阿尔茨海默病的Aβ表达与APOE、PS1基因的相关分析

目的 研究阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)的APP基因中Aβ表达量与载脂蛋白E(APOE)基因和早老素1(PS1)基因间相互关系.方法 应用竞争RT-PCR技术,测定52例AD患者、28例血管性痴呆(VD)患者及60名健康老人的外周单核血细胞中Aβ相对半定量表达量(amole/1μg cDNA),以及采用PCR-RFLP方法检测所有研究对象的APOE基因和PS1基因的多态性分布.疾病诊断按DSM Ⅲ-R标准.结果 APOEε4等位基因和PS1的各种基因型对AD患者、VD患者和健康老人的Aβ表达量无显著性的影响,AD患者的Aβ表达量高于其它两组.结论 APOEε4等位基因和PS1基因多态性分布对AD患者的Aβ过度表达无显著性的作用.     

Alzheimer病和血管性痴呆患者APOE及LRP基因多态性与认知及精神行为症状相关性研究

目的 探讨Alzheimer病(AD)和血管性痴呆(VD)患者APOE及LRP基因多态性与认知及精神行为症状(BPSD)的相关性.方法 收集AD患者79例、VD患者85例和健康对照者(对照组)156名,采用简易精神状态检查量表(MMSE)评定认知功能;采用简明精神病量表和汉密尔顿抑郁(HAMD)、焦虑量表(HAMA)评定BPSD.采用PCR-RFLP进行APOEε、LRP基因分型.结果 (1)AD组(17.7％)及VD组(20.5％)APOEε4等位基因频率均高于对照组(5.7％,均P＜0.01).(2)AD组和VD组APOEε4携带者MMSE得分均低于同组APOEε4非携带者[AD组(13.84±2.32)分vs.(14.78±2.54)分,P＜0.01;VD组(15.53±1.87)分vs.(18.45±2.23)分,P＜0.01].(3)AD组患者APOEe4携带者BPSD比例明显高于APOEε4非携带者(55.56％ vs.52.83％,P=0.039).结论 APOEε4可能是AD、VD患者认知障碍的共同危险因素.APOEε4可能是AD的BPSD危险因素.     

APOE基因多态性与抑郁症和痴呆的关联分析

目的：探索基因与抑郁症和痴呆的关联。方法：对42例单相抑郁症,39例双相抑郁症,40例痴呆和100例健康对照者进行载脂蛋白E（appolipoprotein,APOE)基因分型,计算基因频率,并对抑郁症、痴呆与APOE基因多态性进行关联分析。结果：抑郁症和痴呆的APOEε2等位基因频率比对照组低,单相抑郁症和痴呆的APOEε4等位基因频率高于对照组,且APOEε4等位基因与痴呆密切关联。结论：APOEε2基因可能是抑郁的保护因子,痴呆与单相抑郁症可能分享共同的发病因子。     

多巴胺β羟化酶基因内含子5区A1/A2多态与帕金森病的相关研究

帕金森病 (ＰＤ)作为一种危及人类生存生活质量的老年神经退行性疾病 ,其多种临床表现均与脑区黑质纹状体多巴胺浓度的降低有关 ,故与多巴胺系统代谢相关的基因已成为ＰＤ临床分子遗传学研究的热点。本研究主要探讨多巴胺β羟化酶 (ＤＢＨ)基因内含子 5区Ａ1/Ａ2多态在ＰＤ发病风险中的意义 ,并试图为ＰＤ的早期诊断提供可靠的生物学标记。1 研究对象 :原发性ＰＤ患者 35例 (男 16例 ,女 19例 ) ,年龄 4 3～ 79岁 ,平均 (6 2 3± 14 1)岁 ,源于我院神经内科门诊病人 ,诊断符合全国第一届锥体外系疾病会议制定标准。对照组 5 0例 (男 2 3例…     

Aβ寡聚体损伤PC12细胞毒性研究

目的研究Aβ寡聚体对PC12细胞的毒性损伤作用及机制。方法不同比例的Aβ42/Aβ40 Aβ寡聚体作用于PC12细胞构建AD模型,分别应用CCK-8检测细胞活力、ELISA法检测Aβ42蛋白含量,Western blot法检测凋亡相关蛋白Caspase 3表达、自噬相关蛋白Beclin 1及PS1蛋白表达。结果 Aβ42/Aβ40不同比例寡聚体作用于PC12细胞:Aβ42比例越大,Aβ的表达及凋亡越明显,且具有剂量依赖性; PC12细胞活力一定浓度范围呈现增强,超过一定范围后其活力下降; Aβ42/Aβ40对细胞自噬的激活在一定的浓度范围内有效,当浓度过大时,细胞自噬减弱,引起细胞损伤;不同比例Aβ寡聚体损伤PC12细胞,PS1的表达水平无差异。结论 (1) Aβ损伤PC12细胞AD早期细胞模型构建成功;(2) Aβ寡聚体损伤PC12细胞Beclin1蛋白在一定的浓度范围内表达增加,自噬受激活,当Aβ42的浓度达到某一浓度时,Beclin1蛋白的表达减低,自噬被抑制;(3) Aβ寡聚体不改变细胞内PS1的表达水平,其可能通过改变PS1的结构和功能引起Aβ沉积。     

ApoE和Slco1B1基因多态性与缺血性脑卒中的相关性分析

目的 探讨汉川市汉族人群ApoE基因和Slco1B基因多态性与缺血性脑卒中的相关性。方法 收集450例缺血性脑卒中患者(实验组)和健康对照人群(对照组)的血液,通过直接测序法分析对照组和实验组人群ApoE和Slco1B1基因型; Hardy-Weinberg平衡定律检测遗传平衡性。结果(1)ApoE基因型频率符合Hardy-Weinberg平衡定律(P=0.982),ApoE基因型可能与缺血性脑卒中有关(P=0.034);(2)Slco1B1基因型频率符合Hardy-Weinberg平衡定律(P=0.469),Slco1B1基因型可能与缺血性脑卒中有关(P=0.031)。结论 汉川市汉族人群ApoE基因和Slco1B1基因多态性可能与缺血性脑卒中有关。     

阿尔茨海默病患者NQO1基因与apoE基因关联性分析

近年研究发现 ,阿尔茨海默病 (Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ′ｓｄｉｓｅａｓｅ,ＡＤ)的发病可能与自由基生成增加有关。ＮＡＤ(Ｐ)Ｈ :醌氧化还原酶(ＮＱＯ1)是一种黄素酶 ,可催化醌双电子还原 ,使氧自由基的生产减少。ＮＱＯ1基因 6 0 9位点的Ｃ→Ｔ点突变可导致该酶的活性缺乏 ,使氧自由基生成增加。为探讨ＮＱＯ1基因 6 0 9位点Ｃ→Ｔ点突变产生的多态性与散发性阿尔茨海默病(ＳＡＤ)发病关系及其与ａｐｏＥ基因多态性的相互作用 ,我们对ＳＡＤ患者的ａｐｏＥ基因、ＮＱＯ1基因多态性及其相互作用进行了研究。资料和方法 :ＳＡＤ组 92例 ,男 30例…     

α1-抗糜蛋白酶基因、早老素1基因 与阿尔茨海默病的相关分析

目的探讨中国汉族人中α１抗糜蛋白酶（ＡＡＣＴ）基因、早老素１（ＰＳ１）基因多态性与阿尔茨海默病（Ａｌｚｈｅｉｍｅｒｓｄｉｓｅａｓｅ,ＡＤ）的相关情况。方法应用ＰＣＲＲＦＬＰ方法,在１２３例患者和１４０例正常人中观察ＡＡＣＴ信号肽和ＰＳ１基因多态性的分布,进行关联分析。结果１ＡＤ患者与ＰＳ１基因等位基因１正关联,与等位基因２和基因型２／２负关联,但与１／１基因型无关;２ＡＡＣＴ信号肽基因多态性与ＡＤ无关联;３在三种ＰＳ１基因型中,ＡＡＣＴ信号肽基因多态性与ＡＤ均无关;４在ＡＡＣＴ基因ＡＡ、ＴＴ基因型中,ＰＳ１基因多态性与ＡＤ负关联,而ＴＡ型中ＰＳ１基因与ＡＤ无显著相关。结论中国人群中,ＡＤ与ＰＳ１基因２／２型负关联,而与ＡＡＣＴ信号肽基因多态性无关;ＡＡＣＴ信号肽和ＰＳ１基因多态性之间也无明显的相互影响。     

阿尔茨海默病患者Aβ40测定与载脂蛋白E基因关系

目的:探讨阿尔茨海默病(AD)患者体内β淀粉样蛋白(Aβ)的代谢异常。方法:随机选取70例正常人(对照组)、55例AD患者,检验其血浆中Aβ40水平和载脂蛋白E基因(ApoE)多态性,将AD按轻、中重度和不同ApoE基因型分组后与相应的对照组进行比较。结果:AD组、轻度AD组Aβ40较对照组差异无显著性(P>0.05);中重度AD组Aβ40较对照组升高,差异有显著性(P<0.05);有ApoEε4AD组较相应对照组Aβ40升高,有显著性差异(P<0.05),其它组别无显著性差异(P>0.05)。结论:AD患者体内Aβ40异常,与疾病的严重程度相关,与ApoEε4基因型相关。     

阿尔茨海默病自身抗Aβ抗体对血浆Aβ水平的影响

目的通过比较有无自身抗Aβ抗体的阿尔茨海默病(AD)患者和年龄匹配的健康老年对照者(aNC)血浆Aβ水平之间差异,研究自身抗Aβ抗体对血浆Aβ水平的影响。方法113例AD患者和155例aNC的血浆对Tg2576小鼠大脑组织连续切片进行免疫染色,并进行组织淀粉样蛋白免疫反应(TAPIR)测定。随后,TAPIR阳性和阴性血浆分别与人工合成的Aβ40、Aβ42进行免疫沉降,免疫沉降物经过western blot检测分析其免疫特性。最后通过一种双抗体夹心的ELISA精确定量所有血浆的Aβ水平。结果(1)自身抗Aβ抗体无差异地频繁出现于AD患者(45．1%)和aNC中(41．3%)(P＞0．05),并在免疫沉降过程中表现出与Aβ40更强的亲和力。(2)两组TAPIR 和TAPIR-血浆的Aβ40和Aβ42水平比较均无显著性差异(P＞0．05)。结论自身抗Aβ抗体不足以影响血浆Aβ水平,人类抗Aβ抗体产生和作用机制可能有别于转基因AD动物模型。     

载脂蛋白E基因内含子1增强子多态与阿尔茨海默病的相关分析

载脂蛋白Ｅ(ａｐｏＥ)基因ε4 等位基因是中国上海汉族人群中阿尔茨海默病 (ＡＤ)的主要易感因子 ,但仅与约 5 0 %的ＡＤ患者有关[1] 。而ＡＤ作为一种复杂性状遗传的多基因疾病 ,则可能存在其他诸多遗传因素或环境因子的参与。我们选择位于ａｐｏＥ基因内含子 1中的增强子 (ＩＥ1)元件的Ｇ/Ｃ多态 ,采用聚合酶链反应和限制性片段长度多态性方法 ,探讨中国人群中载脂蛋白Ｅ基因ＩＥ1多态在ＡＤ发病风险中的意义及其对ε4 等位基因作用的影响。对象　 (1)ＡＤ组 :共 10 5例ＡＤ患者 ,均由上海精神卫生中心提供 ,均符合美国精神疾病诊断统计手…     

Aβ1-40对PC12细胞突触素表达的影响

目的探讨β-淀粉样蛋白(Aβ1-40)诱导PC12细胞凋亡,对突触素的表达影响。方法星形胶质细胞诱导PC12细胞分化为神经元样细胞。PC12细胞随机分为7组:Aβ1-40(0h)组～Aβ1-40(24h)组和对照组。应用MTT法检测细胞生存率,吖啶橙染色、流式细胞仪观察PC12细胞凋亡情况,应用免疫荧光技术检测突触素的表达变化。结果 Aβ1-40作用PC12细胞6h时,细胞生存率明显下降,细胞出现凋亡特征改变,细胞凋亡率最高,与对照组、其他各时间点比较,差异有统计学意义(P<0.05);Aβ1-40作用PC12细胞4h时,突触素明显减少,与对照组、其他各时间点相比,差异有统计学意义(P<0.05)。结论在Aβ1-40诱导大量PC12细胞明显出现凋亡特征之前,Aβ已经引起PC12细胞突触素明显减低,β-淀粉样蛋白(Aβ)可能引起PC12细胞早期神经突触损伤。     

早老素-1对阿尔茨海默病相关蛋白调节的可能途径

阿尔茨海默病（Alzheimer disease,AD)是成人痴呆症中最常见的一种,其中约105为显性遗传的家族性阿尔茨海默病（familial Alzheimer disease,FAD)。自从Sherrington首次报道早老素－1（presenilin-1,PS-1),并随后发现另1条与它高度同源的基因早老素－2（PS－2）以及药50％－80％FAD与它们突变有关以来,老素（PS）已成为AD研究的热点。但迄今为止,PS的功能尚不清楚。越来越多的语气表明,PS－1参与notch、wnt信息传导途径的调节,并藉此在AD发病中起重作用。     

脑微出血患者血清Aβ1-40 Aβ1-42的检测及意义

目的 探讨对脑微出血患者进行血清Aβ1-40、Aβ1-42检测的意义.方法 选择2015-04—2016-04我院收治的45例急性腔隙性梗死患者为观察组,并选取同期在我院接受治疗的无急性腔隙性梗死的43例患者为对照组.分别检测2组患者的血清Aβ1-40和Aβ1-42水平,并进行比较.结果 观察组患者血清Aβ1-40水平明显高于对照组,而Aβ1-42水平则明显低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05).结论 血清Aβ1-40、Aβ1-42的检测是诊断脑微出血的重要方法,Aβ1-40、Aβ1-42水平能够准确反映患者脑微出血情况.     

早老素1基因多态性与迟发性阿尔茨海默病的遗传相关研究

目的 对中国广州汉族人群的早老素１（ＰＳ１）基因内含子８多态性与迟发性阿尔茨海默病（ＡＤ）进行关联分析。方法 应用聚合酶链反应和限制性片段长度多态性方法,检测１０４例迟发性ＡＤ患者（ＡＤ组）和１０６名正常老年人（对照组）的ＰＳ１基因内含子８的多态性,并对ＡＤ与ＰＳ１基因各等位基因及基因型进行了关联分析。结果 （１）ＡＤ患者组的ＰＳＩ等位基因１的频率（０．６０）高于对照组（０．４８）,等位基因２的频     

Aβ40诱导SD大鼠海马细胞凋亡相关蛋白p53的表达

目的探讨β淀粉样蛋白40(Aβ40)诱导凋亡相关蛋白p53蛋白的表达及其与细胞凋亡的关系。方法实验组将Aβ40立体定向微注射至双侧大鼠海马的CA1、CA2-CA3区诱发其沉积．对照组注射等容量的生理盐水。通过p53单克隆抗体免疫组化法观察凋亡相关蛋白p53的表达，并通过原位TdT末端标记(TUNEL)法、透射式电镜法观察了Aβ40的脑内致凋亡效应。结果术后3d、7d的实验组大鼠切片上可见海马区明显的p53蛋白的表达，生理盐水对照组大鼠的相应切片检测未见p53蛋白的表达；术后3d、7d的TUNEL染色切片上可见海马区明显棕褐色阳性着染的凋亡细胞，生理盐水对照组的大鼠海马切片上未见TUNEL染色阳性的凋亡细胞；术后3d、7d的透射式电镜观察发现．实验组大鼠组织切片上可见明显的细胞凋亡征象，凋亡细胞的核染色质呈现环状、凝块状或星月状小体(凋亡小体)．对照组未见明显的细胞凋亡征象。结论实验结果提示，Aβ40可诱导p53蛋白的表达，p53蛋白可能参与了大鼠海马神经细胞的凋亡活动。     

Aβ3-10s基因疫苗免疫AD小鼠诱导Th2型免疫反应的研究

目的探讨新型AD疫苗AdCpG-(Aβ3-10)10诱导转基因小鼠产生的免疫反应类型。方法将人工合成的Aβ3-10的基因片段插入到真核表达质粒pcDNA3.1+,以CpG为基因佐剂,使用E1/E3缺陷的腺病毒载体pAxCAwtit作为基因载体,获得基因重组缺陷腺病毒AdCpG-(Aβ3-10)10。以3月龄的转基因小鼠18只为研究对象,实验分为3组,每组各6只小鼠:免疫含有目的基因的AdCpG-(Aβ3-10)10组、不含目的基因的AdCpG组及Aβ1-42全肽链组。各组均经鼻粘膜分别免疫AdCpG-(Aβ3-10)10、不含目的基因的AdCpG及Aβ1-42全肽链,每组均免疫8次,每3个月1次。用ELISA方法检测小鼠血清中IgG抗体含量及抗体分型,用MTT方法观察脾细胞增值反应;用ELISA法检测IL-2、IL-4、IL-10及γ-干扰素等细胞因子含量。结果小鼠经过6次免疫后,AdCpG-(Aβ3-10)10组和Aβ1-42组抗Aβ42 IgG抗体浓度分别为21.17±1.59ng/ml、23.93±1.66ng/ml,较AdCpG组(1.08±0.16)明显升高(P<0.05),但AdCpG-(Aβ3-10)10组的IgG1/IgG2a(12.94±3.79)较Aβ1-42组的IgG1/IgG2a(6.13±2.21)明显增高(P<0.01);AdCpG-(Aβ3-10)10组和Aβ1-42组的脾细胞在体外培养,经Con A刺激后细胞增殖明显,OD值分别为0.37±0.059,0.3237±0.048与AdCpG(0.1692±0.072)比较有明显差异(P<0.05)。经AdCpG-(Aβ3-10)10免疫的小鼠脾细胞体外培养液中IL-4和IL-10含量分别为342.34±45.68μg/ml、329.46±112.99μg/ml,经Aβ1-42免疫的小鼠脾细胞体外培养液中IL-2、INF-γ、IL-4和IL-10含量分别为284.81±22.55μg/ml、361.96±26.47μg/ml、223.19±22.45μg/ml、258.68±102.42μg/ml,与AdCpG(149.03±27.34μg/ml、291.92±45.92μg/ml、169.52±25.68μg/ml、134.85±21.67μg/ml)比较有明显差异(P<0.05)。结论 AdCpG-(Aβ3-10)10主动免疫幼龄双转基因小鼠主要产生Th2型体液免疫应答反应,可以减少细胞免疫应答反应引起的炎性反应。     

阿尔茨海默病患者血浆脂联素与Aβ水平的变化

目的 探讨AD患者血浆脂联素、Aβ水平的变化及其与MMSE评分的关系。方法 对20例AD患者(AD组)、20例正常认知老年组的血浆脂联素、Aβ40和Aβ42水平进行检测,比较2组血浆脂联素和Aβ水平的差异,并分析血浆脂联素、Aβ与MMSE评分的关系。结果 AD组MMSE评分、血浆脂联素(APN)、Aβ42和Aβ42/Aβ40均低于对照组(P<0.05)。Aβ40水平与Aβ42水平呈显著正相关、与Aβ42/Aβ40呈显著负相关(P<0.01),Aβ42水平与APN水平呈显著正相关(P<0.05),MMSE评分与Aβ42、APN、Aβ42/Aβ40呈显著正相关(P<0.01)。结论 AD组血浆APN、Aβ42水平和Aβ42/Aβ40明显降低,其改变与认知功能评分存在一定的正相关性。     

淀粉样蛋白Aβ_(1-42)与α_1-抗糜蛋白酶反应的体外研究

目的研究淀粉样蛋白Aβ1-42与α1-抗糜蛋白酶(α1-antichymotrypsin,ACT)在体外动态反应的性质,为阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)发病机制的研究探索新的领域。方法Aβ1-42、ACT以10:1的摩尔比溶解于Tris缓冲液中,37℃下孵育7h形成复合物。SDS-PAGE及糜蛋白酶(chymotrypsin,CHY)干扰实验探索Aβ1-42/ACT复合物的性质;采用ACT蛋白酶抑制剂活性的化学计量法研究和荧光标记Aβ1-42的解离追踪计算Aβ1-42与ACT的结合速率和解离速率;定量分析Aβ1-42浓度对ACT活性的影响。结果Aβ1-42与ACT反应7h形成的复合物在SDS-PAGE电泳条件下不稳定,ACT仍具有蛋白酶抑制剂活性。Aβ1-42与ACT结合后,后者的蛋白酶抑制剂活性减弱约10倍(SI=1.1vsSI=10.5),并且在一定范围内ACT的活性随Aβ1-42浓度的增高而减弱。Aβ1-42/ACT的结合速率常数为1.7(M.s)-1,解离速率常数为1.4×10-5s-1,即37℃、PH值7.4条件下Aβ1-42与ACT的结合速率远远高于解离速率。结论体外定量实验证实Aβ1-42、ACT之间的动态反应可形成稳定复合物并最终使ACT丧失蛋白酶抑制剂活性,提示ACT在AD的发病中可能发挥着与Aβ1-42相关的重要作用。     

阿尔茨海默病与淀粉样β分泌酶基因的相关性研究

目的 探讨淀粉样β分泌酶(BACE)基因与阿尔茨海默病(AD)发病风险的关系。方法 采用聚合酶链反应和限制性片段长度多态方法，在上海121例汉族AD患者和165名正常人中检测BACEl 91 591C／G、BACE2 1158C／T及apoE基因多态的分布。按比值比(OR)做疾病关联分析。结果 (1)BACEl基因91591C／G多态G／G基因型、G等位基因均与AD显著关联[G／G基因型：OR＝2．072，95％可信区间(95％CI)＝1．259—3．412;G等位基因：OR＝1．626，95％CI＝1．155—2．289]；按apoEε4等位基因分层后，仅apEε4阳性者中存在显著相关(G／G基因型：OR＝5．339，95％CI＝1．627—17．523；G等位基因：OR＝2．203，95％CI＝1．149—4．226)。(2)AD患者与正常对照人群间BACE2基因1169C／T多态分布的差异无显著性(X^2＝0．645，v＝2，P＝0724)。结论 上海地区汉族人群中，BACEl基因可能协同apEε4基因，共同参与AD的发病风险。