胡桃醌抑制卵巢癌SKOV3细胞黏附和侵袭作用

目的探讨胡桃醌对人卵巢癌SKOV3细胞转移抑制作用。方法实验设对照组、胡桃醌12.5、25.0、50.0、100.0 μmol/L组,通过噻唑蓝(MTT)实验检测细胞增殖能力,黏附实验和Transwell实验观察胡桃醌对SKOV3细胞黏附和侵袭能力,Western blot 检测基质金属蛋白酶2(MMP-2)和MMP-9蛋白表达变化。结果与对照组比较,胡桃醌12.5、25.0、50.0、100.0 μmol/L组SKOV3细胞抑制率分别为(16.8±3.4)%、(39.6±9.7)%、(63.3±13.6)%和(84.5±17.3)%,明显升高,呈剂量依赖性;与对照组比较,25.0、50.0、100.0 μmol/L胡桃醌组SKOV3细胞黏附率和侵袭力分别为(49.2 ±6.5)%、(37.3±2.9)%、(24.7 ±3.7)%和(0.627±0.064)、(0.419±0.018)、(0.165±0.014),明显下降(P<0.05);与对照组比较,胡桃醌50.0、100.0 μmol/L组SKOV3细胞内MMP-2、MM-9表达水平明显下降(P<0.05),呈剂量依赖关系。结论胡桃醌能明显抑制SKOV3细胞黏附能力及侵袭力,其机制可能与抑制细胞内MMP-2、MMP-9表达有关。     

薏苡仁油对卵巢癌SKOV3细胞凋亡的作用及机制研究

目的 研究薏苡仁油对卵巢癌SKOV3细胞凋亡的作用及其机制.方法 采用不同浓度薏苡仁油作用于卵巢癌SKOV3细胞,MTT法观察薏苡仁油对SKOV3细胞存活率的影响.采用Hoechst33342/PI染色、AO/EB染色、DNA Ladder检测、流式细胞仪检测薏苡仁油对SKOV3细胞凋亡的影响.Western blotting检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、Capase 3、8、9的表达情况.结果 与对照组相比,400μg/mL和500μg/mL薏苡仁油浓度可在处理后24 h、48 h和72 h显著降低SKOV3细胞存活率(t值4.635～5.231,P<0.05),其作用随着时间的延长而增加.薏苡仁油低浓度50μg/m L、100μg/m L、200μg/m L作用于卵巢癌SKOV3细胞48h诱导凋亡效果较好.薏苡仁油作用于SKOV3细胞48h后,Hoechst33342/PI染色、AO/EB染色均可见典型的凋亡小体.不同浓度50μg/mL、100μg/mL、200μg/mL组薏苡仁油作用于SKOV3细胞48h后,与对照组相比较,细胞凋亡均显著增多(t值分别为2.536、3.012、4.908,P<0.05),其中200μg/m L组细胞总凋亡率高达(27.10±5.42)％.与对照组相比较,薏苡仁油浓度50μg/mL、100μg/mL、200μg/mL作用于SKOV3细胞48h后,Bax、Caspase 3、Caspase 8、Caspase 9蛋白表达均显著增高(t值2.436～5.709,P<0.05),Bcl-2蛋白表达显著下降(t值2.357～4.304,P<0.05).结论 薏苡仁油可诱导卵巢癌细胞株SKOV3凋亡,其机制可能与下调抑制凋亡蛋白Bcl-2、上调促凋亡蛋白Bax、Caspase 3、8、9的表达水平有关.薏苡仁油有可能抑制卵巢癌细胞的扩散、转移.     

中药复方药物血清对BID和CTNNB1基因在人卵巢癌细胞株SKOV3中表达的影响

目的:研究BID和CTNNB1基因在中药复方理冲生髓饮诱导人卵巢癌细胞株SKOV3细胞凋亡中的作用。方法:Wistar大鼠随机分组,灌胃给药,采血制备中药复方药物血清。提取对照组及理冲生髓饮组肿瘤细胞mRNA,制备DNA探针并分别用Cy3和Cy5两种荧光染料标记,与人细胞凋亡寡核苷酸微阵列芯片进行杂交,经扫描、分析得出药物作用后表达有差异的基因。结果:共筛选出显著表达差异基因66种,其中20种基因表达水平上调,46种基因表达水平下调。结论:理冲生髓饮可能通过上调BID基因和下调CTNNB1基因达到诱导细胞凋亡、抑制转移及增加化疗敏感性的目的。     

AKT基因被RNA干扰抑制后对卵巢癌SKOV3细胞增殖及凋亡的影响

目的通过RNA干扰技术阻断卵巢癌SKOV3细胞中AKT基因的表达,研究其对卵巢癌细胞增殖与凋亡的影响。方法人卵巢癌SKOV3细胞体外培养,分为对照组、空白载体组与RNA干扰组三组,采用MTT法与流式细胞仪AnnexinV／PI法检测并评价AKT基因干扰后对卵巢癌细胞增殖、凋亡的影响。结果MTF结果显示RNA干扰组细胞增殖能力较对照组与空白载体组明显降低,差异具有统计学意义（P〈0．05）,空白载体组与对照组比较差异无统计学意义（P〉0．05）;流式细胞仪AnnexinV／PI法检测结果显示,RNA干扰组细胞凋亡率高达到（79．52±2．31）％,较对照组与空白载体组明显升高,约是空白载体组与对照组的3倍,差别具有统计学意义（P〈0．05）。结论靶向AKT基因的小干扰RNA（siRNA）可有效地抑制卵巢癌细胞的增殖,促进细胞凋亡,是卵巢癌的治疗新方法。     

自噬相关基因5在卵巢肿瘤患者中的表达及对卵巢癌细胞系SKOV3增殖影响的意义研究

目的:检测卵巢肿瘤中自噬相关基因5(Atg5)的表达情况,公共数据库分析Atg5在mRNA表达水平与患者预后的相关性。研究人卵巢癌细胞系SKOV3中Atg5下调对细胞增殖的影响。方法:收集卵巢肿瘤患者卵巢肿瘤标本共30例,对其进行Atg5的免疫组织化学染色,检测其在不同卵巢肿瘤患者中的表达情况。应用公共数据库Kaplan-Meier plots对多组卵巢癌患者mRNA表达谱分析,预测Atg5的表达水平对患者预后的影响。SKOV3细胞分为两组,阴性对照组(转染阴性对照siRNA)和实验组(转染Atg5 siRNA)。通过蛋白印记法检测、CCK-8法及克隆形成实验检测细胞转染siRNA后Atg5的表达及增殖情况。结果:免疫组织化学检测卵巢肿瘤组织Atg5表达情况,卵巢癌组阳性率(75.00%)较交界性卵巢肿瘤(40.00%)及良性卵巢肿瘤(20.00%)表达水平高,且卵巢癌组与良性卵巢肿瘤组差异有统计学意义(P<0.05)。公共数据库KaplanMeier plots表达谱芯片分析Atg5 mRNA表达水平对患者预后的影响,结果显示高表达Atg5组较低表达组预后差,差异有统计学意义〔(P=3.1e-05,HR=1.37(1.18,1.58)〕。对人卵巢癌细胞系SKOV3进行反义siRNA干扰,干扰后细胞采用CCK8法分别在不同时间点检测细胞的增殖能力,结果阴性对照组和转染Atg5 siRNA组(实验组)A450值在24 h、48 h、72 h对照组及实验组A450值分别为1.179±0.036、1.454±0.040、1.828±0.059;0.640±0.039、1.032±0.054 1.146±0.040,实验组较阴性对照组明显降低,差异有统计学意义(均P<0.01)。结论:免疫组织化学法检测Atg5在卵巢癌中表达与良性卵巢肿瘤及交界性卵巢肿瘤相比明显升高,对公共数据库mRNA表达谱芯片的分析显示,Atg5高表达可能与卵巢癌的不良预后有关,反义干扰siRNA显著下调了Atg5水平表达的SKOV3细胞,其增殖能力受到明显抑制。     

T7-shRNAs对SKOV3卵巢癌细胞株中C-erbB2基因的RNAi作用

目的:探讨设计含有T7-启动子的Oligo-DNA,继而合成T7发夹RNA,并应用T7-shRNAs对卵巢癌SKOV3细胞株的卵巢癌C-erbB2基因进行RNAi。方法:自行设计并应用体外转录法合成、筛选出3条T7-shRNAs,脂质体转染卵巢癌SKOV3细胞株,分为非转染组、无关RNA组、shRNA(a、b、c)组,免疫细胞、RT-PCR及CCK-8观测干涉结果。结果:体外转录结果,合成后电泳检测shRNA(a、b、c)纯度较高,符合实验标准;转染后免疫细胞爬片结果,非转染组、无关RNA组和shRNAc链24、48、72h可见细胞生长正常,与时相无关,着色为深棕色,无抑制效果;shRNAa链24h可见有一定抑制效果,但48h即开始恢复生长,72h已恢复正常;shRNA b链24、48、72h可见有明显抑制效果,以24~48h最为明显,至72h仍维持相当抑制率;在核酸水平上半定量的RT-PCR结果与上述结果相符合;CCK-8动态观测,经shRNA干涉后不同时间内的抑制曲线显示,shRNAb链的抑制作用最明显,而shRNAa链和shRNAc链的抑制作用不明显(P<0.01),但shRNAa链抑制作用强于shRNAc链(P<0.01),从整个时间段来看,shRNAb在48h的抑制作用最强。结论:研究证实应用发夹RNA对肿瘤细胞可以取得明显干涉效果,发现shRNAb对C-erbB2基因干涉具有明显抑制作用,进一步完善RNA干涉实验来抑制肿瘤细胞生长是存在可能的。     

整合素α5表达上调促进卵巢癌SKOV3细胞侵袭转移及机制探讨

目的:检测整合素α5(integrinα5,ITGA5)表达上调对卵巢癌SKOV3细胞侵袭转移影响及机制探讨。方法:用pEGFP-ITGA5过表达质粒对卵巢癌SKOV3细胞进行转染,未转染的SKOV3细胞作为对照。RT-PCR方法检测SKOV3细胞中整合素α5的mRNA水平变化,Western Blot方法检测整合素α5蛋白水平的表达。为观察整合素α5表达上调对SKOV3细胞侵袭转移能力的影响,采用Transwell小室检测细胞侵袭及迁移能力。小鼠体内粘附实验观察整合素α5过表达的SKOV3-GFP细胞体内粘附能力变化。Western Blot方法检测EMT相关蛋白EMT相关基因表达情况。结果:与对照组相比,pEGFP-ITGA5转染SKOV3细胞后整合素α5基因表达水平明显增高。细胞侵袭、迁移实验表明,pEGFP-ITGA5转染组较对照组细胞侵袭、迁移力明显增加,对照组和实验组穿膜细胞数分别为(56.32±4.63)个和(135.58±7.94)个,对照组与实验组相比差异有统计学意义(P<0.05)。小鼠体内粘附实验证明,整合素α5过表达的SKOV3-GFP细胞体内粘附能力明显增强。Western Blot结果表明整合素α5过表达的SKOV3中,E-cadherin表达明显下调,同时Vimentin、MMP-9表达明显上调。结论:整合素α5表达上调能促进卵巢癌SKOV3细胞的粘附和侵袭转移,其可能是通过促进上皮间质转化发生进而引起细胞侵袭转移能力的增强。     

Caspase 3在土荆皮酸诱导卵巢癌SKOV3细胞凋亡中的作用

目的:探讨Caspase 3在土荆皮酸(PAB)诱导卵巢癌SKOV3细胞凋亡中的作用。方法:使用不同浓度的PAB处理SKOV3细胞,应用流式细胞仪检测细胞周期的分布,采用Western Blot法检测SKOV3细胞经PAB作用前后Bcl-2和Caspase 3蛋白的表达变化。结果:经PAB作用后,SKOV3细胞出现剂量依赖性G2/M期阻滞伴随细胞凋亡,随药物浓度增加,Bcl-2蛋白表达逐渐下降,Caspase 3蛋白表达上调,Caspase 3活化百分率增高。结论:PAB能通过调节Bcl-2蛋白的表达激活Caspase 3,从而诱导SKOV3细胞发生凋亡。     

靶向H-ras基因的小干扰RNA对卵巢癌SKOV3细胞增殖的抑制作用

目的:探讨脂质体介导的靶向H-ras基因的小发夹状RNA重组质粒对人卵巢癌细胞株SKOV3细胞增殖的抑制作用。方法:实验分4组:正常对照组(仅予脂质体处理)、转染psh RNA/H-ras处理24h组、48h组及72h组。分别于转染后不同时间进行MTT实验、软琼脂克隆形成实验、细胞周期检测和AO/EB双染实验,观察各组细胞增殖、凋亡及细胞周期的变化。结果:FCM显示转染psh RNA/H-ras 24h及48h后的SKOV3细胞均出现细胞周期的抑制,48h后SKOV3细胞有显著的凋亡发生;转染psh RNA/H-ras1和pshRNA/H-ras2对SKOV3细胞克隆形成的抑制率分别为51.5%(P<0.05)和63.3%(P<0.01);MTT检测转染psh RNA/H-ras1和psh RNA/H-ras 272h后对SKOV3细胞增殖抑制率分别为62.5%和64.5%。AO/EB实验显示48h细胞的凋亡率为29.3%(P<0.05)。结论:重组质粒psh RNA/H-ras在人卵巢癌SKOV3细胞中有明显抑制细胞增殖的作用,并介导肿瘤细胞的凋亡。     

尼美舒利和扑热息痛对人卵巢癌细胞株SKOV3的作用研究

目的研究选择性环氧合酶（cyclooxygenase，COX）-2抑制剂尼美舒利和非COX抑制剂扑热息痛，对人卵巢癌细胞系SKOV3生长作用的影响。方法利用免疫组化法检测SKOV3细胞系中COX-2表达，以及两种药物对Ki-67在SKOV3细胞中表达的影响；透射电镜观察两种药物作用后，细胞形态变化及凋亡情况；流式细胞术检测两种药物作用后，对SKOV3细胞周期的影响。结果COX-2在SKOV3细胞中表达呈阳性，尼美舒利作用后的SKOV3细胞中，可发现Ki-67表达明显减少，扑热息痛对Ki-67表达无影响；透射电镜观察到细胞中凋亡小体的形成；流式细胞术发现，尼美舒利使SKOV3细胞停滞在G0／G1期，扑热息痛对细胞周期改变无影响。结论选择性COX-2抑制剂尼美舒利，可以作为卵巢癌的预防及治疗应用于临床。     

中药复方理冲生髓饮对Casp-8和CXCL2基因在人卵巢癌细胞株SKOV3中表达的影响

目的:采用基因芯片技术研究理冲生髓饮对人卵巢浆液性乳头状囊腺癌细胞株SKOV3的作用机制。方法:Wistar大鼠随机分组,灌胃给药,采血制备含药血清。提取对照组及理冲生髓饮组肿瘤细胞mRNA,制备DNA探针并分别用Cy3和Cy5两种荧光染料标记,与基因表达谱芯片进行杂交,经扫描、分析,得出药物作用后表达有差异的基因。结果:共筛选出显著表达差异基因136种,其中16种基因表达水平下调,120种基因表达上调。结论:理冲生髓饮对卵巢癌细胞株SKOV3的生长有抑制作用,促进肿瘤细胞凋亡和抑制血管生成可能是其作用机制。     

丹参酮ⅡA对人卵巢癌细胞SKOV3增殖与凋亡的影响

目的:探讨丹参酮ⅡA(TanⅡA)对人卵巢癌细胞SKOV3的生长抑制和诱导凋亡作用及其可能机制。方法:培养人卵巢癌细胞SKOV3,经TanⅡA作用后,通过四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测定丹参酮ⅡA对人卵巢癌细胞SKOV3的增殖抑制作用;流式细胞术检测细胞周期;RT-PCR检测Survivin与Smac/DIABLO mRNA表达水平;免疫荧光细胞化学检测Survivin蛋白及Smac/DIABLO蛋白的表达。结果:1.0～10.0μg/ml TanⅡA对人卵巢癌细胞SKOV3具有生长抑制作用,并具有时间-剂量依赖性。实验组较对照组G1/G2期细胞数量增多,而S期细胞数量减少(P<0.05)。随着TanⅡA干预浓度的增加和作用时间的延长,Survivin mRNA的表达受到明显抑制(P<0.05),而Smac/DIABLO mRNA的表达明显上调(P<0.05)。Survivin蛋白及Smac/DIABLO蛋白均表达于SKOV3细胞,其表达多定位于细胞质中,偶见于细胞核。结论:TanⅡA对人卵巢癌细胞SKOV3具有生长抑制和诱导凋亡作用,其作用机制可能是通过抑制人卵巢癌细胞SKOV3 Survivin和促进Smac/DIABLO的表达而实现的。     

不同浓度FSH对上皮性卵巢癌细胞增殖、凋亡、侵袭的影响及分子机制研究

目的 探讨不同浓度卵泡刺激素(follicle stimulating hormone,FSH)对上皮性卵巢癌细胞株SKOV3和OAW28细胞增殖、凋亡、侵袭的影响及其分子机制.方法 将SKOV3和OAW28细胞培养至对数生长期,分别加入浓度为0,20,40,80 IU/L的FSH培养液培养48 h,通过倒置显微镜观察...     

Jagged1-STAT 3信号轴对卵巢癌细胞A 2780迁移能力的影响

目的探讨Jagged1调控STAT 3对卵巢癌A 2780细胞迁移能力的影响。方法 Notch信号特异性阻断剂γ-分泌酶抑制剂(N-[N-(3,5-difluorophenacetyl)-1-alanyl]-S-phenylglycine t-butyl ester,DAPT)以浓度梯度的方式(0μM、2.5μM、5μM、10μM、20μM和40μM)处理卵巢癌A 2780细胞,通过CCK-8和平板克隆实验分析细胞增殖能力,Transwell迁移实验和体外划痕实验检测A 2780细胞迁移能力,Western blot检测Jagged1、STAT 3和p-STAT 3的蛋白表达。结果实验组细胞的平板克隆形成能力均低于对照组细胞,且随浓度升高呈逐级递减趋势,且10μM DAPT处理后的细胞下降最明显(P0.05)。实验组的迁移能力明显低于对照组,且呈时间梯度和浓度梯度的方式降低(P0.05)。卵巢癌A 2780细胞中Jagged1下调p-STAT 3表达以浓度和时间依赖的方式,DAPT浓度大于10μM有明显抑制作用(P0.05);STAT 3蛋白表达的作用变化无明显差异(P0.05)。结论抑制Jagged1可下调STAT 3导致卵巢癌A 2780细胞活力、增殖和迁移能力降低,Jagged1可能成为卵巢癌治疗的潜在新靶点。     

厄洛替尼联合山奈酚诱导卵巢癌细胞凋亡协同作用

目的 探讨厄洛替尼和山奈酚对表皮生长因子受体酪氨酸激酶(EGFR-TPK)的抑制作用,并阐明两者诱导卵巢癌细胞凋亡的协同作用机制。方法 在EGFR-TPK、SKOV-3人卵巢癌细胞株中加入不同浓度(0.1、0.5、1.0、2.5、5.0 mg/mL)山奈酚与厄洛替尼,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定山奈酚和厄洛替尼对EGFR-TPK的抑制作用,四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定山奈酚和厄洛替尼对SKOV-3人卵巢癌细胞株生长的抑制作用和协同效应,酶标仪法检测山奈酚和厄洛替尼对细胞凋亡蛋白caspase-3活性的影响。结果 山奈酚和厄洛替尼对EGFR-TPK的半抑制率(IC₅₀)分别为(2.33±0.32)和(1.75±0.18) mg/mL,差异无统计学意义(P>0.05);与空白对照组比较,0.1、0.5、1.0、2.5、5.0 mg/mL山奈酚和厄洛替尼组肿瘤细胞转移数量均减少,差异均有统计学意义(P<0.05);山奈酚和厄洛替尼协同能力检测结果显示,0.5 mg/mL厄洛替尼与0.5、2.5和5.0 mg/mL山奈酚联合使用对抑制SKOV-3人卵巢癌细胞生长均具有协同效应,2.5和5.0 mg/mL厄洛替尼与0.5、2.5和5.0 mg/mL山奈酚联合使用对抑制SKOV-3人卵巢癌细胞生长均具有加和效应。结论 山奈酚联合厄洛替尼能够诱导SKOV-3人卵巢癌细胞的凋亡,并对SKOV-3人卵巢癌细胞转移起到抑制作用。     

趋化因子CXCL12对卵巢癌细胞侵袭和转移的作用及机制研究

目的 研究趋化因子CXCL12对卵巢癌细胞侵袭和转移的作用及机制.方法 采用RT-PCR检测20例上皮性卵巢癌组织、卵巢癌细胞株CAOV3、血管内皮细胞株HUVEC和20例正常卵巢组织中CXCL12的mRNA表达及卵巢癌腹膜后淋巴组织和输卵管平滑肌组织中CXCL12的表达,ELISA法检测20例卵巢癌患者腹水中趋化因子CXCL12表达水平,比较不同浓度CXCL12对CAOV3及HUVEC细胞迁移能力及其表面相关黏附分子表达水平的影响.结果 20例卵巢癌组织、卵巢细胞CAOV3、内皮细胞HUVEC、转移的淋巴组织中CXCL12mRNA相对表达量分别为2.41±1.05、1.92±1.17、1.73±1.12、1.68±1.13,而正常组未检出,各组比较有显著性差异(F=2.907,P=0.032).20例卵巢癌患者腹水中有19例检测到趋化因子CXCL12,检出率95.0%,CXCL12水平为(6 552.7±476.5)pg/mL.与对照组相比,CAOV3细胞经CXCL12处理后,与细胞外基质的粘附能力相对粘附率由(22.65±2.3)%上升至(51.47±2.7)%(t=4.696,P<0.05).卵巢癌细胞株CAOV3与内皮细胞HUVEC中,加入CXCL12处理后,经Tramswell法检测,结果显示细胞数显著增加(t值分别为3.326、3.897、3.215、3.168,均P<0.05),提示细胞的侵袭与迁移能力明显增强,其中浓度为100ng/mL的趋化活性最高,CAOV3 与HUVEC细胞趋化指数分别为4.0±1.5、4.3±1.7,对照组趋化指数分别为1.1±0.5、1.2±0.6,比较差异有统计学意义(t值分别为2.687、2.938,均P<0.05).结论 趋化因子CXCL12通过调控卵巢癌细胞的黏附、侵袭和转移能力,进而提高CAOV3、HUVEC细胞活性,参与卵巢癌细胞的侵袭和转移.     

S100A6siRNA对卵巢癌细胞生物学行为的影响

目的探讨S100A6蛋白表达对卵巢癌细胞生物学行为的影响。方法以卵巢癌细胞A2780为研究对象,利用RNA干扰技术特异性降低S100A6表达水平后,分别用实时定量PCR和Western blot检测S100A6 siRNA对S100A6表达水平的抑制效率。用流式细胞术检测S100A6 siRNA转染前后A2780细胞的细胞周期变化,用Transwell试验观察S100A6siRNA转染前后侵袭能力的变化,用MTT法检测S100A6 siRNA对A2780细胞顺铂敏感性的影响。结果S100A6siRNA转染组细胞中S100A6 mRNA和蛋白表达水平与S100A6 siRNA呈浓度、时间依赖性明显下调,抑制效率可达63．75％～80．68％。在与空白对照组和阴性对照siRNA组相比,S100A6 siRNA出现了G0／G1期比例升高,S期比例降低,差异有统计学意义（X^2=6．211,P=0．045）。Transwell试验表明,6．25、12．5nmol／LS100A6 siRNA分别转染48h后,A2780细胞芽膜细胞数目分别为78±7．51和27±8．24,与阴性对照组（91±5．78）相比,穿膜细胞显著减少,差异有统计学意义（X^2=3．898,P=0.048）。MTT法测定S100A6 siRNA转染后A2780细胞对顺铂敏感性的影响结果显示,S100A6 siRNA引起顺铂对A2780细胞的抑制率增加（X^2=9．609,P=0．022）,而空白对照组和阴性对照siRNA组之间无明显差异。对顺铂半数致死剂量（IC50）的计算结果显示,分别转染6．25、12．5nmol／LS100A6 siRNA的A2780细胞对顺铂IC50值分别为13．42μmol／L和11．32μmoL／L,与空白对照组和阴性对照siRNA组相比均显著降低,差异有统计学意义（X^2=5．566,P=0．018）。结论S100A6 siRNA转染卵巢癌A2780细胞后,引起A2780细胞GO／G1期阻滞,侵袭能力降低,同时对顺铂的敏感性有所增强,可能是卵巢癌靶向治疗的候选基因。