聚合酶链反应检测肺炎衣原体方法的建立与初步应用

目的探讨聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术在肺炎衣原体检测中的应用。方法参照Ｃａｍｐｂｅｌ报道的肺炎衣原体全基因序列、Ｇ＋Ｃ比例和次级结构设计一对引物，采用ＰＣＲ法检测肺炎衣原体ＤＮＡ及临床标本中的肺炎衣原体感染。结果经对肺炎衣原体、沙眼衣原体、大肠埃希菌、溶血性链球菌、白色念珠菌和结核分枝杆菌培养物进行ＰＣＲ扩增，结果只有肺炎衣原体出现单一４３７ｂｐ的扩增区带；敏感性试验可检测出１０ｆｇ的肺炎衣原体ＤＮＡ；１０份模拟标本均扩增出４３７ｂｐ区带；２２份小儿肺部感染的咽拭子标本中有５份为阳性，阳性率为２２．７％，而显微镜检查只有２例可见包涵体；１２份正常小儿咽拭子标本均为阴性。结论ＰＣＲ法检测肺炎衣原体，具有特异、敏感、快速、准确的特点，为肺炎衣原体感染的临床诊断提供了科学的依据     

荧光定量聚合酶链反应检测沙眼衣原体感染的初步应用

泌尿生殖道沙[衣原体(Chlam ydia trachom atis,Ct)感染是我国目前最常见的性传播疾病之一,并可引起宫颈炎、尿道炎、盆腔炎、异位妊娠、输卵管不孕症及早产等[1]。细胞培养分离Ct是传统的实验室诊断“金标准”,但鉴于该方法操作烦琐,约需1周才能报告结果,故未能在临床普遍应用     

肺炎支原体聚合酶链反应检测方法的实验研究和初步应用

人类原发性非典型性肺炎是一种全球性疾病,其病原体为肺炎支原体,除引起呼吸系统感染外,还可引起神经系统、心血管系统、消化系统等的病变。因而早期、快速、准确地检测肺炎支原体,具有重要的临床和流行病学意义。目前对肺炎支原体检测方法主要有分离培养法、     

套式聚合酶链反应结合直接荧光法检测女性生殖道沙眼衣原体

目的建立一种敏感、特异、快速诊断女性生殖道沙眼衣原体（ＣＴ）感染的方法。方法应用套式聚合酶链反应（ＮＰＣＲ）技术和直接荧光（ＤＦＡ）法检测女性生殖道沙眼衣原体。对两者结果不符的标本用细胞培养法验证。结果３００份受检标本，ＤＦＡ法阳性７１份，阴性２２９份，ＮＰＣＲ法阳性９０份，阴性２１０份；其中ＮＰＣＲ和ＤＦＡ均为阳性者６８份，另有２２份ＮＰＣＲ阳性，而ＤＦＡ为阴性，再经细胞培养证实系阳性。但另有３份ＤＦＡ阳性，ＮＰＣＲ却为阴性，再经细胞培养证实亦属阳性。综合ＮＰＣＲ与ＤＦＡ并对照细胞培养，结果显示ＮＰＣＲ的敏感性为９６７％（９０／９３），特异性为１００％（２０７／２０７），ＤＦＡ的敏感性为７６３％（７１／９３），特异性为１００％（２０７／２０７）。结论ＮＰＣＲ技术与ＤＦＡ法检测ＣＴ感染，均具有高度特异性、操作简便等优势；ＮＰＣＲ的敏感性优于ＤＦＡ法；ＤＦＡ法具有费用低、重复好的特点。两法结合起来检测ＣＴ，将获得理想的检测效果。     

聚合酶链反应检测沙眼衣原体和解脲脲原体

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术对１５６例非淋病性尿道炎（ＮＧＵ）和１２８例淋病性尿道炎（ＧＵ）患者进行沙眼衣原体（Ｃｔ）和解脲脲原体（Ｕｎ）检测，其中ＮＧＵ中Ｃｔ、Ｕｕ的阳性率分别为２６．３％、１７．９％，Ｃｔ、Ｕｕ双阳性率为７．７％；ＧＵ患者Ｃｔ、Ｕｕ的阳性率分别为４３．８％、３３．６％，Ｃｔ、Ｕｕ双阳性率的为１６．４％。     

聚合酶链反应检测泌尿生殖道沙眼衣原体和解脲支原体

用聚合酶链反应（ＰＣＲ）对７２例妇产科，泌尿科门诊患者的尿道或宫颈分泌物进行了沙眼衣原体（ＣＴ），和解脲支原体（ＵＵ）的检测。共检出ＣＴ和ＵＵ阳性者２９例，ＣＴ的阳性检出率明显高于女性，而ＵＵ阳性检出率女性高于男性，与国内外报告基本一致。妇产科，泌尿科门诊患者中均有性传播疾病中应引起高度重视。     

聚合酶链反应检测丁型肝炎病毒方法的建立及初步应用

目的:研究建立聚合酶链反应(PCR)检测丁型肝炎病毒的方法,并在临床上作初步应用.方法:选择HDV保守区域基因片段设计合成特异性引物,建立检测HDV感染的PCB方法,对450例门诊患者血清进行HDV感染检测.结果:该PCR方法特异性和灵敏度均较高,450例门诊患者血清HDV感染率为1.3%,与ELISA法比较,总符合率为99.3%.结论:本PCR方法可用于检测HDV感染,是一种快速、简便、实用的方法.     

热启动双重聚合酶链反应检测淋病奈瑟菌和沙眼衣原体

建立了蜡隔热启动双重聚合酶链反应同时检测临床泌尿生殖道样品的淋病奈瑟菌和沙眼衣原体的方法，对１７５例临床样品进行了检测，其中淋病奈瑟菌阳性２０例，占１１．４％，沙眼衣原体阳性为３９例，占２２．３％，淋病奈瑟菌和沙眼衣原体双重感染为１２例，占６．９％，做了单一ＰＣＲ与双重ＰＣＲ对照，结果完全相符，并对阳性ＰＣＲ产物进行了限制性酶切鉴定，本实验表明，双重ＰＣＲ对于临床检测淋病奈瑟菌和沙眼衣原体是一快捷     

聚合酶链反应与反向线点杂交检测沙眼衣原体及分型

目的建立和评价一个新的多重和巢式PCR-反向线点杂交试验（RLB）检测泌尿生殖道沙眼衣原体及其分型方法。方法该试验设计了3对引物分别针对CT外膜蛋白（omp1）基因VD2区和质粒进行扩增，用CT15种血清型（A、B／Ba、C、D／Da、E、F、G／Ga、H、L／Ia、J、Ja、K、L1、L2和L3）探针与扩增后的产物杂交。经COBAS Amplicor检测的355份标本，其中277份尿液，2份男性直肠拭子和78份女性宫颈试子，进行PCR-RLB检测CT并分型。结果192份COBAS Amplicor阳性标本中175份PCR-RLB阳性，其中93．1％（163／175）的CT感染可被正确分型，其单一型感染分型结果与DNA测序结果一致。163份COBAS Amplicor阴性标本中6份巢式PCR-RLB阳性。85．3％（139／163）为单一型CT感染，最常见的CT是E（38．6％）F（28．5％）和D（18．2％）。14．7％（24／163）为CT混合感染，混合感染以H和K为主。结论PCR-RLB检测CT是一种简便、快速、特异和敏感的方法，并准确的进行CT分型，为CT感染的临床诊断和分子流行病学研究提供了一种可靠的方法。     

肺炎衣原体和冠心病关系的研究

目的 研究肺炎衣原体和冠心病的关系。方法 在非冠心病（NCHD）组、稳定型心绞痛（SAP）组、不稳定型心绞痛（UAP）组和急性心肌梗死（AMI）组,用血清学和PCR方法检测肺炎衣原体。结果 各组之间血清学无显著性差异。冠心病各组PCR阳性率显著高于NCHD组,UAP、AMI两组间差异无显著性意义。结论 肺炎衣原体与冠心病的形成及斑块的不稳定性有关。     

沙眼衣原体聚合酶链反应检测研究进展

沙眼衣原体（Chlamydia trachomatis, CT）是重要的性传播疾病的病原体之一，它不仅会导致阴道、尿道感染；上行的生殖道感染还可能累及子宫内膜、输卵管和邻近的盆腔结构，也能导致盆腔炎、输卵管损伤直至不孕。此外，此种病原体还与人乳头瘤病毒（HPV）和人类免疫缺陷病毒（HIV）的感染有关。由于相当一部分感染者为无症状携带者，因此需要建立高度敏感的实验室诊断方法控制该疾病的传播。作为CT检测“金标准”的细胞培养方法操作复杂、技术要求高，且所用时间较长无法进行快速检测，某种程度上限制了其在临床诊断实验室的应用。聚合酶链反应（PCR）技术具有耗时少、扩增效率高、特异性强的特点，显示出了其在CT感染临床诊断中的优越性。但是由于受核酸突变、扩增抑制物的影响，以及核酸提取效率等方面的差异尚存在检测效率降低甚至漏检的问题，而且由于其仍能检测出已经死亡的病原体，所以尚不能作为临床治疗效果的评价方法。     

糖原试验、聚合酶链反应和细胞培养对沙眼衣原体感染的诊断价值

目的 探讨糖原试验、聚合酶链反应（PCR）和细胞培养法检测泌尿生殖道沙眼衣原体感染的诊断价值。方法 用三种方法分别对106例女性门诊患者宫颈分泌物标本进行平行检测。结果 以细胞培养作参比。糖原试验的敏感性为80.0%，特异性为95.8%；PCR敏感性为90.0%，特异性为97.7%。结论 糖原试验对泌尿生殖道沙眼衣原体感染有一定诊断价值。     

聚合酶链反应技术在肺部感染性疾病诊断中的应用

肺部感染是临床上最常见的疾病之一,居各种致死病因中的第5位。明确的病原学诊断对于改善预后,合理地使用抗生素具有重大意义。临床上肺炎的诊断常较容易,但却难以判断病原体的性质,特别对在体外生长较为困难的病原体尚无理想的检测手段。聚合酶链反应[Poly-merase Chain Reaction,PCR]技术的出现,为从临床标本作出病原学诊断提供了广阔的前景,特别对检出目前尚难培养的微生物尤有价值。本文重点综述PCR技术在检测肺部感染病原微生物上的应用.     

聚合酶链反应结合反向杂交技术快速检测泌尿生殖道沙眼衣原体感染

沙眼衣原体（Chlamydiatrachomatis,Ct）是性传播疾病的主要病原微生物,因此敏感特异、简便快速的Ct检测方法对于该病的早期诊断和治疗尤为重要。为探索快速可靠的诊断方法,我们在原核生物16SrRNA基因保守区内设计细菌的通用引物,在16SrRNA基因可变区内设计Ct特异性探针,用聚合酶链反应（PCR）结合反向杂交技术检测尿道炎患者Ct感染,并与细胞培养法相比较,取得了较好的结果。     

聚合酶链反应结合反向杂交技术快速检测泌尿生殖道沙眼衣原体感染

沙眼衣原体(Chlamydiatrachomatis,C t)是性传播疾病的主要病原微生物,因此敏感特异、简便快速的C t检测方法对于该病的早期诊断和治疗尤为重要。为探索快速可靠的诊断方法,我们在原核生物16S rRNA基因保守区内设计细菌的通用引物,在16S rRNA基因可变区内设计C t特异性探针,用聚合酶链反应(PCR)结合反向杂交技术检测尿道炎患者C t感染,并与细胞培养法相比较,取得了较好的结果。一、材料和方法1.临床资料病例来源于青岛市中心医院,共146例,其中男96例,女50例,年龄19~50岁。患者具有不同程度的尿道瘙痒、蚁行感、尿频、尿痛等较典型的…     

TaqMan-MGB探针实时荧光定量-聚合酶链反应检测肺炎支原体方法的建立

目的 建立敏感、特异的TaqMan-MGB探针实时荧光定量-聚合酶链反应(real-time PCR)快速检测方法,为临床标本中肺炎支原体快速检测提供技术支持。方法 选取肺炎支原体重复序列RepMP23中保守区域设计、合成特异性扩增引物和TaqMan-MGB探针,建立并优化real-time PCR检测方法。对优化后的方法使用标准浓度核酸进行扩增效率、灵敏度及特异度评价,并与已报道的肺炎支原体荧光PCR方法进行比较。结果 本研究建立的TaqMan-MGB探针荧光PCR方法对肺炎支原体的检测限为0.2 cfu,比普通TaqMan real-time PCR检测限(3～5 cfu)提高了一个数量级。其检测标准曲线的循环阈值(Ct) 与模板拷贝数呈良好的线性关系(R2=0.999)。用该方法扩增23种呼吸道常见病原菌染色体及人类染色体,结果均为阴性,特异度为100%。结论 TaqMan-MGB探针real-time PCR方法可快速、灵敏、特异地检测肺炎支原体,有很好的应用前景与价值。     

荧光定量聚合酶链反应检测解脲支原体及沙眼衣原体

目的应用荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）检测解脲支原体（Uu）、沙眼衣原体（Ct）,以了解其感染状况及发展趋势,为临床诊断提供依据和帮助。方法采用FQ-PCR方法对70例患者同时进行Uu、Ct的检测。结果70例患者Ct的感染率为5．71％;Uu的感染率为57．14％,其中Uu男性感染率为30．56％,女性感染率为85．29%。结论FO-PCR技术检测Uu、Ct具有简便、快速、准确的优点;Uu感染率明显高于Ct,已成为生殖道感染的主要病原菌。     

应用聚合酶链反应对心血管疾病患者血清肺炎衣原体DNA的检测及意义

目的　了解肺炎衣原体(TWAR)与心脏病的相关性,多方面探讨冠心病的发病因素。方法　采用聚合酶链反应(PCR)法,对冠心病100例,高血压病40例,心肌疾病40例,心律失常40例,正常对照60例,血清TWARDNA进行检测。结果　不同组别间TWAR阳性率的差别有高度显著性(χ     

沙眼衣原体聚合酶链反应测定质控物的构建及其应用研究

目的 研制能够模拟真实临床样本且无生物传染危险性的沙眼衣原体(chlamydia trachomatis,CT)PCR检测质摔物,并进行稳定性研究.方法 在充分查阅文献的基础上,明确国内外已有文献报道的CT:PCR检测的靶序列,选择最普遍应用的CT质粒序列,采用重叠(overlap)PCR、分子克隆等技术构建含有所选择的常用检测目的 CT质粒序列的重组真核表达载体,即pTARGETTM-CT 质粒.然后,将载体以脂质体转染的方式转染入宫颈上皮细胞(HTB-SiHa细胞)中,收集细胞,经含20%小牛血清的细胞培养液稀释,即成为能模拟CT检测临床样本的细胞质控物.最后观察得到的质控物对目前国内常用商品试剂盒的适用性及在4℃、37℃及室温条件下的稳定性.结果 成功构建了含CT质粒(178-610)、(1219-1993)、(2471-3260)、(5239-5864)、(6722-7499)等5个片段的重组真核表达载体,并转入HTB-SiHa细胞中,得到了可模拟临床样本的CT PCR检测的质控物.采用深圳匹基生物工程有限公司、中山大学达安基因股份有限公司商品CT PCR检测试剂盒对转染后样本进行检测,得到阳性结果;定量为3.21×108拷贝/ml;倍比稀释后较高浓度样本检测结果呈梯度下降、10倍稀释循环阈值相差约3.3;对不同浓度稀释后在4℃、37℃及室温条件下保存1个月的样本的检测结果进行随机区组的两因素方差分析后发现,在各温度下保存的样本经检测后的结果问差异无统计学意义,所构建的质控样本至少可以稳定保存1个月.结论 利用重叠PCR与双酶切的方法,建立了一种将多间隔片段连接并构建入同一载体的简便有效的方法.成功地得到了可模拟临床标本的CT PCR检测质控物.