17β-雌二醇对人子宫内膜癌细胞的增殖及P21ras和p-Erk表达的研究

目的:探讨17β-雌二醇(E2)对人子宫内膜腺癌雌激素受体(ER)阳性的Ishikawa和ER阴性的HEC-1A细胞增殖,细胞周期及其对丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路相关蛋白P21ras和p-Erk表达的影响及意义。方法:用MTT法,流式细胞技术检测不同浓度E2作用Ishikawa和HEC-1A细胞不同时间的细胞吸光度值及细胞周期,用免疫细胞化学法检测上述细胞中P21ras和p-Erk的表达。结果:随E2浓度增加,Ishikawa细胞吸光度值上升并呈时间依赖性(P<0.01),G0～G1期比例下降(P<0.01),S期比例升高(P<0.01);HEC-1A细胞吸光度值及细胞周期无明显变化(P>0.05);10-6mol/LE2作用于Ishikawa细胞30min时,P21ras和p-Erk活化表达最强,作用于HEC-1A细胞15min时,P21ras和p-Erk即有明显表达而且达高峰,随着E2浓度增加两种细胞中P21ras和p-Erk表达均逐渐增加,呈浓度依赖性。结论:E2可促进子宫内膜癌Ishikawa细胞的增殖和周期进展,而且可以促进Ishikawa和HEC-1A中P21ras和p-Erk表达增加。     

17β-雌二醇对子宫内膜癌细胞上皮间质转化诱导作用的研究

目的:研究17β-雌二醇(17β-E2)对子宫内膜癌细胞发生上皮间质转化的诱导作用。方法:用17β-E2处理Ishikawa和HEC-1A细胞后,Western blot法检测两种细胞中E-cad、N-cad和Vimentin蛋白的表达。结果:经10-8mol/L E2作用后,Ishikawa细胞中的E-cad蛋白表达减少(P0.05),N-cad、Vimentin蛋白增加(P0.05);其他浓度作用前后,各蛋白表达无明显变化(P0.05)。经不同浓度E2作用后,HEC-1A细胞中E-cad、Ncad、Vimentin蛋白均无明显变化。结论:17β-E2仅在特定浓度下存在诱导ER阳性子宫内膜癌细胞Ishikawa发生上皮间质转化的作用。     

17β-雌二醇对子宫内膜癌细胞磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B信号传导通路的激活作用

目的　探讨 17β 雌二醇 (E2 )对子宫内膜癌细胞系Ishikawa细胞磷脂酰肌醇 3激酶 /蛋白激酶B(PI 3K/PKB)信号传导通路的激活作用以及PI 3K抑制剂对其的影响。方法　应用免疫印迹杂交技术 ,检测一定浓度 (1× 10 -6mol/L) 17β E2 作用于Ishikawa细胞不同时间 (分别为 0、5、15、30、6 0、12 0min)后和不同浓度 (分别为 0、1× 10 -10 、1× 10 -8、1× 10 -6、1× 10 -4mol/L) 17β E2 作用Ishikawa细胞一定时间 (30min)后PKB的活化情况 [以磷酸化PKB和总PKB比值 (p PKB/PKB)表示 ],以及用同法检测PI 3K抑制剂LY2 94 0 0 2对 17β E2 活化PKB的影响。结果　 1× 10 -6mol/L 17β E2 作用于Ishikawa细胞 15min时 ,PKB的活化水平 (0 5 33± 0 0 2 9)已明显高于对照 (0 36 1± 0 0 2 9,P <0 0 5 ) ,30min时最明显 (0 6 6 6± 0 0 2 1,P <0 0 0 1) ,而且持续至少达 12 0min时 ;随着 17β E2 浓度 (分别为 1× 10 -10 、1×10 -8、1× 10 -6、1× 10 -4mol/L)的增加 ,PKB的活化水平逐渐增高 ,与对照比较 ,差异有显著性 (除 1×10 -10 mol/L外 ,P值分别为 >0 0 5、<0 0 5、<0 0 5、<0 0 0 1)。随着LY2 94 0 0 2作用浓度 (分别为 0 1、10、5 0、10 0 μmol/L)的增加 ,17β E2 作用Ishikawa细胞后P     

17β-雌二醇对子宫内膜癌细胞磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B信号传导通路的活化

目的:探讨17β雌二醇(E2)对子宫内膜癌细胞系HEC1A磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/PKB)信号传导通路的激活作用以及PI3K抑制剂和雌激素受体(ER)拮抗剂对它的影响。方法:应用免疫印迹杂交技术检测1×106mol/LE2作用于HEC1A细胞不同时间和不同浓度E2作用细胞15min后PKB的活化情况,同法检测PI3K抑制剂LY294002和ER拮抗剂ICI182780对E2活化PKB的影响。结果:1×106mol/LE2作用于HEC1A细胞15min时,PKB活化最明显,Ser473位点磷酸化PKB和总PKB比值(pPKB/PKB)为0.7877±0.0346,而基础值为0.5198±0.0166(P<0.001),且持续至少达2h,随着E2浓度的增加,PKB活化逐渐增强;随着LY294002作用浓度增加,E2作用HEC1A细胞后PKB的活化水平逐渐下降,浓度为50μmol/L时已完全阻断了E2对HEC1A细胞PKB的活化;而随着ICI182780浓度的增加,E2作用HEC1A细胞后PKB的活化水平无明显改变。结论:E2可通过非转录效应,迅速激活HEC1A细胞的PI3K/PKB信号传导通路,而且是ER非依赖性的。     

17β-雌二醇促进骨髓间充质干细胞对子宫内膜异位症影响的小鼠实验研究

目的:进一步验证雌激素在骨髓间充质干细胞(BMSC)分化为子宫内膜异位症(EMT)病灶过程中的作用。方法:原代培养BMSC后进行流式细胞分析鉴定,建立小鼠EMT模型并将内异病灶进行HE染色鉴定。将小鼠BMSC经尾静脉注射EMT模型小鼠内,按BMSC是否预处理分为无17β-雌二醇预处理组(对照组)和17β-雌二醇预处理组(预处理组)。1月后EMT病灶切片免疫荧光检测子宫内膜间质细胞(ESC)的B淋巴细胞瘤-2(BCL-2)、增殖细胞核抗原(PCNA)、基质金属蛋白酶-1(MMP-1)蛋白表达差异。结果:小鼠模型EMT病灶HE染色提示建立模型成功。免疫荧光结果发现:预处理组的异位病灶BCL-2的平均积分光密度值高于对照组(56.58±7.07 vs 3.34±0.29),预处理组的异位病灶PCNA的平均积分光密度值高于对照组(83.64±13.07 vs 5.23±0.51),预处理组的异位病灶MMP-1蛋白的平均积分光密度值高于对照组(40.26±7.79 vs 7.64±3.62),差异均有统计学意义(P0.05)。结论:本实验初步证实17β-雌二醇可能通过促进BMSC迁移、分化,最终促进异位病灶ESC的分化、增殖并减少凋亡,从而增加异位病灶的病变程度。     

异体垂体移植诱发ICR小鼠子宫腺肌病动物模型的建立

目的探索用ICR小鼠建立子宫腺肌病实验动物模型的可行性和有效性。方法24只7周龄已达到性成熟但未曾受孕的雌性ICR小鼠开腹行异体脑垂体子宫内移植手术,小鼠分别在垂体移植术4个月后(20只)、6个月后(4只)处死,取出子宫和卵巢称重,计算小鼠子宫湿重/终末体重的比值,同时计数子宫表面突出的子宫腺肌病结节,联合组织切片HE染色检查评估子宫腺肌病的严重程度,并与未行垂体移植雌性ICR小鼠(4只)比较。结果垂体移植术后4个月,95%的小鼠(19/20)可诱发形成子宫腺肌病。术后6个月100%小鼠(4/4)诱发形成子宫腺肌病。对照组4只小鼠即使在术后6个月也不能自发发生子宫腺肌病。术后6个月小鼠终末体重、子宫湿重以及子宫湿重/终末体重的比值垂体移植组分别为37.33±2.21g、93.00±5.66mg和2.49±0.12;未做垂体移植组分别为36.25±2.48g、79.25±9.58mg和2.18±0.13。虽然两组小鼠终末体重和子宫湿重差异均无统计学意义(P>0.05),但垂体移植组的子宫湿重/终末体重比值显著高于未行垂体移植组(t=-3.698;P=0.034)。垂体移植术后6个月,平均子宫腺肌病突起结节数为11.50±2.38个;HE染色的平均分数为3.25±0.32。结论选择ICR小鼠经垂体移植手术建立子宫腺肌病实验动物模型是行之有效的。     

雌激素对子宫内膜癌细胞内钙离子水平的调控的研究

目的:研究雌激素通过子宫内膜癌细胞膜受体非基因效应对细胞内钙离子的调控。方法:17β-雌二醇(E2)和17β-雌二醇偶联牛血清白蛋白(E2-BSA)作用于子宫内膜癌Ishikawa细胞系,在细胞外液分别为细胞培养基、Tyrode's液和磷酸缓冲液(PBS)的条件下,激光共聚焦显微镜检测雌激素作用后子宫内膜癌细胞胞浆钙离子的浓度变化。结果:细胞外液为培养基时,10nmol/L E2和E2-BSA作用100s内即引起钙离子浓度的增高,E2表现为单峰,E2-BSA表现为双峰;细胞外液为Tyrode's液时,E2作用后钙离子浓度无改变,E2-BSA引起钙离子浓度快速增高,100s后回落;细胞外液为PBS时,E2作用后钙离子浓度瞬时下降,E2-BSA作用后钙离子浓度快速下降,50s后趋于稳定。结论:雌激素可调节子宫内膜癌细胞内钙离子浓度,细胞外液可影响其调控作用。     

建立去势雌性裸小鼠人子宫内膜癌皮下移植瘤动物模型的探讨

目的:探讨全身外照射对建立切除卵巢后雌性裸小鼠子宫内膜癌皮下移植瘤模型成瘤率的影响.方法:将切除卵巢后1周的裸小鼠随机分为两组,一组全身外照射(4 Gy)3 h后皮下注射子宫内膜癌细胞悬液,另一组未予照射同时间皮下注射子宫内膜癌细胞悬液,观察裸小鼠体质量变化、存活情况和肿瘤的生长情况,测量肿瘤径线并计算体积.结果:2组成瘤率100％;各组肿瘤体积差异无统计学意义(P＞0.05),但存活率差异有统计学意义(P＜0.05).结论:全身外照射不影响切除卵巢的裸小鼠的成瘤率,但增加裸小鼠的死亡率.     

新鲜小鼠卵巢组织自体异位移植后卵巢功能的研究

目的 :测定小鼠卵巢组织自身异位移植后动情期血清中 17β 雌二醇 (E2 )和孕酮 (P)的水平 ,称量子宫湿重。在相同条件下 ,与正常同龄小鼠和绝经模型比较 ,探索卵巢组织移植后功能的变化。方法 :将约 10周大的ICR雌性小鼠 4 3只分成 3组 :A组即空白对照组 ,11只 ,不作任何处理 ;B组即去势组 ,16只 ,去除双侧卵巢 ;C组为实验组 ,16只 ,自身卵巢摘除后剪成 3～ 4块种植于腹壁皮下。术后观察阴道涂片变化 ,在动情期断头取血 ,称量子宫湿重 ,并分析子宫内膜组织形态。再用酶联免疫法测定各组血清中E2和P的水平。结果 :B组小鼠的阴道涂片在 1周左右失去正常的周期变化 ,将超过 2周未出现典型动情期者判断为绝经。C组在失去正常周期变化后 ,通常于 8± 3d重新出现动情期。A组 10周动情期小鼠的血清E2 、P的平均水平为 5 3.72pg/ml、9.86ng/ml,子宫湿重平均为 111.0 0mg ;B组分别为 4 2 .17pg/ml、1.5 8ng/ml ,2 4 .4 2mg ;C组分别为 4 7.11pg/ml、11.6 1ng/ml,95 .2 0mg。此外 ,C组子宫湿重及子宫内膜组织形态与正常小鼠无显著差异(P >0 .0 5 )而与B小鼠有明显差异 (P <0 .0 5 )。结论 :小鼠卵巢组织的自身异位移植能够恢复卵巢分泌E2 和P的功能。     

17β雌二醇对子宫腺肌病患者子宫内膜-肌层交界区平滑肌细胞内游离Ca2+浓度的调节作用及机制研究

目的：探讨17β雌二醇（17β-E2）对子宫腺肌病患者子宫内膜-肌层交界区（EMI）平滑肌细胞内游离Ca2+浓度（[Ca2+]i）的调节作用及可能机制。方法选择2011年9月至2012年12月在首都医科大学附属北京妇产医院妇科微创中心因子宫腺肌病行子宫全切除术的患者28例为腺肌病组,选择同期因子宫颈上皮内瘤变（CIN）Ⅲ行子宫全切除术者31例为对照组,对两组患者的EMI平滑肌细胞进行分离及原代培养。应用Ca2+荧光探针Fluo-4/AM负载平滑肌细胞,采用细胞外钙阻断实验、细胞内钙释放阻断实验、细胞膜钙通道阻断实验、细胞膜钙激活钾通道阻断实验阻断引起[Ca2+]i变化的各个环节,利用激光共聚焦显微镜观察17β-E2诱导后的两组患者EMI平滑肌细胞内[Ca2+]i的变化,其变化程度以ΔF[Ca2+]i表示。结果（1）在常规有Ca2+培养基中,17β-E2诱导后腺肌病组和对照组EMI平滑肌细胞内Ca2+荧光强度均明显高于其17β-E2诱导前,腺肌病组ΔF[Ca2+]i为384±26,对照组ΔF[Ca2+]i为235±20,两组比较,差异有统计学意义（P=0.001）;细胞外钙阻断实验显示,细胞外无Ca2+时,腺肌病组ΔF[Ca2+]i为207±17,对照组ΔF[Ca2+]i为221±19,两组比较,差异无统计学意义（P=0.731）。腺肌病组ΔF[Ca2+]i在细胞外有Ca2+时明显高于无Ca2+时,差异有统计学意义（P=0.000）;而对照组两者比较,差异无统计学意义（P=0.060）。（2）细胞内钙释放阻断实验显示,阻断肌质网钙库上三磷酸肌醇（IP3）敏感的钙释放通道、肌质网利阿诺定（Ryanodine）受体（RyR）钙释放通道、肌质网钙泵释放后,腺肌病组和对照组ΔF[Ca2+]i分别与其阻断前相比均明显降低（P<0.05）,且腺肌病组ΔF[Ca2+]i均明显高于对照组（P<0.05）。（3）细胞膜钙通道阻断实验显示,阻断L-型钙通道后,腺肌病组ΔF[Ca2+]i为211±19,对照组为203±16,两组比较,差异无统计学意义（P=0.064）;腺肌病组ΔF[Ca2+]i明显低于其阻断前（ΔF[Ca2+]i为384±28;P=0.001）;而对照组与其处理前（ΔF[Ca2+]i为234±22）比较,差异则无统计学意义（P=0.141）。（4）细胞膜钙激活钾通道阻断实验显示,阻断细胞膜钙激活钾通道后,腺肌病组ΔF[Ca2+]i为357±24,对照组为209±19,两组比较,差异有统计学意义（P=0.000）;腺肌病组和对照组ΔF[Ca2+]i分别与其处理前（腺肌病组ΔF[Ca2+]i为363±21,对照组为237±20）比较,差异均无统计学意义（P>0.05）。结论17β-E2通过内源性钙库释放Ca2+和细胞膜L-型钙通道介导的Ca2+内流导致子宫腺肌病患者EMI平滑肌细胞内游离[Ca2+]i异常增高,[Ca2+]i调节异常导致的子宫收缩功能障碍可能参与子宫腺肌病的发生、发展。     

Effects of raloxifene hydrochloride on endometrial cancer cells in vitro

OBJECTIVE: Determine effects of raloxifene hydrochloride, a selective estrogen receptor modulator (SERM), on growth and proliferation of an estrogen-responsive endometrial cancer cell line in vitro. MATERIALS AND METHODS: Studies were performed with Ishikawa endometrial adenocarcinoma cells, a well-differentiated cancer that expresses estrogen receptors and progesterone receptors. Raloxifene was purified as the hydrochloride salt. The four arms of the study were cells grown (1) without any further addition (control), (2) with estradiol only, (3) with raloxifene only, or (4) with estradiol and raloxifene. Three concentrations of estradiol (10, 100, 1000 pg/ml) and raloxifene (1, 10, 100 ng/ml) were used. After 1 week of culturing, the number of living cells for each experimental group was determined and expressed as a percentage of the control group. RESULTS: Cells treated with raloxifene 10 or 100 ng/ml alone grew significantly faster than control cells: 10 ng/ml [115.25%; SD, 11.05; 95% confidence interval (CI), 107.35-123.16; P = 0.002] and 100 ng/ml (111.14%; SD, 14.19; 95% CI, 100.98-121.29; P = 0.03). Estradiol 10 or 100 pg/ml did not stimulate cell growth, whereas cells treated with 1000 pg/ml grew significantly faster than control cells (114.69%; SD, 16.84; 95% CI, 102.65-126.74; P = 0.02). Raloxifene and estradiol together in any concentration did not affect cell growth. CONCLUSIONS: Raloxifene did not inhibit the growth of endometrial cancer cells in vitro. High concentrations even promoted cell growth. Estradiol in physiologic concentrations did not stimulate the growth of endometrial cancer cells in vitro.     

The positron emission tomography with F18 17beta-estradiol has the potential to benefit diagnosis and treatment of endometrial cancer

BACKGROUND: The positron emission tomography (PET) with F18 17beta-estradiol (FES) has good imaging for assessment of estrogen receptor in breast cancer. CASE: We report on a 30-year-old woman who desired to preserve her fertility with well-differentiated endometrial adenocarcinoma. Before hormone treatment was started, FES-PET showed increased uptake of endometrium, magnetic resonance imaging (MRI) showed thickness and F-18 fluorodeoxyglucose (FDG)-PET showed increased uptake. FES-PET after 3 months showed remaining FES uptake, but there were no abnormal findings on MRI and FDG-PET. Hysteroscopy showed remaining adenocarcinoma. After additional treatment, FES-PET showed a therapeutic response, and hysteroscopy showed no abnormal finding. CONCLUSIONS: To our knowledge, this is the first report that FES-PET has the potential to provide more useful information than did FDG-PET about the hormone therapy.     

生酮饮食对人子宫内膜癌裸鼠皮下移植瘤生长的影响

目的:建立人子宫内膜癌裸鼠皮下移植瘤模型,通过中链甘油三酯(MCT)生酮饮食诱导裸鼠产生酮症,观察生酮饮食对裸鼠肿瘤生长的影响。方法:3~4周龄雌性裸鼠18只,随机分为正常饲料组(SD)、生酮饮食组(KD)和无碳水化合物生酮饮食组(NCKD)3组;裸鼠右侧腋窝皮下注射子宫内膜癌细胞悬液,接种后予以不同饮食饲养;观察期间肿瘤生长情况,测量肿瘤径线并计算体积,于第30天处死裸鼠取瘤称重。结果:7天后观察,与SD组比较,KD组及NCKD组血糖约降低40%,血酮体升高3~5倍;3组裸鼠成瘤率100%;30天后KD组和NCKD组肿瘤体积及重量均小于SD组,差异有统计学意义(P<0.05),KD组与NCKD组无明显差异(P>0.05)。结论:中链甘油三酯生酮饮食能抑制肿瘤的生长速度,虽然不能替代传统抗肿瘤治疗方法,但其临床应用价值值得进一步研究。     

腹腔镜手术与开腹手术治疗早期子宫内膜癌的临床对比分析

目的　探讨腹腔镜用于早期子宫内膜癌手术治疗的可行性。方法　回顾性分析 1998年 1月至 2 0 0 3年 8月间用腹腔镜完成手术治疗的子宫内膜癌患者 2 4例作为研究组 ,随机选择同期经过开腹手术治疗的患者 41例作为对照组 ,对两组围手术期的情况和生存情况决定是否进行比较。结果　两组患者术前情况 ,如体重、病情严重程度、病理分化程度和肌层浸润深度比较 ,差异均无显著性 (P >0 0 5)。研究组平均手术时间 97min ,对照组为 13 4min ,差异有极显著性 (P <0 0 0 1) ;平均手术出血量分别为 163和 2 59ml,差异无显著性 (P =0 0 59) ;平均切除盆腔淋巴结数量分别为 13 6和19 6个 ,差异无显著性 (P >0 0 5) ;术后并发症发生率分别是 12 %和 2 4% ,差异有显著性 (P <0 0 5) ;术后平均住院天数分别为 6 3和 9 6d ,差异有极显著性 (P <0 0 0 1)。两组病理类型和手术病理分期比较 ,差异无显著性 (P >0 0 5) ;术后放疗、化疗和生物治疗等辅助治疗比较 ,差异无显著性(P >0 0 5) ;剔除失访病例后 ,两组生存率分别为 10 0 %和 97% ,差异无显著性 (P >0 0 5)。结论　小样本量的临床研究表明 ,在严格掌握指征的条件下腹腔镜治疗早期子宫内膜癌是可行的 ,并且有手术创伤小、恢复快的优点 ,值得进行多中心、前瞻     

子宫内膜增殖症与子宫内膜癌细胞凋亡的相关性研究

目的：探讨子宫内膜增殖症和子宫内膜癌细胞凋亡及其与凋亡相关基因产物表达的关系。方法：应用ＴＵＮＥＬ法检测正常增殖期、增殖症及癌变子宫内膜组织标本的凋亡细胞,应用组免法检测Ｂｃｌ ２、Ｐ５３、Ｆａｓ及Ｆａｓ Ｌ抗原。结果：（１）与正常增殖期相比,增殖症子宫内膜腺上皮细胞中凋亡细胞比率高,Ｂｃｌ ２ 蛋白含量高,Ｆａｓ、Ｆａｓ Ｌ蛋白含量低下;（２）内膜癌癌细胞中凋亡细胞比率高,Ｂｃｌ ２蛋白含量低,１／３标本中Ｆａｓ、Ｆａｓ Ｌ蛋白含量丰富;（３）Ｐ５３ 仅存在于１２％ 的内膜癌细胞核内。结论：增殖症内膜凋亡细胞增多显示了良性病变内膜中细胞凋亡对过度增生的抑制。内膜癌细胞凋亡增多则与Ｂｃｌ ２ 低表达,Ｆａｓ、Ｆａｓ Ｌ高表达及Ｐ５３部分表达相伴,表明癌变内膜中细胞凋亡调控受多种基因表达的影响。