去势与非去势不同月龄雌性大鼠成骨细胞内雌激素受体β的表达特点

目的:观察去势与非去势雌性大鼠成骨细胞内雌激素受体β的表达水平,并比较其变化特点。方法:实验于2003-02/06在哈尔滨医科大学第二临床医学院科研中心完成。分别取新生,2,4,6,8,10,12个月龄的雌性Wistar大鼠各14只,按月龄分为6组,2,4,6,8,10,12个月龄组,各月龄组再随机分对照组,正常饲养不造模;去势组行卵巢切除造模,每组各7只。两个月后处死。①成骨细胞的生物学特征检测:取新生雌性Wistar大鼠14只用于大鼠成骨细胞体外培养。采用二次酶消化法、反复贴壁法分离纯化培养大鼠成骨细胞。采用倒置显微镜观察成骨细胞形态及超微结构。大鼠成骨细胞检验学特征碱性磷酸酶检测采用改良钙钴法,阳性反应为胞质中出现灰黑至深黑颗粒状或片状沉淀。成骨细胞培养上清液碱性磷酸酶及骨钙素检测,采用磷酸对硝基苯酯二钠盐比色法进行碱性磷酸酶检测,测得A值,换算成国际单位。采用放射免疫试剂盒进行骨钙素检测,计数器测定沉淀物cpm值,根据标准曲线得到样品中骨钙素含量。②成骨细胞内雌激素受体检测:应用半定量蛋白印迹酶促底物染色法以及发光法。测得A值,以A值越高,说明雌激素受体β表达越多。结果:纳入84只大鼠分为6组,均进入结果分析。①成骨细胞形态学观察:随着培养时间的延长,细胞伸出较多突起,细胞融合成片,培养12～18d呈多层生长。②大鼠成骨细胞碱性磷酸酶染色结果:镜下见90%的细胞呈碱性磷酸酶染色阳性。③成骨细胞培养上清液碱性磷酸酶及骨钙素含量:成骨细胞碱性磷酸酶和骨钙素明显高于成纤维细胞(P<0.01)。④去势与非去势大鼠成骨细胞内雌激素受体β的表达结果:应用酶促低物染色法测定,非去势组雌激素受体β表达在2个月龄组呈低度表达(90.81±2.20),4,6个月组雌激素受体β开始呈现上升趋势(121.10±5.78,143.20±4.41)至8,10个月组雌激素受体β达到高峰(186.10±6.60,190.90±6.10),10月组以后表达呈现下降趋势;去势组2,4,6,8,10,12个月组雌激素受体β都呈低度表达(87.80±2.51,89.50±2.72,89.81±2.43,90.59±2.34,92.52±2.62,90.39±2.53),除2个月龄组以外,其他各月龄组非去势组均显著高于去势组(P<0.05,0.01)。结论:①本实验采用酶消化法培养的细胞符合成骨细胞的生物学特征,具备成骨细胞功能。②去势大鼠在观察的不同时限点均出现成骨细胞雌激素受体β表达较同月龄非去势大鼠显著减少,说明去势影响成骨细胞内雌激素受体β的表达。     

雌激素、促性腺激素与大鼠成骨细胞雌激素受体β的表达

目的：观察不同剂量雌激素，卵泡雌激素及黄体生成素对大鼠成骨细胞雌激素受体β表达的影响。方法：实验于2004-02／08在哈尔滨医科大学第二临床医学院科研中心完成。①取三四个月龄雌性Wistar大鼠28只用于大鼠成骨细胞体外培养。采用二次酶消化、反复贴壁法分离纯化培养大鼠成骨细胞。观察其形态、改良钙钴法碱性磷酸酶染色，培养上清碱性磷酸酶、骨钙素测定来鉴定成骨细胞。②取2代培养的成骨细胞用无血清培养基培养24h，分为10组：对照组，1&;#215;10^10，1&;#215;10^-8，1&;#215;10^-6mol/L 17β-雌二醇组，10，100，1000U／L黄体生成素组，1&;#215;10^-7,1&;#215;10^-6，1&;#215;10^-5g／L卵泡刺激素组。每组3个孔。对照组加入基础培养基，其他各组分别加入相应终浓度药物，培养24-48h。大鼠成骨细胞雌激素受体表达阳性细胞数检测应用免疫组织化学法测定，以细胞浆有棕黄色颗粒沉积为阳性。成骨细胞雌激素受体β表达检测应用半定量免疫印渍酶促底物染色法以及化学发光法，以A值越高，说明雌激素受体β表达越多。结果：①成骨细胞形态及特征性鉴定：成骨细胞随培养时间的延长，细胞呈指数增长，分泌碱性磷酸酶和骨钙素，碱性磷酸酶染色阳性率为90％，表现出旺盛的分泌功能。②成骨细胞雌激素受体表达阳性细胞数检测结果：不同剂量卵泡刺激素组和黄体生成素组对雌激素受体表达无明显影响；雌激素1&;#215;10^-8mol／L组和1&;#215;10^-6mol/L组显著高于对照组[(90．95&;#177;5．89)，(95．12&;#177;6．17)，(81．44&;#177;5.37)个数／100个细胞，τ=2．95，P&;lt;0．05；τ=3．50,P&;lt;0．01]。③成骨细胞雌激素受体β表达结果：不同剂量卵泡刺激素及黄体生成素对雌激素受体β的表达无明显影响；随雌激素浓度的增加成骨细胞雌激素受体β表达呈上升趋势。结论：雌激素能促进成骨细胞雌激素受体β的表达，且表现出剂量依赖性。而黄体生成素、卵泡刺激素对雌激素受体β表达无直接影响。     

骨质疏松症大鼠白细胞介素6、骨钙素和骨碱性磷酸酶的表达特征

背景：白细胞介素6、骨钙素和骨碱性磷酸酶均参与骨代谢过程，其与骨质疏松的发生有相关性。 目的：观察白细胞介素6、骨钙素和骨碱性磷酸酶在骨质疏松大鼠中的表达特征。 设计：随机分组观察对比实验。 单位：深圳市人民医院（暨南大学医学院第二附属医院）骨科。 材料：实验于2002—01／2003-01在深圳市人民医院动物实验室及中心实验室完成。6月龄雌性SD大鼠60只，平均体质量250g，随机分为3组：去势组，对照组，空白组，每组20只。方法：去势组手术切除大鼠双侧卵巢建立骨质疏松动物模型；对照组开腹后将卵巢提出腹腔后还纳关腹；空白组不行任何处理。分别于术后2，3，4，5，6个月后每组随机抽出大鼠4只，进行骨密度、骨钙素、白细胞介素6及碱性磷酸酶检测。 主要观察指标：大鼠全身骨密度、血清骨钙素、血清白细胞介素6及血清骨碱性磷酸酶变化。 结果：60只大鼠均进入结果分析。①大鼠骨密度测量结果：4，5，6个月去势组骨密度较对照组和空白组明显下降[4个月：（0．1395&;#177;0．0078），（0．147&;#177;0．0008），（0．1459&;#177;0．0029）g／cm^2．5个月：（0．1379&;#177;0．0009）．（0．1456&;#177;0．0008），（0．1447&;#177;0．0005）g／cm^2，6个月：（0．1226&;#177;0．0004）．（0．1450&;#177;0．0021），（0．1440&;#177;0．0009）g／cm^2，P〈0．05或〈0．011。②大鼠血清骨钙素测量结果：4个月后去势组骨钙素显著高于对照组与空白组（P〉0．05）。③大鼠白细胞介素6检测结果：各时间点去势组白细胞介素6均显著高对照组与空白组（P〉0．05）④大鼠血清骨碱性磷酸酶：4，5，6个月去势组骨碱性磷酸酶显著高于对照组与空白组[（2026&;#177;4）比（1247&;#177;12），（1291&;#177;7）nkat／L，（2342&;#177;9）比（1273&;#177;18），（1342&;#177;12）nkat／L．（2633&;#177;15）比（1340&;#177;9），（1357&;#177;8）nkat／L，P〈0．05] 结论：在骨质疏松症大鼠中骨密度显著降低，白细胞介素6、骨钙素和骨碱性磷酸酶在骨质疏松症大鼠中有显著表达，可作为骨质疏松症的诊断及筛查指标。     

雌激素、促性腺激素与大鼠成骨细胞雌激素受体β的表达

目的:观察不同剂量雌激素,卵泡雌激素及黄体生成素对大鼠成骨细胞雌激素受体β表达的影响。方法:实验于2004-02/08在哈尔滨医科大学第二临床医学院科研中心完成。①取三四个月龄雌性Wistar大鼠28只用于大鼠成骨细胞体外培养。采用二次酶消化、反复贴壁法分离纯化培养大鼠成骨细胞。观察其形态、改良钙钴法碱性磷酸酶染色,培养上清碱性磷酸酶、骨钙素测定来鉴定成骨细胞。②取2代培养的成骨细胞用无血清培养基培养24h,分为10组:对照组,1×10-10,1×10-8,1×10-6mol/L17β-雌二醇组,10,100,1000U/L黄体生成素组,1×10-7,1×10-6,1×10-5g/L卵泡刺激素组。每组3个孔。对照组加入基础培养基,其他各组分别加入相应终浓度药物,培养24～48h。大鼠成骨细胞雌激素受体表达阳性细胞数检测应用免疫组织化学法测定,以细胞浆有棕黄色颗粒沉积为阳性。成骨细胞雌激素受体β表达检测应用半定量免疫印渍酶促底物染色法以及化学发光法,以A值越高,说明雌激素受体β表达越多。结果:①成骨细胞形态及特征性鉴定:成骨细胞随培养时间的延长,细胞呈指数增长,分泌碱性磷酸酶和骨钙素,碱性磷酸酶染色阳性率为90%,表现出旺盛的分泌功能。②成骨细胞雌激素受体表达阳性细胞数检测结果:不同剂量卵泡刺激素组和黄体生成素组对雌激素受体表达无明显影响;雌激素1×10-8mol/L组和1×10-6mol/L组显著高于对照组[(90.95±5.89),(95.12±6.17),(81.44±5.37)个数/100个细胞,t=2.95,P<0.05;t=3.50,P<0.01]。③成骨细胞雌激素受体β表达结果:不同剂量卵泡刺激素及黄体生成素对雌激素受体β的表达无明显影响;随雌激素浓度的增加成骨细胞雌激素受体β表达呈上升趋势。结论:雌激素能促进成骨细胞雌激素受体β的表达,且表现出剂量依赖性。而黄体生成素、卵泡刺激素对雌激素受体β表达无直接影响。     

雄性大鼠成骨细胞内雄激素受体表达对骨代谢的影响

目的：研究雄性大鼠一生中成骨细胞内雄激素受体(androgen receptor，AR)的表达水平的变化规律，同时通过雄性大鼠血清睾酮含量变化及规律来进一步探讨雄激素在骨质疏松中的作用机制。方法：实验于2003—06／2004—07在哈尔滨医科大学附属第二医院实验动物中心完成。用放免法对不同月龄大鼠进行睾酮测定，采用二次酶消化、反复贴壁法分离纯化培养大鼠成骨细胞，并进行鉴定，应用半定量Western blot法对不同月龄雄性Wistar大鼠成骨细胞内雄激素受体进行检测。结果：①AR表达在1，2月龄组呈低度表达，分别为87．70&;#177;2．68，90．74&;#177;2．06(染色法)。4月龄组AR开始呈现上升趋势，6月龄组以后AR表达开始明显增高，至10，12，14月组AR达到高峰，分别为142．9&;#177;4．73，154.2&;#177;6．67，190．6&;#177;5．80(染色法)。16月组以后表达呈现下降趋势。②不同月龄雄性大鼠血清睾酮浓度亦呈规律性分布。③血清睾酮与雄激素受体的表达有明显的相关关系(R=0．1675，P&;lt;0．01)。结论：①AR表达在不同月龄大鼠呈规律性分布，AR的表达应与雄激素水平是相一致的。②雄激素直接与成骨细胞的AR结合或在5-α还原酶的作用下变成双氢睾酮(DHT)后与AR结合来调控成骨细胞的一系列功能是雄激素在体内维持骨稳态的主要作用途径。     

脉冲电磁场对去势大鼠骨代谢的影响

目的：探讨脉冲电磁场对去势大鼠骨代谢的影响。方法：3月龄SD雌性大鼠50只(体质量200～230g)，随机分为正常对照组、去势对照组、脉冲电磁场组、雌激素组、脉冲电磁场+雌激素组(每组10只)。正常对照组做腹腔开关手术，其余4组做双侧卵巢切除手术。术后3个月双能X线骨密度仪证实骨质疏松模型造模成功，随后对正常对照组和去势对照组大鼠腹部皮下注射生理盐水0．2mL／kg,每2周1次；脉冲电磁场组大鼠选用强度为50Gs、频率为15Hz的脉冲电磁场行全身磁疗(以脊柱为中心)，2h／d，1次／d；雌激素组腹部皮下注射苯甲酸雌二醇0.5mg／kg，1次／2周；脉冲电磁场+雌激素组腹部皮下注射苯甲酸雌二醇0．5mg／kg，每2周1次，同时进行磁疗。各组均于治疗后12周及处死前3d行口饲四环素。于24周末在全麻下将全部大鼠处死，行骨密度、生物力学及组织学切片和骨形态学检查。结果：治疗前后，正常对照组及去势对照组大鼠L2-L4的骨密度无明显变化，而治疗后脉冲电磁场组、雌激素组和脉冲电磁场+雌激素组的BMD(g／cm^2)(分别为：0．142&;#177;0．069，0．145&;#177;0．004，0．144&;#177;0．007)较治疗前(分别为：0．097&;#177;0．010，0．094&;#177;0．010，0．094&;#177;0．010)显著增加(P&;lt;0．05)(t=-17．37，-24．38，-28．52)；治疗后同期各组骨密度比较，大小排序为：正常对照组&;gt;雌激素组&;gt;脉冲电磁场+雌激素组&;gt;脉冲电磁场组&;gt;去势对照组(P&;lt;0．05)；生物力学检测显示：上述各组的最大载荷(N)分别为280．75&;#177;36．3l，107．5l&;#177;24．69，231．44&;#177;37．76，201．32&;#177;30．99和234．54&;#177;16．29，其中各处理组要明显高于去势对照组，且脉冲电磁场组及脉冲电磁场+雌激素组又要高于雌激素组(F=45．4l，P&;lt;0．05)；相应地，各处理组的弹性模量亦高于去势对照组，但仍较正常对照组低(F=34．94)；形态学检查显示各处理组均可见明显的四环素双标记线，而正常对照组、去势对照组不明显；骨组织切片三维重建显示各处理组骨松质的空间结构明显优于去势对照组，但较正常对照组仍略差。结论：脉冲电磁场能对去势大鼠骨代谢产生明显的影响。     

染料木黄酮不是通过雌激素受体促进成骨细胞增殖

目的：探讨染料木黄酮对成骨细胞活性的影响及其可能机制。为染料木黄酮防治骨质疏松提供理论依据。 方法：实验于2001—05／2003-01在卫生学环境医学研究所完成。无菌条件下用胰蛋白酶和Ⅱ型胶原酶分步消化乳鼠颅盖骨获得成骨细胞。传代后细胞用于实验。染料木黄酮组分别加入10^5 ～10^-7 mol／L染料木黄酮，对照组以吐温20为对照。分别用噻唑蓝比色法和^3H-胸腺嘧啶掺入法测定成骨细胞增殖和DNA合成。用反转录-聚合酶链式反应和Western blot测定雌激素受体mRNA和蛋白表达。 结果：①成骨细胞培养基中加入（10^-5～10^-6mol／L）染料木黄酮，培养48h和72h后噻唑蓝的吸光度值与对照组相比均明显升高[培养48h，（039&;#177;0．03），（0．45&;#177;0．03）,（0．46&;#177;0．02），（0．19&;#177;0．05）；培养72h：（0．29&;#177;0．04），（032&;#177;0．02），（0．37&;#177;0．02），（0.15&;#177;0．04）]。②染料木黄酮组^3H-胸腺嘧啶掺入量均显著增加[染料木黄酮组为（101．20&;#177;10．06），（844．60&;#177;366．90），（512．20&;#177;197．6）；对照组为（68．67&;#177;10．39）]未发现成骨细胞雌激素受体基因和蛋白表达。 结论：染料木黄酮不是通过促进雌激素受体基因和蛋白的表达来促进成骨细胞增殖。     

强骨抗萎方对模拟失重条件下体外培养成骨细胞的影响

背景：航天环境中，失重对骨质代谢的影响被认为是对人体最严重的危害之一。目的：探讨复方强骨抗萎方对模拟失重条件下体外培养的成骨细胞的影响，拟揭示该方对抗骨丢失的分子生物学作用。设计：随机对照观察。单位：航天医学工程研究所。材料：实验于1997-04／12在北京航天医学工程研究所完成。选择SD乳鼠。药物：强骨抗萎方（熟地、骨碎补、龟板、怀牛膝等）。方法：乳鼠15只，随机分为5组，每组3只。分离乳鼠颅骨成骨细胞，体外培养后，分为正常对照、失重模型、强骨抗萎方大（2．0％）、中（1．0％）、小（0．5％）剂量5组。置回旋器，30r／min，连续回旋60h模拟失重，观察该方对回旋12，30，60h时大鼠成骨细胞碱性磷酸酶和骨钙素生成及碱性磷酸酶基因转录水平（mRNA）的影响。主要观察指标：强骨抗萎方对体外模拟失重条件下成骨细胞培养液中碱性磷酸酶活性、骨钙素含量及碱性磷酸酶mRNA表达的影响。结果：纳入的15只乳鼠均进入结果分析，实验中无脱失。①与正常对照组比较，模型组成骨细胞在回旋12，36，60h不同时间点的细胞培养液中的碱性磷酸酶活性均明显降低，其中12，60h时差异显著l（45．0l&;#177;12．50），（96．18&;#177;12．34）；（13．17&;#177;5．33），（137．36&;#177;137．86）nkat／L．P〈0．05]，碱性磷酸酶mRNA表达低微；骨钙素活性均减低，60h时差异显著[（30．3&;#177;2．75），（42．0&;#177;10．0）μg/L P〈0．05]。②与模型组比较，中药复方不同剂量组于回旋不同时间点细胞培养液中的碱性磷酸酶活性均有不同程度升高[其中60h的小、中、大剂量组分别为（143．70&;#177;123．86）．（54．5l&;#177;13．17）；（156．53&;#177;133．69）nkat／L，P〈0．051；碱性磷酸酶mRNA表达活性也较高；但骨钙素活性无明显变化。结论：该方能改善模拟失重条件下成骨细胞的功能，缓解其分化抑制状态，促进骨基质的形成和成熟。     

雌激素、灯盏花对去势大鼠脑缺血损伤保护作用的叠加实验

目的：探讨去势大鼠局灶脑缺血再灌注后雌激素、灯盏花的叠加保护作用。方法：实验于1998-06／1999-04在华西医科大学的相关实验室进行.雌性SD大鼠进行双侧卵巢切除后2周再采用线栓法制备去势大鼠大脑中动脉缺血(2h)再灌注(70h)模型。50只SD大鼠随机分为雌激素组．灯盏花组、雌激素加灯盏花组、对照组和假手术组。再灌注2h和70h后分别进行神经功能缺损评分。再灌注70h显微镜下观察脑损伤区组织病理学、脑梗死体积比和脑水肿体积F测定血液中一氧化氮、白细胞介素1(IL-1)及肿瘤坏死因子(TNF)水平的变化，采用免疫组织化学方法观察脑内雌激素受体的表达。结果：再灌注70h后，与对照组神经功能缺损评分[(1．7&;#177;0．6)分]相比，雌激素组[(0．3&;#177;0．5)分]、灯盏花组[(0．9&;#177;0．6)分]、雌激素加灯盏花组[(0．2&;#177;0．4)分]明显降低(F=13．488，P&;lt;0．05)；与对照组脑梗死体积比[(31．33&;#177;1．26)％]相比，雌激素组[(12．52&;#177;1．40)％]、灯盏花组[(18．35&;#177;1．10)％]、雌激素加灯盏花组[(11．52&;#177;0．69)％]明显降低(F=612．876，P&;lt;0．01）；与对照组脑水肿体积[(69．77&;#177;3．40)mm^3]相比，雌激素组[(32．59&;#177;2．12)mm^3]、灯盏花组((51．2&;#177;4．37)mm^3)、雌激素加灯盏花组[(30．97&;#177;2．13)mm^3]明显降低(F=334．867，P&;lt;0．01）；与对照组IL-1水平[(0．97&;#177;0．08)μg／L]相比，雌激素组[(0．84&;#177;0．03)μg／L]、灯盏花组[(0．84&;#177;0．06)μg／L]、雌激素加灯盏花合用组[(0．82&;#177;0．02)μg／L]明显降低(F=24．626，P&;lt;0．01）；与对照组TNF水平(171．25&;#177;3．95)μg／L相比，雌激素组[(150．38&;#177;10．85)μg／L]、灯盏花组[(157．13&;#177;11．08)μg／L]、雌激素加灯盏花组[(149．5&;#177;3．95)μg／L]明显降低(F=31．75．P&;lt;0．01）；与对照组血液中一氧化氮浓度[(133．41&;#177;8．45)μmol／L]相比，雌激素组[(64．58&;#177;6．55)μmol／L]、灯盏花组[(78．82&;#177;7．33)μmol／L]、雌激素加灯盏花组[(62．5&;#177;4．77)μmol／L]明显降低(F=249．945，P&;lt;0．01）。结论：雌激素对去势大鼠脑缺血具有明显的脑保护作用，并优于灯盏花，雌激素与灯盏花合用无叠加效应。     

去势大鼠下丘脑弓状核β-内啡肽免疫反应阳性神经元数量及血清相关激素水平变化

目的：观察雌性大鼠切除卵巢后其下丘脑弓状核β-内啡肽免疫反应神经元和血清生长素、雌激素、降钙素及骨钙素水平的变化。 方法：实验于2004-03／2005-01在广东医学院生理学实验室完成。①将12只健康雌性未孕产SD大鼠采用随机数字表法分为2组，每组6只。卵巢切除术组大鼠在麻醉状态下完全切除双侧卵巢，牢固结扎剩余的子宫部分；假手术组大鼠不切除卵巢，仅切除卵巢周围小块脂肪组织。术后处理完全相同。②采用左心室灌注固定方法取胫骨及脑。通过检测大鼠胫骨上段骨组织形态计量学的变化判断骨代谢发生的变化。③用无菌注射器通过右心室取血，离心后取上层血清，采用放射免疫方法检测血清上述激素水平的改变。④采用免疫组织化学方法观察下丘脑弓状核β-内啡肤免疫反应神经元的变化。 结果：①两组大鼠胫骨上段松质骨组织形态计量参数的变化：与假手术组大鼠比较，卵巢切除组大鼠骨小梁面积百分数、骨小梁宽度和骨小梁数量均明显减小[（22.1&;#177;3.3）％比（14.8&;#177;2.3）％，（41．2&;#177;8．8）比（30.8&;#177;3．9）μm，（5.5&;#177;0．8）比（4.3&;#177;0．7）个，P〈0．05或0.01]，骨小梁分离度明显增大[（164．9&;#177;12.3）比（250．2&;#177;33．2）μm，P〈0．01]。②两组大鼠血清激素水平的变化：与假手术组大鼠比较，卵巢切除组大鼠血清雌激素、降钙素、生长素含量明显降低[（35.22&;#177;3．41）比（6．29&;#177;1．82）ng／L，（48．41&;#177;8．85）比（28.21&;#177;6.28）ng／L，（6．59&;#177;1．49）比（4.45&;#177;0．88）μg／L]，骨钙素明显升高[（13．72&;#177;4.58）比（23．89&;#177;4．4）μg／L。③下丘脑弓状核β-内啡肽神经元的改变：卵巢切除组大鼠下丘脑弓状核β-内啡肽免疫反应阳性神经元的数量明显减少。 结论：弓状核β-内啡肽免疫反应阳性神经元数量的减少及生长素等钙调激素水平的改变，可能与骨质疏松的形成具有密切的关系。     

Megaesophagus in rats

The objective of this study was to determine whether myenteric denervation of the abdominal esophagus using benzalkonium chloride (BAC) leads to esophageal achalasia with changes of the muscle propria and epithelial cell proliferation. The treatment led to megaesophagus 3 months after BAC application. Denervation of the esophagus induced muscle hypertrophy and increased epithelial cell proliferation. The imbalance of the neurotransmitters may play a role in these morphokinetic changes.     

不同品系大鼠皮下脂肪源干细胞诱导分化能力的比较

目的:对比SD大鼠和Wistar大鼠皮下脂肪源干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)体外诱导分化能力,为ADSCs的进一步应用提供实验依据。方法:SD大鼠和Wistar大鼠各6只取腹股沟脂肪垫,培养扩增ADSCs,相差显微镜下观察两个品系来源的ADSCs的形态。用第4代细胞进行成骨和成脂诱导,分别用茜素红和油红O染色观察向成骨细胞分化后的矿化结节和向脂肪细胞分化后的脂质沉积。结果:两个品系来源的ADSCs在细胞形态上没有显著区别,都能进行成骨和成脂诱导分化。结论:SD大鼠和Wistar大鼠腹股沟脂肪垫来源的ADSCs诱导分化能力差异无显著性。     

Use of multiple fluorophores for evaluating microvascular permeability in control rats and rats with sepsis

Capillary leak accompanying systemic inflammatory response conditions is a significant clinical problem. In the present study, we describe and verify a method for studying capillary leak that is based on the injection of proteins that differ significantly in size and have spectrally distinguishable fluorophores. Control (n=11) and post-CLP (caecal ligation and puncture; n=14) Sprague-Dawley rats were injected with tracer amounts of albumin and PEG-Alb [albumin covalently linked to methoxy-poly(ethylene glycol)] labelled with fluorescein and Texas Red. Blood samples were withdrawn between 5 min and 144 h, and the fluorescence of the labelled proteins was determined. The relative retention of the PEG-Alb and albumin was assessed via measurement of the TER (transcapillary escape rate; in %/h) and the t(50%) estimate, defined as the time when the actual concentration reached 50% of its baseline. The concentration-time trends for both albumin and PEG-Alb tracers exhibited two-compartmental behaviour and were analysed using bi-exponential modelling. Retention times were significantly greater for PEG-Alb in both control and CLP rats. TER(PEG-Alb) was significantly lower than TER(albumin) for both control (8.1+/-5.6 compared with 14.8+/-7.1 %/h respectively; P<0.01) and CLP (14.8+/-6.6 compared with 22.5+/-7.3 %/h respectively; P<0.001) rats. The t(50%[PEG-Alb]) was substantially greater than the corresponding t(50%[albumin]) for both control (29.8+/-9.8 compared with 7.2+/-2.0 h respectively; P<0.001) and CLP (12.9+/-5.6 compared with 5.1+/-1.6 h respectively; P<0.001) rats. The result was similar irrespective of the fluorophore-protein combination, validating the multifluorophore technique. In conclusion, the double-fluorophore approach described in the present study may provide the future basis for a method to quantify capillary leak in disease.     

Nonlinear pharmacokinetics of aspirin in rats

Rats are frequently used as an animal model for studies of the antithrombotic action of aspirin. The purpose of this investigation was to explore factors that influence the systemic exposure to unhydrolyzed aspirin after oral and systemic administration of the drug to adult male Sprague-Dawley rats. The experiments were performed according to a crossover design, and drug concentration measurements were made on whole blood. Intravenous injection and oral administration of aspirin (200 mg/kg) showed that the drug is eliminated rapidly (total clearance approximately 45 ml/min/kg; half-life approximately 8 min), that only about one-fourth of the dose is absorbed intact, and that the systemic availability of the oral dose is highly variable (coefficient of variation approximately 60%). A 40 mg/kg i.v. dose was cleared almost twice as rapidly as a 200 mg/kg i.v. dose. Injection of salicylic acid to yield concentrations similar to those obtained after injection of the large dose of aspirin (approximately 400 mg/l) reduced the total clearance of a 40 mg/kg i.v. dose of aspirin by about one-third, suggesting product inhibition of ester hydrolysis. The systemic availability of aspirin infused into the portal circulation was about 80% over a wide range of infusion rates, showing that presystemic hydrolysis of the drug occurs mainly in the gut. As in humans, absorption of orally administered aspirin affects the exponential decline of aspirin concentrations in blood, resulting in an apparent half-life substantially longer than the actual biologic half-life of the drug after i.v. injection.(ABSTRACT TRUNCATED AT 250 WORDS)     

Kinetics of fomepizole in pregnant rats

Context/objectives. Fomepizole has been utilized with remarkable success for ethylene glycol and methanol poisonings in children and adults. However, very little information is available regarding the safe and effective use of fomepizole in pregnancy. The goal of this research was to utilize an animal model to investigate the kinetics of fomepizole in pregnancy. Materials/methods. Male and pregnant Sprague-Dawley rats, which were obtained at 19 days gestation, were administered fomepizole 15 mg/kg intraperitoneally. The animals were anesthetized and blood, liver, kidney, and fetus samples were collected at 1–24 hours post administration. Tissue samples were homogenized, deproteinized and prepared by solid phase extraction. Fomepizole concentrations from tissue and serum samples were analyzed using high pressure liquid chromatography. Results. Between males and pregnant females, tissue and serum fomepizole levels were similar. Fomepizole concentrations in whole fetal tissue were similar to those in the maternal liver and kidney tissue. Fetal fomepizole concentrations were fivefold higher than maternal serum concentrations. The zero order elimination rate of fomepizole from maternal serum was 7.6 mol/L/h, which was slightly slower than the elimination rate in male rats (12.9 mol/L/h). Elimination of fomepizole from the fetus followed a similar time course to that in the maternal tissues. Discussion/conclusion. Elevated concentrations of fomepizole were detected in the fetus following maternal administration. Although the levels of fomepizole in the fetal tissue would imply significant protection against fetal formation of toxic alcohol metabolites, further research is needed to explore the long-term effects of fomepizole on the fetus.