ＲＰ—ＨＰＬＣ法测定大豆提取物中大豆苷元、染料木素、大豆苷、染料木苷的

目的：建立ＲＰ－ＨＰＬＣ法分离检测大豆提取物大豆苷元,染料木素、大豆苷、染料木苷４成分含量的方法,方法：用ＺorbaxSB-C18色谱柱,以甲醇－乙腈－０．１％,磷酸（３０：８：６２）和甲醇－乙腈－０．１％磷酸（１６：２４：６０）为流动相分别测定大豆苷元,染料木素和大豆苷、染料木苷、检测波长为２５４nm.结果：大豆苷元、染料木素、大豆苷、染料木苷４成分的平均回 分别为９８．７％,９９．５％,９８．４％,９８．６５,ＲＳＤ分别为１．４％,０．９％,０．９％,１．７％（n=４）。结论方法简便、准确、重复性好。     

脂多糖诱导滑膜细胞产生一氧化氮及木黄酮对其的抑制作用

目的：研究脂多糖（LPS）诱导滑膜细胞产生一氧化氮（NO）及酪氨酸激酶（PTK）抑制剂木黄酮对其的抑制作用。方法：LPS或LPS＋木黄酮体外刺激滑膜细胞，用Griess方法检测上清中NO的含量。结果：LPS能诱导滑膜细胞产生NO，此作用具有时间（0－72h)和剂量依赖性（0．01－100μg/ml）；木黄酮（6．25－50μmol/L）剂量依赖性地抑制LPS诱导滑膜细胞产生NO，50μmol/L木黄酮抑制率达到50．22％。结论：木黄酮能剂量依赖性地抑制LPS诱导滑膜细胞产生NO。     

HPLC法测定加替沙星血药浓度

目的：建立反相高效液相色谱法（HPLC）测定犬血清中加替沙星浓度。方法：血清样品用二氯甲烷提取，以环丙沙星为内标，流动相为甲醇－0．01mol/L磷酸二氢钾缓冲液－0．5mol/L四丁基氢氧化铵溶液（15：75：1．4），磷酸调pH至2．6，流速为1．0mgL/min，检测波长298nm，结果：本法在0．2－8．11μg/ml范围内线性良好，r=0.9998，日内RSD为3．9％－7．3％，日间RSD为5．7％－7．3％（n=5)，血清最低检测浓度为0．05μg/ml。结论：本法快速，准确，重现性好，为该药物的临床血药浓度监测和药代动力学研究提供依据。     

西洋参DNA导入大豆实现遗传转化的研究Ⅱ.导入后代异黄酮类成分的含？…

用高效液相色谱法测定了西洋参 DNA导入大豆后代的异黄酮类成分、大豆苷 (daidzin)、大豆黄素(daidzein)、染料木苷 (genistin)、染料木素 (genistein)的含量 ,采用 U nisil Q C1 8柱 ,4.6 mm× 2 5 0 m m,流动相乙腈 - 0 .0 0 3mol/L 磷酸氢二钠 (17∶ 83) ,流速 1.0 m L/min,检测波长 2 5 4nm,结果表明 ,4种成分分离效果好 ,成分含量发生了广泛变异 ,从中可筛选出有效成分含量较高的新材料     

槐角苷及染料木素对成骨细胞生物学特性的影响

目的：比较槐角苷及染料木素对成骨细胞生物学特性的影响。方法：成骨细胞由新生24h SD大鼠头盖骨分离得到。通过细胞增殖率测定、碱性磷酸酶活性测定、茜素红染色矿化结节形态计量方法,对比槐角苷和染料木素在体外对成骨细胞骨形成功能的影响。利用基因克隆和报告基因方法,检测槐角苷和染料木素对人骨保护素（osteoprotegerin,OPG）启动子活性的作用,观察两者对骨保护素基因转录活性的调节。结果：体外培养的成骨细胞在1和0．1μmol／L槐角苷的干预下,均显示增殖刺激作用（与对照组比较P〈0．05）。10μmol／L染料木素使细胞增殖受抑制,但0.1μmol／L染料木素则显示增殖刺激作用（与对照组比较P〈O．05）。槐角苷在实验的各种浓度中均能提高ALP活性,而染料木素只在0．1μmol／L浓度才能提高ALP活性。槐角苷在10、1和0．1μmol／L浓度对成骨细胞的矿化总面积较对照组分别提高了73％、138．6％和114．3％,而染料木素各个浓度下成骨细胞矿化总面积均减少。10、1和0．1μmol／L浓度槐角苷干预后检测报告β-半乳糖苷酶基因（LacZ）活性均增加,但染料木素仅在0．1μmol／L浓度对LacZ活性有增强作用（与对照组比较P〈0．05）。结论：槐角苷能够促进成骨细胞的增殖、分化和矿化功能,与染料木素比较,不出现对成骨细胞成骨功能的抑制作用。而对于成骨细胞产生的破骨细胞抑制因子骨保护素,较染料木素有更强的上调作用。     

大豆异黄酮苷元检测方法的研究

目的建立大豆异黄酮苷元含量测定方法。方法采用HPLC法,Diamonsil C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相:甲醇-0.3%磷酸溶液(体积比48∶52),流速0.7 mL/min,测定波长260 nm,柱温25℃。结果制备的大豆异黄酮苷元总含量为70.98%;大豆苷元、黄豆黄素和染料木素平均回收率分别为98.7%、98.9%和99.2%,RSD分别为2.1%、1.6%和1.4%。结论所建立的测定方法重现性好、可靠,可用于3种大豆异黄酮苷元的含量测定。     

RP—HPLC测定马齿苋黄酮提取物中染料木苷的含量

目的检测马齿苋黄酮提取液中染料木苷的含量。方法用反相高效液相色谱（RP-HPLC）检测马齿苋黄酮部位中染料木苷的含量。色谱柱为SunfireC18column（250.0mm×4.0mm,5.0μm）,流动相为甲醇：冰醋酸：水＝45：1：55,流速为0.8ml/min,柱温25℃,柱压2144psi,检测波长为259nm。结果马齿苋黄酮部位中染料木苷与标准品中染料木苷保留时间一致,染料木苷进样量在0.0625～2.0000ng范围内线性关系良好（r＝0.9999）,平均回收率98.30％,RSD＝0.57％（n＝5）。结论RP-HPLC测定方法简便,结果可靠,含生药6kg/L的马齿苋黄酮提取液中染料木苷含量为1.66mg/L。     

不同辅料炮制对淡豆豉中大豆异黄酮含量的影响

目的考察用不同辅料炮制淡豆豉对其大豆异黄酮含量的影响。方法采用发酵法制取淡豆豉样品,用HPLC色谱法测定样品中大豆异黄酮的含量。色谱柱为Hanbo（250 mm×4.6 mm,5μm）;流动相为甲醇∶水∶冰醋酸（40∶60∶0.5）;流速：1 m L/min;检测波长：260 nm。结果以大豆苷为考察指标时三者的差别不大,与青蒿、桑叶比较,淫羊藿和人参为辅料发酵的淡豆豉含量略低;以染料木苷为考察指标时,与青蒿、桑叶比较,淫羊藿为辅料发酵的淡豆豉含量略有升高,人参为辅料发酵的淡豆豉含量升高明显。结论炮制辅料不同,对淡豆豉中大豆异黄酮含量有一定影响,且人参为炮制辅料时影响较大。     

西洋参DNA导入大豆实现遗传转化的研究Ⅱ.导入后代异黄酮类成分的含量测定

用高效液相色谱法测定了西洋参DNA导入大豆后代的异黄酮类成分、大豆苷(daidzin)、大豆黄素(daidzein)、染料木苷(genistin)、染料木素(genistein)的含量,采用Unisil Q C18柱,4.6 mm×250 mm,流动相乙腈-0.003 mol/L磷酸氢二钠(17∶83),流速1.0 mL/min,检测波长254 nm,结果表明,4种成分分离效果好,成分含量发生了广泛变异,从中可筛选出有效成分含量较高的新材料.     

高速逆流色谱法分离制备淡豆豉中大豆素和染料木素

淡豆豉是经大豆Glycine maa T（L．）Merr．发酵而来的传统中药，其中所含的大豆异黄酮是该药主要活性成分之一。近年来的研究结果表明，大豆异黄酮是一类重要的生理活性物质，具有预防心血管疾病、防癌抗癌、治疗骨质疏松、降低妇女更年期综合症等功效。经发酵处理后大豆异黄酮中游离型苷元的质量分数明显提高，如大豆素和染料木素，而游离型大豆异黄酮比结合型大豆异黄酮具有更强的生物活性。因此，如何简便、快速从淡豆豉中分离制备大豆异黄酮苷元对进一步进行药效与作用机制研究、     

Influence of Isoflavones on Cadmium-induced Adverse Effects in Vascular Endothelial Cells （ECV 304）

To study the possible intervention of isoflavones in cytotoxicity induced by cadmium in vascular endothelial cells. Methods An ECV 304 cell line derived from human umbilical vein endothelial cells was adopted. Genistein / daidzein was added prior to or simultaneously with CdCl2, cell viability was determined by MTT assay, and metallothionein mRNA expression was monitored by RT-PCR method. Results Cell viability was higher in isoflavone and CdCl2. co-treated groups than that in CdCl2 treated group, with CdCl2 concentration at 10, 20, 40, and 80 μmol/L, respectively. However this increase was not observed in the group treated with CdCl2 at a concentration of 60 μmol/L, lsoflavones (10^-1mol/L to 10^-5 mol/L) were added 24 h before cells were challenged with 80 μmol/L CdCl2 for 24 h or simultaneously with 80 ^-10mol/L CdCl2. Genisteinincreased cell viability only at 10^-5 mol/L, while daidzein caused a dose-dependent increase from 10^-10 mol/L to 10^-5 mol/L in co-treatment with CdCl2. In pre-treatment, genistein (10^-7 to 10^-5 mol/L) increased cell viability whereas only 10^-5 mol/L of daidzein exerted protection. Apparent protection could be found when the cells were pre-treated with 10^-5 mol/L isoflavones for over 12 h, whereas 24 h incubation was required in such a co-treatment, with the exception of daidzein that had a significant protection in only 3 h. Isoflavones (10^-6 mol/L) incubated for 3 h to 24 h, increased MT ⅡA and MT IF mRNA expression, but the induction could not last for more than 24 h. Co-treatment with isoflavones could induce an additional induction of MT ⅡA mRNA expression in cells exposed to cadmium. However, the additional induction of MT ⅡA and MT IF mRNA was not seenwhen pre-treatment was carried out with isoflavones, with the exception of an increase in MT ⅡA mRNA expression in the daidzein pre-treated group. Conclusion Genistein/daidzein could reverse the cytotoxicity of cadmium either in pre-treatment or in co-treatment. The protection is the strongest in 10^-5 mol/L of isoflavones with a dose-dependent pattern. There are differences between genistein and daidzein in their protective effects. Whether the protection of isoflavones is related to their capacity of inducing MT mRNA expression remains to be elucidated.     

大豆异黄酮抗血小板聚集作用的实验研究

[目的 ]研究大豆异黄酮对血小板聚集性的影响 .[方法 ]普通饲料中添加 2 0 g/kg大豆异黄酮混合物 ,饲喂GK/Jcl糖尿病大鼠 2 0周 ,测定其血小板聚集率 .利用ODS柱层析和高效液相色谱技术分离大豆异黄酮 ,体外观察大豆异黄酮单体对人血小板聚集率的影响 .[结果 ]长期食用大豆异黄酮的GK/Jcl糖尿病大鼠血小板聚集率显著降低 .在人体外血小板聚集实验中 ,大豆异黄酮均抑制腺嘌呤核苷二磷酸钠、胶原蛋白和肾上腺素诱导的血小板聚集 ,大豆异黄酮类型中金雀异黄素的最强 ,其 5 0 %抑制浓度值分别为 0 38,0 30 ,0 2 3mmol/L .[结论 ]大豆异黄酮具有血小板聚集抑制效应 ,在大豆抗血小板聚集中起着重要作用 .     

贵州豆豉发酵前后大豆异黄酮含量测定

目的：建立一种测定豆豉中大豆异黄酮类成分含量的分析方法,并对黄豆及其发酵后豆豉中的大豆异黄酮含量进行比较。方法：采用反相高效液相色谱法,色谱柱Diamonsil-C18（250 mm×4.6 mm,5μm）,保护柱Phenomenex—C1s（4.6mm×3 mm,5μm）,流动相乙腈-0.2％磷酸(36∶64),流速...     

大豆异黄酮抑制Bcap-37细胞增殖与TGF-β关系的研究

目的　探讨大豆异黄酮抑制Bcap-37人乳腺癌细胞增殖时TGF-β和TGF-β受体表达的改变。方法　以二羟异黄酮、三羟异黄酮处理Bcap-37细胞,采用TGF-β拮抗试验、免疫细胞化学和逆转录聚合酶链式反应等实验方法,检测大豆异黄酮作用后Bcap-37人乳腺癌细胞TGF-β1、TGF-β2及受体表达的变化。结果　3×10-5 mol/L三羟异黄酮作用后Bcap-37细胞TGF-β1、TGF-β2及受体表达增强,而二羟异黄酮处理组其表达无明显改变。结论　三羟异黄酮抑制Bcap-37细胞增殖同时伴有TGF-β1、TGF-β2及受体表达增强。     

哌嗪雌酚酮的含量测定方法研究

目的 采用非水滴定法和HPLC-UV法测定哌嗪雌酚酮原料药含量,建立柱切换柱前衍生化荧光检测的HPLC法测定狗血浆中哌嗪雌酚酮含量。方法 分别采用无水冰醋酸为溶剂,0．1mol／L高氯酸为滴定液,结晶紫指示液指示终点的非水滴定法和HPLC-UV法测定哌嗪雌酚酮原料药含量;以FMOC-CL为衍生化试剂,采用柱切换柱前衍生化荧光检测的HPLC法测定狗血浆中哌嗪雌酚酮含量。结果非水滴定法日内精密度(RSD)及日间精密度(RSD)分别为0．28％、0．21％;HPLC-UV法中哌嗪雌酚酮在1．001～5．005μg范围内呈良好的线性关系和重现性,方法的检测限为4ng(S／N=3);柱切换柱前衍生化荧光检测的HPLC法中线性范围为8．4～420ng／mL,净化回收率为77．24％～83．10％,方法回收率为98．33％～103．3％,日内精密度(RSD)及日间精密度(RSD)分别小于7．7％和7．3％,方法的检测限为1ng(S／N=3)。结论 以上三种方法简便、准确、重现性好,分别为哌嗪雌酚酮原料药及狗血浆中的哌嗪雌酚酮的含量测定提供了方法。     

大豆异黄酮类药genistein抑制IL-1β的促破骨细胞骨吸收功能

目的:观察大豆异黄酮类药genistein抑制IL-1 β的促破骨细胞骨吸收功能.方法:新生兔长干骨机械分离法获得破骨细胞(osteoclast,OC),鼠颅盖骨机械法体外器官培养.按照加入药物的不同分为4组:对照组(不加genistein和IL-1β)、10-6mol/L genistein、10 μg/L IL-1β、10-6 mol/L genistein 10 μg/L IL-1β组.图像分析体外骨吸收陷窝面积,原子分光光度计法测定OC培养上清液和器官培养上清液中的Ca2 含量,用生化法检测器官培养上清液中的酸性磷酸酶(acid phosphatase,ACP)含量.计算实验组与对照组平均值比值,作为骨吸收指数,其值大于1.0表示骨吸收增强,小于1.0表示骨吸收受到抑制.结果:10-6mol/L genistein 10μg/L IL-1β组骨吸收陷窝面积显著高于10-6mol/L genistein组,Ca2 含量显著低于10μg/L IL-1β组,骨吸收指数小于10μg/L IL-1β组,大于10-6mol/L genistein组.器官培养上清液中,各组ACP含量差异无显著性;而10-6 mol/L genistein 10μg/LIL-1β组的骨吸收指数低于10μg/L IL-1β组,且二者都大于1.0;10-6mol/L genistein组的骨吸收指数低于1.0.结论:10-6mol/L genistein和10μg/LIL-1β联合使用显著降低了单独使用IL-1β导致的骨吸收陷窝面积和Ca2 浓度的上升,与对照组数值接近,说明genistein抑制了IL-1β诱导的骨吸收亢进.     

异黄酮类植物雌激素通过雌激素受体对靶基因的转录调节作用

目的:观察异黄酮类植物雌激素染料木素和大豆苷元通过雌激素受体(estrogen receptor,ER)对靶基因的转录调节作用。方法:采用磷酸钙瞬时转染的方法,利用转染雌激素受体表达质粒的Hela细胞,观察染料木素和大豆苷元对雌激素反应元件(estrogen response element,ERE)报告基因的转录激活作用;此外还观察ER拮抗剂ICI 182780对这两种植物雌激素转录激活作用的影响。结果:染料木素和大豆苷元均可通过ER的两种亚型ERα和ERβ激活ERE报告基因的转录,且这种转录激活作用能被ICI 182780所阻断。结论:染料木素和大豆苷元均能产生类雌激素样作用,通过ERα和ERβ激活ER靶基因的转录。     

大豆异黄酮对大鼠睾丸支持细胞的影响

目的：研究大豆异黄酮对体外培养的大鼠睾丸支持细胞(sertoli cells,SCs) 增殖以及卵泡雌激素受体(follicle-stimulating hormone receptor,FSHR)、抑制素α亚基(inhibin α,INHα)、抑制素βB亚基(inhibin βB,INHβB)、雄激素结合蛋白(androgen binding protein,ABP)、转铁蛋白(transferrin,Tf)和波形蛋白(vimentin) mRNA水平的影响。方法：体外培养大鼠SCs,用0.03,0.3,3及30 μmol/L的大豆黄酮(daidzein,Dai)和0.05,0.5,5及50 μmol/L的染料木黄酮(genistein,Gen)处理细胞,MTT检测细胞增殖,实时荧光定量PCR检测FSHR,INHα,INHβB,ABP,Tf和vimentin mRNA的相对表达量。结果：与对照组相比,其余各组细胞增殖和INHβB,ABP mRNA相对表达量差异均无统计学意义(P>0.05),Dai (0.3及3 μmol/L)和Gen (0.05 μmol/L)组INHα mRNA表达增加,Dai (30 μmol/L)和Gen所有浓度组的FSHR mRNA表达下降,Dai (30 μmol/L)和Gen (5 μmol/L和50 μmol/L)组Tf mRNA表达下降,Dai (3 μmol/L及30 μmol/L)和Gen (50 μmol/L)组vimentin mRNA表达下降。结论：大豆异黄酮可能通过抑制SCs重要功能蛋白的mRNA转录而影响其功能发挥,从而对雄性生殖系统产生负面影响。     

大豆异黄酮激活PPARγ促进人前列腺癌DU-145细胞凋亡

目的探讨染料异黄酮(genistein,GEN)和大豆苷元(daidzein,DAI)对人前列腺癌DU-145细胞凋亡的影响及其与过氧化物酶体增殖物激活体受体γ(peroxisome proliferators-activated receptorγ,PPARγ)的关系。方法采用过氧化物酶体增殖物反应元件(peroxisome proliferator responsive element,PPRE)驱动的荧光素酶报告基因检测GEN、DAI对DU-145细胞PPARγ的激活作用;GEN、DAI单独或联合PPARγ选择性拮抗剂GW9662处理DU-145细胞,采用免疫荧光化学染色方法观察PPARγ定位分布变化;TUNEL法和AnnexinⅤ/PI双染色流式细胞术检测细胞凋亡的变化。结果 GEN、DAI明显增强转染PPRE-TK-Luc质粒的DU-145细胞中荧光素酶表达活性,且这种作用可被GW9662所逆转。GEN或DAI单独作用于DU-145细胞时,PPARγ发生核移位;细胞凋亡率明显增加(P<0.05)。GW9662分别与GEN或DAI联合作用时,GEN、DAI促进PPARγ核移位和诱导细胞凋亡的作用明显削弱(P<0.05)。结论大豆异黄酮可通过激活PPARγ信号途径,促进人前列腺癌DU-145细胞凋亡。     

染料木素和大豆黄素对海马神经细胞H19-7增殖和神经营养因子表达的影响

目的 探讨染料木素和大豆黄素对海马神经细胞的活性和增殖作用及其可能机制.方法 H19-7/IGF-IR神经细胞在无酚红无血清DMEM培养液中培养72h后,分别加入一定浓度的染料木素、大豆黄素和雌二醇,用MTT和BrdU法分别检测细胞的活性和增殖,流式细胞术检测神经细胞周期,ELISA和RT-PCR法检测脑源性神经营养因子(BDNF)的表达.结果 处理细胞72h后,与对照组相比,20nM、200 Nm雌激素组H19-7细胞增殖分别提高了33%、36%;20 Nm、200 Nm染料木素组H19-7细胞增殖分别提高了15%、13%;200nM大豆黄素组H19-7细胞增殖分别提高了11%,差异有显著性(P＜0.05).200nM染料木素和大豆黄素的S期细胞比例[分别为(17.64±0.43)%,(19.48±1.01)%]显著高于对照组(14.21 ± 1.75)%,差异具有显著性(P＜0.05).染料木素和大豆黄素显著增加海马神经细胞成熟型BDNF水平及其Mrna的表达(P＜0.05).酪氨酸激酶受体阻断剂K252a能阻断染料木素和大豆黄素的促海马神经细胞增殖作用.结论 染料木素和大豆黄素改善海马神经细胞的增殖和活性能力,其作用与促进海马细胞BDNF的表达有关.

Abstract：

Objective To determine the effects of genistein and daidzein on the proliferation and survival of the hippocampal neural cells and underlying mechanism. Methods H19-7/IGF-IR neural cell line was cultured in phenol red free DMEM absented of serum for 72h. Genistein, daidzein or 17β-estradiol was added to the culture at various concentrations. Their proliferation and protective effects on the neuronal cells were determined by BrdU and MTT assay respectively. The effect of phytoestrogens on cell cycle regulation was determined using flow cytometry. The effects of the soy isoflavones on brain-derived neurotrophic factor (BDNF) expression were determined by ELISA and RT-PCR respectively. Results It was observed that, with 72h of treatment, 20nM and 200 nM 17B-estradiol significantly promoted the neuronal cell proliferation at 33% and 36% ;20nM and 200nM genistein significantly promoted the neuronal cell proliferation at 15% and 13% ; 200nM daidzein significantly promoted the neuronal cell proliferation at 11% compared to the control (P＜0.05). Genistein and daidzein induced an significantly increase in the S phase arrest at (17.64 ± 0.43) % and (19.48 ± 1.01) % compared to the control (P ＜ 0. 05). Moreover, genistein and daidzein significantly increased the expression of mature BDNF and BDNF mRNA level (P＜0.05). The effect of genistein and daidzein on hippocampal neuronal cell proliferation was blocked by K252a, selective inhibitor of tyrosine kinase receptors. Conclusion Genistein and daidzein improved hippocampal neuronal cell proliferation and viability in vitro. The effects might be mediated by increasing in BDNF expression.