRβ基因分布。测序结果显示谱型图上单一条带过度浓集往往是单克隆或者寡克隆T细胞增殖;发现SLE一个异常T细胞克隆的TCRβV8 CDR3氨基酸序列与已报道强直性脊椎炎疾病相关克隆完全一致。结论 SLE患者出现T细胞寡克隆增生,增生的T细胞克隆可能与自身免疫病发病有关。APBSCT后免疫重建,抑制了致病的T细胞寡克隆,可能是移植后SLE治疗缓解的主要因素。     

淋巴细胞白血病和淋巴瘤T细胞受体基因重排研究

目的：探讨淋巴细胞白血病及淋巴瘤的T淋巴细胞受体（TCR）Vβ亚家族分布特点。方法：用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测急性淋巴细胞白血病5例,慢性淋巴细胞白血病2例,弥漫大B淋巴瘤3例及外周T淋巴瘤3例患者的外周血或淋巴结T淋巴细胞TCR Vβ亚家族表达。对照组为健康人8例。结果：对照组健康8例外周血淋巴细胞表达全部24个Vβ亚家族。急性淋巴细胞白血病和慢性淋巴细胞白血病患者外周血淋巴细胞TCR Vβ亚家族均呈限制性表达,外周T淋巴瘤2例和弥漫大B淋巴瘤1例Vβ亚家族呈限制性表达,另外3例表达未受抑制。而淋巴瘤患者淋巴结标本Vβ亚家族全部呈限制性表达。结论：TCR基因重排对淋巴瘤和淋巴细胞白血病的诊断有辅助作用。     

肺结核患者外周血alpha/betaT细胞CDR3谱系研究

[摘要] 目的 探讨活动性肺结核患者外周血T细胞TCR α、 链CDR3 谱系漂移,为肺结核患者特异性T细胞免疫应答机制和免疫治疗研究提供基础。方法 采用基因扫描谱型分析技术,分析6例正常献血员及6例活动性肺结核患者PBMC中T细胞TCR CDR3谱型分布特征及患者TCR Vα和Vβ基因家族的优势取用情况,对克隆性增生T 细胞CDR3区进行序列分析。结果 6例正常献血员外周血中TCR 32 Vα、24 Vβ家族CDR3谱型均呈高斯分布（gaussian distribution）,6例活动性肺结核患者出现不同Vα和Vβ家族优势取用,对部分单/寡克隆增生T细胞α、 链CDR3区基因进行测序,证实存在不同的CDR3序列。结论 肺结核患者活动期外周血T细胞TCR α、 链CDR3谱系出现明显漂移,提示CDR3的选择性表达与结核患者细胞免疫应答机制有关,优势取用Vα、Vβ家族T细胞TCR CDR3序列的确定,为肺结核患者特异性T细胞免疫治疗研究提供基础。     

肺癌患者TCR Vβ亚家族表达及记忆性T细胞表达的研究

目的 探讨肺癌患者外周血T细胞及胸水肿瘤浸润性淋巴细胞(TIL)的T细胞受体(TCR)Vβ亚家族及记忆性T细胞的表达情况.方法 分离健康人和肺癌患者的T细胞,采用流式方法检测Vβ24个亚家族及CD45RO和CD28的表达情况,统计分析Vβ24个亚家族及记忆性T细胞的特点.结果 43例肺癌患者外周血TCR Vβ亚家族主要...     

应用RT-PCR和基因扫描分析TCRVβ谱系的CDR3长度了解急性单核细胞白血病病人克隆性增殖T细胞(英文)

目的　了解急性单核细胞白血病 (AML M5 )病人TCRVβ亚家族T细胞的分布及其克隆性。方法　利用RT PCR分别扩增 9例M5病人外周血单个核细胞的TCRVβ2 4个亚家族基因的CDR3,了解TCRVβ谱系的表达情况。PCR产物进一步经基因扫描分析 ,确定T细胞克隆性。结果　 9例AML M5病人仅存在 1 10个Vβ亚家族T细胞 ,而正常血标本则可检测到 2 4个Vβ亚家族。基因扫描分析显示 :8例病人的某些Vβ亚家族出现一主峰图象 (寡克隆性T细胞 )。Vβ2寡克隆T细胞发现于 6例病人中。结论　结果提示AML M5病人存在克隆性增殖的T细胞 ,主要为Vβ2亚家族 ,推测这可能是对白血病细胞 (M5 )相关抗原的特异性免疫反应并可能具有抗白血病的活性。     

荧光定量PCR溶解曲线分析技术检测多系统萎缩患者TCRβ链CDR3谱序初探

目的利用荧光定量PCR溶解曲线分析技术检测多系统萎缩病人TCRβ链CDR3谱序。方法提取1例多系统萎缩病人外周血单个核细胞中的总RNA逆转录成cDNA,以26个人TRBV基因家族设计上游引物,共同的TRBC基因设计下游引物,用荧光定量PCR（FQ—PCR）扩增26个TRBV基因各家族CDR3谱系,根据其溶解曲线图分析各家族CDR3谱系的单／寡／多克隆增生。结果该病例外周血T细胞TCRβ链26个家族CDR3表达频率不一致,有的家族呈现缺失状态,有的家族出现寡克隆状态。结论该多系统萎缩病人TCRβ链CDR3存在谱系漂移,有的表达呈寡克隆,有的无表达呈缺失。     

中老年男性非小细胞肺癌患者TCR Vβ基因表达谱分析

目的分析非小细胞肺癌（non-small-cell lung cancer,NSCLC）T细胞受体（TCR）Vβ基因在中老年男性患者外周血的表达情况。方法分离健康人及患者外周血的T细胞,用流式细胞术分析TCR Vβ各亚家族表达谱,统计分析其特点。结果患NSCLC的中老年男性外周血中TCR Vβ部分亚家族高表达,其中CD8＋TCR Vβ3、4、9表达有统计学意义（P均〈0.05）,同时CD8＋TCR Vβ3与Vβ4两基因表达有相关性;r=0.541,P=0.008。结论患NSCLC的中老年男性CD8＋TCR Vβ在外周血呈倾斜性分布,推测与肿瘤表位特异性表达有关。     

寻常型天疱疮患者外周血T细胞受体β链可变区CDR3基因克隆谱型分析

目的:探讨寻常型天疱疮（PV）患者外周血T细胞受体（TCR）互补决定区（CDR3）基因谱型变化,了解克隆扩增的T细胞与自身免疫性疾病的相互关系。方法:采用免疫扫描谱型分析技术,分析6例正常人外周血单个核细胞TCR β链可变区(BV) CDR3谱型分布特征以及6例PV患者CDR3谱型变化情况。结果:6例正常人TCR BV CDR3谱型均符合正态分布,6例PV患者TCR BV CDR3谱型均出现多态性降低,BV亚家族单/寡克隆增生。结论:PV患者外周血TCR可变区β链CDR3谱型异常可能与PV发病有关。     

肺结核患者外周血αβT细胞CDR3谱系研究

目的探讨活动性肺结核患者外周血T细胞TCRα,β链CDR3谱系漂移,为肺结核患者特异性T细胞免疫应答机制和免疫治疗研究提供基础。方法采用基因扫描谱型分析技术,分析6例正常献血员及6例活动性肺结核患者PBMC中T细胞TCR CDR3谱型分布特征及患者TCRVα和Vβ基因家族的优势取用情况,对克隆性增生T细胞CDR3区进行序列分析。结果6例正常献血员外周血中TCR 32 Vα,24Vβ家族CDR3谱型均呈高斯分布(gaussian distribution),6例活动性肺结核患者出现不同Vα和Vβ家族优势取用,对部分单/寡克隆增生T细胞α,β链CDR3区基因进行测序,证实存在不同的CDR3序列。结论肺结核患者活动期外周血T细胞TCRα,β链CDR3谱系出现明显漂移,提示CDR3的选择性表达与结核患者细胞免疫应答机制有关,优势取用Vα,Vβ家族T细胞TCR CDR3序列的确定,为肺结核患者特异性T细胞免疫治疗研究提供基础。     

CML患者外周血TCR Vδ亚家族T细胞的谱系变化研究

目的 了解慢性粒细胞白血病(chronic myeloid leukemia,CML)患者慢性期(chronic phase,CP)和缓解期(complete remission,CR)外周血T细胞受体(T cell receptor,TCR)Vδ亚家族T细胞的分布和克隆性情况.方法 利用RT-PCR扩增8例CML-CP和8例CML-CR患者外周血T细胞中8个Vδ亚家族基因的互补决定区(CDR3),了解TCR Vδ亚家族T细胞的分布和利用情况;阳性产物进一步经基因扫描分析CDR3长度,从而了解其克隆性.10例健康人外周血作为对照.结果 8例CML-CP患者外周血T细胞平均表达(3.25±0.89)个Vδ亚家族,主要以Vδ1、Vδ2和Vδ3的表达为主,而8例CR期患者则平均表达(3.50±0.76)个Vδ亚家族,主要集中在Vδ1、Vδ2、Vδ3和Vδ8中表达;两组与健康对照组(3.50±0.52)比较无统计学意义.此外,Vδ8表达频率在CML-CR患者(5/8)中略高于健康人(3/10)和CML-CP患者(2/8).基因扫描绝大多数患者和健康人外周血TCR Vδ亚家族T细胞均存在克隆性增殖现象,主要以Vδ1-Vδ3为主,但在CML-CR患者中,表达V87亚家族的两例样本均呈克隆性增殖,这在10例健康人中均未检测到.结论 3组样本的外周血T细胞中TCR Vδ谱系和克隆性增殖类似,提示CML患者T细胞免疫抑制可能并不主要累及TCR Vδ谱系变化,并在CML-CR期所出现了一些不同的Vδ表达和克隆模式.     

APL细胞诱导脐血TCR Vα和Vβ亚家族T细胞增殖和细胞毒性研究

目的 了解急性早幼粒细胞性白血病(APL)细胞体外诱导脐血T细胞的TCR Vα和Vβ亚家族克隆性增殖及针对APL细胞特异性杀伤情况.方法 采用混合淋巴细胞和肿瘤细胞培养(MLTC)方法,利用APL细胞体外诱导脐血T细胞增殖,用RT-PCR和基因扫描分析MLTC后T细胞的29个TCR Vα亚家族基因和24个TCR Vβ亚家族基因的互补决定区(CDR3),了解各亚家族的T细胞克隆性增殖特点,并应用LDH法分析诱导增殖的T细胞针对APL细胞特异性杀伤作用.结果 经APL细胞刺激后增殖的脐血T细胞表达部分Vα和Vβ谱系基因,并在Vα10、Vβ5和Vβ15出现有克隆增殖趋势,诱导后T细胞对APL细胞的杀伤性均高于未诱导组的T细胞.结论 APL细胞体外诱导脐血T细胞出现抗原相关的TCR Vα和Vβ亚家族优势利用和克隆性增殖;诱导后的T细胞对APL细胞具有特异性细胞毒性作用.     

乳腺癌转移淋巴结T细胞克隆性分析

目的分析乳腺癌患者转移淋巴结中TCR BV亚家族T细胞的克隆性分布特点。方法选取2例反应性增生淋巴结及10例乳腺癌转移淋巴结标本,应用RT-PCR方法扩增T细胞24个TCRβ链可变区(BV)亚家族的互补决定区3(CDR3)基因,经基因扫描确定T细胞克隆性。结果乳腺癌转移淋巴结中T细胞存在克隆性增生,增生形式包括单、寡克隆及多克隆。不同患者增生T细胞克隆中均存在TCR谱型偏移,仅表达2~5个BV亚家族。结论乳腺癌转移淋巴结内克隆性T细胞TCR BV亚家族存在选择性取用特点,可能与机体对乳腺癌相关抗原的特异性免疫反应有关。     

抗原特异TCRα和β链基因克隆及分子空间结构预测

目的扩增弥漫大B细胞淋巴瘤(diffuse large B cell lymphoma,DLBCL)相关抗原特异T细胞克隆的全长TCRα和β链基因序列,并对其三维空间结构进行预测。方法从已鉴定的2例伴有克隆性增殖TCR Vα6和Vβ13亚家族T细胞的DLBCL患者外周血中克隆全长TCRα和β基因序列,利用Primer Premier 5.0分析软件推算其相应的氨基酸序列,并通过自动化蛋白质模建服务器SWISS-MODEL进行三维空间结构预测。然后利用蛋白质三维图像分析软件Rasmol对所获得的TCR三维空间结构进行显示和分析。结果获得DLBCL相关抗原特异TCRα6和β13全长基因序列及其氨基酸序列。2例患者的TCR Vα6的空间结构与PDB ID:3ffcD模型相似,序列同源性分别为92.16%和91.71%;而2个TCR Vβ13也均具有同一个空间结构模型PDB ID:2ialD,序列同源性分别为92.95%和92.18%。结论来自不同DLBCL患者外周血中克隆性增殖的TCR Vα6或Vβ13亚家族T细胞的TCR具有高度同源性的空间结构,提示其可能识别相同的肿瘤抗原表位。     

甲氰咪呱对K562细胞诱导脐血T细胞TCR Vβ亚家族克隆性的影响

2细胞诱导组的T细胞对K562细胞的特异性杀伤作用显著增强(P<0.01).3组均呈现不同程度的T细胞TCR Vβ亚家族选择性利用,均有TCR Vβ21亚家族呈克隆性增殖.结论 甲氰咪呱可协助增强bcr-abl抗原刺激的特异性抗CML T细胞作用.     

系统性红斑狼疮患者外周血T细胞TCRβ链CDR3谱系漂移和序列鉴定

目的 探讨系统性红斑狼疮（SLE）患者外周血T细胞TCRβ链CDR3谱系漂移，为SLE的免疫应答机制和个性化治疗研究提供基础。方法 采用免疫扫描谱型分析技术，分析5例正常献血员的CDR3分布特征及5例SLE患者PBMC中T细胞TCRβ链CDR3的优势利用情况，对克隆性增生T细胞的CDR3区进行序列分析。结果 5例正常献血员PBMC TCR BV CDR3谱型均呈高斯分布，5例活动型SLE患者24TCR BV CDR3家族均出现不同的优势表达。对单／寡克隆性增生T细胞B链CDR3区基因进行测序，证实存在不同的CDR3序列。结论 SLE活动期外周血T细胞TCRβ链CDR3谱系出现明显漂移，提示CDR3的选择性表达可能与SLE的免疫发病机理有关。特异应答的T细胞TCRCDR3序列的确定，将为SLE的发病机制研究和个性化治疗提供新的方法与手段。