组蛋白去乙酰化酶抑制剂MS-275对乳腺癌MCF7细胞周期作用及分子机制探讨

目的 研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂MS-275对乳腺癌MCF7细胞周期的作用及机制.方法 用0.5、1.0、1.5;μmol/L MS-275作用于乳腺癌MCF7细胞24 h,用MTT 法观察不同浓度MS-275对乳腺癌MCF7细胞的生长抑制作用,流式细胞仪检测乳腺癌MCF7细胞生长及周期,Western-blotting法检测MS-275对乳腺癌MCF7细胞周期相关基因表达的影响.结果 1.0 μmol/L的MS-275对乳腺癌MCF7细胞有明显的生长抑制作用,并呈现一定的量效关系,在1.0 μxmol/L浓度之上可明显诱导乳腺癌MCF7细胞周期阻滞,增强p21、p27基因的表达,降低CCNDl、Cdk4D基因的表达.结论 一定剂量MS-275抑制乳腺癌MCF7细胞的生长,细胞阻滞的发生与p21、p27基因表达的增加及CCND1、Cdk4D基因表达的减少相关.     

牛膝多糖联合5-氟尿嘧啶对食管癌的作用及相关机制的探讨

目的:探讨牛膝多糖(Achyranthes bidentata polysaccharides,ABPS)及其联合5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-Fu)对食管癌EC9706细胞的作用及可能机制.方法:通过MTT法检测ABPS(3个浓度100、200、300μg/ml)及联合5-Fu对食管癌细胞的增殖的作用;用流式细胞术检测细胞周期改变及凋亡率,Westem blot检测ABPS对食管癌细胞周期相关基因p21和p27表达的影响;免疫细胞化学检测凋亡相关基因bax、bcl-2的表达.结果:(1)ABPS可以抑制食管癌EC9706细胞的增殖;ABPS与5-Fu联合应用对食管癌细胞的增殖抑制作用强于两者单用;(2)ABPS作用后的EC9706出现了G0/G1期的阻滞和早期凋亡;其机制可能分别涉及p21和p27基因表达的增加以及bax基因表达的增加和bcl-2基因表达的减少.结论:ABPS对食管癌细胞的增殖有抑制作用;ABPS与5-Fu联合使用具有协同抗肿瘤作用.     

曲古抑菌素A诱导胃癌细胞细胞周期阻滞及其机制

目的研究去乙酰化酶抑制剂TSA对胃癌细胞SGC-7901细胞周期的作用及机制。方法利用细胞计数及流式细胞仪检测细胞生长及细胞周期；利用Western blot、基因芯片及实时定量PCR检测TSA对胃癌细胞周期相关基因的表达。结果TSA可诱导胃癌细胞SGC-7901细胞周期阻滞。TSA可增加胃癌细胞SGC-7901之p53，p21，p27等基因的表达，降低CDK2，CCNDl等基因的表达。TSA可通过调控多个细胞周期相关基因的表达阻滞胃癌细胞细胞周期，从而抑制胃癌细胞的生长。结论TSA可通过调控多个细胞周期相关基因诱导胃癌细胞细胞周期阻滞，从而达到其抑制胃癌细胞生长的作用。     

白藜芦醇对人食道癌细胞生长和凋亡的影响

目的:探讨白藜芦醇对人食管癌EC9706细胞生长及凋亡影响。方法:分为正常组、溶剂组(加了DM-SO)、白藜芦醇组(分为0.2,0.4,0.8,1.6,3.2 mmol/L不同浓度),应用MTT比色法检测白藜芦醇对EC9706细胞体外生长的抑制作用;流式细胞仪测定细胞的周期和凋亡;电子显微镜观察细胞凋亡。结果:MTT实验观察,白藜芦醇对EC9706细胞生长有抑制作用,随浓度升高,时间延长作用增强,呈剂量-时间效应关系。白藜芦醇(3.2 mmol/L)作用EC9706细胞72 h抑制率达86.73%,凋亡率达47.53%。作用24,48,72 h后,半数细胞毒性作用所需浓度(CC50)及最大无毒浓度分别为3.15,3.01,1.14 mol/L及0.32,0.08,0.09 mmol/L。从低到高浓度(0.2-3.2 mmol/L)白藜芦醇使S期细胞比例逐渐下降,G0/G1细胞的比例逐渐增加。电子显微镜观察:白藜芦醇作用的EC9706食管癌细胞,呈明显的凋亡特征。结论:白藜芦醇可抑制人食管癌细胞EC9706增殖并可诱导细胞发生凋亡。使食管癌EC9706细胞周期呈G0/G1阻滞。白藜芦醇可能为食管癌提供一种新的治疗手段。     

曲古霉素A体外诱导膀胱癌细胞凋亡及细胞周期阻滞的机制探讨

目的:观察组蛋白去乙酰化酶(HDAC)抑制剂曲古霉素A(TSA)对体外培养膀胱癌细胞生长情况及相关基因表达的影响,并探讨其可能的作用机制.方法:MTT法检测不同浓度(0.05、0.1、0.2、0.4、0.8 μmol/L)的TSA对人膀胱癌T24细胞生长的影响.透射电镜观察TSA(0.4 μmol/L) 诱导后膀胱癌细胞的形态学变化;流式细胞术检测处理后膀胱癌细胞周期分布及凋亡率的变化;Western 印迹法检测处理后膀胱癌细胞组蛋白乙酰化水平的变化;FQ-PCR检测处理后膀胱癌细胞p21CIP1/WAF1、cyclin A和cyclin E mRNA的表达.结果:TSA体外能明显抑制T24细胞生长,且抑制作用呈明显的剂量、时间依赖性.TSA(0.4 μmol/L)诱导后,透射电镜下可见大量具有凋亡形态特征的T24细胞;流式细胞术检测示细胞阻滞于G0/G1期,并且出现典型的亚二倍体(Sub-G1)峰;TSA可明显提高组蛋白乙酰化水平,并诱导p21CIP1/WAF1的mRNA表达和抑制cyclin A的mRNA表达,而对cyclin E无明显作用.结论:TSA可通过诱导细胞凋亡及细胞周期阻滞而发挥体外抗膀胱癌作用,其作用机制可能涉及组蛋白乙酰化水平以及相关基因(p21CIP1/WAF1、cyclin A)表达的调控.     

肝素酶特异性RNAi对人食管癌EC9706细胞肝素酶基因表达的影响

目的:探讨RNAi技术对人食管癌EC9706细胞肝素酶(heparanase,Hpa)基因表达的影响.方法:针对Hpa不同基因位点设计合成寡核苷酸,然后转录为小分子干扰RNA(siRNA),分别用浓度为10 μmol/L、15 μmol/L、20 μmol/L的siRNA经LipofectamineTM 2000脂质体介导转染EC9706细胞72 h,同时设无关序列组及不转染组.采用完整细胞原位杂交技术观察各组EC9706细胞中Hpa基因的表达.结果:siRNA可有效抑制人食管癌EC9706细胞Hpa基因的表达,以15 μmol/L的siRNA作用效应最强,但不同浓度siRNA两两相比,差异均无统计学意义(P＞0.05),不同浓度siRNA对Hpa基因表达的抑制效应均显著强于无关序列组及不转染组(P＜0.05).结论:RNAi技术可有效抑制人食管癌EC9706细胞Hpa基因的表达.     

曲古菌素A上调食管癌CAR的表达及增强溶瘤腺病毒转染效率的体外研究

目的 通过观察组氨酸去乙酰化酶(histone deacetylase,HDAC)抑制剂曲古菌素(trichostatin A,TSA)对食管癌细胞株EC9706膜表面柯萨奇-腺病毒受体(Coxsackie and adenovirus receptor,CAR)表达水平的影响,观察TSA能否通过上调食管癌EC9706 CAR表达而增强其对腺病毒基因转染效率.方法 采用免疫细胞组织化学、RT-PCR、Western blot检测食管癌EC9706细胞CAR的表达情况,再用上述方法检测TSA作用EC9706细胞后,CAR mRNA和CAR蛋白表达的改变;同时采用流式细胞术测定病毒转染效率,MTT实验评价腺病毒携带的胸苷激酶(Ad-TK)的体外抗瘤效应.结果 0.5 μmol/L TSA处理EC9706细胞12、24、48 h后,CAR mRNA和蛋白表达量[分别为(0.44±0.01)、(0.37±0.02),(0.66±0.04)、(0.58±0.01),(0.77±0.05)、(0.70±0.03)]与未加TSA处理组[(0.27±0.02)、(0.22±0.03)]相比,CAR mRNA和蛋白表达水平显著提高(P<0.05,P<0.01),呈现出时间依赖关系.流式细胞仪分析Ad-GFP转染后GFP的表达发现,未加TSA处理细胞转染效率为(1.35±0.11)%,0.5 μmol/L TSA作用12、24 h 和48 h后,细胞转染效率分别为(2.58±0 17)%、(4.96±0.14)%、(6.36±0.15)%.MTT检测Ad-TK介导的体外杀伤作用结果显示,0.5 μmol/L TSA作用48 h比未加TSA增强8倍.结论 TSA通过上调CAR表达量从而增强腺病毒对食管癌细胞的腺病毒基因转染效率.     

p27kip1基因转染增强放射抗拒人食管癌细胞的放射敏感性

目的研究腺病毒介导的p27kip1基因转染对人放射抗拒食管癌细胞放射敏感性的影响。方法以重组腺病毒介导的p27kip1基因转染人放射抗拒食管癌细胞EC9706R,免疫细胞化学法检测p27kip1表达;流式细胞仪检测转染前后肿瘤细胞周期,克隆形成实验检测p27kip1基因转染前后两种EC9706R细胞的放射敏感性。结果腺病毒转染后放射抗拒食管癌EC9706R细胞p27kip1表达明显升高,细胞周期结果显示G0/G1期阻滞;转染p27kip1前后放射敏感性参数检测结果比较:转染前EC9706R细胞SF2=67.4%,Dq=1.66 Gy,转染后SF2=49.7%,Dq=1.03 Gy,放射增敏比SERSF2、SERDq分别为1.36,1.61,两者比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论 p27kip1基因转染能增强人放射抗拒食管癌细胞的放射敏感性。     

PTPN14对食管癌的抑制作用及其机制研究

目的探讨蛋白酪氨酸磷酸酶14（PTPN14）对食管癌的抑癌作用及其机制。方法通过转染PTPN14质粒过表达食管癌细胞EC9706 中PTPN14 的表达,实时荧光定量聚合酶链反应及Western blot检测其过表达效果;四甲基偶氮唑盐比色法检测过表达PTPN14对EC9706细胞增殖的影响;流式细胞术检测过表达PTPN14对EC9706 细胞周期的影响;Western blot检测过表达PTPN14 对YAP 蛋白表达的影响。结果转染PTPN14质粒可上调食管癌细胞系EC9706 中PTPN14 的表达;过表达EC9706 细胞中PTPN14 可以抑制食管癌细胞的增殖,使细胞周期阻滞在G1期;过表达EC9706 中PTPN14 可以下调细胞中YAP的表达水平。结论PTPN14可通过下调YAP,阻滞食管癌细胞周期,抑制细胞增殖。     

曲古抑菌素A对甲状腺未分化癌DRO细胞株生长及其端粒酶逆转录酶mRNA表达影响的研究

目的:观察曲古抑菌素A(TSA)对甲状腺未分化癌DRO细胞株的体外作用,探讨TSA对甲状腺未分化癌的作用机制。方法:倒置相差显微镜观察细胞形态变化;MTT法检测TSA对DRO细胞增殖的抑制效应;流式细胞术检测经TSA1.0μmol/L作用24、48、72h后细胞周期和凋亡率的变化;RT-PCR方法观察经TSA1.0μmol/L作用48h后细胞内hTERT和p21基因的表达情况。结果:在0.1～1.5μmol/LTSA作用下,DRO细胞生长明显受抑制;倒置相差显微镜检测DRO细胞经TSA处理后形态发生明显变化;1.0μmol/LTSA作用于DRO细胞,48h后出现明显的细胞周期阻滞;hTERT经TSA诱导后表达明显下调,呈量效关系。结论:一定浓度的TSA可以抑制甲状腺未分化癌细胞株DRO增殖。其作用机制可能与下调hTERT表达有关。     

补肾填精复方对WI38细胞周期及相关基因表达的影响

目的:观察补肾填精中药复方对衰老细胞周期及相关基因表达的影响.方法:选用衰老细胞模型WI38常规培养至33代,加入补肾填精复方含药血清作用至40代,并以流式细胞仪、RT-PCR、wester-blot等方法检测补肾填精含药血清对衰老细胞周期及相关基因表达影响.结果:33代后传代细胞出现明显衰老特征;衰老细胞阻滞于G1期;补肾填精含药血清可以延缓WI38细胞衰老,促进细胞进入细胞周期;补肾填精含药血清可降低细胞衰老相关基因P53、P21、P16转录与表达水平.结论:补肾填精中药复方可以影响细胞周期,减缓细胞衰老,其作用的环节可能与降低细胞衰老相关基因P53、P21、P16表达水平相关.     

大鼠肺鳞癌癌变过程中细胞周期调控蛋白的动态表达

目的 探讨化合物诱导的大鼠肺鳞癌癌变各阶段细胞周期调控蛋白P16、P27和P53水平动态变化趋势、相互关系及其在癌变过程中的作用.方法 3-甲基胆蒽(MCA)及二乙基亚硝胺(DEN)碘油溶液诱发Wistar大鼠肺鳞癌.采用免疫组化S-P法检测P16、P27和P53蛋白在大鼠肺鳞癌癌变各阶段的表达水平,采用Western blot检测鳞癌、癌旁和正常组织中各蛋白表达水平.结果 共获取癌变各阶段标本164例,其中正常支气管上皮20例,增生25例,鳞状化生27例,不典型增生37例,原位癌30例,浸润癌25例.P16和P27蛋白表达的阳性率随癌变进展而降低,P53蛋白表达的阳性率随癌变进展而升高.P16与P27蛋白表达呈正相关(P<0.01),P16和P27蛋白表达与P53蛋白表达呈负相关(P<0.05).鳞癌组织中P16与P27蛋白低表达,P53蛋白高表达,与正常组织或癌旁组织有显著性差异(P<0.01).结论 在癌变过程中细胞周期调控蛋白P16和P27表达下调,P53蛋白表达逐渐增强,可能与大鼠肺鳞癌的发生、发展密切相关.     

食管鳞癌P16、P15基因杂合子缺失的研究

目的：探讨P16和P15基因与ESCC发生发展的关系。方法：应用显微切割、PCR、凝胶电泳、AgNO3染色等技术,检测食管鳞癌（ESCC）和高级别不典型增生中P16、P15基因杂舍子缺失（LOH）,对照正常细胞,分析ESCC和高级别不典型增生组织中LOH的变化,并就LOH率与患者的临床病理参数分别进行单因素分析。结果：ESCC组织中的LOH率为29．7％,高级别不典型增生组织中的LOH率为16．5％。应用SPSS软件对LOH率与患者的性别、组织分化、淋巴结转移进行单因素分析,差异均无显著性（P〉0．05）。结论：①从正常鳞状上皮到不典型增生再到癌变的过程中存在基因的异常累积。②P15基因可能与食管鳞癌的发生发展相关。（3）D9S162住点或其附近可能存在与ESCC发展相关的抑癌基因。     

Stat3和Stat5在分化型甲状腺癌组织中的表达及意义

目的:研究分化型甲状腺癌(DTC)组织中信号转导和转录激活因子Stat3和Stat5的表达情况及其与甲状腺癌临床病理因素和相关抑癌基因之间的关系,探讨Stat3和Stat5在DTC发生、发展中的作用。方法：应用免疫组织化学 SABC法检测42例DTC［包括38例乳头状癌(PTC)和4例滤泡状癌(FTC)］、30例甲状腺腺瘤（TA）及15例正常甲状腺组织(NTT)中Stat3、Stat5、P53及P21蛋白的表达,比较不同组织中阳性细胞表达率,分析其与DTC临床病理参数的相关性。结果：Stat3和Stat5在DTC组织中的阳性率显著高于TA和NTT(P<0.05) ,二者表达率与DTC病理分型密切相关（r=0.76,P<0.05;r=0.80,P<0.05）;Stat3和Stat5在PTC中的表达率明显低于FTC(P<0.05),且Stat5 的表达率明显高于Stat3,二者呈正相关（r=0.78,P<0.05）。DTC组织中P53蛋白阳性表达率（30.9%）明显高于TA(0%)和NTT（0%）(P<0.05) 。P21蛋白阳性表达率（14.3%）在DTC组织中明显降低。Stat3和Stat5在DTC组织中表达率分别为54.8%和66.7%,明显高于P53表达率（30.9%）,且分别与P53表达率呈正相关(r=0.77,P<0.05;r=0.72,P<0.05),与P21表达率呈负相关（r=－0.87,P<0.05;r=－0.67,P<0.05）。结论：Stat3和Stat5参与DTC病理分型,其异常表达率可能与p53基因的突变、抑癌基因p21的失活有关。Stat3和Stat5表达率的异常增高可能是DTC发生、发展的原因之一。     

食管上皮内瘤变和癌组织中P15 P16的表达及其生物学意义

目的检测食管上皮内瘤变及鳞癌组织中P15、P16的表达,探讨它们在食管癌发生、发展过程中的意义。方法收集山西省肿瘤医院病理科2003—2005年手术切除的食管鳞癌标本105例,病理复诊证实为食管鳞癌并伴有食管上皮内瘤变和正常食管鳞状上皮组织,用免疫组织化学S-P法检测P15、P16蛋白的表达。结果P15、P16蛋白在鳞癌组织中的表达明显低于食管上皮内瘤变和正常食管鳞状上皮组织(P<0.01)。结论P15、P16蛋白的失表达参与了食管癌的发生发展。     

胃泌素及其受体拮抗剂丙谷胺与胃癌BGC-823细胞系P16、P21蛋白的表达研究

目的：探讨丙谷胺（PGM）抑制胃癌BGC-823细胞增殖及胃泌素的促增殖作用，通过P16及P21蛋白表达的变化，为内分泌途径治疗胃癌提供理论依据，并提供内分泌途径治疗癌症疗效的指标。方法：通过体外细胞培养及对癌细胞进行分组实验研究，应用免疫荧光技术及Northern blot方法测定癌细胞内P16及P21蛋白的表达情况。结果：P16蛋白的表达量随PGM的抑癌作用而升高，两者呈负相关；P21蛋白的表达量与PGM的抑癌作用无明显相关。结论：丙谷胺作为胃癌的一种内分泌治疗手段，可采用P16的表达情况作为其疗效的一个指标。     

深呼吸时P—R间期,P—P间期变化的临床意义

目的：通过深呼吸心电图试验,探讨观察心脏自主神经功能的无创性方法。方法：１０９名健康成人,描记１２导联心电图,在Ⅱ导联上分别描记平卧平静呼吸、深呼吸时心电图。分析Ｐ－Ｒ间期、Ｐ－Ｐ间期的变化。结果：深吸气时Ｐ－Ｒ间期、Ｐ－Ｐ间期均较平静呼吸缩短,深呼气时Ｐ－Ｒ间期、Ｐ－Ｐ间期均较平静呼吸时延长,均Ｐ〈０．０１。结论：呼吸时Ｐ－Ｒ间期、Ｐ－Ｐ间期的变化可为评价心脏自主神经功能提供参考依据。     

P53、P16在宫颈病变组织的表达及意义

目的 探讨P53、P16在宫颈病变组织的表达及临床意义.方法 应用免疫组化SP法检测66例官颈上皮内瘤变(CIN)和36例宫颈鳞癌P53、P16的表达,另选取20例正常宫颈组织作为对照.结果 P53在正常宫颈组织、CIN和宫颈鳞癌中阳性率分别为5.00%、60.61%及86.11%,差异有统计学意义(P<0.05);P53表达强度随宫颈CIN分级增加而增加,表达有统计学意义(P<0.05).P16在正常宫颈组织、CIN和宫颈鳞癌中阳性率分别为5.00%、89.39%及100.00%,差异有统计学意义(P<0.05);P16表达强度随宫颈CIN分级增加而增加,差异有统计学意义(P<0.05).结论 P53和p16与宫颈癌前病变发生机制及病变进展相关,其检测可作为宫颈CIN分级与鳞癌诊断的重要辅助指标.     

基于P2P模式的校园网课堂直播系统的构建

C/S结构的流媒体网络点播和直播系统,由于服务器及带宽限制,无法提供大规模的应用。而P2P与流媒体技术的结合将计算及流量分散到了所有在线的客户端,为在校园网上搭建低成本、高性能的网络直播系统提供了可能。文章就此方案进行测试实践,说明其应用效果良好。     

中药黄精的性状和显微鉴别

对我国9种黄精:黄精、滇黄精、囊丝黄精、卷叶黄精、轮叶黄精、长梗黄精、节根黄精、距药黄精和湖北黄精的生药性状和组织结构进行研究。并分别列出其生药性状、组织构造和粉末特征的检索表。