器官组织移植

他克莫司联合青藤碱抑制大鼠心脏移植急性排斥反应;大鼠的工作型与非工作型同种异体心脏移植模型比较;心肌内心电图监测和诊断大鼠心脏移植术后的排斥反应;心脏移植术后采用无创分子技术实时监测免疫排斥反应的现状（学术交流）;存活十年以上同种原位心脏移植三例;骨髓间充质干细胞自体移植治疗心肌梗死的实验研究;[编者按]     

槐耳清膏在小鼠心脏移植排斥反应中作用的初步探讨

目的 探讨槐耳清膏在小鼠心脏移植急性排斥反应中的作用.方法 实验分为3组:A组:同种异基因移植后槐耳清膏处理组(槐耳清膏组);B组:同种异基因移植财照组(移植排斥组)及C组:同系移植对照组(同系移植组).观察各组移植心脏的存活时间、术后第5天供心的组织病理改变.用免疫荧光检测移植心脏中CD8+T淋巴细胞的浸润和颗粒酶B的表达水平.结果 A组移植心脏的平均存活时间为(6.38±0.69)d,与B组(8.31±0.59)d相比明显缩短(P<0.01);心肌组织呈3级急性排斥反应病理改变,CD8+T淋巴细胞弥漫性浸润及颗粒酶B表达与两个对照组相比明显增强(P<0.05).结论 在术后早期单用槐耳清音会促进小鼠心脏移植物的急性排斥反应,可能机制足促进CD8+T淋巴细胞的组织浸润并增强颗粒酶B的表达.     

冠状动脉灌注TGF-β1基因对异基因大鼠心脏移植物急性排斥反应的影响

目的 探讨经冠状动脉灌注重组腺病毒载体介导转化生长因子-β1(TGF-β1)基因转染对异基因大鼠心脏移植物急性排斥反应的影响.方法 建立大鼠颈部心脏移植模型,转基因组供心切取后经冠状动脉缓慢灌注含携带TGF-β1基因腺病毒载体(每克心肌组织5×1010PFU)的Stanford大学液,再植入受体颈部.空载体组灌注腺病毒空载体(每克心肌组织5 × 1010PFU)的Stanford大学液,对照组灌注无病毒的Stanford大学液.结果 转基因组的移植物内外源性TGF-β1基因和蛋白表达,移植物内CD68表达减少,心肌细胞凋亡减少,移植物急性排斥反应的始发时间明显推迟,程度较轻.结论 经冠状动脉灌注重组腺病毒载体介导TGF-β1基因转移可明显减轻异基因大鼠心脏移植物急性排斥反应.     

检测胆汁中sICAM-1诊断大鼠肝移植急性排斥反应

目的：探讨胆汁中可溶性细胞间粘附分子-1（sICAM-1)表达水平与大鼠肝移植急性排斥反应的关系。方法：将大鼠分为单纯胆汁外引流组、同种同基因肝移植组和同种异基因肝移植组,后二组行原位肝移植加胆汁外引流,用ELISA法检测未移植时及移植后2、4、7d胆汁中sICAM-1表达水平。结果：同种异基因肝移植组大鼠胆汁中sICAM-1表达水平显著高于同种同基因肝移植组,且其水平升高与移植术后时间变化呈正相关。结论：检测移植肝组织中sICAM-1的表达水平升高,有助于肝移植急性排斥反应的诊断,并可动态监测其严重程度。     

环孢素A与盐酸小檗碱联用预防大鼠心脏移植排斥反应

目的探讨环孢素A(CsA)与盐酸小檗碱联用对同种异基因大鼠心脏移植排斥反应的抑制效果。方法建立Wistar大鼠心脏到SD大鼠的异位(腹腔内)心脏移植模型,术后单独使用CsA、盐酸小檗碱以及联合使用CsA和盐酸小檗碱进行免疫抑制治疗,观察各组移植心脏的存活时间。结果单独使用不同剂量CsA者移植心脏的存活时间较安慰剂组明显延长(P<0.01);CsA和盐酸小檗碱联用组移植心脏的存活时间较单用小剂量CsA组明显延长(P<0.01);单用盐酸小檗碱组与安慰剂组相比,移植心脏存活时间的差异无统计学意义(P>0.05)。结论CsA与盐酸小檗碱联用预防大鼠心脏移植后的排斥反应具有协同作用。     

大鼠肝移植急性排斥反应的淋巴细胞蛋白质组学研究

目的 利用差异蛋白质学寻找肝移植急性免疫排斥反应相关功能蛋白.方法 选取SD大鼠与Wistar大鼠,建立大鼠同种异体肝移植的动物模型(急性排斥组)和大鼠同基因移植的动物模型(对照组);使用组织化学方法 对移植肝脏进行形态学观察;利用ELISA检测受体血清细胞因子;通过双向凝胶电泳分离急性排斥组和对照组肝移植后受体大鼠脾脏的淋巴细胞蛋白质,通过软件比较两组蛋白质的质纹图谱,进行差异点分析;选取差异点用基质辅助激光解析-飞行时间质谱进行蛋白鉴定;选取部分鉴定蛋白通过Western blot法进行检测,验证蛋白质组学的分析结果 .结果 ELISA检测结果 表明,移植术后3 d同种异体肝移植大鼠血清中IL-2和IFN-γ的表达上调;急性排斥组肝组织HE染色切片证实均有Ⅱ a～Ⅱ b级(Banff标准)排斥反应表现;差异蛋白质组学分析共鉴定出25个淋巴细胞蛋白质在急性排斥反应中的表达量发生了改变,其中13个蛋白点表达上调,12个蛋白点表达下调;Western blot法验证结果 显示,其中的2个相关蛋白(β-actin和碳酸酐酶)在急性排斥反应中的表达量变化与差异蛋白质组学分析结果 一致.结论 本实验筛选出25个大鼠肝移植急性排斥反应的相关功能蛋白,其中的β-actin和碳酸酐酶在排斥反应中有重要功能,为进一步系统研究这一免疫学现象奠定了基础.     

大鼠肾移植急性排斥反应时移植物中基因表达的研究

目的全面认识肾移植急性排斥反应早期移植物内基因表达改变，为进一步探讨肾移植急性排斥反应的发病机理、寻找早期诊断指标提供实验依据。方法以F344大鼠为供者，近交系Lewis大鼠为受者，建立大鼠原位肾移植急性排斥反应模型（同种异体移植组），以近交系Lewis大鼠间肾移植为对照（近交系移植组）。观察术后3、7和14d时的移植肾组织病理学改变，并利用基因芯片技术检测7d时移植物中基因表达水平，获得其表达谱。结果急性排斥反应早期存在大量基因变化，在丽个通道均有有效杂交信号的基因中，上调的有48条，其中7于扰素诱导GTP酶基因上调最为显著。结论移植物排斥反应是个多途径连续衍变的动态不平衡过程，诸多促进排斥与保护因子并存，很难以单一标志物对肾移植急性排斥反应进行早期诊断，但同时通过多个标志物来综合分析还是有一定可能性的。     

白细胞介素-15在心脏移植排斥反应中的表达及意义

目的 探讨白细胞介素-15（IL-15）在心脏移植排斥反应中的表达及其与排斥反应的关系。方法 采用小鼠颈部心脏移植模型，随机分为2组：同基因移植组，供、受体均为C57BL／6小鼠；异基因移植组，供、受体分别为BALB／C、C57BL／6小鼠。以pactin作内参照，分别于术后第1、3、5、7天取移植心脏，用逆转录-聚合酶链式反应（RT—PCR）法观察IL-15的表达情况。结果 随着术后天数的增加，异基因移植组IL-15表达逐渐升高，第5天达高峰（与同基因移植组相比，P〈0．01）。结论 IL-15的表达与心脏移植急性排斥反应的发生发展密切相关，可作为心脏移植急性排斥反应的监测指标，对急性排斥反应的早期诊断和移植物的预后估计具有重要的临床意义。     

急性排斥反应过程中淋巴细胞趋化因子基因表达的意义

目的　探讨急性排斥反应过程中淋巴细胞趋化因子 (LTN)mRNA在移植心脏局部表达的意义及环孢素A(CsA)对其的影响。方法　以SD大鼠为受者 ,Wistar大鼠为供者 ,施行异位 (腹腔 )心脏移植术 ,分为术后使用CsA组 (15mg·kg-1·d-1)和不用组 ,并设SD大鼠间的心脏移植组 (同系移植组 ) ,以正常SD大鼠为对照组。采用一步法逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)检测术后不同时间移植心脏局部LTNmRNA的表达。结果　正常对照组和同系移植组在各时间点均未见LTNmRNA表达 ;LTNmRNA在未用CsA组的表达变化与急性排斥反应的进程相关 ,排斥反应的早期出现LTNmRNA表达上调 ,术后 5d时达到峰值 ,而应用CsA组 ,LTNmRNA的表达峰值出现延缓 ,且明显低于未用CsA组 (P <0 .0 5 )。结论　LTNmRNA的表达上调与排斥反应过程中淋巴细胞浸润密切相关 ,可能对急性排斥反应的早期诊断有帮助 ;CsA可抑制LTN基因的表达 ,可能是其免疫抑制作用的又一分子免疫学机制     

环孢菌素A抑制大鼠同种心脏移植急性排斥反应中趋化因子受体CCR5表达的研究

目的观察大鼠同种心脏移植急性排斥反应中趋化因子受体CCID的表达及环孢菌素A（CsA）的抑制作用。方法分两组建立同种大鼠颈部心脏移植模型：对照组（n=25）和新山地明组（CsA组，n=25），各5例观察移植心脏存活时间。于移植术后第1、5、7、14天分别取移植心组织各5例，逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）检测移植心组织内趋化因子受体CCR5mRNA不同时间点的表达水平，免疫组织化学方法检测移植心组织内趋化因子受体CCR5分子的表达差异。结果对照组移植心存活时间为（11．6±1．5）d，CsA组移植心存活时间为（22．4±5．1）d，两组问移植心存活时间差异有统计学意义（P〈0．01）。急性排斥组和CsA处理组大鼠移植心脏在术后第5、7、14天都可检测到趋化因子受体CCR5mRNA阳性表达，但CsA处理组趋化因子受体CCRSmRNA的表达明显弱于急性排斥组。同样急性排斥组和CsA处理组大鼠移植心脏在术后第5、7、14天都可检测到趋化因子受体CCR5分子的表达，CsA处理组趋化因子受体CCR5分子的表达相对较弱。结论趋化因子受体CCR5在早期移植免疫事件中具有重要的作用，CsA能部分抑制趋化因子受体CCR5的表达，并与移植物存活时间延长有一定的关系。     

肾移植术后早期受者外周血淋巴细胞基因表达谱研究

目的 从基因水平了解淋巴细胞在肾移植免疫反应过程中作用的分子机理。方法 分离16例未发生临床急性排斥反应的肾移植受者术前和术后第7天的外周血淋巴细胞，应用基因芯片技术，与包含4096个人eDNA克隆的微矩阵芯片杂交，分析2组细胞基因表达谱的差异。结果 肾移植术后第7天，外周血淋巴细胞差异表达基因有135个，其中下调基因53个，上调基因82个。这些基因主要涉及细胞信号转导、原癌基因类、DNA结合转录和蛋白翻译合成、细胞凋亡，另外也有离子通道和运输蛋白、细胞周期蛋白、细胞骨架和运动蛋白、代谢、发育相关基因等。结论 肾移植术后7d，受者外周血淋巴细胞一系列基因转录活化，说明肾移植术后早期免疫反应过程涉及多种类型的多个基因；基因芯片技术可有效筛选出肾移植术后受者外周血淋巴细胞的差异表达基因。     

大鼠移植心脏的细胞凋亡及其与急性排斥反应的关系

目的 观察移植心脏的细胞凋亡现象及其与急性排斥反应的关系。方法 建立大鼠异位心脏移植模型,用ＨＥ梁色和原位末端标记（ＴＵＮＥＬ）技术检测移植心脏切片,进行排斥反应的病理分级,计算凋亡指数（ＡＩ）。结果 发生凋亡的细胞主要是心肌细胞,在各级排斥反应中均可见凋亡细胞存在,且ＡＩ与急性排斥发生的分级成正相关;各级的ＡＩ与０级（无排斥反应）比较,差异均有显著性。结论 细胞凋亡与移植心脏急性排斥反应的严重程     

Gene expression profile during acute rejection in rat-to-mouse concordant cardiac xenograft by means of DNA microarray

Using a rat-to-mouse concordant cardiac transplantation model and DNA microarrays, we studied the gene expression profiles during acute rejection. We used inbred BALB/c and C3H/He mice and Lewis rats for our study, in which heterotopic cardiac transplantations were performed. Total RNA was isolated from xenografts (Lewis to C3H), allografts (BALB/c to C3H), rat isografts (Lewis to Lewis) and mouse isografts (C3H to C3H) on day 5 following transplantation. We screened for gene expression profiles in the xenografts, allografts, and mouse isografts by means of DNA microarrays. With a murine array, we determined that many IFN-gamma inducible genes were profoundly expressed in both the allografts and xenografts relative to the isografts. Mac-1 was specifically induced in the xenografts relative to the allografts. Using a rat array, we observed that the cardionatrin and atrial natriuretic factors were most profoundly expressed in the xenografts in comparison with the rat isografts. In addition to known genes, many expressed sequence tags were induced in the xenografts. We identified a group of genes, including Mac-1 induced specifically in xenografts, as well as many new genes upregulated in xenografts.     

Immunological tolerance-related genes in a spontaneous tolerant model of rat liver transplantation explored by suppression subtractive hybridization

Natural immunological tolerance can be induced in certain types of allogeneic liver transplantation in rats. To screen for genes associated with the induction of tolerance, suppression subtractive hybridization was performed in the rat liver transplantation model between a DA donor and PVG recipient combination where spontaneous immunological tolerance is known to occur without any immunosuppressive treatment. As a result, 112 genes were cloned from a DA liver graft that survived for 20 days in the fully allogeneic PVG recipient. After confirmation of the expression intensity using an in-house manufactured DNA array with cDNAs from the DA graft, 36 genes were classified in the highly expressed group and 26 moderately expressed group. In the first group, there were 8 immunoglobulin-related genes and 6 MHC class II-related genes, suggesting the existence of an underlying rejection response. Among those genes, an antiapoptotic gene in the p38 MAP kinase pathway, heme oxygenase gene (HO-1), and a ras cascade gene, IQ motif containing GTPase activating protein 1 (Iqgapl), retained biological significance. The results suggested that the molecular response to a liver graft tends to be antiapoptotic and to terminate the rejection response. Unfortunately, there was no gene identified that qualified as a putative immunosuppressive protein, liver suppressor factor-1 (LSF-1). The panel of genes identified in the present work will be a useful panel of candidate genes to investigate the induction of spontaneous tolerance.     

穿孔素和颗粒酶B基因对肝移植急性排斥的早期诊断作用

目的 探讨细胞毒Ｔ淋巴细胞（ＣＴＬ）激活的功能标志基因穿孔素和颗粒酶Ｂ的表达对肝移植急性排斥反应的早期诊断作用。方法 应用改良三袖套法建立金黄地鼠至大鼠肝移植急性排斥反应模型,用逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测移植肝中穿孔素和颗粒酶Ｂ基因ｍＲＮＡ的表达,并以同基因肝移植为对照,结果 急性排斥反应发生在肝移植术后３天,即急性排斥早期均表达穿孔素,颗粒酶Ｂ基因ｍＲＮＡ,４天后表达明显增强,并贯穿     

热休克蛋白70在大鼠肝移植急性排斥反应中的表达及意义

目的 探讨热休克蛋白70(HSP70)在大鼠肝移植术后的表达规律及对急性排斥反应的早期诊断意义.方法 采用改良"二袖套法"建立大鼠原位肝移植模型.随机将大鼠分为3组,每组供、受者各15只.对照组:供、受者均采用Wistar大鼠;未治疗组:供者为SD大鼠,受者为Wistar大鼠,肝移植后不用任何免疫抑制剂;治疗组:供者为SD大鼠,受者为Wistar大鼠,肝移植术后肌肉注射他克莫司(FK506)2 mg·kg-1·d-1.每组分别于术后第3、5、7天随机各处死5只受者,取移植肝脏观察组织病理学变化,免疫组织化学及逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测移植肝HSP70的表达,并分析其与急性排斥反应的相互关系.结果 对照组术后无排斥反应发生;未治疗组术后第3天出现典型的排斥反应病理变化,随术后时间推移,排斥反应活动度积分(RAI)逐渐升高(P<0.05);治疗组表现为无排斥反应或交界性排斥反应.对照组移植肝HSP70的表达在术后出现短暂升高后迅速降低(P<0.05),未治疗组移植肝HSP70的表达水平较对照组高,并随术后时间的推移而逐渐升高(P<0.01),与移植肝RAI之间存在着明显的正相关(P<0.01);治疗组移植肝组织HSP70在术后各时间段均呈低表达.结论 移植肝组织中HSP70的表达与急性排斥反应的发生和发展密切相关;HSP70表达升高对早期诊断急性排斥反应有一定的意义.