二至天癸颗粒对体外受精-胚胎移植患者卵泡液代谢组学及Ca~(2+)浓度的影响

目的从人卵泡液代谢组学及Ca~(2+)浓度,探讨二至天癸颗粒提高卵细胞质量的机制。探讨体外受精-胚胎移植(in vitro fertilization and embryo transfer,IVF-ET)周期人卵泡液代谢组学及钙离子(Ca~(2+))浓度、胆碱脂酶(ChE)、肌酐(Cr)对卵细胞质量及妊娠结局的影响。方法57例IVF-ET患者随机分为试验组(二至天癸颗粒加IVF-ET常规用药组,27例)和对照组(六味地黄颗粒合IVF-ET常规用药组,30例)。观察患者取卵日肾阴虚证候较垂体降调节后的改善情况,比较两组患者卵泡液Ca~(2+)浓度、胆碱脂酶、肌酐的差异及两组卵泡液代谢组学的变化,取卵数、受精率、卵裂率、优质胚胎率和妊娠率的差异。结果试验组治疗后肾阴虚证候积分为8.30±1.46,受精率0.82±0.09,卵裂率0.97±0.07,优质胚胎率0.51±0.18,对照组分别为9.16±1.15,0.74±0.18,0.91±0.10,0.41±0.09,试验组优于对照组(P0.05)。主成分分析法分析两组卵泡液代谢组学,试验组主要分布在Ⅰ区;对照组主要分布在Ⅱ区。两组卵泡液代谢组学有明显差异。妊娠组卵泡液主要分布在Ⅰ区。试验组Ca~(2+)浓度显著高于对照组(P0.05)。ChE、Cr高于对照组,但差异无统计学意义。结论在调节卵泡液代谢组学和Ca~(2+)浓度,提高卵细胞、胚胎质量,提高IVF-ET妊娠率方面,二至天癸颗粒优于六味地黄颗粒。     

二至天癸方对小鼠卵细胞质量影响的实验研究

目的 观察二至天癸方在体外受精一胚胎移植过程中对卵细胞质量的影响。方法 将80只小鼠随机分为4组：结合组[给二至天癸方加人绝经期促性腺激素(HMG)]、中药组(给二至天癸方)、激素组(给HMG)、对照组(给生理盐水),并进行排卵和卵裂试验,观察中药对卵细胞质量的影响。结果 结合组与激素组在促排卵数量上差异无显著性,但在卵细胞形态学评分及受精率、卵裂率中比较差异均有显著性(P<0．05),以结合组为优。结论 二至天癸方可与西药发挥协同作用,并能提高卵细胞质量。     

二至天癸颗粒对体外受精周期颗粒细胞GDNF、GFRα-1表达的影响

目的：探讨二至天癸颗粒对IVF周期颗粒细胞胶质细胞源性神经营养因子（GDNF）、家族特异性受体a-1（GFRa-1）的影响,从而改善卵母细胞质量,提高妊娠率的可能机制.方法：将80例因输卵管因素行体外授精-胚胎移植（IVF-ET）患者分为治疗组（IVF治疗周期加用二至天癸颗粒）40例,对照组（IVF治疗周期加用安慰剂颗粒）40例.观察临床肾虚证候积分变化情况,促性腺激素（Gn）用量及用药天数,取卵数、优质卵率、受精率、优质胚胎率、临床妊娠率及颗粒细胞GD-NF、GFRa-l mRNA的表达情况.结果：治疗组患者肾虚症状得到明显改善,治疗组Gn用量及用药天数低于对照组,优质卵率、优质胚胎率及临床妊娠率均高于对照组,差异均有统计学意义（P＜0.05）;颗粒细胞GDNF、GFRa-1 mRNA表达都优于对照组,差异均有统计学意义（P＜0.05）.结论：二至天癸颗粒可能通过提高颗粒细胞GDNF、GFRa-l mRNA的表达,改善卵母细胞成熟度,提高卵细胞质量,从而提高临床妊娠率.     

二至天癸颗粒联合体外受精-胚胎移植治疗不孕症61例临床研究

目的：观察二至天癸颗粒对不孕症患者肾气阴两虚证候的疗效,评定其对卵细胞质量,优质卵、受精卵、优质胚数目及妊娠率的影响.方法：治疗组为超促排卵方案加服二至天癸颗粒,对照组单用超排.观察两组治疗前后肾气阴两虚证候改变、取卵数、优质卵率、受精率、优质胚胎率、妊娠率,统计促性腺激素（Gn）用药情况,并做相关性分析.结果：肾气阴两虚证候改善、优质卵率、受精率、优质胚胎率等方面两组比较差异有显著性;治疗组Gn剂量明显少于对照组;肾气阴两虚证候改善程度与优质卵率呈正相关.结论：二至天癸颗粒可明显改善肾气阴两虚证候,在不减少卵细胞数目的情况下,增加优质卵、优质胚数目,提高临床妊娠率.     

二至天癸颗粒提高卵细胞质量与小鼠卵巢内IGF-1R mRNA表达量关系的研究

目的探讨二至天癸颗粒提高卵细胞质量的机理.方法90只小鼠分为6组,实验1组与对照1组观察排卵后优质卵数目.实验2组与对照2组观察鼠胚卵裂率.用原位杂交的方法对实验3组与对照3组鼠卵颗粒细胞IGF-1R mRNA表达量进行检验.结果实验组与对照组优质卵率分别为[（78±8）%、（71±5）%],卵裂率分别为[（88±3）%、（83±5）%]及颗粒细胞IGF-1R mRNA表达量分别为[（0.4890±0.0454）、（0.4439±0.0283）],两组比较差异有显著性（P＜0.05）.优质卵率与颗粒细胞IGF-1R mRNA表达量呈正相关.结论二至天癸颗粒提高卵细胞质量的机理可能与提高颗粒细胞IGF-1R mRNA的表达量有关.     

中医药对卵细胞质量影响的研究

体外受精-胚胎移植技术(IVF-ET)成功率低,价格昂贵、并发症多且流产率高.其中,胚胎质量是影响体外受精-胚胎移植技术结局的关键因素之一,而卵细胞质量又是决定优质胚胎的前提条件.研究及应用中医药提高卵细胞质量,对于增加体外受精-胚胎移植技术的临床妊娠率有重要意义.     

二至天癸颗粒对黄体功能不健性不孕症患者子宫内膜容受性的影响

目的 探讨二至天癸颗粒对黄体功能不健所致不孕症患者的治疗作用及机理.方法 将60例黄体功能不健性不孕症患者随机分为二至天癸颗粒组(试验组)30例和六味地黄颗粒组(对照组)30例,观察两组治疗后中医证候改善情况,黄体中期血清雌二醇(E2)、孕酮(P)水平,黄体中期子宫内膜白血病抑制因子(LIF)表达,以及两组患者的妊娠率.结果 治疗后试验组患者中医证候改善程度优于对照组(P<0.05).试验组黄体中期血清P水平及子宫内膜LIF表达量均明显高于对照组(P<0.05);两组血清E2虽较治疗前有所降低,但差异均无统计学意义(P>0.05).试验组妊娠率亦高于对照组(P<0.05).结论 二至天癸颗粒治疗黄体功能不健性不孕症可能与其提高子宫内膜LIF的表达从而影响子宫内膜容受性有关.     

二至天癸方对IVF-ET患者颗粒细胞凋亡的影响

目的 观察二至天癸方干预调节PI3K/Akt信号通路关键效应分子p-Akt、PI3K及与通路相关的Bad水平对肾气虚体外受精-胚胎移植（IVF-ET）患者卵细胞质量的影响。方法 选取行IVF-ET的肾气虚不孕症患者80例,按照随机数字表法分为治疗组（二至天癸方结合IVF-ET治疗）,安慰剂组（安慰剂颗粒结合IVF-ET治疗）,每组40例,另选取40名因男方因素行IVF-ET的女性志愿者为健康对照组（安慰剂颗粒结合IVF-ET治疗）。3组患者均于促性腺激素释放激素激动剂（GnRH-a）降调节的前一周期开始加服二至天癸方或安慰剂颗粒至人绒毛膜促性腺激素（HCG）注射日停药。观察3组患者临床妊娠率、颗粒细胞凋亡率。Western blot法检测PI3K/Akt信号转导通路p-Akt、PI3K、Bad 蛋白水平。结果 与健康对照组比较,安慰剂组PI3K、p-Akt蛋白表达量降低,Bad蛋白表达量升高（P＜0.05, P＜0.01）;与安慰剂组比较,治疗组PI3K、p-Akt蛋白表达量升高,Bad蛋白表达量降低（P＜0.05, P＜0.01）。与安慰剂组比较,健康对照组及治疗组卵巢颗粒细胞凋亡率均降低,临床妊娠率增高（P＜0.05, P＜0.01）。结论 二至天癸方可能是通过PI3K/Akt信号转导通路,下调Bad因子表达,抑制颗粒细胞凋亡,从而提高IVF-ET患者卵细胞质量,最终改善肾气虚不孕症患者的IVF-ET结局。     

二至天癸颗粒对肾气虚不孕患者颗粒细胞Fas通路的影响

目的:探讨补肾益天癸之二至天癸颗粒对肾气虚不孕患者颗粒细胞Fas通路的影响。方法:分析2013年12月—2015年9月就诊于山东中医药大学附属医院生殖与遗传中心,符合病例选择标准的肾气虚不孕症患者72例,随机分为治疗组(二至天癸颗粒+IVF标准长方案)和对照组(安慰剂+IVF标准长方案),取卵日收集卵泡GC,采用蛋白质印迹法(Western Blot)检测颗粒细胞Fas L、Fas、Caspase8、Caspase3蛋白的含量,实时荧光定量PCR测定mRNA含量,观察组间差异。结果:两组患者GC中均有Fas L、Fas、Caspase8、Caspase3的mRNA和蛋白表达,且在治疗组的表达均低于对照组(P0.05);与未妊娠者相比,妊娠者GCFas L、Fas、Caspase8、Caspase3的mRNA和蛋白表达均较低(P0.05)。结论:二至天癸颗粒可以下调Fas通路四个蛋白的表达。推测这可能是其抑制颗粒细胞凋亡,提高卵细胞质量和胚胎质量从而提高临床妊娠率的机制之一。     

二至天癸方对高龄不孕妇女卵巢反应性的影响

目的探讨补肾益天癸之二至天癸方提高高龄不孕妇女卵巢反应性的临床疗效。方法将66例参加体外受精-胚胎移植（IVF-ET）周期的高龄不孕妇女随机分为中药组（二至天癸方联合超排卵方案治疗,33例）和对照组（单用超排卵方案治疗,33例）,观察临床症状改善情况,促性腺激素（FSH）的用量,不同时期血清激素水平、HCG注射日子宫内膜厚度、子宫和卵巢动脉搏动测定,卵泡数,取卵数,优质卵率,受精率,优质胚胎率,妊娠率,并对治疗后两组患者阴中干涩症状积分与HCG注射日血清E2进行相关性分析。结果中药组患者临床肾气阴两虚症状得到有效改善,与对照组比较差异有显著性（P〈0．05）;中药组FSH总用量及每天FSH用量明显低于对照组,两组比较,差异有显著性（P〈0．05）;在HCG注射日血清E2水平、子宫内膜厚度、取卵数、优质卵率、受精率、优质胚胎率,中药组均明显优于对照组,差异有显著性（P〈0．05）;两组患者治疗后阴中干涩症状积分与HCG注射日血清E2水平均存在弱负相关关系（r=-0．369,r=-0．425）,说明HCG注射日血清E2水平是影响阴中干涩症状的因素,但不是唯一因素。中药组治疗后阴中干涩积分低于对照组,差异有显著性（t=2．422,P〈0．05）。结论二至天癸方配合超排卵方案可明显减少FSH用量,提高卵巢反应,改善卵子质量,提高妊娠率,提示其机理与补肾益天癸之二至天癸方改善卵巢反应性,提高雌激素水平,协调下丘脑-垂体-卵巢轴有关。     

二至天癸颗粒对高龄肾气阴两虚IVF-ET患者Mfn2表达的影响:随机对照研究

目的观察二至天癸颗粒对高龄肾气阴两虚行体外受精-胚胎移植(IVF-ET)患者卵巢颗粒细胞线粒体融合素蛋白(Mfn2)及线粒体膜电位的调控作用。方法将86例行IVF-ET治疗的高龄肾气阴两虚证患者单盲随机分为中药治疗组和安慰剂组各43例。2组均采用拮抗剂方案(GnRH-ant方案)降调节至人绒毛膜促性腺激素(hCG)注射日。中药治疗组于IVF-ET治疗前3个周期始,自月经第3天起给予二至天癸颗粒。取卵日收集卵泡液并提取颗粒细胞,分析各组患者妊娠结局,检测Mfn2 mRNA表达及蛋白的含量和线粒体膜电位(△Ψm)的变化。结果中药治疗组、安慰剂组的临床妊娠率分别为42.1.%(16/38)、26.3%(10/38),中药治疗组与安慰剂组比较差异无统计学意义(P>0.05),但有升高的趋势。与安慰剂组比较,中药治疗组Mfn2 mRNA的相对表达量升高(P<0.05,P<0.01),Mfn2蛋白表达量及△Ψm荧光强度比值升高(P<0.01)。结论二至天癸颗粒可提高高龄肾气阴两虚型IVF-ET患者卵泡液颗粒细胞中Mfn2及线粒体膜电位的表达,对高龄肾气阴两虚型IVF-ET患者临床妊娠率有升高趋势。     

滋肾育胎丸对体外受精—胚胎移植患者胚胎种植率的影响

目的：观察黄体期口服滋肾育胎丸对体外受精-胚胎移植患者胚胎种植率的影响。方法：140例患者随机分成A、B两组，于取卵当日起两组均用绒毛膜促性腺激素健黄体，A组同时加服滋肾育胎丸6g，每天3次连续14天。结果：A组平均血清黄体酮水平。胚胎种植率和临床妊娠率分别为（15.42±1.91)μg/L，24.12%和51.52%。显著高于B组的（13.92±1.96)μg/L（P<0.001),16.67%(P<0.05)和34.78%（P<0.05)。结论：黄体期口服滋肾育胎丸能有效地提高胚胎种植率。     

寿胎丸对提高体外受精-胚胎移植临床妊娠率的影响

目的观察寿胎丸加味对提高体外受精-胚胎移植（IVF—ET）临床妊娠率的影响。方法将2001—2003年中山医科大学深圳泌尿外科医院试管婴儿生殖中心采用IVF-ET助孕术后的有随访条件者80例随机分为2组,治疗组40例,对照组40例,治疗组自胚胎移植后除常规肌注黄体酮外运用中医辨证辅助治疗,对照组仅常规肌注黄体酮,不予其他干预,对2组疗效进行观察和比较。结果治疗组40例,妊娠23例,临床妊娠率57．5％,平均孕激素水平（22．45±1．31）μg／L,妊娠流产率13．0％。对照组40例,妊娠12例,临床妊娠率30．0％,平均孕激素水平（10．18±0．89）μg／L,妊娠流产率25．0％,2组临床妊娠率、平均孕激素水平、妊娠流产率差异有统计学意义（P〈0．05,P〈0．01,P〈0．05）。结论运用寿胎丸为基础方辨证治疗对提高IVF-ET临床妊娠率、降低妊娠流产率疗效显著优于单纯用黄体酮治疗。     

电针干预对体外受精－胚胎移植过程中临床结局的影响

目的观察电针干预治疗在辅助生殖技术运用过程中对妊娠结局及卵巢过度刺激综合征（ovarian hyperstimulation syndrome,OHSS）发生的影响。方法 109例将在本中心行体外受精/卵泡浆内单精子显微注射技术（in vitro fertilization/intracytoplasmic sperm injection,IVF/ICSI）助孕患者按降调节单双号日期分为针刺治疗组（53例）和对照组（56例）。对照组采用促性腺激素释放激素激动剂（GnRH-a）长方案进行超促排卵（controlled ovarian hyperstimulation,COH）。针刺治疗组在长方案COH基础上,从使用促性腺激素（gonadotropin,Gn）日开始至绒促性素（human chorionic gonadotrophin,h CG）注射日接受电针干预治疗。测定两组患者h CG注射日、取卵日、移植日（embryo transfer,ET）的雌二醇（estradiol,E2）及血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）、IL-6、血管紧张素-Ⅱ（angiotensin,AT-Ⅱ）水平。比较两组获卵率、优胚率、临床妊娠率、流产率及OHSS发生率。结果与对照组比较,针刺治疗组血清E2水平在取卵日、移植日均明显降低（P〈0.05）,取卵日卵泡液VEGF、IL-6水平亦明显降低（P〈0.05）。两组患者血清VEGF、IL-6均在h CG注射日水平最高,随后呈下降趋势;与对照组同期比较,针刺治疗组h CG注射日、取卵日、移植日血清VEGF、IL-6均明显降低（P〈0.05）。针刺治疗组移植周期取消率和OHSS发生率均明显低于对照组（P〈0.05）。结论电针辅助治疗能有效防治IVF过程中OHSS发生,且不降低IVF-ET优胚率及妊娠率,可能与其降低患者卵巢局部血管通透性有关。     

尤昭玲“安胎前移法”在体外受精胚胎移植技术中的应用

尤昭玲教授用中医"安胎前移法"辅助治疗采用体外受精-胚胎移植(IVF-ET)技术的不孕症患者,有效地提高了IVF-ET技术的成功率。从现代医学基础——子宫内膜容受性、中医病因病机——脾肾两虚、中医治则——健脾补肾3个方面,分析了"安胎前移法"的科学性。