As4S4对人白血病细胞HL-60细胞COX-2表达和PGE2水平的影响

目的体外研究中药雄黄主要成分(As4S4)对白血病细胞HL-60细胞的增殖和诱导凋亡的作用及其可能的机制。方法以不同浓度的As4S4(7.5、15、30、60mmol/L),分别处理24h,48h,72hHL-60细胞,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定细胞增殖抑制率;流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡率;Western blot检测环氧合酶-2(COX-2)蛋白的表达,用放射免疫法检测细胞PGE2释放水平。结果不同浓度(7.5、15、30、60mmol/L)的As4S4处理的HL-60细胞,细胞增殖受到抑制,作用呈明显的时效和量效关系。24h时IC50为30mmo/L,与对照组相比,差异有显著性(P<0.01)。As4S4诱导HL-60细胞的凋亡率分别为(7.28±1.03)%、(26.98±2.21%)、(47.15±2.66)%、(61.73±3.12)%,与对照组比较(3.84±1.88)%,差异有极显著性(P<0.01),并呈浓度依赖性,As4S4明显抑制COX-2的活性和表达,随着浓度的增加,其COX-2蛋白表达逐渐降低,与对照组相比,差异有显著性(P<0.05);不同浓度As4S4作用24h,可明显抑制Hela细胞PGE2释放水平,其值分别为(70.56±2.03)、(48.58±2.28)、(29.25±1.57)和(18.02±1.04),与对照组比较(3.15±1.01)差异有显著性(P<0.01)。结论As4S4体外对HL-60细胞具有增殖抑制作用,并促进其凋亡,其机制可能与抑制COX-2活性表达和抑制细胞释放PGE2水平有关。     

丹皮酚体外对肝星状细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨丹皮酚对大鼠肝星状细胞(HSC)增殖和凋亡的影响。方法 HSC加入丹皮酚1.66～49.8 mg·L-1作用48 h后,MTT比色法和锥虫蓝染色法检测HSC的存活率。HSC与丹皮酚33.2 mg·L-1分别作用6,12,24,36和48 h,锥虫蓝染色法检测HSC的存活率。HSC与丹皮酚1.66～69.7 mg·L-1作用48 h用细胞乳酸脱氢酶(LDH)活性测定试剂盒检测细胞上清中LDH活性。丹皮酚1.66～49.8 mg·L-1与HSC作用24 h分别用光学显微镜、Hoechst 33258染色和流式细胞术检测HSC细胞形态、细胞凋亡和凋亡率;丹皮酚1.66～49.8 mg·L-1作用48 h用流式细胞术检测细胞周期。结果 MTT实验结果表明,丹皮酚16.6～49.8 mg·L-1对HSC增殖具有明显抑制作用,且具有浓度效应关系(r=0.955,P<0.05),作用48 h时IC50值为105.4 mg·L-1。锥虫蓝染色实验结果表明,丹皮酚对HSC存活率的抑制作用不仅具有浓度效应关系(r=-0.936,P<0.05),浓度为33.2 mg·L-1时还具有时间效应关系(r=-0.965,P<0.05)。丹皮酚16.6～69.7 mg·L-1作用48 h无明显细胞毒性。流式细胞仪检测结果显示,丹皮酚8.3～49.8 mg·L-1作用24 h能显著促进HSC细胞凋亡(P<0.05),且具有浓度效应关系(r=0.920,P<0.05)。丹皮酚33.2和49.8 mg·L-1作用48 h可调节细胞周期,G0/G1期细胞增加(P<0.01),S期细胞减少(P<0.01),具有浓度依赖性(r=0.980,P<0.05)。结论丹皮酚具有促进HSC凋亡和抑制HSC增殖的作用,可能是其抗肝纤维化作用机制之一。     

肝素诱导肝癌细胞凋亡及对凋亡相关蛋白表达的影响

目的探讨体外肝素刺激肝细胞癌(肝癌)细胞后凋亡相关蛋白的表达及其促进肝癌细胞凋亡的分子机制。方法采用DMEM培养液培养人肝癌细胞系huh7。将其达标细胞分别采用PBS(PBS组)或50 U/mL的肝素(肝素组)处理10 s。提取细胞蛋白,采用Western blot法检测各组Caspase-3、Caspase-9、Caspase-8和细胞色素C的表达。结果肝素组细胞凋亡相关蛋白Caspase-3、Caspase-9、Caspase-8和细胞色素C的表达均高于PBS组(P<0.01)。结论体外肝素刺激肝癌细胞系huh7后,内源性(线粒体)和外源性(死亡受体)细胞凋亡通路被激活,从而促进肝癌细胞凋亡。     

丹皮酚对过氧化氢诱导的PC12细胞凋亡的抑制作用(英文)

目的探讨丹皮酚对过氧化氢(H2O2)诱导的PC12细胞凋亡的抑制作用及其机制。方法建立H2O2致PC12细胞损伤模型,采用MTT法测定细胞存活率,流式细胞术测定细胞凋亡率及细胞内活性氧含量,化学比色法测定乳酸脱氢酶(LDH)释放量及细胞内丙二醛(MDA)含量。结果PC12细胞经H2O2100μmol.L-1处理10 h可致细胞存活率下降,并能诱导细胞凋亡,LDH释放量及细胞内活性氧和MDA含量明显增加;丹皮酚(12,25和50μmol.L-1)预处理1 h可提高细胞存活率,减少细胞凋亡、LDH释放量及细胞内活性氧和MDA含量。结论丹皮酚对H2O2诱导的PC12细胞凋亡具有抑制作用,该作用可能与其抗氧化作用有关。     

靶向Survivin基因siRNA诱导肝癌细胞凋亡的实验

目的探讨靶向survivin的siRNA转染肝癌细胞阻抑survivin表达,及其对肝癌细胞凋亡、增殖与细胞化疗敏感性的影响。方法设计合成特异性靶向survivin的siRNA序列。肝癌细胞株HepG2接种于6孔培养板内,分为5组:空白对照组、阴性对照组和低、中、高浓度转染组(分别给予50,100和200nmol.L-1siRNA转染)。作用36h后收集各组细胞。Westernblot法检测各组细胞survivin蛋白表达情况,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测survivinmRNA表达水平,流式细胞术检测各组细胞增殖和凋亡指数,四氮唑盐(MTT)法检测氟尿嘧啶(5-FU)和顺铂(DDP)对各组细胞的生长抑制率。结果各浓度siRNA转染组细胞survivin蛋白和mRNA表达有不同程度减弱。各浓度siRNA转染组细胞凋亡指数明显高于对照组(P<0.05),高浓度转染组最明显(P<0.05)。各浓度siRNA转染组细胞增殖指数明显低于各对照组(P<0.05),高浓度转染组最明显(P<0.05)。等浓度化疗药物5-FU和DDP对各浓度siRNA转染组细胞的抑制率明显高于对照组(P<0.05),高浓度转染组最明显(P<0.05)。结论不同浓度survivinsiRNA转染能下调survivin蛋白和mRNA表达,诱导肝癌细胞凋亡,抑制细胞增殖,增加肝癌细胞对化疗药物的敏感性。     

COX-2和Survivin在葡萄胎组织中的表达及意义

目的探讨环氧合酶-2（COX-2）和Survivin在葡萄胎组织中的表达及发病机制中的作用。方法用免疫组织化学PV-6000法检测葡萄胎组织中COX-2和Survivin蛋白的表达。结果葡萄胎恶变组织中COX-2和Survivin表达水平显著高于葡萄胎未恶变组织（P〈0．05）。结论COX-2和Survivin的高表达抑制葡萄胎组织的凋亡,其可能在葡萄胎的发生及发展中起重要作用。     

COX-2和P-gp在肝细胞癌中的表达及意义

目的 探讨环氧合酶2(COX-2)和P-糖蛋白(P-gp)在肝细胞癌(HCC)中的表达及与临床病理特征的关系.方法 应用免疫组织化学法检测116例HCC组织和癌旁组织COX-2和P-gp表达,分析其与临床病理特征的关系.结果 COX-2在HCC组织中的高表达率明显低于癌旁组织(61.2％ vs.98.3％) (P＜0.01),在中高分化组中的高表达率明显高于低分化组(69.5％vs.52.6％) (P＜0.05),在甲胎蛋白(AFP)增高组中的高表达率明显低于AFP正常组(55.1％vs.73.7％) (P＜0.05).P-gp在HCC组织中的高表达率明显高于癌旁组织(50.0％ vs.3.5 ％)(P＜0.01),在合并有肝硬化组中的高表达率明显低于无肝硬化组(42.3％ vs.65.8％) (P＜0.05).结论COX-2在HCC组织中具有较高表达,是反应HCC生物学行为的有效指标,对HCC的发生发展可能具有一定作用,有望成为HCC基因治疗的靶点.     

选择性COX-2抑制剂NS-398诱导白血病细胞凋亡的作用机制

目的探讨选择性环氧合酶-2(COX-2)抑制剂NS-398诱导白血病细胞系K562细胞凋亡的分子机制。方法采用流式细胞术检测细胞凋亡;采用蛋白印迹法(Western blot)检测凋亡相关蛋白Bcl-2、半胱氨酸酶-3(Caspase-3)的表达;并应用流式细胞术检测Caspase-3的活性。结果①NS-398作用K562细胞24h后,对照组未出现凋亡峰,各药物处理组(100~400μmol·L-1)均出现明显的凋亡峰,其凋亡率分别为(10.51±1.04)%、(27.79±2.40)%、(45.72±3.32)%和(60.22±2.03)%(P<0.01)。②不同浓度NS-398处理后,K562细胞中Bcl-2蛋白表达下降,而Caspase-3蛋白表达增加,与对照组相比差异具有显著性(P<0.05)。③NS-398能以剂量依赖方式促进Caspase-3活性的增加,表达活化Caspase-3的细胞百分率分别为(2.67±0.22)%、(9.53±0.15)%、(21.28±0.43)%、(39.63±0.8)%和(63.40±0.69)%(P<0.01)。结论选择性COX-2抑制剂NS-398可能通过调节Bcl-2蛋白表达、活化Caspase-3,从而诱导白血病K562细胞凋亡。     

蜂毒素对人肝癌BEL-7402细胞增殖和VEGF、bFGF表达的影响

目的研究蜂毒素(Melittin,Mel)对人肝癌细胞株BEL-7402增殖及VEGF、bFGF表达的影响。方法应用MTT法检测Mel对人肝癌BEL-7402细胞增殖的影响;采用ELISA法和免疫细胞化学法检测VEGF和bFGF的表达。实时荧光定量PCR检测VEGF mRNA和bFGF mRNA的变化。结果 Mel可明显抑制BEL-7402细胞的增殖活性,且具有浓度和时间依赖性。经Mel作用24、48和72 h后的IC50分别为6.80、5.47和4.87 mg·L-1。Mel(2.0、4.0、8.0mg·L-1)作用24 h后,能明显降低BEL-7402细胞上清液中VEGF及bFGF的含量(P<0.05或P<0.01),并可下调VEGF和bFGF的蛋白表达(P<0.01)。荧光定量PCR检测显示,Mel能降低BEL-7402细胞VEGF mRNA和bFGFmRNA的转录水平(P<0.01)。结论 Mel具有抑制人肝癌细胞株BEL-7402增殖的作用,并可下调促血管生成因子VEGF和bFGF的表达,有可能阻碍肿瘤血管生成。     

Survivin、xiap、apollon和livin反义寡核苷酸对人消化系肿瘤细胞增殖及凋亡的影响

目的观察凋亡抑制蛋白(inhibitor of apoptosis proteins,IAPs)家族survivin、xiap、apollon和livin反义寡核苷酸(antisense oligodeoxynucleotide,ASO)对人消化系肿瘤细胞增殖、凋亡的影响。方法人工合成survivin、xiap、apol-lon、livin的反义核酸和随机序列,经脂质体包裹后作用肝癌细胞、胃癌细胞、结肠癌细胞48 h后,采用WST-8法观察对细胞增殖的影响,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果 IAPs ASO作用于肝癌HepG2细胞、胃癌MGC-803细胞、结肠癌Lovo细胞48 h后,与空白对照组(control)和随机寡核苷酸(random oligodeoxynucleotide,RODN)对照组相比,IAPs ASO能明显抑制肝癌细胞、胃癌细胞、结肠癌细胞的增殖和诱导细胞凋亡(P<0.01)。其中,在作用浓度为0.2μmol.L-1时,survivin ASO对HepG2、Lovo细胞的增殖抑制率最高,分别为84.2%、82.6%。xiap ASO对MGC-803细胞的增殖抑制率最高,为86.56%,并呈时间-剂量依赖效应。survivin ASO诱导Lovo细胞、MGC-803细胞凋亡作用最强,凋亡率为34.95%、27.6%,livin ASO诱导HepG2细胞凋亡作用最强,凋亡率为27.4%。结论针对凋亡抑制蛋白家族survivin、xiap、apollon、livin的反义核酸均能有效抑制消化系肿瘤细胞增殖,并诱导细胞凋亡。     

环氧化酶-2催化的前列腺素信号在肝细胞癌中作用

肝细胞癌(HCC)患者总生存时间很短,目前尚无有效的二级预防和全身治疗。环氧化酶-2(COX-2)催化产生的前列腺素E2(PGE2)信号为HCC提供新的治疗具有重要的意义。本综述总结COX-2-PGE2-PGE2受体信号在HCC发生的机制,为有效的化学预防及新的治疗策略提供思路。     

金蒲抑瘤片诱导体外培养的人肝癌BEL-7404细胞凋亡的实验研究

目的：探讨金蒲抑瘤片体外对肝癌细胞的诱导凋亡作用。方法：应用MTT法、生长曲线、荧光染色、血清药理学、DNA凝胶电泳等实验技术研究金蒲抑瘤片体外对BEL－7404细胞的增殖抑制和诱导细胞凋亡的作用。结果：金蒲抑瘤片体外对BEL－7404细胞有明显的抑制作用，且这种抑制作用呈浓度依赖性。经体内代谢的含药血清也具有抑制细胞生长的能力。药物作用后的细胞出现荧光染色增强、胞核碎裂、凋亡小体形成等凋亡形态学变化。结论：金蒲抑瘤片及其含药血清，在一定浓度下能诱导BEL－7404细胞凋亡。     

姜黄素对人肝癌细胞BEL-7402中HIF-1α表达的影响

目的探讨姜黄素对人肝癌细胞BEL-7402中H IF-1α表达的影响以及蛋白酶体在其中的作用。方法以0、2.5、5、10、15、20μmol.L-1的姜黄素处理人肝癌细胞BEL-7402缺氧环境中培养6 h,W ST-8法和台盼蓝染色法分析细胞增殖和活力,采用RT-PCR和W estern B lot方法检测肝癌细胞中H IF-1α的表达;以0、10μmol.L-1姜黄素、10μmol.L-1MG-132、10μmol.L-1姜黄素+10μmol.L-1MG-132处理人肝癌细胞BEL-7402缺氧环境中培养6 h,采用W esternB lot方法检测肝癌细胞中H IF-1α的蛋白表达。结果①不同剂量的姜黄素对肝癌细胞活力和增殖率的影响与对照组相比差异无显著性;②随着姜黄素浓度的增加,H IF-1α蛋白表达逐渐降低;③不同剂量的姜黄素对H IF-1αmRNA表达的影响与对照组相比差异无显著性;④MG-132能够逆转姜黄素对H IF-1α蛋白的减少。结论姜黄素抑制人肝癌细胞BEL-7402中H IF-1α蛋白表达是通过转录后机制和蛋白酶体途径。     

Platycodin D induces apoptosis and triggers ERK- and JNK-mediated autophagy in human hepatocellular carcinoma BEL-7402 cells

Aim:

Platycodin D, the main saponin isolated from Chinese herb Platycodonis Radix, exhibits anticancer activities against various cancer cell lines. Here we evaluated its anticancer action against human hepatocellular carcinoma cells in vitro and in vivo, and elucidated the relationship between platycodin D-induced apoptosis and autophagy.

Methods:

The viability of human hepatocellular carcinoma BEL-7402 cells was evaluated with MTT assay, and the apoptosis was examined using Annexin V/PI and Hoechst 33342 staining assays. Monodansylcadaverine (MDC) staining was used to label autophagic vacuoles. The proteins were detected using Western blot analysis. For studying its anticancer action in vivo, platycodin D (5 and 10 mg· kg⁻¹·d⁻¹) was intraperitoneally injected to BEL-7402-bearing mice for 21 days.

Results:

Platycodin D (5–40 μmol/L) inhibited the cell proliferation in vitro with IC50 values of 37.70±3.99, 24.30±2.30 and 19.70±2.36 μmol/L at 24, 48 and 72 h, respectively. Platycodin D (5–20 μmol/L) dose-dependently increased BEL-7402 cell apoptosis, increased the Bax/Bcl-2 ratio and the levels of cleaved PARP and cleaved caspase-3, and decreased the level of Bcl-2. Furthermore, platycodin D (5–20 μmol/L) induced autophagy in BEL-7402 cells, as evidenced by formation of cytoplasmic vacuoles, increased amounts of LC3-II, and increased numbers of MDC-positive cells. Pretreatment with the autophagy inhibitor chloroquine (5 μmol/L) or BAF (50 nmol/L) significantly enhanced platycodin D-induced proliferation inhibition and apoptosis. Moreover, platycodin D (20 μmol/L) activated the ERK and JNK pathways in BEL-7402 cells, and simultaneous blockage of the two pathways effectively suppressed platycodin D-induced autophagy and enhanced platycodin D-induced apoptosis. In BEL-7402-bearing mice, platycodin D (10 mg·kg⁻¹•d⁻¹) significantly reduced relative tumor volume with decreased body weight.

Conclusion:

Platycodin D not only inhibits the proliferation of BEL-7402 cells but also suppresses BEL-7402 xenograft tumor growth. Platycodin D-induced cell proliferation inhibition and apoptosis are amplified by co-treatment with autophagy inhibitors     

酪丝亮肽对人肝癌BEL-7402裸鼠移植瘤的抑制作用

目的:观察酪丝亮肽对人肝癌BEL-7402的抑制作用,并分析其可能机制。方法:制备裸鼠移植瘤模型,随机分为生理盐水、氨基酸混合物、环磷酰胺、酪丝亮肽高低剂量等5组,每组12只,观察酪丝亮肽对人肝癌BEL-7402肿瘤组织坏死和凋亡的影响;电镜观察其对肿瘤细胞超微结构改变;流式细胞技术分析其对细胞周期及细胞凋亡率的影响。结果:酪丝亮肽能够诱导肿瘤细胞坏死和凋亡、细胞周期阻抑、显著抑制肿瘤的生长,给药剂量为80μg.kg-1.d-1和160μg.kg-1.d-1时,肿瘤抑制率分别为42%与58%。结论:酪丝亮肽可以显著抑制人肝癌BEL-7402的生长,作用机制与促进肿瘤细胞的凋亡和坏死有关。     

板蓝根高级不饱和脂肪组酸的体外抗人肝癌BEL-7402细胞活性

目的 :研究板蓝根高级不饱和脂肪组酸体外抗人肝癌BEL 74 0 2细胞的活性。方法 :MTT法测定细胞毒作用 ,集落形成实验观察药物对肝癌细胞增殖的抑制作用 ,PCR ELISA试剂盒测定细胞的端粒酶活性。结果 :板蓝根高级不饱和脂肪组酸能抑制BEL 74 0 2细胞的增殖 ,其IC50 为 0 6mg·mL-1,有促使肿瘤细胞向正常细胞逆转的趋势 ,可降低端粒酶活性的表达。结论 :板蓝根高级不饱和脂肪组酸具有体外抗肿瘤活性     

人肝癌Bel7402/5-FU耐药株多药耐药与凋亡关系的研究

目的　从凋亡的角度探讨人肝癌细胞Bel74 0 2 / 5 FU多药耐药的分子机制。方法　采用SRB法检测Bel74 0 2 / 5 FU耐药株的多药耐药性 ,用AnnexinV FITC/PI双标流式细胞术检测Bel74 0 2细胞及其耐药株的凋亡程度 ,PI单染检测细胞周期变化 ,RT PCR方法检测凋亡相关因子bcl 2、bcl xl、bcl xs、bax、fas、p5 3和cpp32的表达情况。 结果　Bel74 0 2 / 5 FU耐药株具有多药耐药性 ;相同剂量 30 μmol·L-1及 15 0 μmol·L-15 FU处理 ,Bel74 0 2细胞凋亡明显增加 ,G0 /G1期增加 ,S期、G2 /GM减少 ,耐药株不出现凋亡增加及细胞周期改变 ;耐药株凋亡相关因子bcl xl、bcl xs和bax表达上调 ,p5 3和cpp32表达下调。 结论　人肝癌Bel74 0 2 / 5 FU耐药株的多药耐药性可能和凋亡减少有关 ,抗凋亡因子bcl xl表达上调 ,促凋亡因子 p5 3和cpp32表达下调可能参与Bel74 0 2 / 5 FU耐药株的多药耐药。     

黄芩黄酮A对人肝癌细胞7402的抑制能力及体外增效作用

测定黄芩黄酮Ａ抗抗人肝癌细胞ＢＥＬ－７４０２体外活性及对常用抗癌药物的体外增效作用。方法以ＭＴＴ法测定黄芩黄酮Ａ的细胞毒作用及与多种抗癌药物合用后对肝癌细胞ＢＥＬ－７４０２的生长抑制作用,以软琼脂集落形成实验观察药物的诱导分化作用,以ＰＣＲ－ＥＬＩＳＡ试剂盒测定细胞的端粒酶活性。     

Octreotide inhibits proliferation and induces apoptosis of hepatocellular carcinoma cells

AIM: To study the effect of octreotide on cell proliferation and apoptosis in different hepatocellular carcinoma (HCC) cells and hepatocytes. METHODS: The proliferation of HCC cells (HepG2, SMMC-7721) and hepatocytes (L-02) was determined by MTT assay. Apoptosis was detected either by fluorescent staining, transmission electron microscopy or flow cytometry. The content of AFP in the supernatant of cultured HCC cells was determined by electrochemiluminescence immunoassay. The expression of SSTR subtypes was identified by RT-PCR. RESULTS: The proliferation of HCC cells and L-02 cells was inhibited significantly by octreotide (0.25, 0.5, 1.0, 2.0 and 4.0 mg/L). However, the apoptosis of HCC cells markedly increased in a concentration-dependent manner. Both the apoptosis index and the percentage of apoptotic cells in L-02 cells were significantly lower than those of HepG2 and SMMC-7721 cells. The content of AFP in the supernatant of cultured HepG2 cells treated with octreotide was also statistically reduced.