参环毛蚓与赤子爱胜蚓的对比研究

目的:赤子爱胜蚓的抗栓活性可靠,为评价参环毛蚓的溶栓的药用价值,进行了相关的对比研究。方法:通过纤维蛋白平板试验对比活性,通过电泳法对比酶谱。结果:2种蚯蚓活性相近,参环毛蚓及赤子爱胜蚓的许多酶谱的分子量都相近,分子量多在60000以下,主要集中在30000左右。结论:参环毛蚓与赤子爱胜蚓活性与酶谱相近,具有进一步开发价值。     

参环毛蚓脂类挥发性成分分析

为了分析参环毛蚓（Ｐｈｅｒｅｔｉｍａ ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｍ）的脂类成分,我们采用不同溶剂索氏提取法,从该药材得到三种组分,用ＧＣ－ＭＳ法进行测定,确定了３６种化合物的结构。在这三种组分中,乙醚组分中的１１种成分均为脂为,不饱和脂肪酸的含量最高,占２７．７０％,如油酸、亚油酸、花生四烯酸和花生三烯酸。丙酮组分的脂类成分８种,占３５．７５％,不饱和脂肪酸只有亚油酸一种;乙醇组分的脂类成分１３种,占７     

参环毛蚓MT-2基因及启动子的克隆研究

目的揭示参环毛蚓MT-2基因的转录调控机制,为今后采用基因工程技术改良参环毛蚓重金属富集性状奠定基础。方法根据已知的MT-2c DNA序列,设计特异引物,通过PCR扩增参环毛蚓MT-2基因的编码区基因组序列,扩增产物经测序后自行比对分析。基于该序列设计3条特异引物,采用基因步移技术克隆其上游的启动子序列,同时运用Promoter Prediction在线软件分析预测其顺式元件。结果经PCR扩增、测序后获得2 826 bp MT-2基因编码区序列,将该序列与已知MT-2 c DNA序列(登录号为KC787373.1)进行比对,发现MT-2编码区由4个外显子和4个内含子组成。基因步移技术克隆得到1 534 bp的启动子序列,经Promoter Prediction在线软件分析,结果显示该序列不仅含有TATA-box、CAAT-box等核心启动子软件,还具有3个特异响应重金属参与调控MT-2表达的MRE元件。结论参环毛蚓的MT-2基因能被重金属诱导表达,MT-2基因转录水平的金属调控是通过MT-2基因启动子区的金属调控元件MRE来实现的。     

通俗环毛蚓的化学成分研究

目的：对中药通俗环毛蚓的化学成分进行分离鉴定。方法：乙醇、乙醚等溶剂提取物，用红外光谱仪和气相色谱-质谱联用方法以及氨基酸分析仪等技术鉴定化合物。结果：在通俗环毛蚓中测定有琥珀酸、18种脂肪酸和20种游离氨基酸。结论：通俗环毛蚓中的脂肪酸可能是其活性成分之一；另外其总游离氨基酸含量较高（含量为8.629%）。     

通俗环毛蚓的化学成分研究

从通俗环毛蚓[Pheretimavulgaris（chen）]（沪地龙），中提取分离得到一白色结晶，经红外光谱鉴定为玻珀酸（Amberacid）；用气相色谱一质谱联用方法，分析鉴定了其中18种脂肪酸，且油酸，花生烯酸和花生四烯酸的含量较高；用氨基酸分析仪鉴定了其中的20种游离氨基酸，总游离氨基酸含量为8．629％。     

参环毛蚓中溶栓活性蛋白酶的纯化和检测

参环毛蚓Pheretima aspergillum (E．Perrier)为《中华人民共和国药典》2000年版一部中收载的地龙药材来源之一。地龙始载于《神农本草经》，具有通络、利尿、清热、定惊、平喘之功，临床常用于高热神昏、惊厥抽搐、关节痹痛、半身不遂、高血压等。日本学者从赤子爱胜蚓中提取出类似尿激酶的物质，     

参环毛蚓对重金属镉离子耐受能力的考察

目的考察参环毛蚓对重金属镉离子的耐受能力,为进一步探索参环毛蚓富集重金属机制提供实验依据。方法在菜园土壤基础上设置7个组别的不同浓度的重金属镉污染环境,观察人工饲养条件下参环毛蚓在不同浓度镉离子环境中的生存状态,并利用原子吸收分光光度法分别测定参环毛蚓不同部位的镉离子量。结果参环毛蚓在土壤镉离子量为40倍、50倍两组养殖7 d后死亡;30倍组在10 d以后也有两条死亡,其余各组生长情况良好;参环毛蚓体内镉离子浓度随土壤镉离子浓度递增而增加。参环毛蚓能够在土壤中镉离子浓度12 mg/kg以下生存良好,其体内脏器中镉浓度可高达70~90 mg/kg。该浓度是中国对外贸易经济合作部发布的《药用植物及制剂进出口绿色行业标准》中镉限量指标的233~300倍。结论参环毛蚓对重金属镉离子的耐受能力极强,这可能是其药材重金属超标的重要原因之一。     

镉胁迫条件下对参环毛蚓体壁结构影响的研究

目的:研究不同浓度镉离子胁迫条件下对参环毛蚓体壁肌肉结构的影响,探索重金属镉在参环毛蚓体内的生物富集部位。方法:采用不同浓度镉离子胁迫参环毛蚓染毒,HE组织切片染色,光学显微镜下观察体壁肌肉结构的变化,以分析参环毛蚓富集重金属的方式。结果:内侧的斜纹肌损伤要明显比体壁外侧的环肌肉层要严重得多。结论:参环毛蚓体壁的损伤来源于其身体的内部,即对其构成损伤的物质来源于肠道的主动吸收,而不是通过其表皮的被动扩散吸收。     

参环毛蚓对土壤含水量及pH值因子的选择研究

目的 考察参环毛蚓对土壤含水量、pH值二因子的选择性,建立其生活所需要的土壤含水量、pH值单因子数学模型.方法 在养殖槽内设置不同土壤含水量、pH值区域,由参环毛蚓选择适宜的生活区域.结果 参环毛蚓生活适宜的土壤含水量为18.2%～24.6%,pH值为3.7～5.5.结论 参环毛蚓选择在湿度适中,偏酸性的土壤中生活;高湿及较干燥,强酸性和碱性的土壤不适宜其生活.     

中药地龙中参环毛蚓环介导等温扩增快速检测方法

[目的]建立中药材地龙中参环毛蚓的环介导等温扩增(LAMP)检测技术,实现对参环毛蚓的快速检测.[方法]采集不同产地地龙,提取总DNA后将所提取的总DNA进行线粒体细胞色素氧化酶Ⅰ亚基(COI)基因片段扩增、测序、比对,判断各产地地龙物种.用设计的LAMP引物组进行地龙LAMP实验,反应结束后向扩增产物中加入核酸染料S...     

参环毛蚓体内核苷磷酸化酶的活性测定及动力学分析

目的 建立参环毛蚓体内嘌呤核苷磷酸化酶（PNP）的检测方法,以肌苷为底物,评价该酶的活性。方法 采用HPLC法,色谱条件：Ecosil C18-AQ柱（250 mm×4.6 mm,5 μm）,流动相为10 mmol·L-1磷酸二氢铵缓冲液（pH4.5）和甲醇,梯度洗脱,流速为0.8 mL·min-1,柱温为室温,检测波长254 nm,用底物肌苷与组织粗蛋白提取液在室温孵育30 min,沸水煮5 min终止反应,12000 r·min-1离心10 min,取上清过滤后进行HPLC分析,以OriginPro 8.5软件作图,计算酶动力学参数。结果 酶反应中产物次黄嘌呤在0.5～40 μmol·L-1范围内呈良好的线性关系（r=0.9996）;精密度小于3.5 %,回收率大于80 %。PNP酶动力学参数：Vmax为0.015 nmol·min-1·mg-1,Km为19.8 μmol·L-1。结论 成功构建了参环毛蚓体内次黄嘌呤代谢酶活性测定相关的实验体系,该法所得数据稳定可靠,可准确反映关键酶活性的动态变化。     

地龙（参环毛蚓）配方颗粒的位点特异性PCR鉴别

目的 为保障临床用药的安全性和有效性,建立地龙（参环毛蚓）药材及其加工制品混伪、掺假特异性聚合酶链式反应（PCR）鉴定方法。方法 根据地龙氧化酶亚基1（COⅠ）基因序列筛选出地龙配方颗粒的稳定引物区间,并根据区间内筛选获得地龙的特异性单核苷酸多态性（SNP）位点,根据SNP位点设计地龙特异性鉴别引物dlshmy-F及dlshmy-R,分别采集地龙及其混伪品,建立地龙配方颗粒特异性PCR鉴别方法并优化PCR反应体系,对该方法进行耐受性和适用性考察。结果 退火温度为62 ℃,循环次数为36次,地龙及其配方颗粒经PCR反应及凝胶电泳后,可在约170 bp处观察到单一明亮的特异性鉴别条带,其他近源伪品如通俗环毛蚓、保宁腔蚓、栉盲环毛蚓等20种伪品及阴性对照均无条带。结论 该研究建立的特异性PCR鉴别方法可快速准确的鉴别出地龙药材、配方颗粒、冻干粉中的参环毛蚓源性成分,准确鉴定出全国广地龙中药材及饮片以及地龙的基原,也可为其他的中药配方颗粒质量标准研究提供了参考。     

通俗环毛蚓抗血栓活性蛋白成分的快速富集及活性考察

目的 以地龙品种中的通俗环毛蚓为研究对象,对其蛋白总提物进行纯化富集以获得抗血栓活性蛋白成分（PvQ）,对PvQ进行抗血栓活性研究,以期为地龙的抗血栓物质基础研究提供参考。方法 采用AKTA-Pure型蛋白纯化系统,以体外活性为导向,富集通俗环毛蚓PvQ;采用纤维蛋白平板法、纤维蛋白原-凝血酶时间法（Fibg-TT法）对PvQ的纤溶及抗凝活性进行测定;利用体外血栓溶解试验评价PvQ对体外血栓的溶解能力,同时,考察了不同温度及pH对PvQ活性的影响。结果 成功富集得到通俗环毛蚓PvQ,活性测定表明其具有显著的纤溶及抗凝活性。体外血栓试验结果显示,37 ℃孵育5 h后PvQ可水解超过80%的血栓块。此外,温度和pH对于PvQ活性影响显著,在≥60 ℃或酸性条件（pH<7）下PvQ活性显著降低或失活,而在≤50 ℃和碱性条件下PvQ活性则不受影响或受较少影响。结论 建立了可行的通俗环毛蚓PvQ制备方法,PvQ可同时作用于纤维蛋白和纤维蛋白原,从而发挥双重纤溶作用,表现出良好的纤溶及抗凝活性,为其用于治疗血栓性疾病提供了科学阐释,并可为地龙抗血栓蛋白类产品的开发提供参考。     

基于磁珠配体垂钓和液相色谱-质谱联用技术的威廉环毛蚓抗血栓大分子活性成分研究

目的 通过构建靶蛋白固定化磁珠,从威廉环毛蚓Pheretima guillemi中垂钓出与靶蛋白（纤维蛋白原、纤溶酶原）直接作用的抗血栓活性大分子成分,并经液相色谱-质谱联用（LC-MS/MS）技术鉴定。方法 优化并合成纤维蛋白原、纤溶酶原固定化羧基磁珠,分别通过固定化量、透射电镜、傅里叶红外光谱仪、激光纳米粒度分析仪表征功能化磁珠的靶蛋白固定量、微观形态、官能团及表面带电性;利用功能化磁珠从威廉环毛蚓抗血栓部位DPf3中垂钓与靶蛋白直接作用的抗血栓大分子活性成分,洗脱后经LC-MS/MS技术分析,并结合威廉环毛蚓物种蛋白质数据库比对鉴定。结果 靶蛋白固定化磁珠的最佳制备方案为将纤维蛋白原（0.4 mg/mL）或纤溶酶原（1 mg/mL）与磁珠于4 ℃混旋孵育8 h,纤维蛋白原和纤溶酶原的最大偶联量分别为（9.84±2.17）μg/mg和（7.24±0.91）μg/mg;经表征,靶蛋白均已成功固定于磁珠表面。DPf3经纤维蛋白原、纤溶酶原固定化磁珠垂钓所得洗脱液经扫描比对,分别鉴定到20种和27种蛋白质,多属于丝氨酸蛋白酶类成分。结论 通过磁珠配体垂钓策略和LC-MS/MS技术可从威廉环毛蚓中快速筛选和鉴定目标生物活性大分子,可为动物类中药大分子的分离鉴定提供参考。     

人工养殖白花蛇

<正> 白花蛇出产在广东省汕头专区揭陽、普宁、湖陽等县;毒性猛烈,人被咬伤如不及时救治,10至25分锺即会毒发死亡。白花蛇多野生在坟墓里,桥头边和水浸不到的土堆、田岸孔洞中。白天在洞内,晚上七时后才出洞觅食乘凉。故多在黄昏时捕捉。捕蛇必须注意几个原则:蛇在外面游动时应捉蛇尾;蛇在洞内时应抓蛇头;睡着时必须弄醒后再捕,不然突被惊吓则会咬人;母蛇在孵小蛇时,毒性最烈,切勿捕捉;捕捉时勿使手指甲触痛蛇身。被蛇咬伤后,伤口最怕風怕冷,勿喝     

水蛭的人工养殖

水蛭的人工养殖张秀学(安徽省肥东县杨圹乡黄李中药材栽培实验站231623)水蛭为水蛭科动物日本医蛭Hirudonip-poniaWhitman,宽体金线蛭Whitmaniapigra(Whitman),茶色蛭W.acranulata(Whitmaa),细齿金线蛭W.edentula(Whitman),别名蚂蟥、肉钻子,它以干燥全体入药,含有水蛭素和蛋白质,有抗凝固、破瘀血的功效,主治血栓病、血管病、青光眼、瘀血不通、无名肿毒、淋巴结核等症。由于国内外对水蛭的需求量较大,供需矛盾突出,近几年来已....     

人工伪造别直参的鉴别

人工伪造别直参的鉴别钱云川②别直参又称朝鲜红参、高丽参。本品价格昂贵，尤其在货源紧俏时，常出现伪品，应特别注意对比鉴别。１正品别直参正品根据质地和色泽分为天字（一级品）、地字（二级品）、人字（三级品）、翁字（四级品），以示级别，并根据体积重量分为１０...     

刺猬的人工养殖研究（Ⅱ）

三、刺猬的繁殖 1.一般情况刺猬在出生后11—12个月便能达到性的成熟,当年生的第一胎幼猬,翌年春天便可繁殖。刺猬最早在初春交配,怀孕期35天左右,哺乳期约40天。年产1—2胎,每胎3—6仔。在产二胎的情况下,若三月底怀第一胎,则6月中旬可行第二次配种,7月下旬可产出第二胎。第二胎分娩日期也可迟至     

刺猬的人工养殖研究（Ⅰ）

刺猬的皮常用作中药材。其肉、脂、脑、心肝、胆等均能入药。但由于野生刺猬数量下降,中药市场供不应求。为确保用药需要,合理开发利用,我们对刺猬的人工养殖进行了系统的研究。现报道如下。一、刺猬的生物学特性 1.形态习性我国猬科(Erinaceidae)动物有6属7种。我们饲养的为普通刺猬Erinaceus europaeus L.,是体形较大而耳较短的一种。刺猬有乳头5对,雌的发达。雄猬成年体重500～600克,重者达1000余克,体长200余毫米,成年雌性的体重、体长与雄性近似。刺猬栖息在山地森林、平地草原、开垦或荒地、灌木或草丛等地。在树根、倒木下及石隙或旧